得到0)2点阵激光，同时控制器对0)2点阵激光的密度、强度和单点激光 束的能量进行监控，并与对应的设定值进行比较，根据比较结果控制激光能量衰减动态平 衡补偿器实现对0)2点阵激光的自动调节并保持稳定的激光能量输出。
[00础此外，C02点阵激光也可W直接采用甜earn C02点阵激光仪产生。
[0033] S170,将每一菌种每一浓度的菌液对应的照射后的3个培养皿及作为对照的培养 皿置于37C的细菌培养箱中培养2化；
[0034] S180,于照射后第1天至第7天连续观察放置于37C的细菌培养箱中的、被激光照 射后的3个培养皿及作为对照的培养皿上有无菌落生长，如有菌落生长，则计数细菌W菌 落形成单位CFU表示。
[00巧]W下为采用上述方法的一个具体实验：
[003引一、实验材料
[0037] 菌种；大肠杆菌，金黄色葡萄球菌；
[0038] 固体培养基；营养琼脂培养基，培养皿；
[0039] 液体培养基；肉汤培养基，试管。
[0040] 二、仪器
[00川激光仪；Ebeam C02点阵激光仪；
[0042] 无菌超净工作台；
[0043] 细菌培养箱；
[0044] 恒温抬养摇床。
[004引 S、实验步骤
[0046] 1、菌种活化；将大肠杆菌和葡萄球菌无菌操作，接种于固体培养基，于37C的细 菌培养箱培养24h。
[0047] 2、增菌培养；取固体培养基中的单个菌落接种于5ml液体培养基中，于37C、转速 为21化/min的恒温摇床培养1她。再将2. 5ml培养液加入10ml液体培养基中，于37C、转 速为21化/min的恒温摇床培养1她。
[0048] 3、菌液配置；根据比浊法，通过与麦氏比浊管比浊，将每种菌液制备成H种浓度： l〇7/ml, l〇9/ml。
[0049] 4、细菌接种：用移液枪取菌液0. 5ml均匀涂布于培养皿。每一菌种每一浓度对应 每一激光照射能量分别各涂4个平皿(其中3个作为平衡样本，1个作为对照样本)，自然风 干。
[0050] 5、激光照射：用CA激光对涂布细菌的培养皿中也进行照射，每种菌每种浓度分别 用H种不同能量3J、8J、12J进行照射。照射时间1ms，点阵密度2mm，照射面积为2cmX2cm。
[0051] 6、细菌培养；将照射后的培养皿于37°C的细菌培养箱中培养24h。
[0052] 7、观察；于照射后第1天至第7天连续观察放置于37C的细菌培养箱中的、被激 光照射后的3个培养皿及作为对照的培养皿上有无菌落生长。计数细菌W C即表示
[0053] 四、实验结果
[0054] 激光照射后第1天的结果如表1所示：
[00巧] 表1
[0056]
【主权项】
1. 一种CO2点阵激光杀菌实验方法，其特征在于，包括以下步骤： 对第一菌种和第二菌种分别进行无菌操作，接种于固体培养基中，并置于37°c的细菌 培养箱中培养24h ; 从所述固体培养基中提取第一菌种的单个菌落接种于5ml的第一液体培养基中，从 所述固体培养基中提取第二菌种的单个菌落接种于5ml的第二液体培养基中，并分别置于 37°C、转速为210r/min的恒温摇床培养18h ; 从所述第一液体培养基取2. 5ml培养液加入IOml的第三液体培养基中，从所述第二液 体培养基取2. 5ml培养液加入IOml的第四液体培养基中，并分别置于37°C、转速为210r/ min的恒温摇床培养18h ; 根据比浊法，通过与麦氏比浊管比浊，将所述第三液体培养基和所述第四液体培养基 的菌液分别制备成三种浓度的菌液； 通过移液枪分别取每一菌种每一浓度的菌液0. 5ml均匀涂布于培养皿，其中每一菌种 每一浓度的菌液分别各涂4个培养皿，每一菌种每一浓度的菌液对应的4个培养皿中的3 个作为平衡样本，分别对应一种照射能量强度的激光，其余1个作为对照样本，并分别自然 风干； 利用CO2点阵激光对涂布细菌的培养皿中心进行照射，其中每一种菌三种浓度对应的3 个培养皿分别采用照射能量强度为3J、8J、12J的CO2点阵激光单独照射lms，其中CO2点阵 激光的点阵密度2mm，照射面积为2cmX 2cm ; 将每一菌种每一浓度的菌液对应的照射后的3个培养皿及作为对照的培养皿置于 37°C的细菌培养箱中培养24h ; 于照射后第1天至第7天连续观察放置于37°C的细菌培养箱中的、被激光照射后的3 个培养皿及作为对照的培养皿上有无菌落生长，如有菌落生长，则计数细菌以菌落形成单 位CFU表示。
2. 根据权利要求1所述的CO2点阵激光杀菌实验方法，其特征在于，所述第一菌种为大 肠杆菌，所述第二菌种为葡萄球菌。
3. 根据权利要求1所述的CO2点阵激光杀菌实验方法，其特征在于，所述三种浓度为 107/ml、10 8/ml、l〇7ml。
4. 根据权利要求1所述的CO2点阵激光杀菌实验方法，其特征在于，所述CO2点阵激光 的波长为10600nm。
5. 根据权利要求1所述的CO2点阵激光杀菌实验方法，其特征在于，所述CO2点阵激光 通过以下方式获得： 控制器控制二氧化碳激光器输出激光光束至扫描器，在所述控制器对所述扫描器的控 制下形成点阵分布的光束，并经聚焦镜片聚焦后形成光束更细的激光光束，得到所述CO2点 阵激光，同时所述控制器对所述CO 2点阵激光的密度、强度和单点激光束的能量进行监控， 并与对应的设定值进行比较，根据比较结果控制激光能量衰减动态平衡补偿器实现对所述 CO2点阵激光的自动调节并保持稳定的激光能量输出。
【专利摘要】本发明公开一种CO2点阵激光杀菌实验方法，对第一菌种和第二菌种无菌操作接种于固体培养基中培养；从固体培养基中提取每一菌种的单个菌落接种于5ml液体培养基中并置于37℃的恒温摇床培养；取2.5ml培养液加入10ml液体培养基置于37℃恒温摇床培养；通过与麦氏比浊管比浊，将液体培养基菌液制备成三种浓度的菌液；取每一菌种每一浓度的菌液涂布于培养皿；利用CO2点阵激光对涂布细菌的培养皿中心进行照射，每一种菌三种浓度对应的培养皿分别采用照射能量强度为3J、8J、12J的CO2点阵激光照射1ms；将每一菌种每一浓度的菌液照射后的培养皿置于37℃的细菌培养箱中培养；于照射后连续观察被激光照射后的培养皿上有无菌落生长，如有菌落生长则计数细菌以CFU表示。
【IPC分类】C12Q1-02, C12R1-44, C12R1-19
【公开号】CN104630323
【申请号】CN201310557146
【发明人】王宏伟, 陈颖白
【申请人】中国医学科学院北京协和医院
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2013年11月11日