一种蒙氏假单孢菌ky-05与应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物技术领域，尤其是一种蒙氏假单抱菌KY-05与应用。
【背景技术】
[0002] 随着城市生活污水排放量的逐年增长，我国城市污水厂污泥急剧增加，到2010年 底，我国年污泥总产生量（化含水率80%计）已达到3000万吨左右，并W每年约10%的速 度增长。然而大约80 %的脱水污泥都是直接填埋或焚烧，造成环境的二次污染，大打折扣了 污水处理厂的环境效益。因此，实现污泥的稳定化、资源化、无害化的处理与处置问题日益 受到关注和重视。污泥厌氧消化处理因其处理费用较低、致病菌破坏率高、可产甲烧、减少 污泥产量和改善污泥脱水性能等优点得到较广泛地应用，是污水厂污泥快速稳定化和资源 化的一个重要方法。
[0003] 污泥中的有机物质主要可溶性糖类、纤维素、木质素、脂肪、蛋白质等该些有机物 是由长链分子构成，有机物的降解是污泥厌氧消化的限速步骤，其中可溶性糖类、蛋白质和 脂肪可W直接被微生物水解利用，但是占干物质量10%~30%的纤维素很难被降解利用， 而在厌氧消化过程中存在碳源不足的现象，因此将纤维素水解为可利用的可溶性糖类可W 弥补污泥厌氧消化碳源不足的现象，对厌氧消化起到增效的作用。目前污泥中纤维素物质 的水解主要是靠化学和物理的方法进行污泥预处理，但是该方法运行费用高，还存在二次 污染，而利用纤维素分解菌对纤维素进行水解可W大大降到运行成本，避免了二次污染，同 时不需要特定的设备。
[0004] 蒙氏假单抱菌已报道在烟草普通花叶病毒防治方面具有很高的应用价值，可W抑 制烟草普通花叶病毒（Tobacco mosaic virus，TMV)的侵染，但是该菌在纤维素降解方面的 降解功能还未被报道。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题在于提供一种蒙氏假单抱菌KY-05,具有纤维素降解 能力。
[0006] 本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述蒙氏假单抱菌KY-05的应用。
[0007] 为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
[0008] 一 种蒙氏假单抱菌（Pseudomonas monteilii)KY-〇5，其保藏号为 CGMCC No. 10172 (保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、，地址；北京市朝阳 区北辰西路1号院3号、保藏日期；2014年12月15日、保藏编号；CGMCC No. 10172)。
[0009] 优选的，上述蒙氏假单抱菌KY-05,菌株呈革兰氏阴性，电子显微镜观察呈杆状，无 芽抱；通过16SrDNA测序鉴定为蒙氏假单抱菌（Pseudomonas monteili)，其系统进化树如 图1所示，leSrDNA序列分析结果为序列表中<400〉1所示序列，即；
[0010] 5^ -TCTTCGGATTGTAAAGCACTTTAAGTTGGGAGGAAGGGCAGTAAGTTAATACCTTGCTGTTTTGAC GTTACCGACAGAATAAGCACCGGCTAACTCTGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACAGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAA TTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTTTGTTAAGTTGGATGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATC CAAAACTGGCAAGCTAGAGTACGG-3^ 〇
[0011] 优选的，上述蒙氏假单抱菌KY-05,所述核巧酸序列为细菌16S rDNA序列的V3可 变区。
[0012] 优选的，上述蒙氏假单抱菌KY-05,分离自市政污泥，在分离平板上培养2d后，菌 落直径在2~5mm，菌落表面和边缘光滑，隆起，呈浅黄色。
