一株人卵巢癌耐奥拉帕尼细胞株

本发明涉及parp抑制剂奥拉帕尼(olaparib)诱导的人卵巢癌parp抑制剂耐药细胞株。

背景技术：

1、恶性的卵巢肿瘤在所有妇科癌症中是死亡率最高的疾病。在美国，卵巢恶性肿瘤的5年相对生存率约为47％，而在中国约为41.8％。由于其症状隐匿，70％-80％的卵巢癌病人确诊时已是晚期。近数十年来，尽管诊断技术及治疗手段有所提高，但晚期上皮性卵巢癌的五年生存率始终徘徊在30％-40％。2005年，一篇在nature杂志上发表的文章首次提出将parp抑制剂与同源重组缺陷(hrd)在肿瘤中的合成致死作用作为brca1/2突变肿瘤的靶向治疗新途径。

2、parp(poly adp-ribose polymerase，聚腺苷二磷酸核糖聚合酶)是dna损伤修复的关键调控因子，在通过碱基切除修复dna单链断裂(ssb，single strand break)中起着关键作用。在临床应用中，parp抑制剂不仅仅会对brca突变人群有明显益处，在所有高级别浆液性卵巢癌人群中都可观察到明显疗效。然而，从目前的情况来看，对于parp抑制剂的耐药性已逐渐成为临床上所需要面临的一个主要问题。对患者和小鼠模型的研究表明，对parp抑制剂的有效率通常因高耐药率而下降。目前，获得美国fda批准用于铂类敏感型复发性卵巢癌维持治疗的parp抑制剂包括奥拉帕尼(olaparib)、尼拉帕尼(niraparib)和卢卡帕尼(rucaparib)。brca突变或hrd是目前parp抑制剂应用中常用的生物标志物。基于已经获取的临床研究证据，美国fda批准奥拉帕尼和卢卡帕尼用于携带胚系或体系brca1/2基因突变的初始化疗获得临床完全缓解和部分缓解的卵巢癌患者的一线维持治疗。

3、从目前的一些体内外研究的结果来看，已经确定了几种耐药机制，分为三个主要类别：1.影响parp抑制剂在细胞内的含量；2.增强同源重组修复的效率；3.加强复制叉的稳定性。由于药物投入临床使用的时间相对不长等原因，导致我们目前对于parp抑制剂获得性耐药的研究缺乏足够的材料，仍旧存在一定的局限性。parp抑制剂作为卵巢癌化疗后维持治疗阶段的重要药物，目前已逐渐广泛应用于临床，研究人卵巢癌细胞对parp抑制剂耐药性的产生机制对于改善卵巢癌患者治疗效果具有重要的意义，而建立人卵巢癌parp抑制剂耐药细胞株也正是此项工作开展的重要前提与工具。

技术实现思路

1、本发明的目的是建立人卵巢癌parp抑制剂耐药细胞株a2780-olaparib，为相关研究提供耐药肿瘤细胞模型以研究耐药肿瘤细胞形态及生物学特点、研究肿瘤多药耐药机制、分析化疗药物敏感性及筛选化疗药物、研究更有效的肿瘤治疗方法等。

2、本发明采用如下技术方案：人卵巢癌耐奥拉帕尼细胞株a2780-olaparib，其保藏编号为：cctcc no:c2022153。分类名为：人卵巢癌耐药细胞系，于2022年5月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：中国，武汉，武汉大学。

3、进一步地，a2780-olaparib耐parp抑制剂的指数为28.97。

4、进一步地：a2780-olaparib建株完成后撤药培养3个月，液氮冻存半年后复苏细胞，耐药性为原来的96.85％。

5、本发明还提供了一种人卵巢癌耐奥拉帕尼细胞株a2780-olaparib的用途，包括如下中的一种或多种：

6、(1)体外研究肿瘤耐药机制；

7、(2)体外分析化疗药物敏感性；

8、(3)制备肿瘤细胞模型、细胞系类器官模型、肿瘤动物模型等；其中，肿瘤细胞模型包括在本细胞株建立起来的子代细胞或在本细胞株建立起来的子代细胞通过转染带荧光标记的基因建立起来的细胞。动物肿瘤模型包括通过皮下荷瘤或尾静脉注射建模的方法，建立的人卵巢癌的动物模型。

