一种显色剂的稳定剂及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及化学检测领域，尤其设及一种显色剂的稳定剂及其应用。
【背景技术】
[0002] 目前，对目标成分的测定（定性、定量）方法，大多应用了酶参与的氧化还原反应。 该方法通常可W按照下述模式进行：例如，由待测的目标成分生成氧化物质，利用氧化酶使 该氧化物质与通过氧化生成显色化合物的显色剂反应，测定所产生的显色的吸光度。该方 法中，吸光度的大小与所生成的显色化合物的量相当，所生成的前述显色化合物的量与所 生成的氧化物质的量相当，前述氧化物质的量与目标成分的量相当。也就是说，通过检测所 产生的显色（所生成的显色化合物），能够借助运样的氧化还原反应来间接地测定目标成 分。
[0003] 如上所述，显色剂在临床生化检测应用十分广泛。但是具有氧化还原活性的显色 剂，往往非常不稳定。常常出现由于添加酶而导致的人为的氧化还原反应开始前、即在保存 时产生自然显色运样的问题。其原因被推测是由于：例如在前述湿系的情况下，前述溶剂中 前述显色剂变得不稳定，在干系的情况下，由于吸收空气中的水分，因而前述显色剂变得不 稳定等。另外，不论湿系还是干系，在紫外线等光照射条件下保存时，前述显色剂也会不稳 定化而产生自然显色，运也被视为问题。
[0004] 已经有大量的方法被提出及采用W解决上述问题。 阳〇化]比如，在液相的试剂盒中往往采用将显色剂（及其他试剂）冻干，并且密封保存。 但是运样的方法要求复杂的冻干工艺步骤，并且用户在使用时，也需要加入溶液复溶的操 作步骤。
[0006] 干化学试条具有较好的稳定性，但是其保存溫度往往为室溫，而不是试剂盒常用 的冷藏溫度（2-8°C)。因此，干化学试条中的显色剂稳定性问题同样是本领域亟待解决的 问题。国内外对此也进行了大量的研究。
[0007] 例如一种方法为：采用具有碳原子数8~16的烷基的表面活性剂及类黄酬系色素 物质。但该方法配方复杂，并且试剂在市面上难W买到，保护剂本身对测试结果又有一定的 干扰。
[0008] 还有通过在液体介质中使亚甲蓝系显色剂与具有碳原子数为12W上的控基的季 锭或其盐共存，使其稳定化。但该方法对亚甲蓝系显色剂例如：10-(簇甲基氨基幾基）-3， 7-双（二甲基氨基）吩嚷嗦。具有较好的稳定性但是对常见的Trinder'S显色剂及苯胺 类显色剂保护性较差或者没有稳定作用。
[0009] 也有研究采用Ar-NH-NH-CO-NHz试剂稳定显色剂，或者采用一种显色稳定剂具有 比显色剂较强的还原能力，另一种显色稳定剂具有介于显色剂和第一种显色稳定剂之间的 还原能力。但上述方法添加了比较强的还原性物质，对显色剂的氧化还原反应具有一定的 干扰效应，为了将干扰控制在可控范围内，对保护剂的配比及浓度的要求较高。尤其在检测 较低浓度的分析物（肌酢、转氨酶）时，干扰显著。
[0010] 另外还有将氧化发色剂（显色剂）与果糖基氨基酸氧化酶（FAOD)及过氧化物酶 (POD)的至少之一共存，使其稳定化。但该方法只能稳定N-(簇甲胺基幾基）一4,4' -二（二甲胺基）二苯胺钢对其他显色剂没有稳定性作用或者作用较差。
[0011] 上述方法都在不同程度上解决了显色剂不稳定的问题，但仍存在着不同的缺陷， 因此，进一步的研究用于显色剂的稳定剂是十分必要的。
