br>[0019] 其中，步骤⑴所述的种子培养基的组成为：蛋白胨l〇g，牛肉膏粉3g，氯化钠 30g，用蒸馏水定容至1000mL，pH7. 2~7.5 ;步骤（2)所述的发酵培养基的组成为：玉米 粉150g，豆饼粉250g，中温淀粉酶3. 5g，中性蛋白酶2.5g，玉米浆40g，葡萄糖25g，硫酸镁 10g，用陈海水定容至5L，pH7. 2~7.5;步骤（3)所述的发酵菌液和复合载体的重量比为 15~35:1，所述的复合载体为硅藻土粉和玉米芯粉按重量比2~4:1混合的混合物。
[0020] 进一步地，在上述制备方法中，步骤（1)中所述的枯草芽孢杆菌YB-01益生菌种子 液和侧孢短芽孢杆菌YB-02益生菌种子液中的菌体浓度均为2~3X 108cfu/ml。
[0021] 进一步地，在上述制备方法中，步骤（2)中所述的发酵菌液中菌体的镜检芽孢形 成率为80~85%。本发明将发酵菌液的菌体镜检芽孢形成率控制在80~85%，以达到最 佳的活菌芽孢使用比，提高菌体存活繁殖能力，减少使用时的菌体活化时间。
[0022] 进一步地，在上述制备方法中，所述的娃藻土的粒径为50~200目，玉米芯粉的粒 径为60~150目。本发明使用特定粒径的硅藻土以及玉米芯粉，以达到最佳吸附菌体的目 的和水体中的漂悬浮效果，所述硅藻土的粒径优选为100-150目，更优选为100-120目；所 述玉米芯粉的粒径优选为60-100目，更优选为80-100目。
[0023] 进一步地，在上述制备方法中，步骤（3)中所述的终产品的水份含量为3~5%，终 产品中菌体终浓度3 5X109cfu/g。在一般情况下，收集的菌体复合物，在50~55°C下干 燥处理至半干后，自然晾干6~12小时即可。
[0024] 本发明的再一目的是提供本发明所述的载体固定化抑菌型水质净化剂在海洋水 产养殖中的应用。本发明的载体固定化抑菌型水质净化剂尤其适合应用于海水环境中的 海参养殖、大菱鲆养殖和红鳍东方飩养殖。
[0025] 本发明采用海水源（海水养殖环境的底泥）中分离得到的芽孢杆菌（枯草芽孢杆 菌和侧孢短芽杆菌），区别现在淡水菌剂在海水养殖中的滥用和无效，其制剂适合应用于海 水养殖水体的净化。菌株具有高效去除海水养殖水体中的氨氮和亚硝态氮的作用，对环境 耐受性强、保质期长；并采用最佳的活菌芽孢比，减少使用的活化时间；同时，对海水养殖 中的6种海水养殖致病菌具有一定的抑菌效果，减少抗生素的同时避免水体恶化引起的病 疫和死亡。
[0026] 本发明的净化剂采用具有特定粒径的硅藻土粉和玉米芯粉作为活菌载体，其中玉 米芯粉中糖类物质提供芽孢杆菌快速活化，使菌群活化时间明显缩短，同时增加产品的漂 浮性、悬浮性以及沉浮可控性，有利于海水养殖水体三维立体的净化效果；本发明净化剂在 使用时，载菌硅藻土粉吸水后比重变大沉于水底，菌体在底层水体和底泥中发挥作用（去 除水体中的氨氮和亚硝态氮，吸附底泥中的重金属离子），有利于缓解底层水体恶化和臭 底问题；玉米芯载体入水后，能够水面漂浮和水中悬浮，活菌快速工作并迅速活化休眠的芽 孢，高效去除水体中的氨氮、亚硝态氮和硫化氢等毒害物质。
[0027] 本发明的有益效果：本发明的净化剂采用天然非金属矿物硅藻土和玉米芯粉为活 菌载体，对环境耐受性强，漂浮性、悬浮性以及沉浮可控性好，对海参、大菱鲆和红鳍东方飩 等的养殖水体三维立体的净化效果显著。玉米芯粉中糖类物质使菌群活化时间明显缩短， 益生菌快速生长，尤其在海参的育苗期和养成期定期泼洒该载体固定化水质净化剂，可以 快速降解养殖水体中的氨氮、亚硝酸盐、硫化氢等有害物质和高效吸附底泥中的重金属离 子，避免水质恶化、酸化和臭底，同时YB-01和YB-02芽孢杆菌可非特异性抑制海水养殖中 的病原菌生长（灿烂弧菌、黄海希瓦氏菌、哈维氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌和迟缓爱德 华氏菌），有效预防海参病害的发生，提高海参养殖的质量和产量，对于急性水体污染有高 效快捷安全的净水效果。
