AP2A1基因在制备高血压防治产品中的用途

本发明属于生物医药，具体涉及ap2a1基因在制备高血压防治产品中的用途。

背景技术：

1、高血压病属重大慢病，是导致心血管等疾病患者死亡的首要危险因素，具有患病率高、患病人数众多等特点。即使高血压防治指南不断更新，治疗手段不断完善。即使血压控制良好的患者，多数患者仍存在天花板效应，即最终仍发生并死于心、脑、肾等靶器官损害。可见，高血压防控需要寻找更加安全、有效的防治策略。

2、胞内膜内转运的介质是异四聚体蛋白复合物，称为adaptor-related protein(ap)复合物。ap复合物在囊泡形成中发挥重要作用。目前已知的ap复合物有5种，分别是ap-1、ap-2、ap-3、ap-4和ap-5。ap-2有两个α亚型(αa和αc)；编码ap-2的αa亚基的基因被命名为ap2a1。ap2a1基因位于染色体19q13.3上，由24个编码外显子和23个插入内含子组成。目前，该基因只有两个替代转录本被注释。它们的序列在编码区只有66个核苷酸不同，因此，这两个mrna分子共享相同的非翻译区(utr)，翻译起始密码子和终止密码子。现有研究表明在成纤维细胞中，过表达full-length il-33(flil33)能导致ap2a1表达上升并诱导smad3磷酸化；si-ap2a1消除了flil33过表达对smad3磷酸化的刺激作用。

3、然而，ap2a1对高血压的影响尚未见报道。

技术实现思路

1、鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供ap2a1基因在制备高血压防治产品中的用途，以期解决上述的问题。

2、为实现上述目的，本发明具体采用如下技术方案。

3、本发明的第一方面保护ap2a1作为靶点在筛选预防和/或治疗高血压的产品中的用途。

4、本发明的第二方面保护抑制ap2a1的物质在制备预防和/或治疗高血压的产品中的用途。

5、在某些实施方式中，所述抑制ap2a1的物质能抑制ap2a1基因的转录或翻译，或能抑制ap2a1蛋白的表达或活性。

6、在某些实施方式中，所述抑制ap2a1的物质为所述产品的唯一有效成分或有效成分之一。

7、在某些实施方式中，所述抑制ap2a1的物质选自核酸分子、小分子化学药、抗体药、多肽、蛋白、核酸构建体、慢病毒、腺相关病毒、crispr/cas9基因组编辑系统。

8、优选的，所述核酸分子以下中的任一种或多种：反义寡核苷酸、双链rna或shrna。

9、优选的，所述抑制ap2a1的物质为shrna，所述shrna包含能与ap2a1基因杂交的核苷酸序列，所述shrna包括正义链片段和反义链片段，以及连接所述正义链片段和反义链片段的茎环结构，所述正义链片段和所述反义链片段的序列互补，并且所述正义链片段的序列与ap2a1基因中的靶序列相同。

10、优选的，所述抑制ap2a1的物质为双链rna，所述双链rna包含能与ap2a1基因杂交的核苷酸序列，所述双链rna包含第一链和第二链，所述第一链和所述第二链互补共同形成rna二聚体，并且所述第一链的序列与ap2a1基因中的靶序列相同。

11、优选的，所述抑制ap2a1的物质为核酸构建体。

12、优选的，所述抑制ap2a1的物质为腺相关病毒或慢病毒。

13、本发明的第三方面保护一种干扰ap2a1基因表达的核酸分子，包含双链rna或shrna，其中，所述双链rna包含能与ap2a1基因杂交的核苷酸序列，所述双链rna包含第一链和第二链，所述第一链和所述第二链互补共同形成rna二聚体，并且所述第一链的序列与ap2a1基因中的靶序列相同所述shrna包含能与ap2a1基因杂交的核苷酸序列，所述shrna包括正义链片段和反义链片段，以及连接所述正义链片段和反义链片段的茎环结构，所述正义链片段和所述反义链片段的序列互补，并且所述正义链片段的序列与ap2a1基因中的靶序列相同；

14、所述双链rna中编码所述第一链的核苷酸序列包含如seq id no.1-seq id no.3所示；

15、所述shrna的编码核苷酸序列如seq id no.4-5所示，或如seq id no.6-7所示，或如seq id no.8-9所示；

16、所述双链rna或shrna的编码序列包含如seq id no.1-seq id no.3所示序列。

17、本发明的第四方面保护一种ap2a1基因干扰核酸构建体，所述干扰核酸构建体能表达如上文所述的核酸分子。

18、本发明的第五方面保护一种ap2a1基因干扰慢病毒或干扰腺相关病毒，由如上文所述的干扰核酸构建体在慢病毒辅助质粒、宿主细胞的辅助下，经过病毒包装而成；或，由如上文所述的干扰核酸构建体在腺相关病毒辅助质粒、宿主细胞的辅助下，经过病毒包装而成。

