一种植物伤流液rna提取方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及农业技术领域，具体涉及一种植物伤流液RNA提取方法。
【背景技术】
[0002]目前，提取植物组织RNA方法非常成熟，但是应用这些方法提取葡萄、黄瓜等植物伤流液中RNA，效果不理想，出现一下问题:1)提不出RNA ;2)伤流液中RNA降解快；3)提出的RNA量不足，不能满足反转录的需要。
【发明内容】
[0003]发明目的:本发明的目的是提供了一种植物伤流液RNA提取方法。
[0004]技术方案:为了解决上述技术问题，本发明提供了一种植物伤流液RNA提取方法，包括以下步骤:
O将植物伤流液冷冻干燥至原体积的1/8-1/10，加入1300-1500 μ I的SDS，水浴65 0C 25- 30min ；
2 )加入200-400 μ I的水饱和酚，涡旋，再加入200-400 μ I氯仿，涡旋混匀，4 °C，12000~13000rpm 离心 8~10min ；
3)取1100-1300μ I上清液到新的离心管中，加入1/3体积的水饱和酚，涡旋混匀，再加入上清液1/3体积的氯仿，祸旋混勾，12000~13000rpm离心8~10min ；
4)取上清900-1100μ I加入上清液1/2体积的水饱和酚，涡旋混匀，再加入上清液1/2体积的氯仿祸旋混勾，12000~13000rpm离心8~10min ；
5)取上清700-900μ I加入等体积氯仿，祸旋混勾，12000~13000rpm离心lOmin，取上清600-800 μ I加入等体积异丙醇，_20°C静置5h以上；
6)12000~13000rpm 离心 20min，倒掉上清，80% 乙醇 Iml 洗沉淀，12000~13000rpm,5~8min，100% 乙醇再洗一次，12000~13000rpm 离心 5min，晾干 RNA 沉淀，加入 30 μ I 的 DEPC水。
[0005]其中，作为优选，步骤I)中的植物伤流液冷冻干燥至原体积的1/10，加入1400 μ I的 SDS，水浴 65 0C 30min。
[0006]其中，作为优选，步骤2)中加入300 μ I水饱和酚，涡旋，再加入300ul氯仿，涡旋混勾，4°C，13000rpm 离心 1min0
[0007]其中，作为优选，步骤3)中取1200 μ I上清到新的离心管中，加入400 μ I水饱和酚，涡旋混匀，再加入400 μ I氯仿，涡旋混匀，13000rmp离心lOmin。
[0008]其中，作为优选，步骤4)取上清1000 μ I加入500 μ I水饱和酸，涡旋混匀，再加入500ul氯仿祸旋混勾，13000rpm离心lOmin。
[0009]其中，作为优选，步骤5)取上清800 μ I加入800 μ I氯仿，涡旋混匀，13000rpm离心lOmin，取上清700 μ I加入等体积异丙醇，_20°C静置5h以上。
[0010]其中，作为优选，步骤6) 13000rpm离心20min，倒掉上清，80%乙醇Iml洗沉淀，13000rpm, 5min, 100% 乙醇再洗一次，13000rpm 离心 5min，瞭干 RNA 沉淀，加入 30 μ IDEPC水。
[0011 ] 有益效果:本发明的植物伤流液RNA提取方法可以抑制伤流液中RNA降解，提高伤流液中RNA提取效率，本发明简化了 RNA提取程序，提高RNA获取数量，伤流液RNA提取量能满足反转录需要。
【附图说明】
[0012]图1本发明实施例1~3提取的RNA凝胶电泳检测图；
图2本发明实施例1~3提取的RNA反转录后，cDNA凝胶电泳检测图；
图3对比例提取的RNA凝胶电泳检测图；
图4对比例提取的RNA反转录后，cDNA凝胶电泳检测图。
【具体实施方式】
[0013]下面对本发明技术方案进行详细说明，但是本发明的保护范围不局限于所述实施例。
[0014]实施例1:
一种植物伤流液RNA提取方法，包括以下步骤:
1)将5ml植物伤流液冷冻干燥至原体积的1/10，加入1400μ 1SDS，水浴65°C 30min ；
2)加入300μ I水饱和酚，涡旋，再加入300 μ I氯仿，涡旋混匀，4°C，13000rpm离心1min ；
3)取1200μ I上清到新的离心管中，加入400 μ I水饱和酸，祸旋混勾，再加入400 μ I氯仿，祸旋混勾，13000rmp离心1min ；
4)取上清1000μ I加入500 μ I水饱和酚，涡旋混匀，再加入500 μ I氯仿涡旋混匀，13000rpm 离心 1min ；
5)取上清800μ I加入800 μ I氯仿，祸旋混勾，13000rpm离心1min,取上清700 μ I加入等体积异丙醇，_20°C静置5h以上；
6)13000rpm离心20min，倒掉上清，80%乙醇Iml洗沉淀，13000rpm, 5min, 100%乙醇再洗一次，13000rpm离心5min，瞭干RNA沉淀，加入30 μ IDEPC水。
[0015]
实施例2
一种植物伤流液RNA提取方法，包括以下步骤:
1)将植物伤流液冷冻干燥至原体积的1/8，加入1300μ I的SDS，水浴65°C 25min ;
2)加入200μ I的水饱和酚，涡旋，再加入200 μ I氯仿，涡旋混匀，4°C，12000rpm离心8min ；
3)取1100μ I上清液到新的离心管中，加入1/3体积的水饱和酚，涡旋混匀，再加入上清液1/3体积的氯仿，祸旋混勾，12000rpm离心8min ；
4)取上清900μ I加入上清液1/2体积的水饱和酚，涡旋混匀，再加入上清液1/2体积的氯仿祸旋混勾，12000rpm离心8min ；
5)取上清700μ I加入等体积氯仿，祸旋混勾，12000rpm离心lOmin，取上清600 μ I加入等体积异丙醇，_20°C静置5h以上；
6)12000rpm离心20min，倒掉上清，80%乙醇Iml洗沉淀，12000rpm, 8min, 100%乙醇再洗一次，12000rpm离心5min，瞭干RNA沉淀，加入30 μ I的DEPC水。
[0016]
实施例3
一种植物伤流液RNA提取方法，包括以下步骤:
1)将植物伤流液冷冻干燥至原体积的1/9，加入1500μ I的SDS，水浴65°C 30min ;
2)加入400μ I的水饱和酚，涡旋，再加入400 μ I氯仿，涡旋混匀，4°C，12500rpm离心9min ；
3)取1300μ I上清液到新的离心管中，加入1/3体积的水饱和酚，涡旋混匀，再加入上清液1/3体积的氯仿，祸旋混勾