单糖聚合物富集材料及其制备和在糖肽富集中的应用的制作方法

1.单糖聚合物富集材料，其特征在于：单糖功能单体通过席夫碱缩合的方法共聚到聚合物主链上，并进一步接枝到基质材料上，得到糖响应性聚合物材料；

其中，单糖功能单体为阿洛糖，葡萄糖、半乳糖、木糖、甘露糖、乙酰葡萄糖胺、乙酰半乳糖胺、核糖、脱氧核糖中的一种或二种以上的1号位溴代之后与对羟基苯甲醛反应所形成的化合物；聚合物主链包括聚乙烯胺、聚天冬酰胺、聚酰胺、聚甲基丙烯酸氨基乙酯、聚甲基丙烯酸氨基丙酯或者聚丙烯酰胺中的一种或二种以上；基质材料包括无机半导体Si、微孔SiO₂、介孔SiO₂、金属Au、Ag、Cu、Al或Pt，金属氧化物CuO、Al₂O₃、Fe₃O₄中的一种或二种以上。

2.按照权利要求1所述单糖聚合物富集材料，其特征在于：

以阿洛糖为例，材料结构如下：

其中X＝0.01～0.5。

3.按照权利要求1所述单糖聚合物富集材料，其特征在于：富集材料为聚合物修饰的基质材料，材料的粒径是0.2-50μm,孔径为

4.一种权利要求1-3任一所述单糖聚合物富集材料的制备方法，其特征是：

1)在反应容器中依次加入0.1-10g聚合物，0.1g-10g的单糖功能单体，同时加1-10mL H₂O以及1-15mL甲醇作溶剂，20-60℃搅拌1-48小时，得到的产物装于透析袋中用体积含量1-99％甲醇和水的混合溶液中透析1-7天后冷冻干燥后得单糖聚合物白色固体；

2)首先是3-(三乙氧基硅烷)丙基异硫氰酸酯的合成：在反应容器中加入5-30ml四氢呋喃，加1-10ml的3-氨基丙基三乙氧基硅烷，滴入1-5ml的二硫化碳搅拌1-3小时之后加入1-6g双氰胺，0.1-1ml的三乙胺，反应时间1-8小时，蒸 馏出产物3-异硫氰酸丙基-三甲氧基硅氧烷；

3-(三乙氧基硅烷)丙基异硫氰酸酯与基质材料中的一种或二种以上于甲苯中反应得带有异硫氰酸基团的基质材料；3-(三乙氧基硅烷)丙基异硫氰酸酯与基质材料的用量比例为0.1-0.5g，反应条件甲苯回流；

3)接有3-异硫氰酸基团的基质0.1-5g量浸入含有上述单糖聚合物01-10g水溶液10-50ml量中；将烧瓶的温度控制在20-60℃静置反应2—24小时；反应结束后用甲醇、水依次洗涤聚合物接枝表面，此聚合物表面的厚度为10-50nm，氮气吹干表面后置于真空干燥器中备用。

5.按照权利要求4所述单糖聚合物富集材料的制备方法，其特征是：单糖功能单体按如下过程进行制备，

在反应容器内加入50-250ml的乙酸酐溶液加入0.5-3ml的高氯酸，缓慢加入所需单糖10-80g，搅拌10-80min后，置于冰浴中，依次加入5-20g红磷，10-30ml溴，10-20ml水，之后常温搅拌2-6h；所得混合物过滤，干燥，之后用1-99％石油醚乙醚溶液洗涤三次，旋干得一号位溴代其它羟基被乙酰基保护的糖的衍生物；

于反应容器中加入上诉产物10-40g，用50-200ml三氯甲烷溶解，之后加入50-200ml饱和的碳酸钠溶液，加入0.5-10g四丁基碘化铵，1-10g对羟基苯甲醛，30-70摄氏度反应4-24h，之后除水层，干燥后混合物用柱层析法提纯的一号 位接有对羟基苯甲醛其它羟基被乙酰基保护的产物；于反应容器中加入1-10g上诉产物，加入10-50ml甲醇，加入0.1-1g的甲醇钠，反应1-24h后，产物用柱层析法提纯，最后得单糖功能单体。

6.一种权利要求1-3任一所述单糖聚合物富集材料在糖肽富集中的应用。

7.按照权利要求6所述的应用，其特征是：所述单糖聚合物富集材料应用在糖肽的富集和/或选择性分离中；采用聚合物修饰的基质材料与糖蛋白酶解物接触，然后富集糖肽。

8.根据权利要求4所述的应用，其特征是：

具体操作采用固相萃取模式或分散固相萃取模式；

在固相萃取(SPE)模式下采用单糖聚合物修饰的基质材料富集糖肽时，将糖蛋白酶解物上到以单糖聚合物修饰的基质材料为填料的SPE上，采用淋洗液冲洗，除去非糖肽，采用洗脱液分离出糖肽；

或在分散固相萃取模式下采用单糖聚合物修饰的基质材料富集糖肽时，将糖蛋白酶解物上直接与富集材料混合，采用洗脱溶剂，使用离心方式、台阶梯度洗脱条件，富集出糖肽。

9.按照权利要求8所述的应用，其特征在于：1)糖蛋白酶解物与材料的质量比例为1:5-200；2)富集和分离温度为10-60℃；3)淋洗流动相和洗脱流动相的体积为3-1000倍的材料体积。

10.按照权利要求8或9所述的应用，其特征在于：

1)淋洗液的组成如下a-f任一之一所示：

a.A相为水，B相为乙腈，体积比A/B:10/90-40/60；

b.A相为水，B相为甲醇，体积比A/B:10/90-40/60；

c.A相为甲酸铵水溶液(pH 3-6)，B相为乙腈，体积比A/B:5/95-40/60；

d.A相为甲酸铵水溶液(pH 3-6)，B相为甲醇，体积比A/B:5/95-40/60；

e.A相为甲酸水溶液(pH 2-4)，B相为乙腈，体积比A/B:5/95-40/60；

f.A相乙酸水溶液(pH 2-4)，B相为甲醇，体积比A/B:5/95-40/60；

其中缓冲盐溶液浓度1-200mM；

2)洗脱液的溶剂组成如下a-f任一之一所示：

a.A相为水，B相为乙腈，体积比A/B:40/60-100/0；

b.A相为水，B相为甲醇，体积比A/B:40/60-100/0；

c.A相为氨水水溶液(pH 8-11)，B相为乙腈，体积比A/B:40/60-100/0；

d.A相为碳酸氢铵水溶液(7-9)，B相为甲醇，体积比A/B:40/60-100/0；

e.A相为乙酸铵水溶液(5-7)，B相为乙腈，体积比A/B:40/60-100/0；

f.A相为磷酸氢钾水溶液(8-10)，B相为甲醇，体积比A/B:40/60-100/0；

其中缓冲盐溶液浓度1-200mM。