被认为是显著的
[0100]针对HA染色的动物也针对胰岛素染色。图10示出对照和DORmO小鼠胰岛中胰岛素 的免疫染色，采用和不采用4-MU。在上列中的图片显示对照动物中胰岛的胰岛素染色的代 表性图像，对照动物用正常食物(左列)治疗，或采用4-MU治疗(右列）。下列显示针对胰岛素 染色的DORmO胰岛的代表性图像，其中动物用对照食物(左列)治疗或采用4-MU治疗(右列）。 用4-MU治疗的DORmO小鼠在胰岛仍然有显著量胰岛素，这足以保持对照水平的血糖。此外， 当4-MU加入食物，被确定的是，4-MU在DORmO小鼠中恢复血糖量正常。
[0101]因此，已经发现，4-MU具有逆转自身免疫性疾病和障碍的令人惊奇的性质，在这种 特定的情况下，例如，逆转自身免疫性糖尿病的令人惊奇的性质。
[0102]已知细胞外基质多糖HA是一个关键的炎性介质，其在多发性硬化脱髓鞘损害，以 及在该疾病，EAE的小鼠模型中是丰富的。如本文所述，HA合成的抑制可以预防EAE。数据表 明，用UDP-糖基转移酶抑制剂，例如UDP-葡糖苷酸基转移酶(UGT)抑制剂，例如4-MU或4-MU 的代谢物进行的治疗，具有不仅阻止EAE的诱导，而且还在已经确诊的EAE中大大减少临床 缺陷的能力。初步研究表明，采用UDP-糖基转移酶抑制剂，诸如UGT抑制剂，例如4-MU或4-MU 代谢物的治疗，倾向于对抗炎性质的免疫应答，其特征为增加数量的FoxP3+调节性T细胞 (Treg)，已知预防自身免疫的重要的细胞群体。
[0103] UDP糖基转移酶是一种酶，其催化UDP糖的糖部分转移为广泛代谢产物如激素和次 生代谢产物。一般地，UDP糖基转移酶作用于生物合成途径的最后步骤，以增加代谢物的溶 解度，稳定性，储存，生物活性，或者生物利用度。UDP糖基转移酶的一种类型是UGT，通过葡 糖醛酸化反应催化UDP葡糖醛酸的葡糖醛酸成分转移成小的疏水性分子的酶。
[0104] 竞争性抑制是酶抑制的一种形式，其中抑制剂与酶上的活性位点的结合预防了底 物的结合，反之亦然。对某些UGT同种型具有特异性的底物可以用作特异性抑制剂，以确定 负责药物的葡萄苷酸化的UGT同种型。已知UGT抑制剂包括，例如，阿扎那韦，吉非罗齐，讳地 那韦，酮康唑，酮康唑，和丙戊酸，等等。
[0105] 4-MU的代谢物可有效地倾向于免疫应答，所述免疫应答特征在于FOXP3+调节性T 细胞(Treg)的数量增加的抗炎性质。4-MU的代谢物被描述在，例如，Kakizaki，I.，等人， J.Biol .Chem.279,33281-33289(2004)，和在Garre tt，E · R ·，等人，Biopharm · Drug Dispos · 14,13-39( 1994)，这两者都通过引用并入本文。
[0106] 4-MU的示范性代谢物包括4-MUG和4-MUS。为了确定在24小时期间血液中来自源自 膳食食物摄入的4-MU的4-MU的血清水平，Balb/C雌性小鼠（自Taconic农场购买的12周龄） 被提供含有5%4-MU的食物膳食(n=18)或不包含4-MU的对照食物(n = 3)。在实验的开始和 在2周终末点称重小鼠。在两周，通过心脏穿刺用肝素化的注射器收集血液，将其放入在冰 上的收集管，旋转离心，并将血浆在-80 °C冷冻。随后通过气相色谱质谱(GCMS)，针对4-MU和 两个4-MU缀合物(conjugate)，4_MUG和4-MUS分析血衆样品。
[0107] 图11A，11B，和11C示出，在含有5 % 4-MU的14天固体食物膳食之后4-MUG，4-MUS，和 非缀合4-MU在小鼠的血浆水平。在24小时内每4小时收集血液(η =每个时间点3只小鼠）。最 占主导地位的血浆产物是4-MUG并在采用对照食物的小鼠中是检测不到的（数据未示出）。 如预期的，在已知小鼠进食更多的夜间，4-MUG水平较高（在动物饲养所，晚上7点到早上7 点）。4-MU，4-MUS存在，不过，以低得多的水平存在。4-MU和4-MUS均在对照食物喂养的小鼠 中可被检测到。分别相对于4-MUG(513微克/毫升），4-MU(0.9微克/毫升）和硫酸化产物4-MUS(30.5微克/毫升）的二十四小时的平均水平存在于约600和20倍更低的水平。结果证明 采用2周含有5 % 4-MU的食物膳食的Balb/C小鼠显示大约500微克/毫升的24小时平均4-MUG 血浆水平，伴有低得多水平的4-MUS缀合物和非缀合的4-MU，并确认4-MUG和4-MUS是4-MU的 代谢产物。