【发明内容】
[0012] 有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种显色剂的稳定剂及其应用。本 发明提供的稳定剂具有良好的稳定效果，即便在较高的溫度下仍能对显色剂起到良好的稳 定作用，并且对显色剂的显色效果没有干扰。
[0013] 本发明提供的显色剂的稳定剂，包括偶氮染料；
[0014] 偶氮染料选自单偶氮染料、双偶氮染料或多偶氮染料；
[0015] 单偶氮染料选自苏丹红1号、苏丹红2号、苏丹澄B、诱惑红、茜素黄R、澄黄G、巧樣 黄、宽菜红、日落黄、苏丹红G、依莱铭红B、酸性红18或藏花澄G;
[0016] 双偶氮染料选自酸性红66、苏丹黑B、直接红2B、碱性栋G、苏丹红B、苏丹红3号、 苏丹红4号或苏丹红7B;
[0017] 多偶氮染料为直接黑BN。
[0018] 偶氮染料是目前染料市场中品种和数量最多的一类染料，因其分子中含有偶氮基 而得名。目前，偶氮染料常用于各类纤维的染色和印花，并用于皮革、纸张、肥皂、蜡烛、木 材、麦杆、羽毛等染色W及油漆、油墨、塑料、橡胶、食品等的着色。本发明通过实验证明，偶 氮染料对生化检测中常用的显色剂具有稳定作用，能够改善显色剂的自发显色并且使显色 剂保持了更好的显色能力。并且，偶氮染料作为稳定剂还能够降低对测试效果的干扰。
[0019] 在一些实施例中，偶氮染料为双偶氮染料和多偶氮染料的组合物，其中，双偶氮染 料与多偶氮染料的摩尔比为15:40。
[0020] 在一些实施例中，偶氮染料为单偶氮染料和双偶氮染料的组合物，其中，单偶氮染 料与双偶氮染料的摩尔比为7 : (4~20)。
[0021] 在本发明的实施例中，偶氮染料选自藏花澄G、澄黄G、碱性栋G、巧樣黄、茜素黄R、 苏丹澄B、苏丹黑B、苏丹红3号、苏丹红4号、苏丹红7B、苏丹红B、苏丹红G、酸性红18、酸 性红66、依莱铭红B、诱惑红、直接黑BN或直接红2B
[0022] 在本发明的实施例中，偶氮染料选自苏丹红1号、苏丹红2号、诱惑红、宽菜红、苏 丹红G、依莱铭红B、酸性红18、酸性红66、直接红2B、苏丹红B、、苏丹红3号、苏丹红4号或 苏丹红7B。
[0023] 在本发明的实施例中，偶氮染料选自苏丹红3号、苏丹红4号、苏丹红7B、苏丹红 B、苏丹红G、酸性红18、酸性红66、依莱铭红B、直接红2B或诱惑红。
[0024] 在本发明的实施例中，显色剂的稳定剂还包括还原剂、馨合剂、缓冲剂、辅助稳定 剂、表面活性剂中的任一种或两者W上的组合。
[00巧]还原性物质指在化学反应中能够降低氧化剂中起到氧化作用的元素的化合价降 低的物质。实验表明，当本发明提供的稳定剂与还原性物质配合使用时，显色剂的稳定性可 W进一步的提高。
[0026] 在本发明的实施例中，还原剂的浓度为10ymol/L~100ymol/L;
[0027] 还原剂选自1-苯基氨基脈、1,5-二苯基脈、N，N，N-S甲基氨基脈，4-苯基氨基 脈、双酪A、五倍子酸、碳酷阱、对乙酷氨基酪或龙胆酸。
[0028] 在一些实施例中，还原剂为1-苯基氨基脈、4-苯基氨基脈、碳酷阱或对乙酷氨基 酪。
[0029] 在本发明的实施例中，馨合剂的浓度为20ymol/L~150ymol/L;
[0030] 馨合剂选自乙二胺四乙酸、二亚乙基S胺五乙酸、反式-1，2-二氨基环己烧-N，N， N'，N' -四乙酸、0, 0' -二（2-氨乙基）乙二醇-N，N，N'，N' -四乙酸或氨S乙酸。
