一种抗犬PD-1单克隆抗体及其应用的制作方法

本申请涉及抗体兽药。具体地，本申请涉及一种抗犬pd-1单克隆抗体及其应用。

背景技术：

1、程序性细胞死亡蛋白1(pd-1)是一种由活化的t细胞、b细胞和髓系细胞表达的免疫抑制受体。pd-1是免疫球蛋白(ig)超家族的成员，也是cd28同源物，其细胞质尾部含有免疫受体酪氨酸基抑制基序(itim)，缺乏pd-1的小鼠其外周耐受性被破坏，并表现出多种自身免疫特征，这表明pd-1在免疫系统中起着重要的负调节作用。

2、b7：cd28家族能提供刺激和抑制t细胞激活的关键信号，调节t细胞的激活和耐受，而pd-1的配体pd-l1是b7：cd28基因家族的一员。pd-l1由抗原提呈细胞表达，包括干扰素γ刺激产生的人外周血单核细胞以及活化的人和小鼠树突状细胞。抑制性pd-l1和共刺激信号b7-1/b7-2在抗原提呈细胞中的相对水平可能决定了t细胞活化的程度，从而决定免疫耐受和自身免疫的阈值。pd-l1与pd-1的结合可抑制t细胞受体介导的淋巴细胞增殖和细胞因子的分泌，而b7-1与pd-l1的特异性相互作用抑制t细胞的激活和细胞因子的产生。此外，pd-1信号还可以抑制cd28介导的共刺激作用。

3、pd-l1也在心脏和肺等非淋巴组织中表达，pd-l1在非淋巴组织中的表达及其与pd-1的潜在相互作用可能决定炎症部位的免疫反应的程度。研究表明，pd-1与其配体pd-l、pd-l1或pd-l2在肿瘤微环境中结合48小时后，向t细胞传递抑制信号。除与pd-1结合外，pd-l1还可与cd80/b7-1结合，pd-l2可与rgmb结合，促进机体的耐受性。

4、抗pd-1的单抗是治疗人类癌症最有前景的治疗方法之一，近年来，pd-1或pd-l1在不同类型癌症的阻断免疫治疗中都获得了巨大成功，临床试验中使用的犬pd-1抗体也显示出治疗犬癌的效果。有研究者对一只11岁的患犬腺癌的雄性边界牧羊犬进行了抗犬pd-1单抗治疗，两个月后肿瘤达到部分缓解，并且这种缓解维持了6个月，足以说明pd-1在免疫抑制中的重要作用。

技术实现思路

1、本申请的目的在于提供一种新的抗犬pd-1单克隆抗体、包含该单克隆抗体的兽药组合物以及该单克隆抗体的制药用途。

2、本申请的具体技术方案如下：

3、1.一种抗犬pd-1单克隆抗体，其中，其包含三个重链互补决定区和三个轻链互补决定区，所述三个重链互补决定区为cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，所述三个轻链互补决定区为cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其中：

4、cdr-h1的氨基酸序列如seq id no：3所示；

5、cdr-h2的氨基酸序列如seq id no：4所示；

6、cdr-h3的氨基酸序列如seq id no：5所示；

7、cdr-l1的氨基酸序列如seq id no：6所示；

8、cdr-l2的氨基酸序列如seq id no：7所示；

9、cdr-l3的氨基酸序列如seq id no：8所示。

10、2.根据项1所述的单克隆抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中，

11、所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no：9所示；

12、所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no：10所示。

13、3.根据项2所述的单克隆抗体，其中，

14、重链的氨基酸序列如seq id no：11所示；

15、轻链的氨基酸序列如seq id no：12所示。

16、4.根据项1所述的单克隆抗体，其中，

17、所述单克隆抗体的重链的核苷酸序列如seq id no：1所示；

18、所述单克隆抗体的轻链的核苷酸序列如seq id no：2所示。

19、5.一种分离的核酸，其中，其编码如项1-4任一项所述的单克隆抗体。

20、6.一种宿主细胞，其中，其包含如项5所述的核酸。

21、7.一种生产单克隆抗体的方法，其中，所述方法包括培养如项6所述的宿主细胞从而生产如项1-4任一项所述的单克隆抗体。

22、8.一种兽药组合物，其中，其包含如项1-4任一项所述的单克隆抗体和药学上可接受的载体。

23、9.根据项8所述的兽药组合物，其中，其用于治疗犬的癌细胞的生长、增殖或转移相关的疾病；

24、优选地，其中，所述治疗犬的癌细胞的生长、增殖或转移相关的疾病可以是以下任意一种或两种以上：胰腺癌、口腔鳞状细胞癌、口腔腺癌、骨肉瘤、黑色素瘤、肥大细胞瘤、软组织肉瘤、犬恶性胶质瘤、淋巴瘤、尿路上皮癌、犬顶泌腺肛囊腺癌、犬乳腺肿瘤、皮肤癌、肝癌、骨癌、肺癌、膀胱癌、脑瘤、甲状腺癌。

25、10.如项1-4任一项所述的单克隆抗体在制备用于治疗犬的癌细胞的生长、增殖或转移相关的疾病的兽药中的用途；

26、优选地，其中，所述治疗犬的癌细胞的生长、增殖或转移相关的疾病可以是以下任意一种或两种以上：胰腺癌、口腔鳞状细胞癌、口腔腺癌、骨肉瘤、黑色素瘤、肥大细胞瘤、软组织肉瘤、犬恶性胶质瘤、淋巴瘤、尿路上皮癌、犬顶泌腺肛囊腺癌、犬乳腺肿瘤、皮肤癌、肝癌、骨癌、肺癌、膀胱癌、脑瘤、甲状腺癌。

27、发明的效果

28、本申请的抗犬pd-1单克隆抗体特异性结合犬pd-1抗原蛋白，能在蛋白水平上和细胞水平上阻断犬pd1-his抗原与犬pdl1配体的结合，亲和力常数远超阳参，未来有望作为犬癌症的治疗抗体在临床上使用。

技术特征：

1.一种抗犬pd-1单克隆抗体，其中，其包含三个重链互补决定区和三个轻链互补决定区，所述三个重链互补决定区为cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，所述三个轻链互补决定区为cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其中：

2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中，

3.根据权利要求2所述的单克隆抗体，其中，

4.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其中，

5.一种分离的核酸，其中，其编码如权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体。

6.一种宿主细胞，其中，其包含如权利要求5所述的核酸。

7.一种生产单克隆抗体的方法，其中，所述方法包括培养如权利要求6所述的宿主细胞从而生产如权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体。

8.一种兽药组合物，其中，其包含如权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体和药学上可接受的载体。

9.根据权利要求8所述的兽药组合物，其中，其用于治疗犬的癌细胞的生长、增殖或转移相关的疾病；

10.如权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体在制备用于治疗犬的癌细胞的生长、增殖或转移相关的疾病的兽药中的用途；

技术总结
本申请提供一种抗犬PD‑1单克隆抗体，其中，其包含三个重链互补决定区和三个轻链互补决定区，所述三个重链互补决定区为CDR‑H1、CDR‑H2和CDR‑H3，所述三个轻链互补决定区为CDR‑L1、CDR‑L2和CDR‑L3。本申请的抗犬PD‑1单克隆抗体特异性结合犬PD‑1抗原蛋白，能在蛋白水平上和细胞水平上阻断犬PD1‑his抗原与犬PDL1配体的结合，亲和力常数远超阳参，未来有望作为犬癌症的治疗抗体在临床上使用。

技术研发人员：秦晓瑞,张久春,方朝东
受保护的技术使用者：麦里生物科技（上海）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/10