两种孢子蛋白稳定融合表达非洲猪瘟关键抗原的重组解淀粉芽孢杆菌及其构建方法和应用

文档序号:37544202发布日期:2024-04-08 13:46阅读:来源:国知局

技术特征:

1.两种孢子蛋白稳定融合表达非洲猪瘟关键抗原的重组解淀粉芽孢杆菌,其特征在于,所述重组解淀粉芽孢杆菌通过将优化后的非洲猪瘟p72蛋白的核酸序列,或者优化后的非洲猪瘟p30和p54蛋白的核酸序列整合到解淀粉芽孢杆菌孢子表面获得;所述优化后的非洲猪瘟p72蛋白的核酸序列、优化后的非洲猪瘟p30蛋白的核酸序列以及优化后的非洲猪瘟p54蛋白的核酸序列分别如序列seq id no.1-3所示。

2.根据权利要求1所述的两种孢子蛋白稳定融合表达非洲猪瘟关键抗原的重组解淀粉芽孢杆菌,其特征在于,所述解淀粉芽孢杆菌优选为cplk1314。

3.根据权利要求1所述的两种孢子蛋白稳定融合表达非洲猪瘟关键抗原的重组解淀粉芽孢杆菌,其特征在于,所述解淀粉芽孢杆重组菌中包括编辑载体ptn-cas9以及表达载体ptk-p72-cotb,所述表达载体ptk-p72-cotb其序列如seq id no.4所示。

4.根据权利要求1所述的两种孢子蛋白稳定融合表达非洲猪瘟关键抗原的重组解淀粉芽孢杆菌,其特征在于,所述解淀粉芽孢杆重组菌中包括编辑载体ptn-cas9以及表达载体ptk-p3054-cotg,所述表达载体ptk-p3054-cotg其序列如seq id no.5所示。

5.根据权利要求3所述的两种孢子蛋白稳定融合表达非洲猪瘟关键抗原的重组解淀粉芽孢杆菌,其特征在于,所述表达载体ptk-p72-cotb是以ptk-gfp-cotb为基础载体,将优化后的非洲猪瘟p72蛋白的核酸序列与荧光蛋白gfp的核酸序列进行替换。

6.根据权利要求4所述的两种孢子蛋白稳定融合表达非洲猪瘟关键抗原的重组解淀粉芽孢杆菌,其特征在于,所述表达载体ptk-p3054-cotg以ptk为基础载体,插入p43-sgrna1表达框、优化的非洲猪瘟p30和p54蛋白基因、以及孢子表面蛋白bacotg基因;所述p43-sgrna1表达框包括p43启动子和sgrna1序列,p43-sgrna1表达框其序列如seq id no.6所示;其中非洲猪瘟p30和p54蛋白通过柔性linker连接为优化重组蛋白p3054,优化重组蛋白p3054的核酸密码子序列如seq id no.7所示;所述编码孢子表面蛋白bacotg基因其序列如seq id no.8所示。

7.一种权利要求1所述的两种孢子蛋白稳定融合表达非洲猪瘟关键抗原的重组解淀粉芽孢杆菌的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:

8.一种权利要求1所述的两种孢子蛋白稳定融合表达非洲猪瘟关键抗原的重组解淀粉芽孢杆菌在制备益生菌制剂中的应用。

9.一种权利要求1所述的两种孢子蛋白稳定融合表达非洲猪瘟关键抗原的重组解淀粉芽孢杆菌在制备诱导产生非洲猪瘟抗原的特异性抗体的疫苗制剂中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述疫苗制剂包括口服疫苗或者注射疫苗。


技术总结
本发明公开了两种孢子蛋白稳定融合表达非洲猪瘟关键抗原的重组解淀粉芽孢杆菌及其构建方法和应用,本发明重组菌是通过基因编辑和化学转化的方法将非洲猪瘟p72、p30和p54蛋白整合到解淀粉芽孢杆菌CPLK1314孢子表面,然后将重组菌分别以及混和免疫小鼠,该重组菌不仅是生物安全的益生菌,还可以诱导小鼠的体液和细胞免疫,进而诱导针对非洲猪瘟抗原的特异性抗体的产生。本研究发明的重组解淀粉芽孢杆菌,不仅为非洲猪瘟口服疫苗的研究提供理论基础,还提供了研发新思路。

技术研发人员:罗楚平,余思宇,朱桃,李彬,张双玉,王小花,田宝霞,陈悦雯,朱晓文,谷晓红,罗科程,李恋
受保护的技术使用者:淮阴工学院
技术研发日:
技术公布日:2024/4/7
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