r>[0023] 实施例2 :索氏平厮蠕抱A606的活化、发酵培养及提取物制备
[0024] (1)将实施例1得到的纯菌株索氏平厮蠕抱A606接种于斜面培养基，于28°C培养 5山得到活化后的菌种。所述斜面培养基通过W下方法获得：用500mL蒸馈水煮200g马铃 馨20min，过滤得汁，再加入葡萄糖20g、皿2?〇43邑、MgS〇4〇. 75g、维生素BilOmg，琼脂20g，用 水补足至1L，pH自然，灭菌备用。
[00对 似将步骤（1)活化培养后的菌株接种至种子培养基中，于28°C、12化/min振荡条 件下培养7山得到种子液，所述种子培养基通过W下方法获得：用500mL蒸馈水煮200g马 铃馨20min，过滤得汁，再加入葡萄糖20g、KH2P043g、M拆040. 75g、维生素BilOmg，用水补足至 1L，pH自然，灭菌备用。
[0026] 做将步骤似所得种子液W10%的体积比的接种量接种到发酵培养基中，于 28°C、120r/min培养7山得到发酵培养物。所述发酵培养基与种子培养基相同。
[0027] (4)提取物制备：将步骤（3)所得的发酵培养物除菌丝体后得到的滤液用乙酸乙 醋萃取3次，萃取液经减压浓缩后即为本发明的索氏平厮蠕抱度ipolarissorokiniana) A606提取物。 阳0測实施例3 :索氏平厮蠕抱度ipolarissorokiniana)A606提取物的抗菌活性测定
[0029] 采用滤纸片法测定索氏平厮蠕抱A606提取物对金黄色葡萄球菌 (Staphylococ州Saureus)或枯草芽抱杆菌度acillussubtilis)的抗菌活性。
[0030] 将实施例2获得的索氏平厮蠕抱度ipolarissorokiniana)A606提取物用DMS0 溶解，并稀释至浓度为500yg/mL。
[0031] 将液体发酵获得的金黄色葡萄球菌和枯草芽抱杆菌的菌液分别用生理盐水分别 稀释至浓度为1〇 6CFU/i止，吸取浓度为106CFU/mL的菌液1血放入平板中，倒入已冷却至合 适溫度的LB培养基，混合均匀。用无菌綴子夹取厚度为1. 5mm、直径为6mm的滤纸片置于 含菌平板上，同时在滤纸片上分别滴加菌株A606提取物稀释液5yL为样品组，WDMS0代 替A606提取物稀释液作为空白对照组，W浓度为200yg/mL的氨节青霉素作阳性对照组， 将平板置于37°C恒溫箱培养2地，用十字测量法测量抑菌圈直径的大小，重复=次，计算抑 菌圈直径的平均值。
[0032] 实验结果如表1所示：
[0033] 表1索氏平厮蠕抱度ipolarissorokiniana) A606提取物对细菌的抑制作用 (-Y n二3 )
[0034]
[0035] 实施例4 :索氏平厮蠕抱度ipolaris so;rokiniana)A606提取物对金黄色葡萄球 菌、枯草芽抱杆菌的最低抑制浓度测定
[0036] 采用滤纸片法测定索氏平厮蠕抱A606提取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌 最低抑菌浓度。
[0037] 用DMS0将实施例2的索氏平厮蠕抱A606提取物分别稀释至5、2. 5、1. 25、0. 625、 0. 312、0. 156、0. 078mg/mL。分别吸取浓度为l〇6CFU/mL的金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌 菌液ImL放入培养皿中，倒入已冷却至合适溫度的LB培养基，混合均匀。用无菌綴子夹取 厚度为1. 5mm、直径为6mm的滤纸片置于含菌平板上，同时在滤纸片上分别滴加上述浓度的 索氏平厮蠕抱A606提取稀释液5yL置于37 °C恒溫箱培养2地，观察滤纸片周围的抑菌圈， W滤纸片周围有抑菌圈的滤纸片所含样品的最低浓度为最低抑菌浓度（MIC值）。 阳03引实验结果如表2所示：
[0039] 表2 :索氏平厮蠕抱度ipolaris so;rokiniana)A606提取物对细菌的最低抑制浓 度（MIC值）扫马)
[0040]
阳0创注：" + "表示有抑菌圈，表示无抑菌圈
[0043] 从实验结果可W看出，索氏平厮蠕抱度ipolaris so;rokiniana)A606提取物对金 黄色葡萄球菌或枯草芽抱杆菌具有明显的抗细菌作用，可应用于制备抗细菌药物。因此，本 发明为研究与开发新的抗菌药物提供了物质基础，为开发利用植物内生真菌来源的天然活 性物质提供了科学依据。
【主权项】
1. 索氏平脐蠕孢（Bipolarissorokiniana)A606,保藏编号为：CCTCCNO:M2015436。2. -种索氏平脐懦孢（Bipolarissorokiniana)A606提取物，其特征在于，以索氏平 脐懦孢（Bipolarissorokiniana)A606作为发酵菌株，液体发酵获得发酵培养物，分离菌 丝体和发酵液，取发酵液用乙酸乙酯萃取，萃取液经浓缩后即得索氏平脐蠕孢（Bipolaris sorokiniana)A606 发酵提取物。3. 根据权利要求2所述的索氏平脐懦孢（Bipolarissorokiniana)A606提取物，其 特征在于，所述的液体发酵是将索氏平脐懦孢（Bipolarissorokiniana)A606接种到发酵 培养基中，于28°C、120r/min液体发酵培养，得到发酵培养物，所述的发酵培养基每升是 通过以下方法制备：用500mL蒸馏水煮200g马铃薯20min，过滤得汁，再加入葡萄糖20g、 KH2P043g、MgSO4O. 75g、维生素B1IOmg,用水补足至1L，pH自然，得到发酵培养基。4. 权利要求1所述的索氏平脐懦孢（Bipolarissorokiniana)A606提取物在制备抗细 菌药物中的应用。5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的抗细菌药物为抗金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus)或枯草芽抱杆菌（Bacillussubtilis)的药物。6. -种抗细菌药物，其特征在于，包含权利要求2所述的索氏平脐懦孢（Bipolaris sorokiniana)A606提取物作为活性成分。7. 根据权利要求6所述的抗细菌药物，其特征在于，所述的抗细菌药物为抗金黄色葡 萄球菌（Staphylococcusaureus)或枯草芽抱杆菌（Bacillussubtilis)的药物。8. 权利要求1所述的索氏平脐懦孢（Bipolarissorokiniana)A606在制备抗细菌药物 中的应用。9. 根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的抗细菌药物为抗金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus)或枯草芽抱杆菌（Bacillussubtilis)的药物。
【专利摘要】本发明公开了一株索氏平脐蠕孢及其用途。本发明的索氏平脐蠕孢(Bipolaris？sorokiniana)A606提取物具有明显的抗细菌活性，表明该提取物具有很好的应用开发前景，因此本发明为研究与开发新的抗菌药物提供了物质基础，为开发利用植物内生真菌来源的天然活性物质提供了科学依据。CCTCC NO：M 201543620150708
【IPC分类】C12R1/645, A01P1/00, A01N63/04, C12P1/02, C12N1/14
【公开号】CN105199965
【申请号】CN201510512489
【发明人】李浩华, 章卫民, 谭国慧, 李赛妮
【申请人】广东省微生物研究所
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2015年8月19日