龙涎香醇的制造方法
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及一种龙涎香醇的制造方法。
【背景技术】
[0002] 龙涎香(ambergris)是一种从7世纪时开始在世界各地使用的高级香料，也作为中 药使用。人们认为龙涎香是抹香鲸通过消化管分泌物使食物(章鱼、乌贼等）的不消化物结 石化，排泄而形成的物质，但是详细的生成机理是不明确的。龙涎香的主要成分是龙涎香 醇，龙涎香在海上悬浮时通过日光和氧被氧化分解，生成具有各种香味的化合物。
[0003] 龙涎香的主要成分龙涎香醇作为香料或药剂使用，但是无法从自然界大量获取。 因此，提出了各种有机合成方法。
[0004] 例如，在日本特开平10-236996号公报中公开了一种简便且低成本、高效率地制备 ( + )-龙涎香醇的方法，其中，其包含下述工序：由龙涎香内酯制备新的磺酸衍生物，对该磺 酸衍生物偶联上γ -环香叶基卤化物的光学活性体。
[0005] 而且，在Tetrahedron Asymmetry，（2006)Vol · 17，ρρ · 3037-3045(不对称四面体， 2006年，第17卷，第3037-3045页）中公开了一种通过茱莉亚偶联(Julia Coupling)反应对 由（± ) (5，5，8a_二甲基八氛-1H-螺[蔡_2，2 ' -环氧乙烧]-1-基）甲醇合成的2_( (1R, 2R, 4aS，8aS)-2-(甲氧基甲氧基)-2，5，5，8a-四甲基十氢萘-卜基）乙醛和由（± )甲基6-羟基-2，2-二甲基环己烷羧酸酯合成的5- ((4- ((S) -2，2-二甲基-6-亚甲基环己基)丁烷-2-基-磺 酰)-1-苯基-1H-四唑进行汇集合成，得到龙涎香醇的方法。
[0006] 另一方面，已知一种通过使用角鲨烯-藿烯环化酶的突变型酶（D377C、D377N、 Y 4 2 0 Η、Y 4 2 0 W等），由角鲨烯得到单环性三萜的3 -脱氧蓍醇A的方法 (Biosci .Biotechnol .Biochem.，（1999)Vol .63,pp .2189-2198(生物科学?生物技术?生 物化学，1990年，第63卷，第2189-2198页）；8丨〇3(^.8丨(^6(*11〇1.8丨〇(*6111.，（2001)￥〇1.65， pp.2233-2242(生物科学?生物技术?生物化学，2001年，第65卷，第2233-2242页）； Biosci .Biotechnol ·Biochem.，（2002)Vol ·66，pp· 1660-1670(生物科学?生物技术?生物 化学，2002年，第66卷，第1660-1670页））。
[0007] 而且，已报告了四异戊二烯-β-姜黄烯环化酶是与由四异戊二烯-β-姜黄烯生成4 环性的C35萜烯醇的反应和由角鲨烯生成2环性的三萜的反应这2种反应相关的二功能性酶 (J.Am.Chem.Soc. ,(2011 )Vol. 133，pp.17540-17543(美国化学会志，2011 年，第 133卷，第 17540-17543页））。
【发明内容】
[0008] 发明要解决的课题
[0009] 由于现有的龙涎香醇的有机合成方法需要很多合成阶段，反应系统复杂，达不到 产业化。而且，与龙涎香醇的生成相关的具体的酶是未知的。
[0010] 因此，本发明的目的在于，提供一种能比现有的已知有机合成法简便地制备龙涎 香醇的龙涎香醇的制造方法。
[0011] 解决课题的手段
[0012] 本发明如下所述。
[0013] [ 1 ] -种龙涎香醇的制造方法，其中，其包含：
[0014] 使四异戊二烯-β-姜黄烯环化酶与3-脱氧蓍醇A反应，得到龙涎香醇。
[0015] [2]如[1]中记载的龙涎香醇的制造方法，其中，四异戊二烯-β-姜黄烯环化酶来自 芽孢杆菌属细菌。
[0016] [3]如[1]或[2]中记载的龙涎香醇的制造方法，其中，四异戊二烯-β-姜黄烯环化 酶来自巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及地衣芽孢杆菌中的任意一种。
[0017] [4]如[1]~[3]中任意1项记载的龙涎香醇的制造方法，其中，所述制造方法还包 含：
[0018] 使能由角鲨烯生成3-脱氧蓍醇Α的突变型角鲨烯-藿烯环化酶与角鲨烯反应，得到 3_脱氧蓍醇A。
