一株弯曲乳酸杆菌(Lactobacillus crispatus)及其制药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，特别涉及一株分离自人体的可用于防治细菌性阴道病 的弯曲乳酸杆菌（Xactobacillus crispatus)
【背景技术】
[0002] 微生物栖息在人体几乎每一个部位，如皮肤、口腔、肠道、生殖道等各部位都存在 着大量的细菌，其中包括多种不同种类的细菌，可粗略分为"有益菌"和"条件致病菌"两大 类，在健康人体该些细菌的数量和比例保持稳定的平衡状态。妇女阴道内可存在多种细菌， 其中，乳酸杆菌是维持阴道健康微生态环境最常见和最重要的有益菌，乳酸杆菌占健康妇 女阴道细菌总量的90% W上。它们主要通过产酸、过氧化氨来抑制病原菌和其他条件致病 菌的生长。如果某些因素引起阴道内乳杆菌数量减少，甚至完全缺失，则可导致阴道内许多 条件治病菌异常增殖，出现W明显的阴道微生态环境奈乱为主要特征的细菌性阴道病。
[0003] 细菌性阴道病是育龄期妇女最为常见但又未受到重视的多发病，在健康妇女中的 患病率约为20%，孕妇约为15%。细菌性阴道病是"小疾病，大麻烦"，患者生活质量明显下 降，精神负担很重；而且感染艾滋病、淋病、非淋菌性尿道炎等性病的风险明显增加；患病 孕妇可出现一系列妊娠并发症，如早产及绒毛膜羊膜炎等。目前，细菌性阴道病的治疗主要 依靠甲硝哇或林可霉素等抗生素，但治疗效果不佳，治愈率不到50%，而且复发的比例高。 一半患者即使大量应用抗生素亦不能治愈，临床症状持续存在，患者备受煎熬，医生苦无良 策。如何控制复发、彻底根治细菌性阴道病是妇产科医生亟需解决的棘手问题。
[0004] 为了提高细菌性阴道病的治疗效果，临床上急需新的治疗方案。由于抗生素治疗 细菌性阴道病效果欠佳和抗生素治疗引起的肝、肾损害等毒副作用，国内外一直在努力探 索基于益生菌乳杆菌制剂的微生态疗法。微生态治疗是将W杀灭微生物为主要的治疗方法 变为增加益生菌、恢复阴道正常微生态环境为目的的新型治疗理念。即在利用抗生素清除 致病菌后，直接补充自健康妇女阴道分离的乳杆菌活菌制剂，使其粘附定植下来，促进其天 然的抵抗致病菌生长的能力。
[0005] 健康妇女阴道内存在多种乳杆菌，具有个体差异性，且弯曲乳酸杆菌各株间抗致 病菌能力差异明显。选择乳杆菌益生菌时，需要综合考虑乳杆菌的种类，其产酸、产馬化能 力，及与阴道上皮细胞粘附的能力，其中乳酸杆菌能否在阴道成功定植，是乳杆菌持续作用 的基础，也是乳杆菌发挥疗效的关键因素。
[0006] 由于不同的乳杆菌株对阴道上皮细胞有不同的粘附亲和力，亲和力强的菌株定植 能力强，才能起到抑杀多种病原微生物的作用。如果乳杆菌活菌制剂不能定植在阴道上皮 细胞，体外实验中再强的抑杀多种病原微生物的作用都无从谈起，变为空头支票。
[0007] -个完善而有效的益生菌菌种，其本身至少必须具备下述标准；（1)须为宿主应 用位置正常定植菌；（2)能在宿主应用位置存活并生长；（3)可提供宿主有益的作用；(4) 相关产品制成及储存期间须可维持活性及存活能力。
[0008] 目前，国内阴道益生菌菌剂只有一种，其主要成分是德氏乳杆菌活菌。虽然它是从 健康妇女阴道分离出来的一种乳杆菌，但不是我国妇女阴道菌群中的主要有益菌，我国健 康妇女阴道细菌W弯曲乳酸杆菌为主。
【发明内容】
[0009] 本发明人基于上述领域的空白，从我国健康妇女体内分离了一种弯曲乳酸杆菌 (Lactobacillus crispa化S)菌株，该菌株于2014年7月16日保藏中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中也，保藏编号为CGMCC No. 9468。本发明人还证明了该菌株对阴道上 皮细胞具有较强的黏附作用，同时还证实该菌株具有较强的产生化的能力，该菌制成的 菌剂在存储期间能够维持较高的活性和存活能力，说明可W用于防治细菌性阴道病。
[0010] 本发明请求保护的技术方案如下：
[0011] 一株弯曲乳酸杆菌菌株 IMC-79 (Lactobacillus crispatus)，其保藏号为 CGMCC No.9468。
[0012] 用于预防和/或治疗细菌性阴道病的制品，其特征在于：所述制品的活性成分包 括上述弯曲乳酸杆菌菌株IMC-79。
[0013] 用于预防和/或治疗细菌性阴道病的制品，其特征在于：所述制品的活性成分是 上述的弯曲乳酸杆菌菌株IMC-79。
