一种醋酸丙氨瑞林的药物组合物及其医药用图
【专利摘要】本发明公开了一种醋酸丙氨瑞林的药物组合物及其医药用途，本发明提供的醋酸丙氨瑞林的药物组合物中含有醋酸丙氨瑞林和一种从射干的干燥根茎中分离得到的结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，醋酸丙氨瑞林、化合物(Ⅰ)单独作用时，可以降低肝损伤动物血清转氨酶、胆红素及尿素氮含量，减轻黄疽及肾功能障碍，并可降低血浆内毒素含量；醋酸丙氨瑞林和化合物(Ⅰ)联合作用时，药理作用更明显，可以开发成治疗急性肝功能衰竭的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
一种醋酸丙氨瑞林的药物组合物及其医药用途
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及醋酸丙氨瑞林的新用途，具体涉及醋酸丙氨瑞林 的药物组合物及其在急性肝功能衰竭中的应用。
【背景技术】
[0002] 醋酸丙氨瑞林为人工合成的促性腺激素释放激素(GnRH)的九肽类似物，用药初期 可刺激垂体释放促黄体生成素(LH)和促卵泡素(FSH)，引起卵巢源性留体激素短暂升高;重 复用药可抑制垂体释放LH和FSH，使血中的雌二醇水平下降，达到药物去卵巢的作用，这种 抑制作用可用于治疗子宫内膜异位症等激素依赖性疾病。
[0003] 肝炎防治药物目前品种繁多，但尚乏对急性肝功能衰竭的有效防治药物。
[0004] 迄今为止，尚未见醋酸丙氨瑞林及其药物组合物与急性肝功能衰竭的相关性报 道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种醋酸丙氨瑞林的药物组合物，该药物组合物中含有醋 酸丙氨瑞林和一种结构新颖的天然产物，醋酸丙氨瑞林和该天然产物可以协同治疗急性肝 功能衰竭。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 一种具有下述结构式的化合物（I)，
[0008]
[0009] - tTH百EKIAJ安0而外tf」约似J5且甘柳，'既估断阪卜」安0而林、如权利要求1所述的化合物 (I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。
[0010] 进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0011] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0012] 上述化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将射干的干燥根茎粉碎，用75 ~85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的 正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中正丁 醇取物用大孔树脂除杂，先用25%乙醇洗脱8个柱体积，再用70 %乙醇洗脱12个柱体积，收 集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓缩物用正 相硅胶分离，依次用体积比为85:1、45:1、25:1和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组 分；⑷步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、15:1和1:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离， 用体积百分浓度为72 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集10~16个柱体积洗脱液，洗脱液减压 浓缩得到化合物(I)。
[0013] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)用80%乙醇热回流提取，合并提取 液。
[0014] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
[0015]进一步地，化合物（I)的制备方法中，步骤(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯进行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0016] 上述化合物(I)在制备治疗急性肝功能衰竭的药物中的应用。
[0017] 上述醋酸丙氨瑞林的药物组合物在制备治疗急性肝功能衰竭的药物中的应用。
[0018] 本发明的优点：
[0019] 本发明提供的醋酸丙氨瑞林的药物组合物中含有醋酸丙氨瑞林和一种从射干的 干燥根茎中分离得到的结构新颖的天然产物，醋酸丙氨瑞林和该天然产物单独作用时，对 急性肝功能衰竭具有治疗作用；二者联合作用时，对急性肝功能衰竭的治疗效果进一步提 高，可以开发成治疗急性肝功能衰竭的药物。本发明与现有技术相比具有突出的实质性特 点和显著的进步。