一种用于抑郁症诊断的lncRNA标志物、试剂盒及基因芯片的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物技术领域，涉及一种用于抑郁症诊断的IncRNA标志物、试剂盒及 基因芯片。
【背景技术】
[0002] 抑郁症的核心症状是情绪低落、兴趣减退、精力缺失，在全球范围内有超过3.5亿 人患有抑郁症。世界卫生组织预测，到2020年，抑郁症将占据世界疾病负担的第二位。
[0003] 抑郁症对社会造成的重大负担，其原因有发病率高、发病年轻化、呈慢性发展、损 害其社会功能和认知能力，及非自然死亡，抑郁症患者中自杀死亡与自杀未遂的比例远远 高于在普通人群中的比值。因此研究抑郁症发病机理及可以体现其严重程度的生物标志 物，并及时针对病因进行干预与治疗是治疗疾病、减轻社会负担的关键因素。
[0004] 关于抑郁症的发病机制及治疗原理目前尚不明确，既往认为遗传因素、生物学因 素、心理社会因素对抑郁症的发生有一定的影响，后来学术界开展了神经生化、神经内分 泌、神经可塑性、神经电生理以及神经影像学等多方面研究，提出了多种病因假说、可能有 关的内分泌轴、脑区结构及功能的变化、脑区环路以及信号通路的变化等，均取得了相应的 进展，但目前仍然无单一的理论即可完全解释抑郁症的发病原因。现代分子遗传学认为很 多社会环境或自身经历等因素可引起基因表达的变化，可导致某些特定的基因发生表观遗 传改变，这些变化可引起神经元的可塑性和功能异常，而这些异常表现可以被遗传下来，即 表观遗传机制，基于基因水平的MDD发病机理及生物标志物的研究逐步引起学者们的关注。
[0005] 非编码RNA(non-coding RNA，ncRNA)即不编码蛋白质的RNA，按照其长短分为长非 编码RNA(>200bp)和短非编码RNA(〈200bp)，广义上包括1111?嫩、丨1?嫩、冰嫩、小干扰卩祖、111丨尺· 以及功能尚未明确的长链非编码RNA。很多学者研究了miRNA在抑郁症患者中的差异表达， 提示miRNA可能通过不同方式参与抑郁症的发生发展，例如神经可塑性、神经内分泌、心理 社会因素、抗抑郁药等，而且认为miRNA-26b、miRNA-1972、miRNA-4485、miRNA-4498和 miRNA-4743等可以作为抑郁症的生物标志物。后来学者们发现LncRNA可以作为人类基因组 中一类非常重要的表观遗传调控因子，通过表观遗传、转录调控及转录后调控等多种机制 调控DNA甲基化、组蛋白修饰或染色质重构，使基因沉默或激活，LncRNA还广泛地参与中枢 神经系统的各种生物学进程，如海马发育、少突胶质细胞髓鞘形成、脑老化、CREB和PGCl-a 转录调控、GABA能神经元和G蛋白偶联受体等信号转导通路相关.LncRNA除了直接参与基因 的表达调控外，可作为一种竞争性内源性RNA(Competing endogenous RNA，ceRNA)与miRNA 相互作用，从而实现相互间的交流与调节。LncRNAs与很多的人类疾病有关，比如癌症、共济 失调及心血管疾病，但是关于LncRNA在抑郁症患者中差异表达的研究极少。
[0006] 越来越多的研究证明，在大脑的发育、神经发生、神经元成熟及突触形成过程中， IncRNA起关键的调控作用。进一步的研究表明，抑郁症症的发生、发展中，IncRNA亦起重要 作用，并与抗抑郁药物的疗效有相关性。因此，某些IncRNA可成为抑郁症诊断和预测抗抑郁 药物治疗效果的生物标记物。
[0007] 越来越多的研究证明，在大脑的发育、神经发生、神经元成熟及突触形成过程中， IncRNA起关键的调控作用。进一步的研究表明，抑郁症的发生、发展中，IncRNA亦起重要作 用，并与抗精神病药物的疗效有相关性。因此，某些IncRNA可成为抑郁症诊断和预测抗精神 病药物治疗效果的生物标记物。
【发明内容】
[0008] 本发明要解决的技术问题是:提供一种用于抑郁症诊断的IncRNA标志物。
[0009] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：一种用于抑郁症诊断的 IncRNA标志物，所述标记物包括TC0NS_12_00001212(PY1)、N0NHSAT102891(PY2)、T⑶NS_ 00019174(PY3)、ENST00000566208(PY4)、N0NHSAG045500(PY6)、ENST00000517573(PY8)、 N0NHSAT034045(PY9)和 N0NHSAT142707(PY10)。所述 TC0NS_12_00001212、N0NHSAT102891、 TC0NS_00019174、ENST00000566208、N0NHSAG045500、ENST00000517573、N0NHSAT034045、 N0NHSAT142707为数据库中的RNA代号，可以在数据库中检索得到，各IncRNA的具体来源数 据库见表4。
