一种从钦州石金钱龟中提取活性肽的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种活性肽的制备方法，具体涉及一种从钦州石金钱龟中提取活性肽 的方法。
【背景技术】
[0002] 石金钱龟，又称石龟，拟水龟属，属水陆两栖动物，有着极高的药用价值、食用价 值、观赏价值和人文价值。众人皆知龟类是长寿之物。龟的寿命长达几百年，常言道"千年 王八，万年龟"，龟不但有极强的生命力，而且体内有多肽长寿因子。食用、药用龟肉能延年 益寿，而且长寿龟体内的多肽长寿因子能充分被人体所吸收。人体很多活性物质都是以肽 的形式存在的，经研宄发现人体干重的70%以上都是蛋白质（由50个以上氨基酸组成的肽 就称为蛋白质），所以说没有肽，就没有活性，就没有生命。肽涉及人体的激素、神经、细胞 生长和生殖各领域。活性肽主要控制人体的生长、发育、免疫调节和新陈代谢，它在人体处 于一种平衡状态，若活性肽减少后，人体的机能发生重要变化，对于儿童来说，他的生长、发 育变得缓慢，甚至停止，长久下去就形成了侏儒；对成年人或老年人，缺少活性肽后，自身的 免疫力就会下降，新陈代谢紊乱，内分泌失调，引发各种疾病的产生，如失眠、身体消瘦或浮 肿。由于活性肽还作用于神经系统，因此人体就会变得动作迟缓，头脑不再聪慧，更主要的 是活性肽减少，直接引起人身体各部位逐渐出现全面衰老，引发各种疾病。科研人员还发现 龟从不患癌症，其体内含有抗癌物质。运用乌龟精华，使人延年益寿这一生命科学研宄的前 沿目标，当前引人注目。
[0003] 钦州地处沿海，有着养殖龟鳖的得天独厚的自然优势和传统产业优势，由于地理 环境和水土不同，钦州产的龟鳖肉质特别香甜，享有"天下名龟出钦州"之盛名。钦州石金 钱龟，是广西壮族自治区钦州市特产，为中国地理标志产品。钦州石金钱龟养殖有着悠久的 历史，积累了成熟的经验，养殖户利用本地沿海、沿江低值小杂鱼丰富的优势，以鲜活鱼虾 天然饲料喂养为主，养殖的石金钱龟更接近自然生态产品，具有更高的营养价值。经过多年 的发展，钦州的石金钱龟养殖户发展到1万多户，养殖数量发展到70多万只，年产值3亿多 元，龟鳖产业已成为钦州市农民群众致富奔康的支柱产业。
[0004] 对于从钦州石金钱龟中提取活性肽的研宄已有一些研宄报道，例如中国专利 CN103397066A从钦州石金钱龟中提取活性肽的方法，公开了一种从钦州石金钱龟中提取活 性肽的方法，包括下述步骤：原料处理、水解、酶解、冷冻、融化、浓缩、喷雾干燥即得成品。 但是该方法得到的产品的提取率还是不太理想。
【发明内容】
[0005] 本发明提供了一种提取率高，且小分子肽比例高的以钦州石金钱龟为原料提取活 性肽的方法。
[0006] 本发明是通过如下技术方案实现的：
[0007] 一种从钦州石金钱龟中提取活性肽的方法，包括下述步骤：
[0008] 1)原料处理：取钦州石金钱龟，去除内脏后，清洗干净，保留龟壳、龟肉；
[0009] 2)水解：加入8-10倍量的纯净水，调节混合物pH值至1. 8-2. 5,煮沸后维持压力 0.1 Mpa水解8-10小时，煮沸维持压力过程中注意补充失去的水分；
[0010] 3)高压微射流超微粉碎处理：将水解后得到的溶液，用高速剪切乳化机处理 10-20min，转速为8000-1200()r/min，然后用高压微射流超微粉碎设备于25°C进行处理，处 理压力为80-120MPa，处理次数为2-3次，得到膏状浆液；
[0011] 4)发酵：将步骤3)得到的膏状浆液经过超高温瞬时灭菌，然后调整pH6. 5-7.0， 按体积百分比为10-15%接入培养成熟的乳酸菌液体菌种，放入发酵罐中发酵，发酵温度在 35-37°C，发酵时间 8-10h;
[0012] 5)酶解：将步骤4)得到的发酵液经过超高温瞬时灭菌，过滤，收集滤液，调pH值 至3. 5-5. 5,加入0. 2-0. 3%重量份木瓜蛋白酶，45-50°C酶解反应6-8h;
[0013] 6)冷冻：将酶解后的溶液，离心30分钟，转速4000r/min，收集沉淀，-10°C冷冻 24h ；
[0014] 7)融化、浓缩：将步骤6)得到的冷冻物取出，加热使之融化，过滤，收集滤液，将滤 液进行浓缩成相对密度为1. 22 (60°C )的浸膏；
[0015] 8)将浸膏进行喷雾干燥，包装后即得成品。
[0016] 本发明所述的乳酸菌优选保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、乳脂链球 菌、两歧双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌。
[0017] 采用本发明的得方法得到的活性肽，具有如下性状：
[0018] 白色结晶粉末；味微苦，易溶于水。
[0019] 采用本发明的方法以钦州石金钱龟为原料提取活性肽，与现有技术相比，本发明 的优点：
[0020] 1、本发明通过使用高压微射流超微粉碎技术处理石金钱龟的水解液，利用高压微 射流超微粉碎设备产生挤压力、剪切力、冲击力，经过液-液、液-固之间的高速撞击、高剪 切、空穴作用等，使物料的分子结构发生变化。高压微射流超微粉碎设备可以做到纳米分 散，细化效果可达0. lum甚至以下，压力高达100-200MPa，得到的溶液颗粒粒径分布均匀， 具有操作简单、无污染、可在线清洁消毒、可高效率进行细胞破壁等诸多优点。
[0021] 2、现有技术对石金钱龟的处理一般是采用酶解，酶解只能处理蛋白，而本发明通 过乳酸菌来处理，具有促进蛋白质、单糖的分解，以及促进钙、镁等营养物质的吸收，产生维 生素B族等大量有益物质，还可以增加肠道有益菌群，改善人体胃肠道功能，恢复人体肠道 内菌群平衡，形成抗菌生物屏障，抑制胆固醇吸收，降血脂、降血压作用，免疫调节作用，增 强人体免疫力和抵抗力等作用。
[0022] 3、采用本发明的方法，提纯率和分离度更高，现有技术采用酸性蛋白酶酶解，活性 肽的提取率为10%左右，而本发明提取率为20%以上，且小分子肽比例在95%以上。
【具体实施方式】
[0023] 下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
[0024] 实施例1:
[0025] 一种从钦州石金钱龟中提取活性肽的方法，包括下述步骤：
[0026] 1)原料处理：取10kg钦州石金钱龟，去除内脏后，清洗干净，保留龟壳、龟肉；
[0027] 2)水解：加入80kg纯净水，调节混合物pH值1. 8,煮沸后维持压力0.IMpa水解8 小时，煮沸维持压力过程中注意补充失去的水分；
[0028] 3)高压微射流超微粉碎处理：将水解后得到的溶液，用高速剪切乳化机处理 20min，转速为1200