一种分子标记辅助选择提高黑羽番鸭脂肪沉积的育种方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种育种方法，具体是一种分子标记辅助选择提高黑羽番鸭脂肪沉积 的育种方法。
【背景技术】
[0002] 黑羽番鸭是是由江苏农牧科技职业学院与江苏现代畜牧科技园合作培育，W法国 白羽番鸭为父本、本±番鸭为母本进行杂交，通过杂交后代的继代选育，W培育遗传性能稳 定、生长速度较快、肉质较好的黑羽型优质番鸭为育种目标。黑羽番鸭作为一种瘦肉型肉鸭 品种，商品代上市时间大致在13周龄左右，其脂肪沉积量较低，会影响肌肉中肌巧酸的含 量降低肌肉的品质，故提高黑羽番鸭脂肪沉积量可W相应提高肌肉中肌巧酸的含量，提高 烹任效果。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种检测方法简单、节省育种费用的分子标记辅助选择提 高黑羽番鸭脂肪沉积的育种方法，W解决上述【背景技术】中提出的问题。
[0004] 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案： 一种分子标记辅助选择提高黑羽番鸭脂肪沉积的育种方法，具体步骤包括： 1) 提取黑羽番鸭基因组DNA; 2) 参照野鸭的A-FABP基因序列设计引物，引物序列为： 上游序列F;5' -TCTTCAGTCCATAGCACCCC-3'，如SEQIDNO: 1 所示； 下游序列R: 5' -AAAAGGAACTCACCACCACC-3'，如SEQIDN0:2 所示； 3) W黑羽番鸭基因组DM为模板进行PCR扩增；PCR扩增产物长度为17化P; 4)PCR扩增产物采用SSCP检测或直接测序，判定被检测个体属于W下哪种基因型；MM 型、丽型、順型，其中匪型的基因序列如SEQIDNO:3所示；丽型的基因序列如SEQID NO:4所示；順型的基因序列如SEQIDNO: 5所示； 如果某个体的基因型为匪型，则表示该个体脂肪沉积能力高，能作为种用，用于生产MM型后代；丽型也可作为种用，用于生产MM型；順型不能产生MM型，直接淘汰。通过配种 产生MM型的方式主要有3种情况：①双亲均为MM型，则后代100%为MM型；②双亲一方为 匪型，另外一方为丽型，则后代50%为匪型，50%为丽型；⑨双亲均为丽型，则后代25% 为匪型，50%为丽型，25%为順型。
[0005] 作为本发明进一步的方案；所述PCR扩增条件： ①反应液组成： 10XPCRBuffer，含Mg2+，2. 5yL，dNTP，2. 5mM，2yL， 正向引物，1化M，1uL反向引物，1化M，1 Taq聚合酶，5U/yL，0. 2yL， 地2〇，17. 3yL， DM模板，1化， ②扩增条件： a. 95°C预变性 5min; b. 95°C变性 30s; c. 67°C退火 30s; d. 72°C延伸 30s; e. 72°C延伸lOmin; f. 4°C保存5min;其中步骤b-d需要经过35个循环周期。
[0006] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明在黑羽番鸭育种过程中，在4周龄 左右即可进行个体基因型判断，然后淘汰非目标基因型个体，可W达到早期选育，降低非目 标个体的饲养量时间，节省育种费用。该检测方法简单、基因型容易判断，因此具有推广价 值。
【附图说明】
[0007] 图1是本发明过程中PCR扩增产物SSCP检测结果图。
【具体实施方式】
[000引下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述， 显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的 实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都 属于本发明保护的范围。
[0009] 实施例1 本发明实施例中，一种分子标记辅助选择提高黑羽番鸭脂肪沉积的育种方法，具体步 骤包括： 1)黑羽番鸭基因组DNA的提取。
[0010] 2)参照野鸭的A-FABP基因序列(序列号：册640428)设计引物，引物序列为； 上游序列F;5' -TCTTCAGTCCATAGCACCCC-3'设日沈QIDNO: 1 所示）； 下游序列R: 5' -AAAAGGAACTCACCACCACC-3'巧日SEQIDNO:2 所示）； 3)黑羽番鸭基因组DM为模板进行PCR扩增。PCR扩增条件如表1所示。PCR扩增产 物长度为17化P。
[0011] 表 1
【主权项】
1. 一种分子标记辅助选择提高黑羽番鸭脂肪沉积的育种方法，其特征在于，具体步骤 包括： 1) 提取黑羽番鸭基因组DNA; 2) 参照野鸭的A-FABP基因序列设计引物，引物序列为： 上游序列F:5' -TCTTCAGTCCATAGCACCCC-3'，如SEQIDNO: 1 所示； 下游序列R: 5' -AAAAGGAACTCACCACCACC-3'，如SEQIDN0:2 所示； 3) 以黑羽番鸭基因组DNA为模板进行PCR扩增；PCR扩增产物长度为171bp; 4)PCR扩增产物采用SSCP检测或直接测序，判定被检测个体属于以下哪种基因型：MM 型、丽型、NN型，其中丽型的基因序列如SEQIDNO:3所示；丽型的基因序列如SEQID NO:4所示；NN型的基因序列如SEQIDNO: 5所示； 如果某个体的基因型为丽型，则表示该个体脂肪沉积能力高，能作为种用，用于生产MM型后代；MN型也能作为种用，用于生产MM型；NN型不能产生MM型，直接淘汰。
2. 根据权利要求1所述的分子标记辅助选择提高黑羽番鸭脂肪沉积的育种方法，其特 征在于，所述PCR扩增条件： ① 反应液组成： 10XPCRBuffer，含Mg2+，2. 5yL，dNTP，2. 5mM，2yL， 正向引物，10pM，lyL， 反向引物，10pM，lyL， Taq聚合酶，5U/yL，0. 2yL，dH20,17. 3yL， DNA模板，IyL， ② 扩增条件： a. 95°C预变性 5min; b. 95°C变性 30s; c. 67°C退火 30s; d. 72°C延伸 30s; e. 72°C延伸IOmin; f. 4°C保存5min;其中步骤b-d需要经过35个循环周期。
【专利摘要】本发明公开了一种分子标记辅助选择提高黑羽番鸭脂肪沉积的育种方法，通过提取黑羽番鸭基因组DNA；参照野鸭的A-FABP基因序列设计引物，以黑羽番鸭基因组DNA为模板进行PCR扩增；PCR扩增产物采用SSCP检测或直接测序，判定被检测个体属于以下哪种基因型：MM型、MN型、NN型。如果某个体的基因型为MM型，则表示该个体脂肪沉积能力高，能作为种用，用于生产MM型后代；MN型也可作为种用，用于生产MM型；NN型不能产生MM型，直接淘汰。本发明在黑羽番鸭4周龄即可进行个体基因型判断，淘汰非目标基因型个体，达到早期选育，降低非目标个体的饲养量时间，节省育种费用。该检测方法简单、基因型容易判断，具有推广价值。
【IPC分类】C12Q1-68
【公开号】CN104774964
【申请号】CN201510217456
【发明人】董飚, 秦豪荣, 王健, 孙国波, 段修军, 纪荣超, 卞友庆
【申请人】江苏农牧科技职业学院
【公开日】2015年7月15日
【申请日】2015年4月30日