9、(4)体外筛选和评估化疗药物；筛选肿瘤化疗药物的方法可以为：通过向所述人卵巢癌耐奥拉帕尼细胞株a2780-olaparib培养基中添加不同化疗药物，观察药物细胞毒性，获得初步有效的候选药物。然后，将候选药物施药于所述细胞，计算筛选出来的有效药物的半数抑制浓度(ic50)，选择ic50最低的药物进一步作用于动物模型，与未施药组动物的存活期、肿瘤大小、转移情况等进行比较，筛选获得潜在的治疗人卵巢癌的药物。

10、(5)体外开发肿瘤耐药逆转药物。开发肿瘤耐药逆转药物的方法可以为：通过向所述人卵巢癌耐奥拉帕尼细胞株a2780-olaparib培养基中添加耐药逆转药物和奥拉帕尼/紫杉醇/顺铂，观察药物细胞毒性，获得初步有效的候选药物。然后，将候选药物施药于所述细胞，计算筛选出来的有效药物的ic50，选择ic50最低的药物进一步作用于动物模型，与未施药组动物的存活期、肿瘤大小、转移情况等进行比较，筛选获得潜在的耐药逆转药物。

11、本发明的有益效果为：a2780-olaparib能在100nm olaparib中稳定生长、传代、复苏，对olaparib的耐药指数为28.97，除对olaparib耐药外，对顺铂、紫杉醇有交叉耐药。且耐药细胞株建株完成后撤药培养3个月及液氮冻存半年后复苏细胞复测其耐药性，耐药细胞株的耐药性为原来的95％以上，耐药细胞株的耐药稳定性极好。本发明为研究肿瘤耐药机制、分析化疗药物敏感性及筛选和评估化疗药物、开发肿瘤耐逆转药物、研究更有效的肿瘤治疗方法等提供了耐药肿瘤细胞模型。

技术特征：

1.一株人卵巢癌耐奥拉帕尼细胞株，该细胞株命名为a2780-olaparib，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：cctcc no:c2022153。

2.根据权利要求1所述的细胞株，其特征在于，人卵巢癌耐奥拉帕尼细胞株对奥拉帕尼的耐药指数为28.97。

3.根据权利要求1所述的细胞株，其特征在于，人卵巢癌耐奥拉帕尼细胞株建株完成后撤药培养3个月，液氮冻存半年后复苏细胞，耐药性为原来的96.85％。

4.权利要求1-3任一项所述的人卵巢癌耐奥拉帕尼细胞株的子代细胞。

5.权利要求1-3任一项所述人卵巢癌耐奥拉帕尼细胞株的用途，其特征在于，包括：

技术总结
本发明公开了一株人卵巢癌耐奥拉帕尼细胞株，该细胞株命名为A2780‑Olaparib，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:C2022153。本发明细胞株A2780‑Olaparib能在100nM Olaparib中稳定生长、传代、复苏，对Olaparib的耐药指数为28.97，除对Olaparib耐药外，对顺铂、紫杉醇有交叉耐药。且耐药细胞株建株完成后撤药培养3个月及液氮冻存半年后复苏细胞复测其耐药性，耐药细胞株的耐药性为原来的95％以上，耐药细胞株的耐药稳定性极好。本发明为研究肿瘤耐药机制、分析化疗药物敏感性及筛选和评估化疗药物、开发肿瘤耐逆转药物、研究更有效的肿瘤治疗方法等提供了耐药肿瘤细胞模型。

技术研发人员：程晓东,汪辉,薛亦特,王玲芳,吕卫国
受保护的技术使用者：浙江大学医学院附属妇产科医院（浙江省妇女医院、浙江省妇女保健院）
技术研发日：
技术公布日：2024/5/10