具有降尿酸作用的秋刀鱼美拉德肽及其制备方法和用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于秋刀鱼精深加工领域，具体涉及具有降尿酸作用的秋刀鱼美拉德肽及 其制备方法和用途。
【背景技术】
[0002] 尿酸（C5H4N403)是内源性嘌呤和饮食中嘌呤的代谢产物。在人体的嘌呤代谢中， ATP等经过一系列的代谢反应，生成次黄嘌呤及黄嘌呤，两者皆会被黄嘌呤氧化酶（XOD)氧 化生成尿酸。而当血尿酸水平过高时，将会导致高尿酸血症，继而导致尿酸盐析出结晶并沉 积在关节处，引起痛风的发生。
[0003] 在目前的药物治疗中，急性痛风发作时，常使用西药进行消炎、镇痛，从而达到治 疗的目的，如秋水仙碱、非留体抗炎药物及泼尼松龙（促肾上腺皮质激素）起效快，效果明 显。此外，还有前列腺素合成酶抑制剂一一萘普生具有抗炎、解热、镇痛的功效，对类风湿性 关节炎和痛风也有一定的效果。
[0004] 西药治疗方法虽然起效快，但大多数西药具有明显的毒副作用。如秋水仙碱会造 成患者的肾脏和肝脏功能衰竭及中枢神经损伤；非留体抗炎药物可能会引起尿蛋白甚至间 质性肾炎、胃肠道和肝脏的功能紊乱；泼尼松龙则会导致糖代谢异常、肌肉萎缩、骨质疏松 和中枢神经系统损伤等多种毒副作用。因此，寻找降尿酸功效显著的、安全的降尿酸药物已 成为必然的趋势。
[0005] 蛋白多肽安全无毒副作用，长期以来都被看作是健康的食品配料或药物的重要来 源，且小分子多肽比蛋白和氨基酸更容易被人体吸收，并具有良好的加工性能。蛋白多肽对 于人体是必不可少的，它们具有不同的生理作用，如降血压、降胆固醇、抗血栓、抗癌、抗氧 化等，随着科技的发展，从蛋白肽中发现的功效越来越多。
[0006] 海洋生物不仅蛋白质含量丰富，而且在长期的进化中，其蛋白质的组成、结构和功 能与陆地生物相比有较大的差异，是生物活性肽很好的来源。秋刀鱼生活在亚洲和美洲沿 岸的太平洋亚热带和温带的水域中，主要分布于太平洋北部温带水域，是一种经济价值较 高的海洋鱼种。如果能将秋刀鱼蛋白中功能性物质提取，并通过其他工艺将其生物活性进 一步提升，既可提高其附加值，又可拓宽其应用范围。
[0007] 因此，以秋刀鱼为原料，结合生物酶解技术及美拉德反应技术制备具有降尿酸作 用的秋刀鱼美拉德肽产品，具有较大的经济和社会意义。
【发明内容】
[0008] 本发明的首要目的在于提供一种具有降尿酸作用的秋刀鱼美拉德肽的制备方法， 该方法的要点在于采用生物酶解技术释放秋刀鱼蛋白中的降尿酸活性成分，并利用超滤膜 分离富集目标降尿酸肽，以及通过美拉德反应提升降尿肽的降尿酸活性。
[0009] 本发明的另一目的在于提供由上述方法制得的具有降尿酸功效的秋刀鱼美拉德 肽。
[0010] 本发明的再一目的在于提供上述的秋刀鱼美拉德肽的用途。
[0011] 本发明的目的通过下述技术方案实现：
[0012] -种具有降尿酸作用的秋刀鱼美拉德肽的制备方法，包括以下步骤：
[0013] (1)秋刀鱼肽的制备：秋刀鱼去头去内脏，过绞肉机绞碎，加水在40~50°C下加热 搅拌1~2小时，然后调节体系pH值至4. 2,继续加热搅拌1~1. 5小时，离心分离，弃除上 清液和上层油脂，取沉淀物；加入沉淀物质量1~1. 5倍的水，调节体系pH值至7. 0,加入 蛋白酶在50~55°C下保温水解6~9小时，灭酶，离心，取上清液经膜通量为5000Da的超 滤膜进行分离，取透过液即秋刀鱼肽液；
[0014] (2)美拉德反应肽的制备：将秋刀鱼肽液真空浓缩至固形物35~55%，然后加入 还原糖，在100~121°C下加热0. 5~1. 5小时；进行喷雾干燥，得秋刀鱼美拉德肽；以秋刀 鱼肽浓缩液固形物质量为计算基准，还原糖的添加量占1. 〇~3. 0%;
