一种高效萃取动物源性食品中磺胺类药物残留的方法与流程

本发明提供一种基于磺酸基高亲水性功能化纳米纤维膜高效萃取动物源性食品中磺胺类药物残留的样品预处理方法，属于分析化学中样品预处理技术领域。

背景技术：
兽药在防治动物疾病、提高生产效率、改善畜产品质量等方面起着十分重要的作用。然而，滥用兽药极易造成动物源食品中有害物质的残留，这不仅对人体健康造成直接危害，而且对畜牧业的发展和生态环境也造成极大危害。随着人们对动物源食品由需求型向质量型的转变，动物源食品中的兽药残留已逐渐成为食品安全问题的重要焦点。磺胺类药物(SAs)是目前广泛应用于禽畜抗感染治疗的重要药物之一，具有性质稳定、抗菌谱广、便于储存、使用简单、价格便宜等优点。但是在近15～20年，猪、禽、牛等动物源食品中磺胺类药物残留量超标现象十分严重，世界各国均有相应的法律法规限定磺胺类兽药残留的标准。中国也在2013年颁布新的法规并开始对其进行监管(GB29694-2013《动物性食品中13种磺胺类药物多残留的测定》)。磺胺类化合物(SAs)是一类人工合成的抗菌药，在兽医临床上已有几十年的历史，其母核结构具有磺酰胺基和芳伯氨基，其中磺酰胺基具有弱酸性，芳伯氨基具有弱碱性，因此磺胺有酸碱两性。磺酰胺基上的氢原子可以被不同杂环取代基取代，形成各种各样的磺胺药物。磺胺类药物在水中几乎不溶，易溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、三氯甲烷和二氯甲烷等极性有机溶剂，难溶于非极性有机溶剂。但是，由于磺胺类药物具有酸碱两性，通过调节溶液的pH，可以使磺胺类药物呈不同状态，即中性分子或离子分子，从而改变水相和有机相的分配系数。固相萃取(SolidPhaseExtraction，简称SPE)是动物源食品中兽药残留的主要样品前处理技术，在近年来颁布实施的国家标准方法中，有很多将固相萃取作为样品前处理的手段。目前GB29694-2013《动物性食品中13种磺胺类药物多残留的测定》采用MCX(Mixed-modeCationeXchange)固相萃取小柱对动物源性食品中的磺胺类兽药残留进行富集和净化。反应的原理是在合适的pH下，固相萃取材料上的磺酸根阴离子可与磺胺类化合物发生可逆性的离子交换反应，从而选择性捕获此类化合物，达到选择性分离和富集的目的。但是现有样品前处理步骤仍旧繁琐，而且由于动物源性食品基质中富含脂肪，常需采用正己烷脱脂，此步骤极易出现乳化现象，使得样品的回收率偏低。静电纺丝纳米纤维(简称静电纺纳米纤维)是一种借助高压静电作用对聚合物溶液或熔体进行纺丝的方法，利用该方法可以简便、快速地制备直径范围在10～1000nm之间的高分子聚合物纳米纤维。静电纺丝纳米纤维具有比表面积大、易于成膜、通透性好等优点，而且有多种高分子聚合物材料可供选择，结合膜表面处理和修饰技术，有望获得高性能的功能化纳米纤维膜，满足不同性质化合物选择性富集的要求。

技术实现要素：
为了克服上述缺陷，本发明提供了基于磺酸基高亲水性功能化纳米纤维膜高效萃取动物源性食品中磺胺类药物残留的方法。磺胺类药物具有两性，可利用磺酸根离子在酸性条件下与其发生离子交换反应达到选择性富集的目的。另外现有国标方法规定的固相萃取材料(MCX)在富集富脂基质中的磺胺类药物残留时操作步骤复杂，且仍需要通过正己烷脱脂，这一步经常会造成样品液乳化，损失部分样品信息。本发明将合成的苯磺酸聚苯乙烯高分子聚合物通过静电纺技术制备成纳米纤维膜，并采用等离子体照射技术，将膜表面处理成亲水性，建立了无需采用正己烷除脂步骤即可选择性富集富脂基质中磺胺类化合物的高性能磺酸基亲水纳米纤维膜，有望应用于选择性富集富脂的动物源性食品中磺胺类兽药残留等样品前处理领域。