一种大豆开花期qtl的染色体作图区间及获得方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于大豆分子育种领域，具体地涉及一种QTL染色体作图区间及获得方法 和应用。
【背景技术】
[0002] 大豆为人类提供重要的植物蛋白质和油份。在世界范围内，北至高炜度的北欧瑞 典和北美加拿大，南至巴西及阿根廷等广泛区域内均有大豆栽培，但单个品种或种质资源 一般适宜种植的炜度跨度较小，这种区域适应性与大豆的生育期基因密切相关。迄今已发 现了 10个主要影响大豆开花期和成熟期（生育期）基因位点E1-E9和J。但大豆的开花期 是一个数量性状，受多个基因同时控制，发掘与大豆生育期有关的数量性状遗传位点，对于 进一步丰富大豆生育期调控网络的研宄有重要意义。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种大豆开花期QTL的染色体作图区间及获得方 法和应用，所述的作图区间为如表1所示的大豆开花期QTL的4号染色体作图区间 BAR_04_0012-LJ_SSR-PSI0526,该区间的Satt519可作为选择大豆开花期的分子标记。
[0004] 本发明的一种大豆开花期的QTL的染色体作图区间的分子标记，所述的大豆开花 期的 LJ_SSR 作图区间为 BAR_04_0012-LJ_SSR-PSI0526。
[0005] 本发明的大豆开花期SSR标记LJ_SSR作为选择大豆开花期的分子标记在大豆遗 传育种中的应用。
[0006] 本发明的一种大豆开花期的QTL的染色体作图区间的获得方法，所述的大豆开花 期的QTL作图区间为BAR_04_0012-LJ_SSR-PSI0526t_026，它是按照以下步骤进行的：
[0007] -、将大豆品种BR121和Harosory杂交，对F1R获得的种子进行自交，获得重组 自交系群体；
[0008] 二、利用 Map Manager program QTXb20 确定遗传距离，用 Mapchart 2. 1 绘制连锁 群图谱；
[0009] 三、利用MapQTL 5. 0,以LOD彡2. 5为标准，对大豆开花期进行遗传作图。
[0010] 本发明利用大豆品种BR121和Harosory杂交，产生的127个后代中选择种子继续 种植，多代自交得到一个由127个株系组成的重组自交系群体。利用这127个F2代个体构 建了4号染色体的遗传图谱。
[0011] 本发明利用Map Manager program QTXb20确定遗传距离后，利用MapQTL 5. 0作 图软件的多区间作图法，以LOD多2. 5为标准，对大豆开花期进行遗传作图。在4号染色体 上发现 QTL 区间 BAR_04_0012-LJ_SSR-PSI0526,如表 1 所示。
[0012] 本发明包含以下有益效果：
[0013] 本发明以LJ_SSR居中的BAR_04_0012-LJ_SSR-PSI0526t_026的区间都是大豆开 花期的理想标记区间（见表1所示），其中LJ_SSR为LOD最高点，其贡献率为34. 7%。与 此标记紧密相连的QTL的加性效应为负值，即BR121为该QTL的供体。因此，无论是从QTL 的定位，还是QTL对表型的贡献率来看，以LJ_SSR居中的BAR_04_0012-LJ_SSR-PSI0526的 区间都是大豆开花期的理想标记区间。利用本发明提供的如表1所示的大豆开花期染色体 作图区间BAR_04_0012-LJ_SSR-PSI0526的重要意义在于，为进一步丰富大豆开花期调控 网络提供了一种最经济有效的分子育种新途径。
【附图说明】
[0014] 图1给出本发明的大豆开花期的遗传作图。
【具体实施方式】
【具体实施方式】 [0015] 一：一种大豆开花期QTL的染色体作图区间，所述的大豆开花期的 QTL 作图区间为 BAR_04_0012-LJ_SSR-PSI0526。
【具体实施方式】 [0016] 二：本实施方式与一不同的是：以LJ_SSR作为分子标 记选择大豆开花期的QTL作图区间BAR_04_0012-LJ_SSR-PSI0526。其它与一 相同。
【具体实施方式】 [0017] 三：本实施方式与一或二不同的是：所述的分子标记 LJ_SSR是以待鉴定材料的基因组DNA作为模板，以引物进行PCR扩增所得的片段；所述的 引物序列为：
[0018] 上游引物：5 ' GGGAAAAAACTCACTCCTACA 3 '
