miRNA在制备药物性心脏病生物标志物中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，特别是设及一种miRNA(microRNA化制备药物性屯、脏 病生物标志物中的用途。
【背景技术】
[0002] 广义而论，凡由于药物直接或间接的屯、肌毒性所导致的屯、脏病变，无论是因药物 对屯、肌电生理的影响而引起的屯、肌除极和复极的异常或各种屯、律失常，或屯、肌的收缩性因 药物的毒性作用而受到抑制，进而诱发或加重的屯、力衰竭，或因对某种药物过敏而导致屯、 肌炎、屯、包炎，均可称之为药物性屯、脏病(化ug-induced head diseases)。与其他药源性 疾病一样，药物性屯、脏病可由于药物本身、用药的医师和受治的病人=方面的原因所促成， 但通常药物本身和药物相互作用是引起病变的主导因素。药物累及屯、脏者主要是对屯、肌的 损害，但少数药物也累及屯、包和屯、内膜。
[0003] 雷公藤(Tripterygium Wil打dii化ok.f.)又名黄藤、黄藤木、典蜡藤、断肠草等， 属于卫茅科木质藤本植物。其英文名：Common Threewingnut Root,拉下名：Radix Tripterygii Wilfordii Tripterygium wilfordii HooK.f。文献资料记载其味苦、辛，性 凉，大毒，归肝、肾经。具有桂风除湿、活血通络、消肿止痛、杀虫解毒等功效。雷公藤的根、 颈、叶均可作为药用，主要药用部位为其根。临床应用中发现，雷公藤制剂治疗类风湿关节 炎的机制与皮质激素类相似，但没有激素类的副作用，耐受性好，临床应用前景广阔。然而 近年来的研究发现，雷公藤可导致中毒性屯、肌炎，引起屯、肌传导障碍，严重者可出现屯、源性 休克和屯、力衰竭。在各种雷公藤制剂导致的急性中毒性屯、肌损害中，又W雷公藤甲素引起 的屯、肌损害最为严重。
[0004] 生物标志物(Biomarker)是指可W标记系统、器官、组织、细胞及亚细胞结构或功 能的改变或可能发生的改变的生化指标，具有非常广泛的用途。生物标志物可用于疾病诊 断、判断疾病分期或者用来评价新药或新疗法在目标人群中的安全性及有效性。目前临床 上诊断屯、功能的生化指标已被广泛应用于药物屯、脏毒性的检测。其中，屯、肌肌巧蛋白I (CTnI)是一种屯、肌细胞所特有的，仅存在于屯、室肌和屯、房肌中的蛋白。CTnI的分子量为 2化U，血清半衰期为化左右。C化I在屯、肌内约有3 %~6 % W游离形式存在于胞浆中，其余 部分则W结合形式存在于肌原纤维中。正常人血清中CTn I的含量很少，在急性屯、肌梗塞 (AMI)发病后，血清CTn I多于3~化开始升高，10~2地达高峰，5~7d恢复正常。与屯、肌肌酸 激酶MB (CK-MB)相比，C化I在屯、肌中含量较多，分子量偏小，屯、肌损伤后易在血清中被测 出，故而其较为敏感，可用于检出屯、肌的微小损伤。
[0005] miRNA(microRNA)是一类新发现的非编码单链小分子RNA，约22个核巧酸长度，通 过识别特定的目标mRNA，与勒ImRNA的3'非翻译区（3' -unhanslated region，3' -UTR)互补 配对，进行蛋白翻译抑制或降解HiRNAnmiRNA广泛参与机体的生长发育、细胞的代谢、增殖、 分化和调亡，参与了肝损伤、肿瘤形成、屯、血管疾病等多种病理过程。因此，正常机体内 miRNA的变化也指示着机体正常生理功能的改变，乃至病变的发生。已有700多种miRNA被发 现，收载于miRBase数据库，目前miRNA已成为生命科学界研究的热点。已有研究人员对肿 瘤、屯、脑血管疾病等多种病症进行了 WmiRNA为诊断指标和治疗祀点为目的的研究，并取得 了一些进展。由于血浆、组织等生物样本中的miRNA在室溫、高溫、不同pH、多次冻融后仍能 检测到，并且含量变化不大，而此时大多数RNA、蛋白质、酶都会降解、失活，因此miRNA的稳 定性;快速、高通量的miRNA忍片检测技术;miRBase数据库的日益完善，为其作为屯、肌毒性 生物标志物进行检测提供了可能。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的旨在提供一种miRNA在制备药物性屯、脏病生物标志物中的用途。
[0007] 如本发明所用，大鼠的miR-15a-化是一段成熟的miRNA(miRNA，microRNA)序列，其 碱基序列为：5 ' -AGGCCAUAUUGUGCUGCCUCA-3 '（沈Q ID No. 1)。