【附图说明】
[0028] 图1为本发明载体固定化抑菌型水质净化剂SEM照片，其中图1A表示硅藻土上吸 附固定的活菌和芽孢，图1B表示玉米芯粉上吸附固定的活菌和芽孢。
【具体实施方式】
[0029] 以下的实施例便于更好的理解本发明，但并不限定本发明。另外，下述实施例中， 如无特殊说明，所使用的实验方法均为常规方法，所用材料、试剂等均可从生物或化学试剂 公司购买。
[0030] 种子培养基（营养肉汤液体培养基）：购于北京索莱宝科技有限公司。
[0031] 发酵培养基：玉米粉150g，豆饼粉250g，中温淀粉酶3. 5g，中性蛋白酶2. 5g，玉米 浆40g，葡萄糖25g，硫酸镁10g，陈海水定容至5L，pH 7. 2~7. 5。制备方法为：按照规定 质量，称取玉米粉和豆饼粉，加入3L陈海水均匀搅拌后，转至发酵罐中，同时加入中性蛋白 酶和中温淀粉酶，依次在50°C、65°C条件下水解40~60min ;将已加入硫酸镁和葡萄糖的适 量陈海水转入发酵罐中，最后将玉米浆转入发酵罐中，陈海水定容至5L，调pH 7. 2~7. 5， 121°C 灭菌 30min。
[0032] 玉米粉：购于大连星驰经贸有限公司。
[0033] 豆饼粉：购于山东万得福实业集团有限公司。
[0034] 葡萄糖：山东西王糖业有限公司。
[0035] 玉米浆：山东郓城康源生物科技有限公司。
[0036] 中温淀粉酶和中性蛋白酶：山东隆科特酶制剂有限公司。
[0037] 硅藻土粉：食品级，100~150目，购于青山源硅藻土有限公司。
[0038] 玉米芯粉：饲料级，60~100目，购于山东高唐华特威科技有限公司。
[0039] 本发明实施例中涉及的微生态制剂包括：由海参养殖环境中分离筛选的芽孢杆 菌包括：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)YB-01CGMCC-No. 9756和侧孢短芽孢杆菌 (Brevibacillus laterosporu) YB-〇2CGMCC_No. 9757。2 株菌株保藏于中国微生物菌种保藏 管理委员会普通微生物中心（中国科学院微生物研宄所，邮编100101)，地址为北京市朝阳 区北辰西路1号院3号。
[0040] 下面通过实例进一步详细描述本发明。
[0041] 实施例1菌株YB-01和YB-02的筛选、分离与鉴定
[0042] 1.培养基的配制：
[0043] 氨氮降解菌富集筛选培养基：(NH4) 2S042g，NaH2P040. 25g，MnS04 ? 4H200.0 lg， K2HP040. 75g，MgS04 ? 7H20 0? 03g，CaC033g，陈海水 1L，pH 7. 5-8. 0。
[0044] 氨氮降解菌分离纯化固体培养基：(NH4) 2S040. 5g，NaH2P040. 25g，MnS04 ? 4H20 0? Olg，K2HP040. 75g，MgS04 ? 7H20 0? 03g，CaC032g，陈海水 1 L，琼脂粉 12g，pH 7. 5-8. 0。
[0045] 亚硝酸盐氮降解菌富集筛选液体培养基：NaN02lg，Na2C0 3lg，K2HP040. 5g， MgS04 ? 7H20 0? 03g，FeS04 ? 7H20 0? 4g，陈海水 1L，pH 7. 2-7. 5。
[0046] 亚硝酸盐氮降解菌分离纯化固体培养基：NaN020 . 5g，Na2C03lg，K2HP040. 5g， MgS04 ? 7H20 0? 03g，FeS04 ? 7H20 0? 4g，陈海水 1L，琼脂粉 12g，pH 7. 2 ~7. 5。
[0047] 2216E液体培养基：蛋白胨5g，酵母膏lg，FeP040. lg，陈海水1L，pH 7