[0108] 鉴于有报道称HA沉积物在中枢神经系统（CNS)损害中是丰富的，并且这主要是 LMW-HA，有人推测，HA可能在这些位点驱动免疫失调。为了检验这一假设，在MS的EAE小鼠模 型中对HA合成，4-MU的选择性抑制剂的效果进行了评估。
[0109] 为了证实HA在MS中的致病作用，EAE在C57B1/6小鼠中用髓磷脂少突胶质细胞糖蛋 白肽片段35-55(M0G35- 55)诱导免疫，和小鼠采用食物中的4-MU的先前建立的安全剂量治疗， 其开始于免疫前4天(预处理方案），第2天免疫强化后立即（治疗方案)或，当动物显示神经 缺陷迹象时（干预方案）。图12A，12B和12C图解说明EAE平均得分作为主体中诱导后天的函 数，分别根据预处理，治疗，或干预方案采用4-MU治疗所述主体。
[0110] 如在图12A和12B所示，疾病诱导前(预处理方案，图12A)或疾病诱导后，但在症状 发生前（治疗方案，图12B)采用4-MU(5%w/w在食物中）治疗，显著减少C57B1/6小鼠中 10635-55肽诱导的EAE的发生率和严重性(分别为1/7和2/10与9/10对照治疗的动物）。如图 12C所示，神经症状发作后用4-MU治疗(干预方案）早在治疗开始后第3天就显著改善疾病， 并降低EAE的严重性。针对图12A，12B和12C，*P〈0 · 05，#Ρ〈0 · 01，*#P〈0 · 001，曼-怀二氏检 验（Mann-Whitney)。
[0111] 数据表明，HA合成的抑制干扰免疫激活机制，其导致神经病理学以及在神经病理 学中是持续的。此外，数据表明，4-MU治疗预防疾病进展和减少EAE主体中确诊的疾病。
[0112] 因此，在一个方面进行说明的是，用于治疗自身免疫性，变应性或特应性疾病的组 合物包括(i)抑制透明质酸合成的化合物，和(ii)可药用的载体。
[0113] 如本文所用的术语"可药用的载体"意指一种或多种相容的固体或液体填充剂，稀 释剂或包封物质，其适合于施用于主体。该药物组合物的组分也能够相互混合，采用的方式 是使得没有任何相互作用，相互作用将大大损害所需药物功效。这些制剂可以常规地含有 可药用的浓度的盐，缓冲剂，防腐剂，相容性载体，佐剂和任选的其它治疗成分。
[0114] 合适的液体或固体药物制剂形式是，例如，用于吸入的水溶液或盐水溶液，微囊化 的，做成螺旋状的，包被到显微金颗粒，包含在脂质体中（包括pH依赖性释放制剂），脂质样 物质，雾化的，气雾剂，植入到皮肤的粒料，或干燥到尖锐的物体上，所述尖锐的物体将通过 划伤皮肤而进入皮肤。药物组合物还包括颗粒，粉末，片剂，包衣片剂，（微)胶囊，栓剂，糖浆 剂，乳剂，混悬剂，乳膏，滴剂或具有组合物的长期释放的制剂，在前述制剂中，赋形剂和添 加剂和/或助剂，例如崩解剂，粘合剂，包衣剂，溶胀剂，润滑剂，调味剂，甜味剂或增溶剂通 常如上所述地被使用。该药物组合物适合于在各种药物递送系统中被使用。对于药物递送 方法的简要综述，参见Langer，科学249,1527-1533(1990)和Langer和Tirrell，自然428， 487-492(2004)。此外，本文描述的组合物可以配制成长效制剂（depot preparation)，时 间-释放，延迟释放或持续释放递送系统。
[0115] 在一个实施方案中，所述化合物是UDP-糖基转移酶抑制剂。在一个实施方案中，所 述化合物是UDP-葡糖苷酸基转移酶抑制剂。在一个实施方案中，所述化合物是4-甲基伞形 酮或4-甲基伞形酮的代谢产物，例如，4-甲基伞形酮-葡糖苷酸或硫酸化4-甲基伞形酮。
