3-0. 4g/L，磷酸二氧钾1. 8-2. 3g/L;配制固体培 养基时添加15g/L的琼脂粉。
[0022] 培养液成份为：玉米浆（以干物质计）含量为35_45g/L，酵母浸膏8-10 g/L，葡 萄糖18-22 g/L，麦芽浸膏25-30 g，硫酸铵0. 5-0. 7g/L，硫酸镁0. 3-0. 4g/L，磷酸二氧钾 1. 8-2. 3g/L，碳酸钙 0.7 g/L，硫酸亚铁 0.18 g/L，硫酸锰 0.025 g/L;pH 5.0。
[0023] 湿青霉菌细胞制备过程如下：青霉菌ATCC204027经斜面、摇瓶培养，得到种子 液。5L发酵罐加入培养液；发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟，冷却至24°C，将 青霉菌种子液接种至发酵罐，接种比例为10-11 %，通气比为0. 9-1V/ (V分钟)，24°C培养 35-40小时，用过滤式离心机离心得到湿青霉菌细胞，用作生物催化反应催化剂。
[0024] 生物催化转化：5L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为6. 1，加入底 物3-(4-甲氧基-苯基)-3_氧代丙酸甲酯，使其浓度为90g/L，玉米浆（以干物质计）含 量为15g/L，山梨坦单月桂酸酯20g/L，葡萄糖20g/L、麦芽糖35g/L、异丙醇8%V/V(体积浓 度），121°C高压灭菌30分钟；冷却至32°C时，加入湿青霉菌细胞使其浓度为71g/L，通气比 为0. 12V/ (V分钟），进行生物催化反应，反应时间为62小时；反应结束后，滤出细胞，用乙 酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物（S)-3-羟基-3- (4-甲氧基苯基）丙酸甲酯 ，反应转化率98 %，产品收率96 %，对映体过量率99 %。
[0025] 实施例3 种子培养基成份为：玉米浆（以干物质计）含量为35-45g/L，酵母提取物10g/L，葡 萄糖20g/L，硫酸铵0. 5-0. 7g/L，硫酸镁0. 3-0. 4g/L，磷酸二氧钾1. 8-2. 3g/L;配制固体培 养基时添加15g/L的琼脂粉。
[0026] 培养液成份为：玉米浆（以干物质计）含量为35_45g/L，酵母浸膏8-10 g/L，葡 萄糖18-22 g/L，麦芽浸膏25-30 g，硫酸铵0. 5-0. 7g/L，硫酸镁0. 3-0. 4g/L，磷酸二氧钾 1. 8-2. 3g/L，碳酸钙 0.7 g/L，硫酸亚铁 0.18 g/L，硫酸锰 0.025 g/L;pH 5.0。
[0027] 湿青霉菌细胞制备过程如下：青霉菌ATCC204027经斜面、摇瓶培养，得到种子 液。10L发酵罐加入培养液；发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟，冷却至23°C，将 青霉菌种子液接种至发酵罐，接种比例为10-11 %，通气比为0. 9-1V/ (V分钟)，23°C培养 35-40小时，用过滤式离心机离心得到湿青霉菌细胞，用作生物催化反应催化剂。
[0028] 生物催化转化：10L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为6. 1，加入底 物3- (4-甲氧基-苯基)-3_氧代丙酸甲酯，使其浓度为84g/L，玉米浆（以干物质计）含 量为13g/L，山梨坦单月桂酸酯20g/L，葡萄糖21g/L、麦芽糖33g/L、异丙醇9%V/V(体积浓 度），121°C高压灭菌30分钟；冷却至32°C时，加入湿青霉菌细胞使其浓度为72g/L，通气比 为0. 12V/ (V分钟），进行生物催化反应，反应时间为63小时；反应结束后，滤出细胞，用乙 酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物（S)-3-羟基-3- (4-甲氧基苯基）丙酸甲酯 ，反应转化率98. 5%，产品收率96. 5%，对映体过量率99%。
[0029] 实施例4 种子培养基成份为：玉米浆（以干物质计）含量为35-45g/L，酵母提取物10g/L，葡 萄糖20g/L，硫酸铵0. 5-0. 7g/L，硫酸镁0. 3-0. 4g/L，磷酸二氧钾1. 8-2. 3g/L;配制固体培 养基时添加15g/L的琼脂粉。