[0010] 在本发明的第二方面，提供了一种抑郁症诊断试剂盒，其能够测定血液中的 TC0NS_12_00001212(PY1)、N0NHSAT102891(PY2)、TC0NS_00019174(PY3)、ENST00000566208 (PY4)、N0NHSAG045500(PY6)、ENST00000517573(PY8)、N0NHSAT034045(PY9)和 N0NHSAT142707(PY10)这八种 IncRNA 的含量。
[0011]在本发明的一个优选例中，上述试剂盒含有!'(：(^3_12_00001212(?￥1)、 N0NHSAT102891(PY2)、T⑶NS_00019174(PY3)、ENST00000566208(PY4)、N0NHSAG045500 (PY6)、ENST00000517573(PY8)、N0NHSAT034045(PY9)和 N0NHSAT142707(PY10)的引物和探 针。
[0012] 在本发明的一个优选例中，上述TC0NS_12_00001212的正向引物如SEQ ID N0.1所 示，TC0NS_12_00001212的反向引物如SEQ ID N0.2所示；N0NHSAT102891的正向引物如SEQ ID N0.3所示，N0NHSAT102891的反向引物如SEQ ID N0.4所示;TC0NS_00019174的正向引物 如SEQ ID N0.5所示，TC0NS_00019174的反向引物如SEQ ID N0.6所示；ENST00000566208的 正向引物如SEQIDN0.7所示，ENST00000566208的反向引物如SEQIDN0.8所示 ； N0NHSAG045500的正向引物如SEQIDN0.9所示，N0NHSAG045500的反向引物如SEQID N0.10所示 ;ENST00000517573的正向引物如SEQIDN0.11所示，ENST00000517573的反向引 物如SEQIDN0·12所示 ；N0NHSAT034045的正向引物如SEQIDN0·13所示，N0NHSAT034045 的反向引物如SEQIDN0.14所示 ；N0NHSAT142707的正向引物如SEQIDN0.15所示， N0NHSAT142707的反向引物如SEQIDN0.16所示。
[0013] 在本发明的一个优选例中，上述TC0NS_12_00001212的探针序列如SEQ ID N0.17 所示；N0NHSAT102891的探针序列如SEQ ID N0.18所示；TC0NS_00019174的探针序列如SEQ IDN0·19所示；ENST00000566208的探针序列如SEQIDN0·20所示；N0NHSAG045500的探针 序列如SEQ ID N0.21所示；ENST00000517573的探针序列如SEQ ID N0.22所示； N0NHSAT034045的探针序列如SEQIDN0.23所示；N0NHSAT142707的探针序列如SEQID NO. 24所示。
[0014]在本发明的第三方面，提供了一种抑郁症诊断基因芯片，包括探针和固相支持物 组成，所述探针序列如SEQ ID NO. 17~24所示，所述固相支持物包括玻璃片、硅片、聚丙烯 膜、硝酸纤维素膜、尼龙膜或聚苯乙烯膜。
[0015] 在本发明的第四方面，提供了一种用于评估抗抑郁症药物疗效的IncRNA标志物， 所述标记物包括TC0NS_12_00001212(PY1)、TO0NS_00019174(PY3)、ENST00000566208 (PY4)、N0NHSAG045500(PY6)、ENST00000517573(PY8)、N0NHSAT034045(PY9)和 N0NHSAT142707(PY10)〇
[0016] 在本发明的第五方面，提供了一种评估抗抑郁症药物疗效的试剂盒，其能够测定 血液中的 TC0NS_12_00001212(PY1)、T ⑶NS_00019174(PY3)、ENST00000566208(PY4)、 N0NHSAG045500(PY6)、ENST00000517573(PY8)、N0NHSAT034045(PY9WPN0NHSAT142707 (PY10)七种IncRNA的含量。
[0017] 在本发明的一个优选例中，上述试剂盒含有TC0NS_12_00001212 (PY1)、T⑶NS_ 00019174(PY3)、ENST00000566208(PY4)、N0NHSAG045500(PY6)、ENST00000517573(PY8)、 N0NHSAT034045(PY9)、NONHSAT 142707(PY10)的引物及探针。
[0018] 在本发明的一个优选例中，上述TC0NS_12_00001212的正向引物如SEQ ID Ν0.1所 示，TC0NS_12_00001212的反向引物如SEQ ID N0.2所示；TC0NS_00019174的正向引物如SEQ IDN0.5所示，TC0NS_00019174的反向引物如SEQIDN0.6所示 ;ENST00000566208的正向引 物如SEQIDN0.7所示，ENST00000566208的反向引物如SEQIDN0.8所示 ；N0NHSAG045500 的正向引物如SEQIDN0.9所示，N0NHSAG045500的反向引物如SEQIDN0.10所示 ； ENST000005