[0116] 通过评价在疾病的峰值(免疫后第22天)细胞浸润到脊髓的免疫性质，分析4-MU治 疗对EAE发病机制的作用。浸润的总数与疾病评分相关，主要由CD4+T细胞组成，浸润的总数 通过预处理和采用4-MU的早期治疗被大幅减少，而干预治疗适度降低CD4+T细胞浸润。图 13A涉及浸润细胞类型，并显示⑶8+和⑶4+淋巴细胞，以及巨噬细胞在健康对照，对照，预处 理，治疗，和干预方案主体中的数量。如图13A中所示，4-MU治疗导致细胞浸润的总数量更 低，并降低⑶8+和⑶4+淋巴细胞，以及巨噬细胞的浸润。出人意料的是，4-MU在这些动物中 没有引起全身性免疫抑制或淋巴细胞增殖普遍提高，考虑到的是，观察的是淋巴器官总的 淋巴细胞计数没有变化。
[0117] 图13B示出了在健康对照，对照，预处理，治疗，和干预方案主体中在⑶4+群体内的 IL4+，IFN-γ +和IL17+细胞数。有趣的是，通过4-MU治疗后仍然存在于CNS的⑶4+T细胞的进 一步分析，4-MU治疗主要降低了产生Thl群体，并与减少疾病严重程度的相关的IFN-γ，而 产生Thl7群体的IL-17受到的影响较小。这最后的观察表明，4-MU治疗通过倾向于远离Thl 反应的局部Th平衡而倾向于中枢神经系统中浸润淋巴细胞的T细胞性质。此外，考虑到Thl 和Thl7细胞在EAE中的差异病理（differential pathologic)角色(Axtell，R.C.，等人， Clin.Rev.Allergy Immunol.44，1 14 120(2013);Lowther，D.E·，等人，Acta Neuropathol. 126,501 515(2013))，这种在局部Th细胞性质中的变化可以有助于预防髓鞘 的自身免疫发作。
[0118] 考虑到T细胞进入脊髓的浸润的减少可以归因于4-MU导致的调节机制的诱导，通 过分析CD25+T细胞的数目评估4-MU治疗在诱导次级淋巴器官中可能的调节细胞的作用。图 13C示出了，健康对照，对照，预处理，治疗，和干预方案主体的脾和淋巴结中CD4+T细胞的 ⑶25+的百分比。如图13C所示，免疫之前在EAE主体中开始的4-MU治疗(预处理方案)导致了 脾和淋巴结中⑶4+⑶25+细胞的数目增加。然而，因为⑶25通常通过活化被诱导，进一步通 过分析FoxP3+T细胞的诱导，评价4-MU对可能的Treg群体的诱导的影响。
[0119] 首先，使用健康小鼠，观察到的是，4-MU治疗显著增加 FoxP3+T细胞在淋巴组织中 的数目（数据未显示）。图13D表示FoxP3+⑶4+T细胞在对照和4-MU治疗的主体中的百分比。 如图13D中所示，通过分析在DO. 11小鼠中0VA免疫后Treg数目，观察到多种免疫隔室，包括 脾，肠系膜淋巴结(MLN)，腹股沟淋巴结（ILN)，和胰脏的淋巴结(PLN)中FoxP3+T细胞增加， 表明4-MU诱导Treg应答。如在EAE小鼠，可以确认的是，4-MU治疗没有诱导这些小鼠中的一 般的免疫抑制(数据未显示）。
[0120] 因此，在一个实施方案中，所述化合物有效诱导调节性T细胞应答。在一个实施方 案中，所述化合物有效地增加 FoxP3+调节性T细胞。
[0121] 在一个实施方案中，自身免疫性，变应性或特应性疾病选自自身免疫性糖尿病，多 发性硬化，S j reas病，自身免疫性甲状腺炎，狼疮，类风湿性关节炎，银肩病，结肠炎，哮 喘组成的组。在一个实施方案中，自身免疫性，变应性或特应性疾病是自身免疫性糖尿病或 多发性硬化。
[0122] 在一个方面，提供用于在有需要的哺乳动物主体中治疗自身免疫性，变应性或特 应性疾病的方法。提供的是包括对主体施用组合物的方法，所述组合物包含在哺乳动物主 体中有效抑制透明质酸合成的量的化合物。在一个实施方案中，所述化合物是UDP-糖基转 移酶抑制剂。在一个实施方案中，所述化合物是UDP葡糖苷酸基转移酶抑制剂。在一个实施 方案中，所述化合物是4-甲基伞形酮或4-甲基伞形酮的代谢产物，例如，4-甲基伞形酮葡糖 苷酸或硫酸化4-甲基伞形酮。
[0123] 在方法的一个实施方案中，所述化合物有效诱导调节性T