[0015] 所述的离心是5000r/min离心15~20min;
[0016] 步骤⑴中，加水是加入秋刀鱼碎肉质量3~5倍的水；
[0017] 步骤⑴所述的调节体系pH值是用0. 5mol/L的NaOH溶液或HC1溶液调节；
[0018] 步骤（2)所述的蛋白酶是商业用的碱性蛋白酶和风味蛋白酶，优选诺维信公司 的碱性蛋白酶（Alcalase 2. 4L)和风味蛋白酶（Flavourzyme 500MG)，碱性蛋白酶的添加 量为秋刀鱼沉淀物质量的0. 6~1. 2%，风味蛋白酶添加量为秋刀鱼沉淀物质量的1. 0~ 2.0% ；
[0019] 步骤（2)中，所述的还原糖为食品级葡萄糖、木糖或核糖。
[0020] 由上述方法制得的秋刀鱼美拉德肽可用于制备具有降尿酸和/或抗痛风功效的 药物和保健品，在应用时，可以将其与具有降尿酸作用的中草药复配。
[0021] 本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0022] (1)由于秋刀鱼中的油脂含量较高（约为18% )，会影响蛋白酶解的进行，且会降 低蛋白肽的纯度，增加产品油脂腐败变质的机率。本发明方法首先对秋刀鱼水溶液进行加 热搅拌，促使秋刀鱼中的油脂与其他成分分离开来，然后通过改变体系中的酸碱环境，使溶 液中的蛋白质在等电点范围内沉淀下来，从而达到高效分离油脂的目的。
[0023] (2)本发明方法结合生物酶解技术、生物膜技术和美拉德反应技术，从秋刀鱼蛋白 中释放出具有降尿酸活性的生物活性肽，然后通过超滤膜富集目标活性肽，最后再通过美 拉德反应技术提升目标生物活性肽的降尿酸活性。采用本发明方法制得的秋刀鱼美拉德肽 的降尿酸功效明显，可显著降低经氧嗪酸钾诱致高尿酸血症的大鼠血清尿酸水平，并具有 明显的保护肾脏的功效。
[0024] (3)本发明工艺操作简单、生产成本低、没有任何污染，所得秋刀鱼美拉德肽的降 尿酸活性强。
【具体实施方式】
[0025] 下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
[0026] 本发明实施例中所涉及的试验指标其实验方法如下：
[0027] (1)还原力的测定
[0028] 2mL样品加到2mL0?2mol/L磷酸盐缓冲液（pH = 6. 6)和2mL 1 % (g/L)的铁氰化 钾溶液的混合液中。混合物在50°C保温20min，然后在反应混合物中加入2mL 10% (g/L) 的三氯乙酸，混合后以3000r/min离心10min，取2mL上清液与2mL蒸馏水以及0. 4mL 0. 1% (g/L)氯化铁溶液在反应试管中反应，lOmin后测定其在700nm处的吸光值。吸光值越大则 表明该样品的还原力越强。
[0029] (2)氧自由基清除能力（ORAC)测定方法
[0030] 基于ORAC反应在75mmol/L磷酸盐缓冲液（pH = 7. 4)环境中进行，FL (荧光素钠 盐）、AAPH(自由基产生剂）、标准抗氧化物质Trolox(维生素E水溶性类似物）以及待测 样品均用该缓冲液溶解和稀释。具体测定操作为：在96孔板各微孔中分别加入待测样品 20 y L后添加缓冲溶液20 y L及FL (70nmol/L) 20 y L，在37°C下预置15min后，用多道移液 器迅速在各孔中加入AAPH(12. 8mmol/L) 140 y L启动反应，并将微孔板置于荧光分析仪中 在37°C下以激发波长485nm，发射波长528nm进行连续测定，每2min测定一次各孔焚光强 度，测定108min，焚光强度分别记为。将记录的各微孔不同时间点的绝对 荧光强度数据A与初始荧光强度f 〇相比，折算成相对荧光强度，并根据公式如下公式统计 荧光熄灭曲线下面积（AUCsamDle)值，
