一种富硒虫草花的生产方法
【专利说明】
(一)
技术领域
[0001]本发明涉及富砸虫草花的生产方法，具体涉及一种利用农业废弃物啤酒糟清洁生产富砸虫草花的方法。
(二)
【背景技术】
[0002]虫草(Cordyceps)为我国特有的名贵药用真菌。虫草中含有多种生理活性物质，中医药文献认为冬虫夏草味甘性温，有秘精益气、保肺补肾、止血化痰的功效。近代医学临床研究表明，冬虫夏草能治疗劳咳痰血、盗汗、阳痿、遗精、黄胆病、肺结核及老年衰弱、慢性咳喘等症，有强壮兼收敛镇静的效果。冬虫夏草所含虫草素能明显增强红细胞粘附肿瘤细胞的能力，抑制肿瘤生长和转移，能明显提升白血球和血小板数量，迅速改善放化疗后的呕吐恶心、胃口差、头发脱落、失眠等症状。但天然的冬虫夏草产量十分稀少，因此，人们采用培养蛹虫草生产虫草花来部分替代天然虫草。
[0003]砸是人和动物体内必需的一种元素，缺砸可以导致多种症状。例如人体缺砸会诱发心血管疾病、癌症、克山病及大骨节病等，而动物缺砸主要表现为白肌病和生长缓慢等。例如牛缺砸时，会出现骨骼肌和心肌变性，生长缓慢，消瘦，犊牛腹泻;猪缺砸时，表现为肝营养不良，仔猪出现白肌病，桑堪心，胃溃疡等。
[0004]本发明拟以啤酒糟为原料，采用蛹虫草菌发酵生产富砸虫草花，实现虫草花低成本的关键技术突破，增加农民收入。
(三)
【发明内容】
[0005]为了得到质量高、成本低廉的富砸虫草花，本发明提供一种原材料新颖、成本低、绿色生产、环境友好，易于实现工业化的富砸虫草花的生产方法。
[0006]本发明采用如下技术方案:
[0007]—种富砸虫草花的生产方法，所述方法按如下步骤进行:
[0008](I)斜面培养:将出发菌株蛹虫草(常规菌株，市购可得)接种于斜面培养基，20?30°C恒温培养7?1d，获得斜面菌体；
[0009]所述斜面培养基的配方为:蛋白胨8?12g/L、葡萄糖30?50g/L、琼脂13?20g/L、氯霉素0.08?0.12g/L，溶剂为水，pH为5.5?6.5 ；
[0010](2)种子液培养:将步骤(I)获得的斜面菌体接种至种子培养基中，在20?30°C，150?200r/min的摇床条件下振荡培养7?10d，获得种子液；
[0011]所述种子培养基的配方为:葡萄糖10?15g/L、K2HP04.3H20 0.4?0.6g/L、1012?040.4?0.68/1、1^-甘氨酸0.8?1.28/1、]\^504.7H20 0.4?0.6g/L、氯霉素0.08?0.128/1，溶剂为水，？!1为5.5?6.5;
[0012](3)固体发酵:将烘干至恒重的啤酒糟粉末与亚砸酸钠、水混合均匀，118?130°C灭菌20?30min，得到固体发酵培养基，冷却待用;将步骤(2)培养好的种子液接种至所得固体发酵培养基中，在20?30°C进行恒温发酵培养30?40d，得到成品富砸虫草花；
[0013]所述种子液的接种体积量为5?15mL/100g固体发酵培养基;所述亚砸酸钠的添加量以烘干至恒重的啤酒糟粉末的质量计为15?25mg/kg;所述烘干至恒重的啤酒糟粉末与水的料液质量比为1:2?3。
[0014]本发明中，所述的出发菌株蛹虫草为尖头虫草I号，购自山东梁山县正大菌业科技开发中心。所述的啤酒糟为可商购获得的普通啤酒糟，任何啤酒生产企业所产生的副产物啤酒糟都可以适用。
[0015]本发明所述的生产方法，步骤(I)中，优选所述斜面培养基的配方为:蛋白胨
1.0g/L、葡萄糖40g/L、琼脂15g/L、氯霉素0.1 g/L，溶剂为水，pH为6。
[0016]步骤(2)中，优选所述种子培养基的配方为:葡萄糖10g/L、K2HP04.3H20 0.5g/L、KH2PO4 0.58/1丄-甘氨酸1.(^/1、1%304.7H20 0.5g/L、氯霉素0.lg/L，溶剂为水，pH为6。
[0017]步骤(3)中，优选所述亚砸酸钠的添加量以烘干至恒重的啤酒糟粉末的质量计为20mg/kg;优选所述烘干至恒重的啤酒糟粉末与水的料液质量比为1:2.3;优选所述种子液的接种体积量为I OmL/1 OOg固体发酵培养基。