[0013] 优选的，上述蒙氏假单抱菌KY-05,具有较强的纤维素降解能力。
[0014] 上述蒙氏假单抱菌KY-05对厌氧消化产沼反应的增效用途。
[0015] 优选的，上述蒙氏假单抱菌KY-05的应用，将所述蒙氏假单抱菌KY-05接种至增菌 培养基中，30°C振荡培养至对数增长期，菌浓为10 6~10 W个/ml,离屯、取菌液上清，按照DNS 还原糖比色国标法GB/T 23881-2009测定上清液对纤维素等有机质的分解代谢能力，并W 0. 1~0. 5 %的接种量接种于厌氧消化反应体系中，实现该菌株对厌氧消化反应的增效作 用。
[0016] 本发明的有益效果是：
[0017] 本发明提供了蒙氏假单抱菌KY-05(保藏号为CGMCC No. 10172)，可产生降解纤维 素类的物质，对于现有的污泥厌氧消化工艺的沼气产气量和厌氧反应启动速度具有提升作 用，可用于开发增强厌氧消化产气效能的微生物制剂，并逐步在污泥厂进行实际应用和推 广，具有广泛的应用前景。
【附图说明】
[001引图1为本发明所述蒙氏假单抱菌KY-05的系统进化树，图中，Pseudomonas monteilii为蒙氏假单抱菌。
[0019] 图2为本发明所述蒙氏假单抱菌KY-05对市政污泥产气增效结果图，其中，上面曲 线为市政污泥+菌，下面曲线为市政污泥。
[0020] 保藏信息
[0021] 分类名词；蒙氏假单抱菌（Pseudomonas monteiU)
[0022] 保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、
[0023] 保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
[0024] 保藏日期；2014年12月15日
[002引 保藏号；CGMCC No. 10172
【具体实施方式】
[0026] 下面结合具体实施例对本发明所述技术方案作进一步的说明。
[0027] 下述实施例中不同的培养基及溶液配方如下：
[002引 1.筛选培养基；纤维素15~30g，磯酸二氨钟2g，硫酸锭1~2g，硫酸儀0. 2~ Ig，氯化巧0. 2~Ig，硫酸亚铁3~6mg，硫酸铺1~2mg，氯化锋1. 0~1. 7mg，氯化钻1~ 2mg，蒸馈水 1000血，pH 7. 0。
[0029] 2.增菌培养基；蒸馈水1000血，蛋白腺5.0~lOg，牛肉膏2~5g，化Cl 5~15g， 抑 7. 2。
[0030] 实施例1
[0031] 蒙氏假单抱菌（Pseudomonas monteilii)KY-〇5的筛选和鉴定。
[0032] 实验材料来自天津纪庄子污水处理厂的厌氧活性污泥样品。
[0033] 取样品稀释液（稀释倍数1(T6)0. 1ml，涂布于筛选培养基平板上，在30°C恒温箱 中培养，挑取单菌落接种至筛选培养基，强化培养4她W上，重复划线纯化3次，得到纯化菌 株；经过16S rDNA和Biolog微生物分类鉴定系统鉴定，确定为蒙氏假单抱菌KY-05,系统 进化树如图1所示，通过PCR扩增其leSrDNA基因，测序结果如<400〉1所示序列，即；
[0034] 5^ -TCTTCGGATTGTAAAGCACTTTAAGTTGGGAGGAAGGGCAGTAAGTTAATACCTTGCTGTTTTGAC GTTACCGACAGAATAAGCACCGGCTAACTCTGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACAGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAA TTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTTTGTTAAGTTGGATGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATC CAAAACTGGCAAGCTAGAGTACGG-3^ 〇
[0035] 实施例2
