地塞米松磷酸钠的药物组合物及其在生物医药中的应用

地塞米松磷酸钠的药物组合物及其在生物医药中的应用
【专利摘要】本发明公开了地塞米松磷酸钠的药物组合物及其在生物医药中的应用，本发明提供的地塞米松磷酸钠的药物组合物中含有地塞米松磷酸钠和一种结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，地塞米松磷酸钠、化合物(Ⅰ)单独作用时，对男性不育症具有治疗作用；地塞米松磷酸钠和化合物(Ⅰ)联合作用时，治疗效果进一步提高，可开发成治疗男性不育症的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。
【专利说明】
地塞米松磷酸钠的药物组合物及其在生物医药中的应用
技术领域
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及地塞米松磷酸钠的新用途，具体涉及地塞米松磷 酸钠的药物组合物及其在生物医药中的应用。
【背景技术】
[0002] 地塞米松磷酸钠为肾上腺皮质激素类药，具有抗炎、抗过敏、抗风湿、免疫抑制作 用。常用于过敏及自身免疫性疾病。
[0003] 迄今为止，尚未见地塞米松磷酸钠及其药物组合物与男性不育症的相关性报道。

【发明内容】

[0004] 本发明的目的在于提供一种地塞米松磷酸钠的药物组合物，该药物组合物中含有 地塞米松磷酸钠和一种结构新颖的天然产物，地塞米松磷酸钠和该天然产物可协同治疗男 性不育症。
[0005] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0006] 一种具有下述结构式的化合物（I)，
[0007]
[0008] -种地塞米松磷酸钠的药物组合物，包括地塞米松磷酸钠、如权利要求1所述的化 合物(I)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。
[0009] 进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、 崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
[0010] 进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、 膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
[0011] 上述化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将湖北贝母粉碎，用60~70% 乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇 萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中正丁醇萃取 物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱12个柱体积，再用70%乙醇洗脱15个柱体积，收集 70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70%乙醇洗脱浓缩物用正相 硅胶分离，依次用体积比为50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分； (d)步骤(C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用 体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集7~13个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩 得到化合物(I)。
[0012] 进一步地，化合物（I)的制备方法中，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0013] 上述化合物(I)在制备治疗男性不育症的药物中的应用。
[0014] 上述地塞米松磷酸钠的药物组合物在制备治疗男性不育症的药物中的应用。
[0015] 本发明的优点：
[0016] 本发明提供的地塞米松磷酸钠的药物组合物中含有地塞米松磷酸钠和一种结构 新颖的天然产物，地塞米松磷酸钠和该天然产物单独作用时，具有治疗男性不育症作用;二 者联合作用时，治疗男性不育症效果进一步提高，可以开发成治疗男性不育症的药物。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。
[0018] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0019]分离方法：（a)将湖北贝母(2kg)粉碎，用65%乙醇热回流提取(20LX3次），合并提 取液，浓缩至无醇味(4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯(4L X 3次)和水饱和的正丁醇 (4LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 正丁醇萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱12个柱体积，再用70%乙醇洗脱 15个柱体积，收集70 %洗脱液，减压浓缩得70 %乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤(b)中70 %乙醇洗 脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1 (8个柱体积）、25:1 (8个柱体积）、15:1 (8个 柱体积)和5:1(10个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤(c)中组分4 用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1(8个柱体积）、5:1(10个柱体积)和2:1(5个柱 体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的 反相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱，收集7~13个柱体积洗脱 液，洗脱液减压浓缩得到化合物（I) (HPLC归一化纯度大于98% )。