[0019] [5]如[4]中记载的龙涎香醇的制造方法，其中，突变型角鲨烯-藿烯环化酶在从由 通过序列编号1表示的氨基酸序列中第377位、420位、607位以及612位所组成的群组中选出 的至少一个部位上具有氨基酸置换。
[0020] [6]如[4]或[5]中记载的龙涎香醇的制造方法，其中，突变型角鲨烯-藿烯环化酶 具有通过序列编号2、序列编号3、序列编号4、序列编号5、序列编号6、序列编号7以及序列编 号8中的任意一者表不的氨基酸序列。
[0021] [7]如[1]~[6]中任意1项记载的龙涎香醇的制造方法，其中，四异戊二烯-β-姜黄 烯环化酶具有通过序列编号16、序列编号17、以及序列编号18中的任意一者表示的氨基酸 序列。
[0022]发明的效果
[0023]根据本发明，提供一种能比现有的已知有机合成法简便地制备龙涎香醇的龙涎香 醇的制造方法。
【具体实施方式】
[0024] 在本说明书中，"工序"一词不只是独立的工序，与其他的工序不能明确地区别的 情况下，只要能达成其工序所期望的目的，也包含于本用语中。
[0025] 在本说明书中，使用"~"表示的数值范围表示包含分别作为最小值以及最大值的 记载于"~"前后的数值的范围。
[0026] 在本说明书中，组合物中的各成分的量在相应于组合物中的各成分的物质为多种 类存在的情况下，在没有特别限制的情况下，表示组合物中存在的所述多种类的物质的总 量。
[0027] 在本发明中，存在用本技术领域中公知的一字符表示(例如，甘氨酸残基用"G"表 示)或者三字符表示(例如，甘氨酸残基用"Gly"表示)氨基酸序列中的氨基酸残基的情况。
[0028] 在本发明中，与蛋白质以及多肽的氨基酸序列相关的"％"，没有特别限制的情况 下，以氨基酸残基的个数为基准。
[0029] 以下，对本发明的实施方式进行说明。这些说明以及实施例是用于例示本发明，并 不是用于限制本发明的范围。
[0030] 本发明的龙涎香醇的制造方法是一种包含有使四异戊二烯-β-姜黄烯环化酶与3-脱氧蓍醇Α反应得到龙涎香醇的龙涎香醇的制造方法。
[0031] 在本发明中，通过使四异戊二烯-β-姜黄烯环化酶与3-脱氧蓍醇A反应制造龙涎香 醇，因此，能简便地制造龙涎香醇。
[0032]已知四异戊二烯-β_姜黄烯环化酶是一种由作为C3Q的直链不饱和烃的角鲨烯生成 2环性萜烯醇的酶，并且已知能将单末端具有单环的3-脱氧蓍醇A作为底物使用。而且，对于 四异戊二烯-β_姜黄烯环化酶而言，明确了如果将3_脱氧蓍醇A作为底物使用，则使3-脱氧 蓍醇A的未环化的一端选择性地环化，生成两末端环化化合物。本发明是基于这些见解而完 成的。根据四异戊二烯-β_姜黄烯环化酶的上述活性，将单末端具有单环的3-脱氧蓍醇A作 为材料，能使用1种酶简便地制备龙涎香醇。
[0033] 本发明的龙涎香醇的制造方法，其包含:使四异戊二烯-β-姜黄烯环化酶与3-脱氧 蓍醇Α反应得到龙涎香醇（以下，称为"龙涎香醇生成工序"）。并且，根据需要包含其他工序。
[0034] 龙涎香醇为（11?，4￡1(；[)-1-[(幻- 6-[(幻-2,2-二甲基-6-亚甲基环己基]4-甲基-3-己烯基]十氢-2，5，5，8ai3_四甲基萘-2α-醇，其是一种组成式为C 3QH520、分子量为428.745的 两末端芘仆仆公物·並曰县一轴且右W下姑拔1的三萜醇（CAS登录编号：473-03-0)。
[0035]
[0036]在本发明的龙涎香醇的制造方法中，将3-脱氧蓍醇A作为四异戊二烯-β-姜黄烯环 化酶的底物使用。
[0037] 3-脱氧蓍醇 Α 为（S)-l，l-二甲基-3-亚甲基-2-((3E，7E，llE)-3,8，12，16-四甲基
十七烷-3，7,11，15-四烯-1-基)环己烷，其组成式为C3QH5Q，是具有以下结构的单末端环化 化合物。该化合物在本发明中作为用于生成龙涎香醇的材料使用。关于3-脱氧蓍醇A的获取 方法，没有特别的限制，可以是通过化学合成所得的物质，也可以是来自现有化合物采用酶 反应所得35||的_席_
[0038]
[0039] 本发明的制造方法优选为进一步包含:使突变型角鲨烯-藿烯环化酶与角鲨烯反 应得到3-脱氧蓍醇A(以下，称为"3-脱氧蓍醇A生成工序"）。由此，通过使用突变型角鲨烯-藿烯环化酶与四异戊二烯-β_姜黄烯环化酶这2种酶反应，能将价格低廉的角鲨烯作为材 料，高效简便地制备龙涎香醇。
[0040] [3-脱氧蓍醇A生成工序]
[0041] 在3-脱氧