专利名称：分离介质的制备方法
技术领域：
本发明在色谱领域内。更精确地，其涉及使用所谓Spinning Disc(转盘)技术制 备分离介质的方法，其中可以以可以将所需的生物分子从复杂样品中分离出来的方式选择 珠子的孔隙率。
背景技术：
在生物技术内，一种最广泛使用的分离方法是色谱法。该术语色谱法包括一族密 切相关的分离方法。色谱法与大多数其他物理和化学分离方法不同的特征在于将两种相互 不混溶的相接触，其中一个相是固定的，而另一个是移动的。将样品混合物引入该移动相 中，随着该移动相将其运送通过系统而经过一系列相互作用，即在该固定相和移动相之间 分配。相互作用利用了该样品中组分的物理或化学性质的差别。在移动通过包含固定相的 柱的移动相的影响下，这些差别控制各个组分的移动速度。根据其与该固定相的相互作用， 分离的组分以特定的顺序出现。最少阻挡的组分首先洗脱，最强保留的材料最后洗脱。随 着样品组分从该柱中洗脱，当一种组分被充分阻挡以防止与相邻溶质的区域重叠时就实现 了分离。迄今为止建议的色谱方法都是基于与目标物的不同的相互作用方式。因此，例如 在离子交换色谱法中，官能团是与其相反电荷的反离子永久结合的离子基团，而在疏水相 互作用色谱法(HIC)中，固定相和待分离组分之间的相互作用是基于疏水性的。其他色谱 分离原理是本领域技术人员公知的。固定相，也称作分离基质，包括载体(其通常是多个基本为球形的颗粒)和结合到 该载体上的配体。在大多数分离基质中，该载体是多孔的，以允许在各颗粒上有更大量的配 体以及因此更多结合的目标化合物。该载体最通常是天然或合成聚合物，球形颗粒可以以 多种不同方式制成。通常用于该目的的天然聚合物是多糖葡聚糖和琼脂糖。转盘技术可以用于形成琼脂糖珠子。其包括转盘，在适合的条件下将液体供给到 该转盘中心，并离心离开边缘。该盘边缘有齿以产生液滴。使用该技术，在该盘的边缘处产 生均勻尺寸的液滴。使用转盘技术产生均勻滴尺寸的喷雾、薄雾和油是已有的技术。Walter 和 Prewett (Walton，W. H. ；Prewett, W. C. (1949) Proc. Phys. Soc. B. 62，341-350)早在 1949 年就总结出喷雾液滴的尺寸通过方程(1)近似给出
权利要求
在转盘工艺中选择性制备聚合物珠子的方法，其中所述珠子具有防止大于150000g/mol的分子扩散到所述珠子中的孔隙率，包括以下步骤a)将处于65～75℃粘度为350～450mPas的4～8％多糖溶液供给3001～3010rpm的一个或多个转盘，以形成多糖珠子；b)将所述形成的多糖珠子捕获在捕获浴中；其中通过将该捕获的温度在15～27℃，优选17.5～24.6℃之间改变来控制所述多糖珠子的孔隙率。
2.权利要求1的方法，其中该多糖选自琼脂糖、角叉菜聚糖、葡聚糖、藻酸盐、果胶、淀 粉和半乳甘露聚糖。
3.权利要求2的方法，其中步骤a)中的所述多糖珠子是处于约70°C且粘度为397 42ImPas的6%的琼脂糖溶液。
4.上述权利要求中的一项或多项的方法，其中步骤a)中将所述多糖溶液供给所述一 个或多个转盘是以120 170mL/min的流速进行的。
5.上述权利要求中的一项或多项的方法，其中将所述多糖珠子活化。
6.上述权利要求中的一项或多项的方法，其中在步骤b)之后将所述多糖珠子交联。
7.权利要求5或6的方法，其中在步骤b)之后为所述多糖珠子提供盖子或外层。
8.权利要求7的方法，其中将所述多糖珠子烯丙基化并部分溴化，并用NaOH处理以在 所述核心多糖珠子上形成盖子。
9.权利要求7或8的方法，其中为所述核心多糖珠子提供配体。
10.权利要求9的方法，其中所述配体是离子交换配体。
11.权利要求10的方法，其中所述多糖珠子是琼脂糖珠子，且所述离子交换配体是配 有增充剂的弱阴离子交换配体。
12.根据权利要求8 11中一项或多项制备的分离介质，其中该配体是离子交换剂。
13.权利要求12的分离介质，其中该配体是配有增充剂的弱阴离子交换剂。
14.权利要求13的分离介质，其中所述多糖珠子是琼脂糖珠子，以及该弱阴离子交换 剂是大尺寸的带电聚合物，例如DEAE(mw500000)，以及该增充剂是葡聚糖。
15.权利要求12 14中的一项或多项的分离介质用于将所需生物分子与不需要的生 物分子进行色谱分离或间歇式分离的用途。
16.权利要求15的用途，其中所述不需要的分子扩散到所述珠子中，而所需的分子不 扩散到所述珠子中。
17.权利要求15或16的用途，其中所述所需生物分子是IgG或单克隆抗体。
18.权利要求15的用途，其中所述所需的分子扩散到所述珠子中，而不需要的分子不 扩散到所述珠子中。
19.权利要求18的用途，其中所述所需的分子是具有<60000g/mol的分子量的低丰度蛋白质。
20.权利要求19的用途，其中该低丰度分子是生物标记物。
全文摘要
本发明涉及使用所谓的转盘技术制备分离介质的方法，其中珠子的孔隙率以可以从复杂样品中分离出所需的生物分子的方式优化。该方法包括以下步骤a)将在65～75℃、具有在350～450mPas内的粘度的4～8％多糖溶液供给3001～3010rpm的一个或多个转盘以形成多糖珠子；b)将所述形成的多糖珠子捕获在捕获浴中；其中通过将该捕获的温度在15～27℃，优选17.5～24.6℃之间改变来控制多糖珠子的孔隙率。该方法产生了防止大于150000g/mol的分子扩散到珠子内的孔隙率。本发明还涉及通过该方法制备的分离介质及其用于纯化生物分子(特别是单克隆抗体)的用途。
文档编号B01J2/14GK101939094SQ200980104112
公开日2011年1月5日 申请日期2009年1月30日 优先权日2008年2月5日
发明者A·斯坦霍尔姆, B-L·约翰逊, G·格拉德, J-L·马洛伊塞尔, N·诺尔曼 申请人:通用电气健康护理生物科学股份公司