为了实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案为：一种高效萃取动物源性食品中磺胺类药物残留的方法，其特征在于，包含以下步骤：1)磺酸基聚苯乙烯高分子聚合物的合成：将苯乙烯单体、4-乙烯基苯磺酸钠和碳酸钠置于三角反应瓶，加入超纯水，磁子搅拌至溶液达到聚合反应温度后，加入过硫酸盐引发剂并继续磁子搅拌反应；聚合反应结束后停止搅拌，将乳白色悬浊液冷却至室温后加入有机酸破乳，充分混匀后放置一段时间，离心沉降，弃去上层清液，取下层沉淀置入烧杯，水洗后放入真空干燥箱中烘干，研磨成粉状，再重复水洗-烘干-研磨步骤，即得；2)高分子纳米纤维膜制备：将步骤1)合成的高分子聚合物溶解于有机溶剂中，配置成一定浓度的聚合物溶液，在阴极收集铝箔上放置圆形盖玻片，通过静电纺丝技术制备纳米纤维膜；3)等离子体处理纳米纤维膜表面：将步骤2)制备的纳米纤维膜放置在等离子体发生器中，在一定强度下照射处理，得到表面亲水性的磺酸基纳米纤维膜；4)动物源性食品样品制备：取匀质动物源性食品置于离心管中，精密称定，加入磺胺类质控药物，加入乙酸乙酯后摇床震荡、低温离心后，吸取上清液，残渣再用乙酸乙酯重复提取一次；合并上清液，水浴氮气吹干，加入Na2EDTA溶液，涡旋混合得到样品溶液；5)SPE样品净化与提取：步骤3)制备的亲水性磺酸基纳米纤维膜置于市售可拆卸过滤器中，分别用甲醇和Na2EDTA溶液活化后，将步骤4)制备的样品溶液以恒定速度通过纤维膜，之后用Na2EDTA溶液淋洗纤维膜；再加入含有机酸的甲醇溶液洗脱吸附的目标化合物，洗脱液水浴氮气吹干，用液相色谱分析用流动相定容。步骤1)所述的反应原料苯乙烯单体、4-乙烯基苯磺酸钠、碳酸钠、超纯水、过硫酸盐和有机酸分别的用量为2～10mL、0.5～1.5g、0.10～0.60g、10～40mL、0.10～0.30g和1～4mL；过硫酸盐为过硫酸铵、过硫酸钠、过硫酸钾中的一种或几种；有机酸是甲酸、乙酸中的一种；步骤1)所述的聚合反应温度维持在50～80℃，聚合反应时间为12～24h；离心沉降的转速在12000～20000r/min，沉降时间控制在30～40min，水洗-烘干步骤重复2-4次，真空干燥温度设定在50～60℃。步骤2)所述的有机溶剂为四氢呋喃(THF)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、六氟异丙醇(HFP)、三氯甲烷(CH3Cl)的一种或者几种；聚合物溶液浓度为聚合物质量占有机溶剂体积的质量/体积百分比，其范围在8～20％；圆形盖玻片规格为市售直径14mm盖玻片；静电纺丝条件为电压10～30kV，纺丝接收距离10～20cm，聚合物溶液流量控制在0.5～1.0mL/h。步骤3)所述的等离子体发生器的照射强度为10～30W，时间为10～60s。步骤4)所述的磺胺类药物包括磺胺醋酰(SA，CAS6209-17-2)、磺胺吡啶(SP，CAS144-83-2)、磺胺甲基嘧啶(SM1，CAS127-79-7)、磺胺噁唑(SX，CAS729-99-7)、磺胺二甲基嘧啶(SM2，CAS57-68-1)、磺胺甲氧嗪(SMP，CAS80-35-3)、磺胺间甲氧嘧啶(SMM，CAS38006-08-5)、磺胺氯哒嗪(SCP，CAS80-32-0)、磺胺甲噁唑(SMZ，CAS723-46-6)、磺胺异噁唑(SIZ，CAS127-69-5)、磺胺苯酰(SML，CAS127-71-9)、磺胺地索辛(SDM，CAS122-11-2)和磺胺苯吡唑(SPP，CAS526-08-9)中的一种或者几种，其浓度范围50～200μg/kg。