一种用于防治储粮害虫谷蠹的dsRNA及其应用

本发明属于粮食储备害虫防控，具体涉及一种用于防治储粮害虫谷蠹的dsrna及其应用。

背景技术：

1、谷蠹又称米长蠹，是一类常见的体型较小的储粮害虫，属鞘翅目，长蠹科(coleoptera)。谷蠹性喜温暖，喜欢在较高的温度中生存，随着粮食在全球范围内频繁流通，目前大多数国家均出现谷蠹虫害的现象。谷蠹在世界各地的广泛分布给粮食行业造成了严重的危害，在谷蠹的生长发育过程中，其蛀蚀粮粒产生的大量粉屑会降低粮堆的通透性，此时粮堆内部温度升高，粮食会产生霉变，严重影响粮食品质，使得粮食失去食用价值。

2、1983年国外首次报道了谷蠹对磷化氢产生抗性，至今已有多个地区发现谷蠹产生了高抗性。随着谷蠹磷化氢抗性增强，为了达到预期的杀虫效果，只能通过增加磷化氢浓度的方法进行熏蒸，但有研究表明，在高浓度磷化氢环境中，谷蠹会产生保护性昏迷现象，这会大大降低磷化氢的熏蒸效果。因此，为了有效防控储粮害虫谷蠹，尤其是高抗性谷蠹品系，亟需新型防治药剂与技术，从而保障粮食安全。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种用于防治储粮害虫谷蠹的dsrna，是针对谷蠹的rdrop基因的靶向药剂，施用后可有效防治储粮害虫谷蠹。

2、本发明还提供所述用于防治储粮害虫谷蠹的dsrna的应用。

3、本发明的目的采用如下技术方案实现：

4、一种用于防治储粮害虫谷蠹的dsrna，采用包括如下步骤的方法制备：将谷蠹的总rna反转录为cdna，以所述cdna为模板，采用seq id no.1和seq id no.2所示的引物对进行pcr扩增，将pcr扩增产物体外转录合成为dsrna，即得用于防治储粮害虫谷蠹的dsrna。

5、在本发明中，pcr扩增的体系包括：模板1μl、上游引物和下游引物各0.45μl、takara taqtmpcr master mix 12μl和无rna酶水11.1μl。

6、在本发明中，所述pcr扩增的程序包括：93℃预变性5min；94℃变性1min，57℃退火1min，72℃延伸3min，55循环；72℃再延伸8min。

7、本发明还提供所述dsrna在防治储粮害虫谷蠹中的应用。

8、在本发明中，所述应用包括将麦粒经剖开处理，滴加所述用于防治储粮害虫谷蠹的dsrna的步骤。

9、在本发明中，所述用于防治储粮害虫谷蠹的dsrna的浓度为1400-1600ng/μl，施用剂量为1-2μl/麦粒。

10、有益效果：本发明用于防治储粮害虫谷蠹的dsrna，是针对谷蠹的rdrop基因的靶向药剂。储粮害虫谷蠹是变态发育，在其生长发育过程中受到相关基因调控以完成其幼虫转化至成虫的过程。本发明提供的防治储粮害虫谷蠹的rdrop基因靶向药剂滴加到剖开的麦粒，让其吸收后，储粮害虫谷蠹(包括敏感和抗性种群)取食后，其体内rdrop基因生长发育调节功能失效，从而阻断储粮害虫谷蠹幼虫向成虫转化，达到高效杀死储粮害虫谷蠹的目的。经试验验证，本发明dsrna，可对磷化氢抗性谷蠹种群有效防控，方法可靠，效果稳定。

技术特征：

1.一种用于防治储粮害虫谷蠹的dsrna，其特征在于，采用包括如下步骤的方法制备：将谷蠹的总rna反转录为cdna，以所述cdna为模板，采用seq id no.1和seq id no.2所示的引物对进行pcr扩增，将pcr扩增产物体外转录合成为dsrna，即得用于防治储粮害虫谷蠹的dsrna。

2.根据权利要求1所述dsrna，其特征在于，pcr扩增的体系包括：模板1μl、上游引物和下游引物各0.45μl、takara taqtmpcr master mix 12μl和无rna酶水11.1μl。

3.根据权利要求2所述dsrna，其特征在于，所述pcr扩增的程序包括：93℃预变性5min；94℃变性1min，57℃退火1min，72℃延伸3min，55循环；72℃再延伸8min。

4.权利要求1-3之一所述dsrna在防治储粮害虫谷蠹中的应用。

5.根据权利要求4所述应用，其特征在于包括将麦粒经剖开处理，滴加权利要求1-3之一所述用于防治储粮害虫谷蠹的dsrna的步骤。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述用于防治储粮害虫谷蠹的dsrna的浓度为1400-1600ng/μl，施用剂量为1-2μl/麦粒。

技术总结
本发明提供一种用于防治储粮害虫谷蠹的dsRNA及其应用，属于粮食储备害虫防控技术领域。该用于防治储粮害虫谷蠹的dsRNA，采用包括如下步骤的方法制备：将谷蠹的总RNA反转录为cDNA，以所述cDNA为模板，采用SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的引物对进行PCR扩增，将PCR扩增产物体外转录合成为dsRNA，即得用于防治储粮害虫谷蠹的dsRNA。本发明dsRNA，是针对谷蠹的RDROP基因的靶向药剂，施用后可有效防治储粮害虫谷蠹。

技术研发人员：唐培安,徐宏磊,吴学友
受保护的技术使用者：南京财经大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/12