19、本发明的第六方面保护一种预防和/或治疗高血压的组合物，包含如上文所述的核酸分子；和/或，如上文所述的干扰核酸构建体；和/或，如上文所述的干扰慢病毒或干扰腺相关病毒。

20、本发明的第七方面保护如上文所述的核酸分子，或如上文所述的干扰核酸构建体，或如上文所述的干扰慢病毒或干扰腺相关病毒，或如上文的组合物的用途，所述的用途为：用于制备治疗高血压的药物，或用于制备降低细胞中ap2a1基因表达的试剂盒。

21、本发明的第八方面保护一种筛选预防和/或治疗高血压药物的方法，所述方法包括：以ap2a1为药物靶点，寻找能够抑制或阻断ap2a1的表达和/或功能的物质作为候选药物。

22、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

23、1)本申请发现与wky大鼠相比较，shr大鼠腹主动脉中的ap2a1表达水平明显增加，进一步干扰ap2a1表达发现降低血压，因此ap2a1可作为筛选高血压的药物靶点。

24、2)本申请针对ap2a1基因设计了合适的靶序列，并筛选出有效沉默ap2a1的shrna，构建了包含shrna的核酸构建体，并将其包装成慢病毒，能有效抑制ap2a1在a7r5细胞中的表达。

25、3)本申请进一步发现将包含shrna的核酸构建体包装成腺相关病毒，将其给于shr大鼠后发现，能显著降低腹主动脉的收缩压、舒张压、平均动脉压、脉冲波传播速度；同时能提高大鼠的血管壁厚度，从而可以起到预防和/或治疗高血压的效果。

26、4)本申请发现ap2a1具有调控高血压的作用，可作为靶点，对今后高血压的药物开发和预防治疗具有重要意义。

技术特征：

1.ap2a1作为靶标在筛选预防和/或治疗高血压的产品中的用途。

2.抑制ap2a1的物质在制备预防和/或治疗高血压的产品中的用途。

3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述抑制ap2a1的物质能抑制ap2a1基因的转录或翻译，或能抑制ap2a1蛋白的表达或活性；

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述抑制ap2a1的物质为shrna，所述shrna包含能与ap2a1基因杂交的核苷酸序列，所述shrna包括正义链片段和反义链片段，以及连接所述正义链片段和反义链片段的茎环结构，所述正义链片段和所述反义链片段的序列互补，并且所述正义链片段的序列与ap2a1基因中的靶序列相同；

5.一种干扰ap2a1基因表达的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含双链rna或shrna，其中，所述双链rna包含能与ap2a1基因杂交的核苷酸序列，所述双链rna包含第一链和第二链，所述第一链和所述第二链互补共同形成rna二聚体，并且所述第一链的序列与ap2a1基因中的靶序列相同；

6.一种ap2a1基因干扰核酸构建体，其特征在于，所述干扰核酸构建体能表达如权利要求5所述的核酸分子。

7.一种ap2a1基因干扰慢病毒或干扰腺相关病毒，其特征在于，由如权利要求6所述的干扰核酸构建体在慢病毒辅助质粒、宿主细胞的辅助下，经过病毒包装而成；或，由如权利要求6所述的干扰核酸构建体在腺相关病毒辅助质粒、宿主细胞的辅助下，经过病毒包装而成。

8.一种预防和/或治疗高血压的组合物，其特征在于，其有效物质包含如权利要求5所述的核酸分子；和/或，如权利要求6所述的干扰核酸构建体；和/或，如权利要求7所述的干扰慢病毒或干扰腺相关病毒。

9.如权利要求5所述的核酸分子，或如权利要求6所述的干扰核酸构建体，或如权利要求7所述的干扰慢病毒或干扰腺相关病毒，或如权利要求8的组合物的用途，所述的用途为：用于制备治疗高血压的药物，或用于制备降低细胞中ap2a1基因表达的试剂盒。

10.一种筛选预防和/或治疗高血压药物的方法，其特征在于，所述方法包括：以ap2a1为药物靶点，寻找能够抑制或阻断ap2a1的表达和/或功能的物质作为候选药物。

技术总结
本发明公开了AP2A1基因在制备高血压防治产品中的用途。本发明发现高血压模型大鼠体内AP2A1表达水平显著升高，进一步在高血压模型大鼠中抑制AP2A1表达水平能显著降低腹主动脉的收缩压、舒张压、平均动脉压、血管壁厚度、脉冲波传播速度，从而改善高血压表型，说明AP2A1具有调控高血压的作用，能作为靶点，对今后高血压的药物开发和预防治疗具有重要意义。

技术研发人员：彭军,沈阿灵,吴美珠,郭智,谢秋容,张富,魏丽慧,连大卫,张斯宇
受保护的技术使用者：福建中医药大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/21