一种新型细胞内高尔基体荧光分子探针及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及荧光分子探针技术领域，尤其涉及一种新型细胞内高尔基体荧光分子 探针及其应用。【背景技术】
[0002] 细胞是生命体系主要的组织单元，其又由各种细胞器组成，如：细胞膜、细胞壁、细 胞质、叶绿体、高尔基体、核仁、染色质、核膜、核液、核孔、线粒体、内质网、核糖体、细胞液、 液泡膜等。细胞器在细胞、酶和很多人体组织活动中起到重要指示作用，如细胞增殖、细胞 凋亡、抗药性、离子传输、肌肉收缩等等。对细胞器的生长形态进行监测对于生命细胞行为 研究和神经系统研究具有重要意义。一些细胞器，如核仁、核糖体、内质网呈嗜碱性，而高尔 基体为嗜酸性。
[0003] 高尔基体（Golgiapparatus，Golgicomplex)亦称高尔基复合体、高尔基器。是 真核细胞中内膜系统的组成之一。它不仅存在于动植物细胞中，而且也存在于原生动物和 真菌细胞内。
[0004] 荧光共聚焦成像法是一种基于光学信号建立的检测方法，具有高灵敏性、高选择 性、快速可目视性等优点。但现在市场上的高尔基体焚光分子探针如Golgi-TrackerRed， 价格昂贵，一毫克即数千元，且在细胞器成像中选择性不佳。
【发明内容】
[0005] 本发明就是为了解决上述现有技术存在的问题而提供一种新型荧光分子探针。
[0006] 本发明的目的通过以下技术方案来实现：
[0007] -种新型细胞内高尔基体荧光分子探针，具有如下结构式：
[0008]
[0009] 该荧光分子探针的制备反应如下式所示，按经典的醛酮缩合反应条件进行。
[0010]
[0011] 较佳地，所述荧光分子探针的荧光响应区域为pH为酸性-中性条件，pH值范围为 2-8 〇
[0012] -种上述的细胞内高尔基体荧光分子探针的应用。
[0013] 较佳地，所述荧光分子探针的应用溶液的溶剂选自水、二甲基亚砜中的一种或两 种。
[0014] 较佳地，所述荧光分子探针在所述应用溶液中的使用浓度为1yM-300mM。
[0015] 所述荧光分子探针可以跨膜渗透进细胞内，所述荧光分子探针结合到高尔基体时 可以发射荧光，进行荧光检测或细胞器成像。
[0016] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
[0017] 本发明的新型高尔基体荧光分子探针合成原料价廉、合成步骤简单，成品价格低， 对高尔基体结合成像选择性好。
【附图说明】
[0018] 图1为本发明实施例1采集到的典型高尔基体共聚焦荧光成像图；其中（a)为荧 光成像图，（b)为明场图。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合附图和具体实施例详细描述本发明。
[0020] 实施例1
[0021] -种新型细胞内高尔基体荧光分子探针，具有以下分子结构式：
[0022]
[0023] 其制备方法的一个实施例如下：
[0024] 取4-羟基苯甲醛1. 12g(0.Olmol)和环己酮0.49g(0. 005mol)加入到含有5%硫 酸的四氢呋喃溶液的反应器中，室温反应20h。反应结束后，硅胶柱层析（乙酸乙酯/石油 醚梯度淋洗），得到棕黄色油状物目标探针：2, 6-双（4-羟基苯亚甲基）环己酮。棕黄色油 状物目标探针的结构确认数据如下：ES頂S(ESI+) :307. 15(M+H);Ex= 385nm，Em= 520nm。
[0025] 该荧光分子探针的应用：将该荧光分子探针以20iiM的浓度分散于二甲基亚砜 和水的混合液（体积比1 :9)中，与人乳癌细胞共孵育1小时，60倍物镜，以385nm光激 发，对520nm处的聚焦荧光图像进行成像，得到如图1所示的高尔基体荧光成像图。从图 中显示结果可见，仅嗜酸性高尔基体细胞器具荧光，其它非嗜酸性细胞器则无荧光。并且， 发明人经多次实验验证，确定本发明的新型细胞内高尔基体荧光分子探针的使用浓度为 1uM-300mM〇
[0026] 以上本发明的新型细胞内高尔基体荧光分子探针的制备方法和应用实例仅为举 例，本领域技术人员在上述公开的范围内还可做出多种变形实施方式，这些变形实施方式 均在本发明的保护范围内。
[0027] 在本发明及上述实施例的教导下，本领域技术人员很容易预见到，本发明所列举 或例举的各原料或其等同替换物、各加工方法或其等同替换物都能实现本发明，以及各原 料和加工方法的参数上下限取值、区间值都能实现本发明，在此不一一列举实施例。
[0028] 以上公开的仅为本申请的几个具体实施例，但本申请并非局限于此，任何本领域 的技术人员能思之的变化，都应落在本申请的保护范围内。
【主权项】
1. 一种细胞内高尔基体荧光分子探针，其特征在于，具有如下结构式：2. 如权利要求1所还的细尚小趣棒灾亢力、卞秌订，兵苻佌仕丁，所述细胞内高尔 基体荧光分子探针的荧光响应区域为pH为酸性-中性条件，pH值范围为2-8。3. 如权利要求1所述的细胞内高尔基体荧光分子探针，其特征在于，所述细胞内高尔 基体荧光分子探针能够跨膜渗透进细胞内。4. 如权利要求1所述的细胞内高尔基体荧光分子探针，其特征在于，所述细胞内高尔 基体荧光分子探针结合到高尔基体时能够发射荧光，能够进行荧光检测或细胞器成像。5. -种权利要求1-4中任一所述的细胞内高尔基体焚光分子探针的应用。6. 如权利要求5所述的细胞内高尔基体荧光分子探针的应用，其特征在于，所述细胞 内高尔基体荧光分子探针的应用溶液的溶剂选自水、二甲基亚砜中的一种或两种。7. 如权利要求6所述的细胞内高尔基体荧光分子探针，其特征在于，在所述应用溶液 中，所述细胞内高尔基体荧光分子探针的使用浓度为1yM-300mM。
【专利摘要】本发明公开了一种新型细胞内高尔基体荧光分子探针，具有如下结构式：本发明的新型细胞内高尔基体荧光分子探针，其荧光响应区域为pH为酸性-中性条件，pH范围为2-8，可以跨膜渗透进细胞内,结合到高尔基体时可以发射荧光，能够进行荧光检测或细胞器成像。本发明的新型细胞内高尔基体荧光分子探针的合成原料价廉、合成步骤简单，对高尔基体结合成像选择性好。
【IPC分类】C07C49/743, C09K11/06, G01N21/64, C07C45/74
【公开号】CN105112048
【申请号】CN201510514205
【发明人】孟庆华, 汤淏渂
【申请人】上海交通大学
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年8月20日