[0030] 培养液成份为：玉米浆（以干物质计）含量为35-45g/L，酵母浸膏8-10 g/L，葡 萄糖18-22 g/L，麦芽浸膏25-30 g，硫酸铵0. 5-0. 7g/L，硫酸镁0. 3-0. 4g/L，磷酸二氧钾 1. 8-2. 3g/L，碳酸钙 0.7 g/L，硫酸亚铁 0.18 g/L，硫酸锰 0.025 g/L;pH 5.0。
[0031] 湿青霉菌细胞制备过程如下：青霉菌ATCC204027经斜面、摇瓶培养，得到种子 液。10L发酵罐加入培养液；发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30分钟，冷却至24°C，将 青霉菌种子液接种至发酵罐，接种比例为10-11 %，通气比为0. 9-1V/ (V分钟)，24°C培养 35-40小时，用过滤式离心机离心得到湿青霉菌细胞，用作生物催化反应催化剂。
[0032] 生物催化转化：20L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为6. 1，加入底 物3-(4-甲氧基-苯基)-3_氧代丙酸甲酯，使其浓度为86g/L，玉米浆（以干物质计）含 量为14g/L，山梨坦单月桂酸酯19g/L，葡萄糖22g/L、麦芽糖34g/L、异丙醇9%V/V(体积浓 度），121°C高压灭菌30分钟；冷却至32-33°C时，加入湿青霉菌细胞使其浓度为71-74g/L， 通气比为0. 13V/ (V分钟)，进行生物催化反应，反应时间为64小时；反应结束后，滤出细 胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物（S)-3-羟基-3- (4-甲氧基苯基)丙 酸甲酯，反应转化率99 %，产品收率96. 5 %，对映体过量率99 %。
【主权项】
1. 一种青霉菌细胞生物催化制备（S)-3-羟基-3- (4-甲氧基苯基)丙酸甲酯的方法， 其特征在于反应罐中加入磷酸盐缓冲液，pH为6. 1，加入底物3- (4-甲氧基-苯基)-3-氧 代丙酸甲酯，使底物3- (4-甲氧基-苯基）-3-氧代丙酸甲酯添加量为80-90 g/L，玉米 浆含量为12_15g/L，山梨坦单月桂酸酯19-20g/L，葡萄糖20-23g/L、麦芽糖32-35g/L、异 丙醇8-10%V/V，121°C高压灭菌30分钟；冷却至32-33°C时，加入湿青霉菌细胞使其浓度 为71-74g/L，通气比为0. 12-0. 13V/ (V分钟)，进行生物催化反应，反应时间为62-65小 时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物（S)-3-羟 基-3- (4-甲氧基苯基)丙酸甲酯，反应转化率98-99%，产品收率96-97%，对映体过量率 98.5-99 %〇2. 权利要求1所述的方法，其特征在于湿青霉菌细胞制备过程如下：青霉菌ATCC 204027,经斜面、摇瓶、种子罐培养得到种子液；发酵罐加入培养液，121°C高压灭菌30 分钟，冷却至23-24°C，将青霉菌种子液接种至发酵罐，接种比例为10-11%，通气比为 0. 9-1V/ (V分钟)，23-24°C培养35-40小时，用过滤式离心机离心得到湿青霉菌细胞，用 作生物催化反应催化剂；发酵罐中培养液成份为：玉米浆（以干物质计）含量为35-45g/ L，酵母浸膏8-10 g/L，葡萄糖18-22 g/L，麦芽浸膏25-30 g，硫酸铵0.5-0. 7g/L，硫酸镁 0. 3-0. 4g/L，磷酸二氧钾 I. 8-2. 3g/L，碳酸钙 0. 7 g/L，硫酸亚铁 0. 18 g/L，硫酸锰 0. 025 g/L;pH 5. 0〇
【专利摘要】一种青霉菌细胞生物催化制备(S)-3-羟基-3-（4-甲氧基苯基）丙酸甲酯的方法，反应罐中加入磷酸盐缓冲液，用青霉菌细胞进行生物催化反应，产品收率高，对映体过量率高，解决了现有方法生产的困难。
【IPC分类】C12R1/80, C12P7/62
【公开号】CN105132478
【申请号】CN201510561190
【发明人】刘均洪, 李秀秀
【申请人】青岛科技大学
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年9月7日