[0036] 蒙氏假单抱菌（Pseudomonas monteilii)KY-05对纤维素等大分子有机质的降解 试验。
[0037] 处理对象为筛选培养基，运行方式为摇瓶振荡培养。具体实施步骤如下；实施例 1所述蒙氏假单抱菌KY-05接种至增菌培养基，30°C振荡培养至对数增长期（菌浓约为1〇8 个/ml)，W 3%接种量接种于液体筛选培养基中，30°C振荡培养1天，维持溶氧为1. 0~ 3.化pm ;离屯、取上清作为粗酶液，按照DNS比色法佑B/T 23881-2009)测定该菌株降解纤维 素等大分子复杂有机质产生还原糖的量。结果显示，每mL该菌株粗酶液平均可产生还原糖 557.92 U g/min。
[003引实施例3
[0039] 蒙氏假单抱菌（Pseudomonas monteilii)KY-05对市政污泥厌氧消化的增效实验。
[0040] 处理对象为厌氧市政污泥，采用400mL模拟厌氧反应体系运行。具体实施步骤如 下；实施例1所述蒙氏假单抱菌KY-05接种至增菌培养基，30°C振荡培养至对数增长期（菌 浓约为1〇 8个/mU W 0. 2%接种量接种于模拟厌氧反应系统中，中温（35±2°C )厌氧条件 下运行。如图2所示，对反应体系的产气效率进行监测，并与未接种组进行对比分析，结果 显示，在300小时的反应时间内，己氏葡萄球菌KY-06可使混合污泥产气量较对照组平均提 升20. 99 %，生物产沼势能MP增加27. 81%，证实该菌剂对厌氧消化均具有显著增效作用， 并能显著提高污泥中可直接参与厌氧消化的有效底物转化率，使反应系统的整体产沼势能 得到提升，从而达到产气量和污泥减量的双重强化效果。
[004U 上述参照实施例对该一种蒙氏假单抱菌KY-05与应用进行的详细描述，是说明性 的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构 思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种蒙氏假单孢菌KY-05,其特征在于：其保藏号为CGMCC No. 10172。
2. 根据权利要求1所述的蒙氏假单孢菌KY-05,其特征在于：菌株呈革兰氏阴性， 电子显微镜观察呈杆状，无芽孢；通过16SrDNA测序鉴定为蒙氏假单孢菌Pseudomonas monteili，16SrDNA序列分析结果为序列表中〈400>1所示序列。
3. 根据权利要求1所述的蒙氏假单孢菌KY-05,其特征在于：所述核苷酸序列为细菌 16S rDNA序列的V3可变区。
4. 根据权利要求1所述的蒙氏假单孢菌KY-05,其特征在于：分离自市政污泥，在分离 平板上培养2d后，菌落直径在2~5mm，菌落表面和边缘光滑，隆起，呈浅黄色。
5. 权利要求1所述的蒙氏假单孢菌KY-05具有纤维素降解能力。
6. 权利要求1所述的蒙氏假单孢菌KY-05对厌氧消化产沼反应的增效用途。
7. 根据权利要求6所述的蒙氏假单孢菌KY-05的应用，其特征在于：将所述蒙氏假单 孢菌KY-05接种至增菌培养基中，30°C振荡培养至对数增长期，菌浓为IO 6~10 1(1个/ml，离 心取菌液上清，按照DNS还原糖比色国标法GB/T23881-2009测定上清液对纤维素等有机质 的分解代谢能力，并以〇. 1~〇. 5 %的接种量接种于厌氧消化反应体系中，实现该菌株对厌 氧消化反应的增效作用。
【专利摘要】本发明提供了一种蒙氏假单孢菌KY-05，保藏号为CGMCC No.10172，具有纤维素降解能力；所述蒙氏假单孢菌KY-05对于现有的污泥厌氧消化工艺的沼气产气量和厌氧反应启动速度具有提升作用，可用于开发增强厌氧消化产气效能的微生物制剂，并逐步在污泥厂进行实际应用和推广，具有广泛的应用前景。CGMCC No. 1017220141215
【IPC分类】C12R1-38, C12P5-02, C12N1-20, C02F11-04
【公开号】CN104630098
【申请号】CN201410833061
【发明人】李玉庆, 张建, 刘范嘉, 陈剑
【申请人】天津凯英科技发展有限公司
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2014年12月29日