[0031]
【主权项】
1. 一种具有降尿酸作用的秋刀鱼美拉德肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 秋刀鱼肽的制备：秋刀鱼去头去内脏，过绞肉机绞碎，加水在40~50°C下加热搅拌 1~2小时，然后调节体系pH值至4. 2,继续搅拌加热1~1. 5小时，离心分离，弃除上清液 和上层油脂，取沉淀物；加入沉淀物质量1~1. 5倍的水，调节体系pH值至7. 0,加入蛋白 酶在50~55°C下保温水解6~9小时，灭酶，离心，取上清液经膜通量为5000Da的超滤膜 进行分离，取透过液即秋刀鱼肽液； (2) 美拉德反应肽的制备：将秋刀鱼肽液真空浓缩至固形物35~50%，然后加入还原 糖，在100~121°C下加热0. 5~1. 5小时；进行喷雾干燥，得秋刀鱼美拉德肽；以秋刀鱼肽 浓缩液固形物质量为计算基准，还原糖的添加量占1. 〇~3. 0% ; 步骤（2)中，所述的还原糖为食品级葡萄糖、木糖或核糖。
2. 根据权利要求1所述的具有降尿酸作用的秋刀鱼美拉德肽的制备方法，其特征在 于：所述的离心是5000r/min离心15~20min。
3. 根据权利要求1所述的具有降尿酸作用的秋刀鱼美拉德肽的制备方法，其特征在 于：步骤（1)中，加水是加入秋刀鱼碎肉质量3~5倍的水。
4. 根据权利要求1所述的具有降尿酸作用的秋刀鱼美拉德肽的制备方法，其特征在 于：步骤（1)中，所述的蛋白酶为碱性蛋白酶和风味蛋白酶。
5. 根据权利要求4所述的具有降尿酸作用的秋刀鱼美拉德肽的制备方法，其特征在 于：碱性蛋白酶的添加量为秋刀鱼沉淀物质量的〇. 6~1. 2%，风味蛋白酶添加量为秋刀鱼 沉淀物质量的1. 0~2. 0%。
6. 根据权利要求4所述的具有降尿酸作用的秋刀鱼美拉德肽的制备方法，其特征在 于：碱性蛋白酶为诺维信公司的Alcalase 2. 4L，风味蛋白酶为诺维信公司的Flavourzyme 500MG。
7. -种具有降尿酸作用的秋刀鱼美拉德肽，其特征在于：是由权利要求1-6任一项所 述的方法制备得到。
8. 权利要求7所述的秋刀鱼美拉德肽在制备具有降尿酸和/或抗痛风功效的药物和保 健品中的应用。
9. 根据权利要求8所述的秋刀鱼美拉德肽在制备具有降尿酸和/或抗痛风功效的药物 和保健品中的应用，其特征在于：所述的秋刀鱼美拉德肽与具有降尿酸作用的中草药复配 使用。
【专利摘要】本发明公开了一种具有降尿酸作用的秋刀鱼美拉德肽及其制备方法和用途，其制备方法包括以下步骤：将秋刀鱼绞碎，然后加热搅拌，再调节pH值至4.2，离心分离取沉淀，加入蛋白酶酶解，酶解产物离心后取上清，过超滤膜后得到秋刀鱼肽液；将秋刀鱼肽液浓缩后加入还原糖反应，即得到秋刀鱼美拉德肽。本发明方法结合生物酶解技术、生物膜技术和美拉德反应技术，从秋刀鱼蛋白中释放出具有降尿酸活性的生物活性肽，然后通过超滤膜富集目标活性肽，最后再通过美拉德反应技术提升目标生物活性肽的降尿酸活性。采用本发明方法制得的秋刀鱼美拉德肽的降尿酸功效明显，可显著降低经氧嗪酸钾诱致高尿酸血症的大鼠血清尿酸水平，并具有明显的保护肾脏的功效。
【IPC分类】A61K38-01, A61P19-06, C07K1-34, A23L1-29, C12P21-06
【公开号】CN104673865
【申请号】CN201510094901
【发明人】苏国万, 赵谋明, 赵容钟, 赵强忠, 徐巨才
【申请人】华南理工大学
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2015年3月3日