[0020] 结构确证：白色无定型粉末，册431-1^显示[1+!1]+为111/2 327.1518，结合核磁特 征可得分子式为〇2〇1122〇4，不饱和度为9。核磁共振氢谱数据511(。。111，〇〇(]13,5〇〇]\〇2):!1-10 (4.79，dd，J = 5.8，11.8Hz)，H-2a(1.81，m)，H-20(1.57，m)，H-3a(2.22，dd，J = 7.O,9.2Hz)， H-30(1.65，m)，H-6(5.93，s)，H-9a(2.34，d，J = 4.2Hz)，H-ll(6.53，dd，J = 4.6，12.8Hz)，H-12(6.37，dd，J = 7.5，12.8Hz)，H-130(2.12，m)，H-14a(2.58，d，J=11.8Hz)，H-140(3.13， dd，J=4.4，11.8Hz)，H-17a(6.18，br，s)，H-170(5.54，br，s)，H-18(O.98，s)，H-19(1.12， s)，H-2〇a(4.25，dd，J = 9.6，1.7Hz)，H-2〇K3.66，dd，J = 9.6，1.7Hz);核磁共振碳谱数据 δ。 (ppm，CDCl3，125MHz):78.6(CH，卜C)，23.4(CH2,2-C)，37.9(CH 2,3-C)，31.4(C，4-C)，117.1 (C，5-C)，143.2(CH，6-C)，173.4(C，7-C)，56.5(C，8-C)，45.7(CH，9-C)，49.1(C，l〇-C)， 129.7(CH，11-C)，126.9(CH，12-C)，35.2(CH，13-C)，33.1(CH 2，14-C)，200.9(C，15-C)， 148.7(C，16-C)，119.5(CH2，17-C)，31.4(CH 3，18-C)，23.3(CH3，19-C)，73.1(CH2,20-C)。在 氢谱中可以观察到两个单峰甲基信号[知1.12(3!1，8肩6-19)，0.98(3!1，8，16-18)]，一个连 氧亚甲基质子信号[δΗ 4.25(1!1，(1(1，1 = 9.6丄7!^，!1-20€0与3.66(1!1，(1(1，1 = 9.6丄7!^， 化200)]，一个端烯烃质子信号[6(16.18(1!1，1^，8，!1-17€0与5.54(1!1，1^，8，!1-170)]，三个 烯属次甲基质子信号[δ Η 5.93(1!1，8，!1-6)，6.53(1!1，(1(1，了 = 4.6，12.8抱，!1-11)与6.37(1!1， dd，J = 7.5，12.8Hz，H-12)]，以及一个连氧次甲基质子信号[SH4.79(lH，dd，J = 5.8， 11.8Ηζ，Η-1β)];在碳谱中显示该化合物有20个碳信号，其中有一组末端双键碳信号，两组 双键碳信号，一个酯羰基碳信号，一个酮羰基碳信号以及两个连氧碳信号。结合以上信息可 以得出该化合物可能是一个二萜类化合物，通过文献查阅可以发现该化合物和已知化合物 ent-lla-Acetoxy-6，7-sec〇-kaur-16-en-15-〇ne_la，7-olide 具有及其相似的结构。将新 化合物的核磁数据和6111：-11&-4〇61：(?7-6,7-86(3〇-1^111-16-611-15-〇116-1&，7-〇1丨(16进行比 较，发现该化合物仍然是ent-kaurano id型的化合物。通过对新化合物的氢谱以及碳谱进行 解析发现，该化合物与已知化合物的主要区别在C-6位和C-11位附近。在HMBC谱图中，在已 知化合物中的C-6位连氧碳上的质子信号在新化合物中是一个烯质子信号，同时多出来一 组环内双键信号，结合9个不饱和度以及高分辨质谱，故而推测该新化合物和已知化合物的 区别在新化合物中的C-5/C-6以及C-11 /C-12之间存在两个双键。进一步的对新化合物的 HMBC 谱的解析中，H-18/C-5，H-19/C-5，H-20/C-6，H-9/C-l 1，H-9/C-12，H-13/C-11 等之间的 相关性证实了新化合物中存在的C-5/C-6以及C-ll/C-12之间的双键。ROESY谱中，H-l与H-3 β和Η-14β之间的相关信号可以证实该化合物中的Η-1为β构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和 R0ESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一 步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。该化合物化学式及碳原子编号如下：
[0021]
〇
[0022] 实施例2:药理作用
[0023]本实施例使用雷公藤多苷建立生殖系统损害大鼠模型，观察药物对不育大鼠模型 内分泌及生殖器官作用的影响。
[0024] 1、材料与方法
[0025] 1.1动物
[0026] Wistar雄性成年大鼠（山东大学实验动物中心提供），2.5个月，体质量190-220g， 自由摄食全价饲料、饮水，驯养1周后使用。
[0027] 1.2试剂与样品
[0028]地塞米松磷酸钠购自中国药品生物制品检定所。化合物（I)自制，制备方法见实施 例1。黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)激素放免测定试剂盒（中美天津九鼎医学 生物工程有限公司）；皮质醇放免测定试剂盒(北京北方放免试剂研究所）；雷公藤多苷(黄 石飞云制药有限公司）；细胞培养液(DMEM，上海杰美基因医药科技有限公司）。
[0029] 1.3仪器
[0030]低温冰箱(MDF-U332SANY0,日本）；图像分析系统（TD3000,北京天地科技有限公 司）；组织切片机(RM-2016,徕卡，德国）；机械分析天平(TG328A，上海天平仪器厂）；放射免 疫γ_θ计数器(GC1200,中国科技大学中加光电仪器公司）；PEMS3.1统计软件包。
[0031] 1.4大鼠分组及模型制备
[0032] 68只Wistar大鼠留取20只分为2组健康组，分别供模型评价及药物研究健康对照 使用，48只随机平均分为4组供造模使用。6组大鼠体质量分布无显著性差异(P>0.05)。采用 雷公藤多苷（以下简称GTW)灌胃造模，剂量25mg · kg"1 · cf1，共30cLGTW临用前混悬于0.5% 羧甲基纤维素(CMC)中。大鼠每周统计体质量调整给药量。末次给药GTW24h后，4组造模大鼠 中每组随机抽取2只，与健康组对比评价造模效果，组织学观察见明显不同为造模成功纳入 实验。4组模型大鼠分为模型对照组、地塞米松磷酸钠组(80mg · kg<)、化合物（I)组(80mg · kg^1)、地塞米松磷酸钠与化合物（I)组合物组【40mg · kg^1地塞米松磷酸钠+40mg · kg"1化合 物（I)】。分别将药物混悬于2.5ml浓度0.5%CMC中，1次/d，灌胃饲服，连续用药30d。每周统 计体质量1次，调整给药剂量。模型对照组及健康组，1次/d，给予2.5ml浓度0.5 %CMC混悬液 灌胃，连续3〇d。
