一种玉米谷蛋白酶解制备抗氧化多肽的方法_3

文档序号:9838613阅读:来源:国知局
in后迅速冷却,并调pH 7.0;最后在4°C,10000r/min 离心10min,收集上清液备用,该上清液可以通过冷冻干燥得到冻干粉,即抗氧化多肽。 [0077] 实施例16:
[0078]本实施例与实施例1的不同之处仅在于:
[0079] (2)多肽制备:将提取的玉米谷蛋白和去离子水按固液比2 %制成悬浮液,调pH 9.5, 于60°C处理30min;然后调pH 8.0,添加0· 15U/g Alcalase(碱性蛋白酶),于60°C酶解 2h;再将酶解液置于沸水浴中处理lOmin后迅速冷却,并调pH 7.0;最后在4°C,10000r/min 离心10min,收集上清液备用,该上清液可以通过冷冻干燥得到冻干粉,即抗氧化多肽。
[0080] 实施例17:
[0081] 本实施例与实施例1的不同之处仅在于:
[0082] (2)多肽制备:将提取的玉米谷蛋白和去离子水按固液比2 %制成悬浮液,调pH 9.5, 于60°C处理30min;然后调pH 8.5,添加0· 15U/g Alcalase(碱性蛋白酶),于60°C酶解 2h;再将酶解液置于沸水浴中处理lOmin后迅速冷却,并调pH 7.0;最后在4°C,10000r/min 离心10min,收集上清液备用,该上清液可以通过冷冻干燥得到冻干粉,即抗氧化多肽。
[0083] 实施例18:
[0084] 本实施例与实施例1的不同之处仅在于:
[0085] (2)多肽制备:将提取的玉米谷蛋白和去离子水按固液比2 %制成悬浮液,调pH 9.5, 于60°C处理30min;然后调pH 9.0,添加0· 15U/g Alcalase(碱性蛋白酶),于60°C酶解 2h;再将酶解液置于沸水浴中处理lOmin后迅速冷却,并调pH 7.0;最后在4°C,10000r/min 离心10min,收集上清液备用,该上清液可以通过冷冻干燥得到冻干粉,即抗氧化多肽。
[0086] 实施例19:
[0087] 本实施例与实施例1的不同之处仅在于:
[0088] (2)多肽制备:将提取的玉米谷蛋白和去离子水按固液比1 %制成悬浮液,调pH 9.5, 于60°C处理30min;然后调pH 8.0,添加0· 15U/g Alcalase(碱性蛋白酶),于60°C酶解 2h;再将酶解液置于沸水浴中处理lOmin后迅速冷却,并调pH 7.0;最后在4°C,10000r/min 离心10min,收集上清液备用,该上清液可以通过冷冻干燥得到冻干粉,即抗氧化多肽。 [0089] 实施例20:
[0090] 本实施例与实施例1的不同之处仅在于:
[0091] (2)多肽制备:将提取的玉米谷蛋白和去离子水按固液比1.5 %制成悬浮液,调pH 9.5, 于60°C处理30min;然后调pH 8.0,添加0· 15U/g Alcalase(碱性蛋白酶),于60°C酶解 2h;再将酶解液置于沸水浴中处理lOmin后迅速冷却,并调pH 7.0;最后在4°C,10000r/min 离心10min,收集上清液备用,该上清液可以通过冷冻干燥得到冻干粉,即抗氧化多肽。 [0092] 实施例21:
[0093]本实施例与实施例12的相同。
[0094] 实施例22:
[0095] 本实施例与实施例1的不同之处仅在于:
[0096] (2)多肽制备:将提取的玉米谷蛋白和去离子水按固液比3 %制成悬浮液,调pH 9.5, 于60°C处理30min;然后调pH 8.0,添加0· 15U/g Alcalase(碱性蛋白酶),于60°C酶解 2h;再将酶解液置于沸水浴中处理lOmin后迅速冷却,并调pH 7.0;最后在4°C,10000r/min 离心10min,收集上清液备用,该上清液可以通过冷冻干燥得到冻干粉,即抗氧化多肽。 [0097] 实施例23:
[0098]本实施例与实施例1的不同之处仅在于:
[0099] (2)多肽制备:将提取的玉米谷蛋白和去离子水按固液比4%制成悬浮液,调pH 9.5, 于60°C处理30min;然后调pH 8.0,添加0· 15U/g Alcalase(碱性蛋白酶),于60°C酶解 2h;再将酶解液置于沸水浴中处理lOmin后迅速冷却,并调pH 7.0;最后在4°C,10000r/min 离心10min,收集上清液备用,该上清液可以通过冷冻干燥得到冻干粉,即抗氧化多肽。
