靶向CKIP-1的双链RNA分子及其用途的制作方法

本发明涉及生物医药领域，具体地，本发明涉及靶向ckip-1的双链rna分子及其用途，特别是涉及所述双链rna分子用于治疗炎症疾病，例如关节炎特别是类风湿关节炎的用途。

背景技术：

0、发明背景

1、ckip-1(酪蛋白激酶相互作用蛋白1)是一种骨形成抑制基因，其特异性地调节骨形成而不是骨吸收。ckip-1在骨质疏松患者中的骨组织中表达较高。已证明靶向抑制ckip-1表达可以用于治疗骨质疏松或其它病理性骨破坏。然而，现有技术中并没有将ckip-1与炎症相联系。

2、tnf-α和il-6是两种重要的促炎细胞因子，在机体的炎症反应中起重要作用。在生理状态下，人体中tnf-α和il-6水平较低。但在病理状态下，tnf-α和il-6分泌的增加以及由此引起的各种促炎因子的级联增加可导致炎症反应，引起组织损伤。本领域已经通过靶向抑制tnf-α和il-6来治疗炎症疾病。例如，靶向tnf-α的抑制剂已经有多个品种上市，包括英夫利昔单抗、依那西普、阿达木单抗、戈利木单抗和赛妥珠单抗。此外已有il-6阻断剂获批上市应用于临床，如托珠单抗。在大型随机、双盲临床试验中，托珠单抗在对tnf-α单抗无应答的患者有较好的治疗效果。

3、类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，ra)是一种以多关节滑膜炎症性病变为特征的慢性全身性自身免疫性疾病。滑膜炎持久反复发作，可导致关节内软骨和骨的破坏，关节功能障碍，甚至残疾。类风湿关节炎在成人中发病率较高，每10万成年人口中约有20-40％的发病率。研究显示，70-75％的类风湿关节炎患者在发病3年内即可出现骨破坏，10％在发病2年内出现严重的功能障碍，约50％的患者在患病10年后丧失劳动能力，给患者和社会都造成严重的经济负担。目前治疗ra的药物主要包括非甾体抗炎药、激素、抗风湿药等，它们主要都是用来缓解疼痛、减轻炎症，并不能很好阻止关节、骨的破坏。近年来新出现的一些生物制剂能够缓解并抑制骨破坏的发生，但是并不能修复已有的骨损伤。目前临床上缺乏既能减轻炎症也能促进骨修复的ra治疗药物。

技术实现思路

0、发明简述

1、在第一方面，本发明提供一种双链rna(dsrna)分子，其包含选自以下的有义链和反义链：

2、1)seq id no:63所示的有义链和seq id no:64所示的反义链；

3、2)seq id no:71所示的有义链和seq id no:72所示的反义链；

4、3)seq id no:83所示的有义链和seq id no:84所示的反义链；和

5、4)seq id no:161所示的有义链和seq id no:162所示的反义链。

6、在一些实施方案中，所述有义链和/或反义链在3’端额外还具有至少一个核苷酸的悬端(overhang)。在一些实施方案中，所述有义链和/或反义链在3’端额外还具有2个核苷酸的悬端，优选所述悬端是tt。

7、在一些实施方案中，其中所述有义链和反义链包含1个或2个核苷酸取代，所述取代位于5’和/或3’末端的6、5、4、3或2个核苷酸之内。在一些实施方案中，其中所述有义链和反义链包含1个核苷酸取代，所述取代位于有义链的3’最后一个核苷酸位置和相应地反义链5’端第一个核苷酸位置。

8、在一些实施方案中，所述dsrna包含至少一个修饰的核苷酸。在一些实施方案中，所述修饰的核苷酸选自：2’-o-甲基修饰的核苷酸、2’-f修饰的核苷酸、包含5’-硫代磷酸酯基团的核苷酸以及与胆固醇基衍生物或十二烷酸双癸酰胺基团相连接的末端核苷酸、2’-脱氧-2’-氟代修饰核苷酸、2’-脱氧-修饰核苷酸、锁核苷酸、无碱基核苷酸、2’-氨基-修饰核苷酸、2’-烷基-修饰核苷酸、吗啉代核苷酸、氨基磷酸酯和含有非天然碱基的核苷酸。在一些实施方案中，所述dsrna的有义链和/或反义链中所有尿嘧啶碱基或胞嘧啶碱基的核苷酸的2’羟基均被甲氧基修饰。

9、在一些实施方案中，所述dsrna分子是sirna或shrna。在一些实施方案中，所述dsrna分子抑制ckip-1的表达至少50％，优选至少70％。在一些实施方案中，所述dsrna分子抑制促炎细胞因子例如il-6、tnf-α和/或il-17a的表达。

10、在第二方面，本发明还提供一种表达载体，其包含编码本发明的dsrna分子的核苷酸序列，所述核苷酸序列与转录调控元件可操作地连接。

11、在第三方面，本发明还提供一种药物组合物，其包含本发明的dsrna分子或本发明的表达载体，以及药学可接受的载体。

12、在第四方面，本发明提供一种在有需要的对象中治疗关节炎，特别是类风湿关节炎的方法，包括给所述对象施用治疗有效量的本发明的dsrna分子或本发明的表达载体或本发明的药物组合物。在一些实施方案中，所述方法还包括给所述对象施用额外的用于治疗关节炎，特别是类风湿关节炎的治疗剂。