[0031] 在一些实施例中，馨合剂为邸TA、G邸TA或DTPA。 阳0巧在本发明的实施例中，缓冲剂的浓度为0.Imol/L;
[0033] 缓冲剂选自巧樣酸缓冲剂、憐酸盐缓冲剂、醋酸缓冲剂或Good'S缓冲剂。
[0034] 在一些实施例中，缓冲剂为化pes缓冲液、憐酸盐缓冲剂、MCPS缓冲液或MES缓冲 液。
[0035] 在本发明的实施例中，表面活性剂的质量分数为0. 5%~1% ;
[0036] 所述表面活性剂选自Tween系列、Triton系列、化ij系列或Pluronic系列。
[0037] 在一些实施例中，表面活性剂为TritonXlOO、PluronicF-68或Tween20。
[0038] 在本发明的实施例中，辅助稳定剂的质量分数为1%~2% ;
[0039] 辅助稳定剂选自糖类或蛋白类。
[0040] 在一些实施例中，糖类为薦糖、海藻糖或山梨醇；蛋白为BSA。
[0041] 在本发明的实施例中，显色剂选自苯胺类、酪类、Trinder、联氮类或咪挫类。
[0042] 在一些实施例中，苯胺类显色剂选自TOPS(N-乙基-N-(3-横丙基）-3-甲基苯胺 钢盐）、MOS(N-乙基-N- (2-径基-3-横丙基）-3-5-二甲氧基苯胺）、MADB阳，N-双（4-横 下基）-3-5-二甲基苯胺]、TMB(3,3'，5,5' -四甲基联苯胺）或T00S[N-乙基-N-(2-^ 基-3-横丙基）-3-甲基苯胺钢盐]。
[0043] 在一些实施例中，Trinder显色剂选自4AA(4-氨基安替比林）、TBHBA化4, 6-S 漠-3-径基苯甲酸）或D皿S(3, 5-二氯-2-径基苯横酸钢）。
[0044] 在一些实施例中，联氮类显色剂为ABTS[(2,2'-偶氮-双（3-乙基苯并嚷挫 嘟-6-横酸）二锭盐）]。
[0045] 在一些实施例中，显色剂选自TMB、4AA、MAOS、MADB、D皿S或TBHBA。
[0046] 在本发明的一个实施例中，染色剂的稳定剂包括偶氮染料、表面活性剂和缓冲剂， 其中偶氮染料的浓度为1ymol/L~110ymol/L;表面活性剂的质量分数为1% ;缓冲液的 浓度为0.Imol/L。
[0047] 作为优选，偶氮染料选自苏丹澄B、茜素黄R、藏花澄G、澄黄G、日落黄或巧樣黄；表 面活性剂为化itonXlOO;缓冲液为MOPS缓冲液。
[0048] 作为优选，染色剂的稳定剂包括浓度为1ymol/L的偶氮染料，质量分数为1%的 表面活性剂，浓度为0.Imol/L的缓冲液。
[0049] 优选的，染色剂的稳定剂包括浓度为1ymol/L的苏丹澄B，质量分数为1 %的 TritonXlOO,浓度为 0.Imol/L的MCPS缓冲液。
[0050] 作为优选，染色剂的稳定剂包括浓度为110ymol/L的偶氮染料，质量分数为1% 的表面活性剂，浓度为0.Imol/L的缓冲液。
[0051] 优选的，染色剂的稳定剂包括浓度为10ymol/L的茜素黄R，浓度为100ymol/L的 藏花澄G、质量分数为1%的TritonXlOO,浓度为0.Imol/L的MCPS缓冲液。
[0052] 作为优选，染色剂的稳定剂包括浓度为25ymol/L的偶氮染料，质量分数为1 %的 表面活性剂，浓度为0