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021 ]实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0022]分离方法：（a)将射干的干燥根茎(2kg)粉碎，用80%乙醇热回流提取（15L X 3次）， 合并提取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水饱和的 正丁醇(3LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤 (a)中乙酸乙酯萃取物用D101型大孔树脂除杂，先用25%乙醇洗脱8个柱体积，再用70%乙 醇洗脱12个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70% 乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为85:1 (10个柱体积）、45:1 (8个柱体积）、 25:1(10个柱体积）和15:1(8个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤 (c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1(10个柱体积）、15:1(8个柱体积） 和1:1(6个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷 基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为72%的甲醇水溶液等度洗脱，收集10~16 个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物（I) (320mg，HPLC归一化纯度大于98% )。 [0023] 结构确证:黄色粉末;HR-ESI-MS显示[M+Na]+为m/z 264.1014,结合核磁特征可得 分子式为Ci5H15N〇2，不饱和度为9。核磁共振氢谱数据δΗ( ΡΡπι，DMS〇-d6，600MHz): H-3 (3.31， m)，H-4(5.65，d，J = 0.96)，H-7(1.26，s)，H-8(2.14，d，J = 0.96)，H-9(8.15，d，J=12.8)，H- 10(12.02，d，J=12.8)，H-2'，6'（7.31，d，J = 8.7)，H-3'，5'（7.38，dd，J = 8.7,7.4)，H-4， (7.08，^ = 7.4);核磁共振碳谱数据6。(卯!!1，0130-(16，15010^):192.7((：，1-〇,76.3((：，2- C)，60.6(CH，3-C)，122.8(CH，4-C)，133.7(C，5-C)，121.3(C，6-C)，16.8(CH 3,7-C)，21.7 (CH3,8-C)，145.1(CH，9-C)，138.6(C，Γ-C)，117.2(CH，2'，6'-C)，129.1(CH，3'，5'-C)， 124.3(CH，4'-C)。11?光谱表明该化合物含有羰基（1687cm-3和胺基（3254cm-4功能团。1H- NMR 谱显示两个甲基0!11.26,8，!13-7)和0!12.14，(1，了 = 〇.96泡，!13-8)，一个含氧次甲基（3 !13.31，111，!1-3)，两个烯属次甲基[(3!15.65，(1，了 = 0.96抱，!1-4)和（3!18.15，(1，了=12.8!^，!1- 9)]，以及五个芳族质子〇!17.31，(1，了 = 8.7泡，!1-2'，6'；7.38，(1(1，了 = 8.7,7.4泡，!1-3'，5'；7.08，t，J = 7.4Hz，H-4'）。芳香质子的低场化学位移及其耦合常数表明该化合物含有仲烯 胺〇!112.02，(1，1=12.8他，!1-10)。13(：-匪1?谱显示15个碳信号，包括两个甲基，八个次甲基 (一个含氧次甲基，七个烯属次甲基），五个季碳(一个含氧季碳，一个酮羰基，三个烯烃季 碳）。上述核磁数据，再结合不饱和数，表明该化合物为两环结构。1H-1!! COSY谱显示了三个 主要的结构片段:单取代的苯基环，稀胺系统（=CH-NH_)和下部结构[C(CH3)=CHLHMBC谱 中，含氧次甲基质子信号（3113.31，1]1，1!〇与两个含氧碳信号（5〇76.3和60.6)化学位移表明 该化合物含有一个环氧结构，此外甲基质子信号(SH1.26，3H，s)与含氧季碳C-2和含氧次甲 基碳C-3的交叉峰表明C-2位还连有一个甲基。HMBC谱中，烯属质子H-4(δΗ5.65)与C-2，CH3- 8和C-6的相关性验证了这部分结构。HMBC谱中，NH-10与芳族碳C-Γ (δα38.6)，C-2 '，6 '（δ C117.2)和季碳C-6(SC121.3)交叉峰表明单取代苯环和另一环状部分由烯胺功能团连接起 来。HMBC谱中H-9与C-l，C-5，C-6和C-Γ的相关性验证了上述推论。N0ESY谱中，H-9与甲基 Me-8的相关性表明烯胺为Z构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和N0ESY谱，以及文献关于相关类 型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与 实验值基本一致。
[0024] 该化合物化学式及碳原子编号如下：
[0025]
[0026] 实施例2:药理作用 [0027] 1、材料与方法
[0028] 1.1动物
[0029] Wistar大鼠，体重170~200g，雌雄兼用。
[0030] 1.2试剂与样品
[0031 ]醋酸丙氨瑞林购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施例 1。半乳糖胺(GalN)购自重庆医科大学，堂试剂由厦门市赏试剂厂生产。
[0032] 1.3仪器
[0033]自动氨基酸分析仪（贝克曼公司）
[0034] 1.4大鼠分组及模型制备
[0035] 大鼠随机分为5组，每组12只，分别为正常对照组、模型对照组、醋酸丙氨瑞林组 (64mg · kg-"、化合物⑴组(64mg · kg-"、醋酸丙氨瑞林与化合物（I)组合物组【32mg · kg-1醋酸丙氨瑞林+32mg · kg<化合物（I)】。实验开始给药组动物皮下注射药物。ql2hX3。次日 下午，除正常对照组外，实验动物腹腔注射GalN 1800mg/kg，40小时后乙醚麻醉下，腹主动 脉取血，作血浆游离氨基酸分析。