[0014] 所述制品，其特征在于；还含有制备菌剂的常规辅料成分。
[0015] 用于抑制致病性细菌的制品，其特征在于：所述制品的活性成分上述的弯曲乳酸 杆菌菌株IMC-79。
[0016] 用于抑制致病性细菌的制品，其特征在于：所述制品的活性成分是上述的弯曲乳 酸杆菌菌株IMC-79。
[0017] 所述的制品，其特征在于；还含有制备菌剂的常规辅料成分。
[0018] 上述的弯曲乳酸杆菌菌株IMC-79在制备预防和/或治疗细菌性阴道病的制品中 的用途，其特征在于，所述制品的活性成分包括上述的弯曲乳酸杆菌菌株IMC-79。
[0019] 上述的弯曲乳酸杆菌菌株IMC-79在制备预防和/或治疗细菌性阴道病的制品中 的用途，其特征在于：所述制品的活性成分是上述的弯曲乳酸杆菌菌株IMC-79。
[0020] 本发明根据益生菌菌种的公认标准，从我国健康妇女体内分离了阴道内优势菌 群一弯曲乳酸杆菌，并从中筛选出了一株具有较高的产H202能力和与阴道上皮细胞粘附 定植能力强的益生菌株一弯曲乳酸杆菌IMC-79。实验证明，实验证明，将所述弯曲乳酸杆菌 (Lactobacillus jensenii) IMC-79,按照106cfu/ml的密度接种于MRS液体培养基，于厌氧 环境下，37C静置培养2比后，转换为振荡培养化，转速为220rpm，最终所得培养液上清中 肥0 2的浓度高达365. 5 y M。高效产生过氧化氨，可有效抑制外来的病原菌和其他条件致 病菌的生长；同时，该弯曲乳酸杆菌对每个阴道上皮细胞平均粘附数量达到113,该也证实 该菌株对阴道上皮细胞具有较强的粘附作用，保证了菌株在阴道上皮的定植。
[0021] 该菌株已经送保藏，保藏名称为IMC-79,保藏号为CGMCC No. 9468,大小约1-2毫 米、不透明、突起的乳白色菌落，菌落边缘整齐、较湿润，大小形态稳定（图1)。处于对数生 长期的所述菌株IMC-79,经涂片、革兰染色，光学显微镜下观察菌体的形态为：革兰染色阳 性，无芽胞杆菌，无鞭毛。弯曲乳酸杆菌（Lactobacillus jensenii) IMC-79兼性厌氧，生长 最适温度37-42C，最适抑5. 8-6. 2 ;可发酵葡萄糖、果糖、藏糖、海藻糖、麦芽糖等多种糖。
[0022] 根据实验证实的该菌株的产&〇2能力和对阴道上皮细胞的粘附能力，本发明还请 求保护W该菌为活性的用于预防和/或治疗细菌性阴道病的制品。制备方法是本领域技 术人员熟知的常规手段，例如但不限于如《一种稳定安全的微生态制剂及其制备方法和用 途》（CN1663573B)，《灭活的乳酸菌微生态制剂及其制备方法》（CN101612169B)，《一种乳酸 杆菌微生态制剂的制备方法》（CN101530160A)，《作为人体阴道中的益生微生物的乳酸产生 细菌》(CN1308436)等现有技术中公开的制备方法或操作步骤，目前市场上公开销售使用的 "乳酸菌阴道胶囊"、"阴道用乳杆菌活菌胶囊（定君生）"的制备工艺，W所述弯曲乳酸杆菌 IMC-79为活性成分，通过所述常规手段和/或现有技术文献中公开的制备方法或操作步骤 或目前市场上公开销售使用的产品的制备工艺，可W获得用于预防和/或治疗细菌性阴道 病的制品，或者用于抑制致病性细菌的制品。
[0023] 本发明请求保护的所述制品的剂型优选但不限于：胶囊剂。
[0024] 本发明的一些实施例中，还提供了用于抑制致病性细菌的产品，该些产品的活性 成分是或者包括本发明分离鉴定到的詹氏乳杆菌IMJ-118。该些产品可用于人体其它部位 的致病性细菌的感染。
[0025] 本发明还提供了体外抑制致病性细菌的方法，如在特定环境中抑制致病性细菌的 用途，该种用途与疾病治疗无关。
[002引保藏信息
[0027] 菌种保藏名称JMC-79
[002引分类命名；弯曲乳杆菌
[0029] 保藏号：CGMCC No. 9468
[0030] 拉下名；Lactobacillus crispatus
[0031] 保藏单位；中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中也
[0032] 保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号 [003引保藏日期；2014年7月16日
【附图说明】
[0034] 图1为从健康人引导分离的弯曲乳酸杆菌IMC-79菌落。
[00巧]图2为弯曲乳酸杆