[0018]与现有技术相比，本发明的优点在于:
[0019](I)使用啤酒糟为富砸虫草花发酵培养的原材料，在国内外未见相关的报道和应用；
[0020](2)本发明使用农业废弃物啤酒糟为基质，生产成本低。
(四)
【具体实施方式】
[0021]下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此:
[0022]以下实施例中，出发菌株:菌株蛹虫草为尖头虫草I号，购自山东梁山县正大菌业科技开发中心。啤酒糟粉末:购自英博双鹿啤酒有限公司。
[0023]实施例1
[0024](I)斜面培养:将出发菌株蛹虫草接种于斜面培养基，20°C恒温培养7d，至菌丝体布满斜面，获得斜面菌体。所述斜面培养基的配方为:蛋白胨8g/L、葡萄糖30g/L、琼脂13g/L、氯霉素0.08g/L，溶剂为水，pH为5.5。
[0025](2)种子液培养:将活化后的斜面菌体接种于种子培养基中，在22°C，180r/min的摇床条件下振荡培养Sd，至培养基中有均匀分布的松散菌丝体，获得种子液。所述种子培养基的配方为:葡萄糖 10g/L、K2HP04.3H20 0.4g/L,KH2PO4 0.4g/L、L_甘氨酸0.8g/L、MgS〇4.7H20 0.4g/L、氯霉素0.08g/L，溶剂为水，pH为5.5。
[0026](3)固体发酵:将烘干至恒重的啤酒糟粉末15g与30mL水混合均匀，作为初始固体培养基，118°C灭菌30min，冷却待用。将培养好的种子液以5% (v/w)接种量接入固体培养基中，加入0.3mg亚砸酸钠，在20°C进行恒温发酵培养30天，得到成品富砸虫草花。
[0027]上述发酵结束，对所得的虫草花进行砸含量分析，测得有机砸量314.7yg/g虫草花。
[0028]实施例2
[0029](I)斜面培养:将出发菌株蛹虫草接种于斜面培养基，22°C恒温培养Sd，至菌丝体布满斜面，获得斜面菌体。所述斜面培养基的配方为:蛋白胨10.0g/L、葡萄糖40g/L、琼脂15g/L、氯霉素0.1 g/L，溶剂为水，pH为6。
[0030](2)种子液培养:将活化后的斜面菌体接种于种子培养基中，在22°C，180r/min的摇床条件下振荡培养Sd，至培养基中有均匀分布的松散菌丝体，获得种子液。所述种子培养基的配方为:葡萄糖 12g/L、K2HP04.3H20 0.5g/L,KH2PO4 0.5g/L、L_甘氨酸I.0g/L、MgS〇4.7H20 0.5g/L、氯霉素0.10g/L,溶剂为水，pH为6.0。
[0031 ] (3)固体发酵:将烘干至恒重的啤酒糟粉末15g与35mL水混合均匀，作为初始固体培养基，121 °C灭菌25min，冷却待用。将培养好的种子液以1 % (v/w)接种量接入固体培养基中，加入0.35mg亚砸酸钠，在22°C进行恒温发酵培养35天，得到成品富砸虫草花。
[0032]上述发酵结束，对所得的虫草花进行砸含量分析，测得有机砸量318.6yg/g虫草花。
[0033]实施例3
[0034](I)斜面培养:将出发菌株蛹虫草接种于斜面培养基，30°C恒温培养1d，至菌丝体布满斜面，获得斜面菌体。所述斜面培养基的配方为:蛋白胨12g/L、葡萄糖50g/L、琼脂20g/L、氯霉素0.12g/L，溶剂为水，pH为6.5。
[0035](2)种子液培养:将活化后的斜面菌体接种于种子培养基中，在30°C，200r/min的摇床条件下振荡培养10d，至培养基中有均匀分布的松散菌丝体，获得种子液。所述种子培养基的配方为:葡萄糖 15g/L、K2HP04.3H20 0.6g/L,KH2PO4 0.6g/L、L_甘氨酸I.2g/L、MgSO4.7H20 0.68/1、氯霉素0.128/1，溶剂为水，？!1为6.5。