[0036] 1.5测定部分血生化指标
[0037]乙醚麻醉后，腹主动脉取血，测定ALT、血浆胆红素(T)B及尿素氮(Bun)含量。
[0038] 1.6内毒素含量测定
[0039]乙醚麻醉后，腹主动脉取血，用改良过氯酸法测定内毒素含量。
[0040] 1.7统计学方法
[0041]实验数据用均数土标准差(X土s)表示，应用SPSS18.0版统计软件进行单因素方差 分析和t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
[0042] 2、实验结果
[0043] 2.1对急性肝功能衰竭动物血生化影响
[0044]与正常对照组比较，模型对照组动物血浆ALT、TB、Bun含量明显升高，动物发生了 急性肝功能不全，出现高胆红素血症及肾功能障碍。药物组动物，ALT、TB及Bun低于模型对 照组;与模型对照组比较，醋酸丙氨瑞林与化合物（I)组合物组动物血浆ALT、TB、Bun含量明 显降低(P<0.01);与模型对照组比较，醋酸丙氨瑞林组、化合物（I)组动物血浆ALT、TB、Bun 含量降低(P<〇.05)，表明药物可减轻黄疽及防止肝肾综合征发生。见表1。
[0045] 2.2对急性肝功能衰竭动物血浆内毒素含量的影响
[0046]与正常对照组比较，模型对照组动物血浆内毒素含量明显升高，意味着出现了严 重的内毒素血症，而经药物治疗的动物，血浆内毒素含量下降。与模型对照组比较，醋酸丙 氨瑞林与化合物（I)组合物组血浆内毒素含量明显下降(p<0.01);与模型对照组比较，醋 酸丙氨瑞林组、化合物(I)组血浆内毒素含量下降(P<〇.05)。结果见表2。
[0047] 2.3对血浆游离氨基酸含量的影响
[0048]与正常对照组比较，模型对照组动物血浆中芳香族氨基酸明显升高；与模型对照 组比较，醋酸丙氨瑞林与化合物（I)组合物组血浆中芳香族氨基酸明显下降（P<〇. 01);与 模型对照组比较，醋酸丙氨瑞林组、化合物（I)组血浆中芳香族氨基酸下降(P<〇.05)。表明 药物可改善肝功能衰竭时血浆氨基酸失衡，防止肝性脑病的发生。结果见表2。
[0049] 表1对血生化改变的影响
[0050]
[0051] 表2对血浆内毒素含量及对血浆中芳香族氨基酸含量的影响
[0052]
'[0053] 上述结果表明，醋酸丙氨瑞林·!化合物a)单独￥用时，可以降低k损伤动物血清1转氨酶、胆红素及尿素氮含量，减轻黄疽及肾功能障碍，并可降低血浆内毒素含量;醋酸丙 氨瑞林和化合物（I)联合作用时，药理作用更明显，可以开发成治疗急性肝功能衰竭的药 物。
[0054]上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)，2. -种醋酸丙氨瑞林的药物组合物，其特征在于:包括醋酸丙氨瑞林、如权利要求1所 述的化合物(I)和药学上可W接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的醋酸丙氨瑞林的药物组合物，其特征在于:药学上可W接受的 载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附 载体或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的醋酸丙氨瑞林的药物组合物，其特征在于：所述剂型包括片 剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注 射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含W下操作步骤：（a)将射 干的干燥根茎粉碎，用75~85 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油 酸、乙酸乙醋和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃 取物；（b)步骤(a)中正下醇取物用大孔树脂除杂，先用25 %乙醇洗脱8个柱体积，再用70 % 乙醇洗脱12个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中 70 %乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为85 :1、45:1、25 :1和15:1的二氯甲 烧-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比 为20:1、15:1和1:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烧 基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为72%的甲醇水溶液等度洗脱，收集10~16 个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)用80%乙醇热回 流提取，合并提取液。7. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为D101型 大孔吸附树脂。8. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:步骤(a)中用二氯甲烧代 替乙酸乙醋进行萃取，得到二氯甲烧萃取物。9. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗急性肝功能衰竭的药物中的应用。10. 权利要求2~4任一所述的醋酸丙氨瑞林的药物组合物在制备治疗急性肝功能衰竭 的药物中的应用。
【文档编号】A61K38/08GK105837533SQ201610262113
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年4月23日
【发明人】高满珍
【申请人】高满珍