13、在第五方面，本发明提供本发明的dsrna分子或本发明的表达载体或本发明的药物组合物在制备用于在有需要的对象中治疗关节炎，特别是类风湿关节炎的药物中的用途。

14、在第六方面，本发明提供一种在有需要的对象中治疗炎症疾病的方法，包括给所述对象施用治疗有效量的本发明的dsrna分子或本发明的表达载体或本发明的药物组合物。在一些实施方案中，所述方法还包括给所述对象施用额外的用于治疗炎症疾病的治疗剂。

15、在第七方面，本发明提供本发明的dsrna分子或本发明的表达载体或本发明的药物组合物在制备用于在有需要的对象中治疗炎症疾病的药物中的用途。

16、在第八方面，本发明提供一种在有需要的对象中治疗骨代谢相关疾病的方法，包括给所述对象施用治疗有效量的本发明的dsrna分子或本发明的表达载体或本发明的药物组合物。在一些实施方案中，所述方法还包括给所述对象施用额外的用于治疗骨代谢相关疾病的治疗剂。

17、在第九方面，本发明提供本发明的dsrna分子或本发明的表达载体或本发明的药物组合物在制备用于在有需要的对象中治疗骨代谢相关疾病的药物中的用途。

18、在本发明各个方面中，其中所述对象是人。

1.一种用于抑制ckip-1的表达的双链rna(dsrna)分子，其包含以下的有义链和反义链：seq id no:71所示的有义链和seq id no:72所示的反义链。

2.权利要求1的dsrna分子，所述有义链和/或反义链在3’端额外还具有至少一个核苷酸的悬端。

3.权利要求2的dsrna分子，所述有义链和/或反义链在3’端额外还具有2个核苷酸的悬端。

4.权利要求3的dsrna分子，其中所述悬端是tt。

5.权利要求1的dsrna分子，其中有义链和反义链包含1个或2个核苷酸取代，所述取代位于5’和/或3’末端的6、5、4、3或2个核苷酸之内。

6.权利要求5的dsrna分子，其中所述有义链和反义链包含1个核苷酸取代，所述取代位于有义链的3’最后一个核苷酸位置和相应地反义链5’端第一个核苷酸位置。

7.权利要求1-6任一项的dsrna分子，其包含至少一个修饰的核苷酸。

8.权利要求7的dsrna分子，所述修饰的核苷酸选自：2’-o-甲基修饰的核苷酸、2’-f修饰的核苷酸、包含5’-硫代磷酸酯基团的核苷酸以及与胆固醇基衍生物或十二烷酸双癸酰胺基团相连接的末端核苷酸、2’-脱氧-2’-氟代修饰核苷酸、2’-脱氧-修饰核苷酸、锁核苷酸、无碱基核苷酸、2’-氨基-修饰核苷酸、2’-烷基-修饰核苷酸、吗啉代核苷酸、氨基磷酸酯和含有非天然碱基的核苷酸。

9.权利要求7的dsrna分子，其有义链和/或反义链中所有尿嘧啶碱基或胞嘧啶碱基的核苷酸的2’羟基均被甲氧基修饰。

10.权利要求1-9任一项的dsrna分子，其是sirna或shrna。

11.权利要求1-10任一项的dsrna分子，其抑制ckip-1的表达至少50％。

12.权利要求11的dsrna分子，其抑制ckip-1的表达至少70％。

13.权利要求1-12任一项的dsrna分子，其抑制促炎细胞因子tnf-α、il-6和/或il-17a的表达。

14.表达载体，其包含编码权利要求1-13任一项的dsrna分子的核苷酸序列，所述核苷酸序列与转录调控元件可操作地连接。

15.药物组合物，其包含权利要求1-13任一项的dsrna分子或权利要求14的表达载体，以及药学可接受的载体。

16.权利要求1-13任一项的dsrna分子或权利要求14的表达载体或权利要求15的药物组合物在制备用于治疗关节炎的药物中的用途。

17.权利要求16的用途，其中所述关节炎选自类风湿关节炎、骨关节炎、特发性关节炎、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、感染性关节炎、青少年关节炎、反应性关节炎、痛风性关节炎。

18.权利要求1-13任一项的dsrna分子或权利要求14的表达载体或权利要求15的药物组合物在制备用于治疗炎症疾病的药物中的用途。

19.权利要求18的用途，其中所述炎症疾病是促炎细胞因子tnf-α、il-6和/或il-17a相关炎症疾病。

20.权利要求19的用途，其中所述炎症疾病选自炎症性肠病、感染引起的炎症、损伤引起的炎症、呼吸系统炎症和癌症相关性炎症。

21.权利要求20的用途，其中所述炎症疾病选自系统性红斑狼疮、克罗恩病、银屑病、结肠炎、回肠炎、肾小球肾炎、哮喘、皮炎、血管炎、慢性支气管炎、慢性前列腺炎、阑尾炎、胰腺炎、盆腔炎、多发性肌炎和慢性阻塞性肺病。

22.权利要求1-13任一项的dsrna分子或权利要求14的表达载体或权利要求15的药物组合物在制备用于治疗骨代谢相关疾病的药物中的用途。

23.权利要求22的用途，其中所述骨代谢相关疾病选自骨软化症、骨质缺乏、溶骨性骨病、肾性骨病、成骨不全和癌症骨转移引起的骨破坏。