[0100] 实施例24:
[0101] 本实施例与实施例1的不同之处仅在于:
[0102] (2)多肽制备:将提取的玉米谷蛋白和去离子水按固液比5%制成悬浮液,调pH 9.5, 于60°C处理30min;然后调pH 8.0,添加0· 15U/g Alcalase(碱性蛋白酶),于60°C酶解 2h;再将酶解液置于沸水浴中处理lOmin后迅速冷却,并调pH 7.0;最后在4°C,10000r/min 离心10min,收集上清液备用,该上清液可以通过冷冻干燥得到冻干粉,即抗氧化多肽。
[0103] 实施例25:
[0104] 本实施例与实施例1的不同之处仅在于:
[0105] (2)多肽制备:将提取的玉米谷蛋白和去离子水按固液比2 %制成悬浮液,调pH 9.5, 于60°C处理30min;然后调pH 8.0,添加0· 15U/g Alcalase(碱性蛋白酶),于50°C酶解 2h;再将酶解液置于沸水浴中处理lOmin后迅速冷却,并调pH 7.0;最后在4°C,10000r/min 离心10min,收集上清液备用,该上清液可以通过冷冻干燥得到冻干粉,即抗氧化多肽。
[0106] 实施例26:
[0107] 本实施例与实施例1的不同之处仅在于:
[0108] (2)多肽制备:将提取的玉米谷蛋白和去离子水按固液比2 %制成悬浮液,调pH 9.5, 于60°C处理30min;然后调pH 8.0,添加0· 15U/g Alcalase(碱性蛋白酶),于55°C酶解 2h;再将酶解液置于沸水浴中处理lOmin后迅速冷却,并调pH 7.0;最后在4°C,10000r/min 离心10min,收集上清液备用,该上清液可以通过冷冻干燥得到冻干粉,即抗氧化多肽。
[0109] 实施例27:
[0110] 本实施例与实施例12的相同。
[0111] 实施例28:
[0112] 本实施例与实施例1的不同之处仅在于:
[0113] (2)多肽制备:将提取的玉米谷蛋白和去离子水按固液比2 %制成悬浮液,调pH 9.5, 于60°C处理30min;然后调pH 8.0,添加0· 15U/g Alcalase(碱性蛋白酶),于70°C酶解 2h;再将酶解液置于沸水浴中处理lOmin后迅速冷却,并调pH 7.0;最后在4°C,10000r/min 离心10min,收集上清液备用,该上清液可以通过冷冻干燥得到冻干粉,即抗氧化多肽。
[0114] 实施例29:
[0115] 本实施例与实施例1的不同之处仅在于:
[0116]玉米谷蛋白的制备方法为:将100g玉米蛋白粉置于3mol/L的醋酸缓冲液中混匀, 100°C恒温搅拌50min,然后冷却至70°C,调PH6,然后加10ml淀粉酶混匀,于70°C密封搅拌过 夜,再调酶解液pH 8,在100°C处理1 Omin后,过筛,并用蒸馏水洗涤筛上物,收集滤液,于10 °C,20000r/min,离心30min,弃上清液,收集沉淀冷冻干燥得玉米谷蛋白,其中玉米蛋白粉 与淀粉酶的用量比为l〇〇g: l〇ml。
[0117] 处理酶解液的方法为:将酶解液置于沸水浴中处理30min后迅速冷却,并调pH 7.5;于5°C,20000r/min,离心30min,收集上清液,得抗氧化多肽。
[0118] 实施例30:
[0119] 本实施例与实施例1的不同之处仅在于:
[0120]玉米谷蛋白的制备方法为:将50g玉米蛋白粉置于lmol/L的醋酸缓冲液中混匀,80 °C恒温搅拌20min,然后冷却至40°C,调pH 4,然后加3ml淀粉酶混匀,于50°C密封搅拌过夜, 再调酶解液pH 6,在90 °C处理lmin后,过筛,并用蒸馏水洗涤筛上物,收集滤液,于2 °C, 6000r/min,离心5min,弃上清液,收集沉淀冷冻干燥得玉米谷蛋白,其中玉米蛋白粉与淀粉 酶的用量比为50g:3ml。
[0121] 处理酶解液的方法为:将酶解液置于沸水浴中处理lOmin后迅速冷却,并调pH 6.5;于1°C,6000r/min,离心5min,收集上清液,得抗氧化多肽。
[0122] 实验例1:DPPH自由基清除能力的测定
[0123] 取2mL O.lmmol/L DPP
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