[0033] 1.5实验材料的制备
[0034] 末次给药24h后大鼠称质量，颈椎脱白法处死，迅速分离睾丸、附睾、精囊腺、前列 腺，摘除脂肪组织，分析天平称质量。剪开股动脉取血，移入肝素抗凝试管30min内离心 (3000r/min，10min)，分离血清，检查血清激素。
[0035] 1.6大鼠血清激素测定
[0036] 取大鼠血清，按试剂盒说明书操作，放免法测定大鼠血清黄体生成素(LH)、卵泡刺 激素(FSH)、睾酮(T)、皮质醇（cortisol，Co) 〇
[0037] 1.7统计学方法
[0038] 计量资料均数比较采用t检验，计数资料率比较采用X2检验，等级计数资料采用 Ridit分析。采用PEMS 3.1医学统计软件包统计处理。
[0039] 2、实验结果
[0040] 2.1对大鼠血清激素的影响
[0041 ]与健康对照组比，模型对照组大鼠血清FSH、LH、T及Co含量都显著降低(P〈0.01)说 明造模成功;与模型对照组比，地塞米松磷酸钠与化合物（I)组合物组大鼠血清FSH、LH、T及 Co含量都显著升高(P〈〇. 01);与模型对照组比，地塞米松磷酸钠组和化合物（I)组大鼠血清 FSH、LH、T及Co含量都升高(P〈0.05)。结果见表1。
[0042] 表1对大鼠血清FSH、LH、T及Co含量的影响(η = 10，f±s:)
[0043]
[0044] 睾丸曲细精管是精子发生基础，约占睾丸总体积98%，睾丸质量反映睾丸曲细精 管质量。附睾分泌的唾液酸、肉毒碱、甘油磷酸胆碱与精子成熟、获能密切相关，测量大鼠附 睾腺壁管厚度可提示附睾上皮修复及损伤情况，了解附睾分泌功能。前列腺特异性抗原 (PSA)、ACP由前列腺腺管上皮细胞分泌进入精液，主要生理作用是裂解精液凝固物质中的 SemenogelinI、Π ，精衆PSA水平与精子活率呈显著正相关。精囊腺分泌果糖(fructose)是 精子能量主要来源。血清生殖激素反映丘脑-垂体-性腺轴功能。FSH主要作用睾丸曲细精 管;LH作用睾丸间质细胞，对精子生成有影响;T促进生殖器官发育与生精细胞分化，刺激精 子生成与成熟。模型对照组LH、FSH、T均较健康组、药物组降低。血中T浓度降低，说明睾丸间 质细胞功能受到影响。一般认为血中T浓度降低可通过下丘脑-垂体-性腺轴反馈调节作用 引起LH和FSH增高，但本研究所测模型对照组LH和FSH均明显降低，给药组LH、FSH、T均明显 升高，与健康组比较无明显差异。
[0045] 上述结果表明，地塞米松磷酸钠、化合物（I)单独作用时，对男性不育症具有治疗 作用;地塞米松磷酸钠和化合物（I)联合作用时，治疗效果进一步提高，可开发成治疗男性 不育症的药物。
[0046] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 一种具有下述结构式的化合物（I)， -02. -种地塞米松憐酸钢的药物组合物，其特征在于:包括地塞米松憐酸钢、如权利要求 1所述的化合物(I)和药学上可W接受的载体，制备成需要的剂型。3. 根据权利要求2所述的地塞米松憐酸钢的药物组合物，其特征在于:药学上可W接受 的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸 附载体或润滑剂。4. 根据权利要求2所述的地塞米松憐酸钢的药物组合物，其特征在于:所述剂型包括片 剂、胶囊剂、日服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注 射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。5. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于，包含W下操作步骤：（a)将湖 北贝母粉碎，用60~70%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸 乙醋和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物； (b)步骤(a)中正下醇萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱12个柱体积，再用70%乙 醇洗脱15个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤(b)中70% 乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烧-甲醇 梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤k)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1、 5:1和2:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键 合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集7~13个柱体积洗 脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(I)。6. 根据权利要求5所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于:所述大孔树脂为AB-8型 大孔吸附树脂。7. 权利要求1所述的化合物（I)在制备治疗男性不育症的药物中的应用。8. 权利要求2~4任一所述的地塞米松憐酸钢的药物组合物在制备治疗男性不育症的 药物中的应用。
【文档编号】A61K31/366GK106083880SQ201610382829
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年5月31日 公开号201610382829.1, CN 106083880 A, CN 106083880A, CN 201610382829, CN-A-106083880, CN106083880 A, CN106083880A, CN201610382829, CN201610382829.1
【发明人】王昌荣
【申请人】王昌荣