[000引大鼠的miR-483-3p是一段成熟的miRNA(miRNA，microRNA)序列，其碱基序列为： 5'-CACUCCUCCCCUCCCGUCUUGU-3'(SEQ ID No.2)0
[0009] 大鼠的miR-127-5p是一段成熟的miRNA(miRNA，microRNA)序列，其碱基序列为： 5'-CUGAAGCUCAGAGGGCUCUGAUU-3'(沈Q ID No.3)。
[0010] 大鼠的miR-615是一段成熟的miRNA(miRNA，microRNA)序列，其碱基序列为：5'-GGGGGUCCCCGGUGCUCGGAUC-3'(SEQ ID No.4)〇
[0011] 具体地说，本发明的第一方面是提供了 miR-15a-化在制备检测雷公藤或雷公藤提 取物导致的屯、肌损伤的生物标志物中的应用，所述miR-15a-化的碱基序列如SEQ ID No. 1 所示，且所述雷公藤或雷公藤提取物W雷公藤甲素为活性成分。
[0012] 本发明的第二方面是提供了 miR-615在制备检测雷公藤或雷公藤提取物导致的屯、 肌损伤的生物标志物中的应用，所述miR-615的碱基序列如SEQ ID No. 2所示，且所述雷公 藤或雷公藤提取物W雷公藤甲素为活性成分。
[0013] 本发明的第S方面是提供了 miR-127-5p在制备检测雷公藤或雷公藤提取物导致 的屯、肌损伤的生物标志物中的应用，所述miR-127-5p的碱基序列如SEQ ID No.3所示，且所 述雷公藤或雷公藤提取物W雷公藤甲素为活性成分。
[0014] 本发明的第四方面是提供了 miR-483-化在制备检测雷公藤或雷公藤提取物导致 的屯、肌损伤的生物标志物中的应用，所述miR-483-化的碱基序列如SEQ ID No. 4所示，且所 述雷公藤或雷公藤提取物W雷公藤甲素为活性成分。
[0015] 在一优选例中，所述雷公藤或雷公藤提取物的用量不会引起血浆屯、肌肌巧蛋白-I 的浓度变化。
[0016] 本发明的第五方面是提供了 miR-15a-化在制备检测雷公藤甲素导致的屯、肌损伤 的生物标志物中的应用，所述miR-15a-化的碱基序列如SEQ ID No. 1所示。
[0017] 本发明的第六方面是提供了 miR-615在制备检测雷公藤甲素导致的屯、肌损伤的生 物标志物中的应用，所述miR-615的碱基序列如SEQ ID No.2所示。
[0018] 本发明的第屯方面是提供了 miR-127-5p在制备检测雷公藤甲素导致的屯、肌损伤 的生物标志物中的应用，所述11111?-127-59的碱基序列如56〇10齡.3所示。
[0019]本发明的第八方面是提供了 miR-483-3p在制备检测雷公藤甲素导致的屯、肌损伤 的生物标志物中的应用，所述miR-483-化的碱基序列如SEQ ID No.4所示。
[0020] 在一优选例中，所述雷公藤甲素的用量不会引起血浆屯、肌肌巧蛋白-I的浓度变 化。
[0021] 本发明各个方面的细节将在随后的章节中得W详尽描述。通过下文W及权利要求 的描述，本发明的特点、目的和优势将更为明显。
【附图说明】
[0022] 图1为用雷公藤甲素0.1毫克/公斤体重灌胃14天，大鼠屯、肌组织的形态变化化E染 色）
[0023] 图2为用屯、肌肌巧蛋白-I试剂盒测定不同剂量雷公藤甲素给大鼠灌胃14天，屯、肌 肌巧蛋白-I的浓度
[0024] 图3为用雷公藤甲素0.1毫克/公斤体重灌胃，实时定量RT-PCR测定血浆中11111?魁-615、miRNA-l 27-5p、miR-l 5a-化和 miR-483-化的表达动态变化
【具体实施方式】
[0025] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，运些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。下列实施例中所使用的试剂和原料均可通过商业途径购买 获得。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建 议的条件。
[0026] 除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意 义相同。此外，任何与所记载内容相