[0036](3)固体发酵:将烘干至恒重的啤酒糟粉末15g与40mL水混合均匀，作为初始固体培养基，130°C灭菌30min，冷却待用。将培养好的种子液以15% (v/w)接种量接入固体培养基中，加入0.25mg亚砸酸钠，在30°C进行恒温发酵培养40天，得到成品富砸虫草花。
[0037]上述发酵结束，对所得的虫草花进行砸含量分析，测得有机砸量292.6yg/g虫草花。
【主权项】
1.一种富砸虫草花的生产方法，其特征在于，所述方法按如下步骤进行: (1)斜面培养:将出发菌株蛹虫草接种于斜面培养基，20?30°C恒温培养7?1d，获得斜面菌体； 所述斜面培养基的配方为:蛋白胨8?12g/L、葡萄糖30?50g/L、琼脂13?20g/L、氯霉素0.08?0.12g/L，溶剂为水，pH为5.5?6.5 ； (2)种子液培养:将步骤(I)获得的斜面菌体接种至种子培养基中，在20?30°C，150?200r/min的摇床条件下振荡培养7?10d，获得种子液； 所述种子培养基的配方为:葡萄糖10?15g/L、K2HP04.3H20 0.4?0.6g/L、KH2P040.4?0.6g/L、L-甘氨酸0.8?I.2g/L,MgSO4.7H20 0.4?0.6g/L、氯霉素0.08?0.12g/L，溶剂为水，pH为5.5 ?6.5; (3)固体发酵:将烘干至恒重的啤酒糟粉末与亚砸酸钠、水混合均匀，118?130°C灭菌20?30min，得到固体发酵培养基，冷却待用;将步骤(2)培养好的种子液接种至所得固体发酵培养基中，在20?30°C进行恒温发酵培养30?40d，得到成品富砸虫草花； 所述种子液的接种体积量为5?15mL/100g固体发酵培养基;所述亚砸酸钠的添加量以烘干至恒重的啤酒糟粉末的质量计为15?25mg/kg ；所述烘干至恒重的啤酒糟粉末与水的料液质量比为1:2?3。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(I)中，所述斜面培养基的配方为:蛋白胨1.0g/L、葡萄糖40g/L、琼脂15g/L、氯霉素0.1 g/L，溶剂为水，pH为6。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述种子培养基的配方为:葡萄HI Og/L, K2HPO4.3H20 0.5g/L, KH2PO4 0.5g/L、L_ 甘氨酸 I.0g/L、MgS〇4.7H20 0.5g/L、氯霉素0.1g/L，溶剂为水，pH为6。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述亚砸酸钠的添加量以烘干至恒重的啤酒糟粉末的质量计为20mg/kg。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述烘干至恒重的啤酒糟粉末与水的料液质量比为1:2.3。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述种子液的接种体积量为1OmL/1 OOg固体发酵培养基。
【专利摘要】本发明提供了一种富硒虫草花的生产方法，所述的生产方法为：将出发菌株蛹虫草接种于斜面培养基，20～30℃恒温培养7～10d，获得斜面菌体；将斜面菌体接种至种子培养基中，在20～30℃，150～200r/min的摇床条件下振荡培养7～10d，获得种子液；将烘干至恒重的啤酒糟粉末与亚硒酸钠、水混合均匀，118～130℃灭菌20～30min，得到固体发酵培养基，冷却待用；将培养好的种子液接种至所得固体发酵培养基中，在20～30℃进行恒温发酵培养30～40d，得到成品富硒虫草花；本发明使用农业废弃物啤酒糟为富硒虫草花发酵培养的原材料，在国内外未见相关的报道和应用，生产成本低。
【IPC分类】C12R1/645, C12N1/14
【公开号】CN105524843
【申请号】CN201511030322
【发明人】杨胜利, 张慧, 王贝, 陈宏
【申请人】浙江工业大学
【公开日】2016年4月27日
【申请日】2015年12月31日