[0019] 下游引物：5'ATGACAATCTTGAAACTCCCG 3'。
[0020] 其它与【具体实施方式】一或二相同。
[0021]
【具体实施方式】四：本实施方式与【具体实施方式】一至三之一不同的是：所述的PCR 反应条件如下：
[0022] 体系 甩量
[0023] 30μΜ检测样品DNA Ιμ? 上游引物(1〇μΜ) Ιμ? 下游引物(1〇μΜ) Ιμ? I Ox PCR Buffer 2μ1 dNTP Mixture (1 ΟμΜ) 2μ! Taq g|(0.5U) 0.2μΙ CldH2O 12.8μ1
[0024] PCR扩增条件为：94°C预变性5min，94°C变性30s，48°C退火30s，72°C延伸30s，共 35个循环，再72°C延伸10min，4°C保温。其它与【具体实施方式】一至三之一相同。
【具体实施方式】 [0025] 五：本实施方式与一至四之一不同的是：用于PCR扩 增BAR_04_0012的引物为：
[0026] 上游引物：5 ' TTCACACGACAATGTTTGACA 3 '
[0027] 下游引物：5 ' TCTTGATCTCCCTTGTTTCACA 3 '。
[0028] 其它与【具体实施方式】一至四之一相同。
【具体实施方式】 [0029] 六：本实施方式与一至五之一不同的是：用于PCR扩 增PSI0526的引物为：
[0030] 上游引物：5' TTTTGGAGTTAGGTTTGGTG 3'
[0031] 下游引物：5' CCATCGCAITTCAAAAGTTA 3'。
[0032] 其它与【具体实施方式】一至五之一相同。
【具体实施方式】 [0033] 七：本实施方式的大豆开花期SSR标记LJ_SSR作为选择大豆开花期 的分子标记在大豆遗传育种中的应用。
【具体实施方式】 [0034] 八：本实施方式与七不同的是：大豆开花期SSR标记 LJ_SSR来源于大豆品种Harosory。其它与七相同。
【具体实施方式】 [0035] 九：本实施方式的一种大豆开花期的QTL作图区间的获得方法，它 是按照以下步骤进行的：
[0036] 一、将大豆品种BR121和Harosory杂交，对F1R获得的种子进行自交，获得重组 自交系群体；
[0037] 二、利用 Map Manager program QTXb20 确定遗传距离，用 Mapchart 2. 1 绘制连锁 群图谱；
[0038] 三、利用MapQTL 5. 0,以LOD彡2. 5为标准，对大豆开花期进行遗传作图。
【具体实施方式】 [0039] 十：本实施方式与九不同的是：步骤一中对F1代获得 的种子进行自交获得F2代杂交群体，并利用该群体构建大豆4号染色体的遗传连锁图谱。 其它与九相同。
[0040] 通过以下实施例验证本发明的有益效果：
[0041] 实施例1
[0042] 大豆开花期QTL的染色体作图区间BAR_04_0012-LJ_SSR-PSI0526t_026的建立：
[0043] 利用两个开花期差异明显的大豆品种BR121和Harosory配置杂交组合，获得127 个杂交后代，利用这127个F2代个体构建了 4号染色体的遗传图谱。
[0044] 其PCR实验操作程序为94°C变性5分钟，35个扩增循环（94°C 30秒，48 °C 30 秒，72°C 30秒），72°C延伸5分钟。PCR扩增产物直接用6%的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。 利用MapQTL 5. 0作图软件的多区间作图法，以LOD多2. 5为标准，对大豆开花期进行遗传 作图。并用 Map Manager program QTXb20/Mapchart 2.1 绘制连锁群图谱。
[0045] 该遗传图谱共有17个标记，图谱中的分子标记包括13个SSR标记、3个启动子特 异性标记。在4号染色体上发现QTL区间BAR_04_0012-LJ_SSR-PSI0526,如表1所示。
[0046] 其中，图1中显示的整个染色体的每个标记位点进行PCR标记的引物如下：
[0047] BAR_04_0001 ：
[0048] 上游引物：5 ' TGCAAATTCCAACGGTTTTT 3 '
[0049] 下游引物：5'AACACTGGTTTCACCTTGGC 3'
[0050] BAR_04_0012
[0051] 上