步骤4)和步骤5)所述的Na2EDTA溶液的浓度0.010～0.030mol/L，pH3～5；水浴氮气吹干温度控制在50～70℃。步骤4)所述的摇床以转速200～300r/min震荡20～30min，在低温3～5℃和8000～12000r/min转速离心3～7min。步骤5)所述的可拆卸过滤器是指市售聚丙烯(PP)材质、规格为13mm直径的可拆卸过滤器，样品溶液的上样速率为0.5～1.5mL/min；甲醇溶液中的有机酸是甲酸、乙酸中的一种，其浓度0.1％为有机酸体积占甲醇溶液(指纯甲醇)体积比，其用量为2.0～3.0mL；液相色谱分析用流动相定容体积为1.0～2.0mL。相对于国标方法(GB29694-2013《动物性食品中13种磺胺类药物多残留的测定》)，本发明所建立的基于磺酸基高亲水性功能化纳米纤维膜高效萃取动物源性食品中磺胺类药物残留的方法具有如下特点：所制备的磺酸基聚苯乙烯纳米纤维膜稳定性好、耐冲洗，可以在酸性条件下与13种典型的磺胺类药物发生离子交换反应，选择性富集动物源性食品基质中的磺胺类兽药残留。根据磺胺类药物具有酸碱两性的特性，通过控制提取溶液酸度范围(pH3～5)，利用固相萃取材料上磺酸根阴离子可与磺胺类化合物发生可逆性的离子交换反应的原理，选择性捕获此类化合物，达到高效富集和净化的目的。采用乳液聚合法制备的磺酸基聚苯乙烯高分子聚合物操作简便、反应温和且聚合物产率高。以静电纺丝纳米纤维所制备的纳米纤维膜，具有高比表面积；通过等离子体修饰处理，使膜表面由疏水状态转为亲水状态，提高了富脂基质中离子状态磺胺类药物的固相萃取效果。通过静电纺丝技术制备纳米纤维膜和等离子体照射技术对膜表面改性的过程简便易行，适合大批量生产。市售标准24孔培养板(直径为15.6mm)配套的圆形盖玻片直径为14mm，因此通过静电纺丝技术在这种圆形盖玻片上制备的纳米纤维膜直径也是14mm，刚好可以放置于市售的直径13mmPP材质的分体式液体过滤器中，便于后期应用纳米纤维膜作为选择性富集材料。所选取的富集过滤装置简单易得、后期使用方便、匹配性良好。此方法不需要采用正己烷脱脂，减少了操作步骤，避免了乳化现象，从而显著提高了萃取回收率，具有快速、简便、高效、重复性好的特点。附图说明图1是按照实施例1所制备的磺酸基亲水性聚苯乙烯纳米纤维膜的场发射扫描电镜(FE-SEM)图；图2是按照实施例1所制备的磺酸基亲水性聚苯乙烯纳米纤维膜的傅里叶变换-红外光谱(FT-IR)图；图3是按照实施例1所制备的磺酸基亲水性聚苯乙烯纳米纤维膜的水接触角(WaterContactAngle)图；图4比较不同固相萃取(SPE)材料(等离子体处理的聚苯乙烯plasma-PS纳米纤维膜、聚苯乙烯PS纳米纤维膜和MCX小柱)对猪肉中13种磺胺类药物残留的回收率结果(各磺胺类药物添加量均为100μg/kg)。具体实施方式下面通过实施例对本发明作进一步地说明。实施例1(猪肉样品中13种磺胺药物残留分析)1)磺酸基聚苯乙烯高分子聚合物的合成：将5.0mL苯乙烯单体、1.0g的4-乙烯基苯磺酸钠和0.30g碳酸钠置于三角反应瓶，加入20mL超纯水，于65℃磁子搅拌反应10min，再加入0.20g过硫酸铵引发剂，继续65℃磁子搅拌反应12h。反应结束后停止搅拌，将乳白色悬浊液冷却至室温，加入2mL甲酸破乳，充分混匀后放置一段时间，离心沉降(16000r/min，30min)，弃去上层清液，取下层沉淀置入烧杯，水洗后放入真空干燥箱中55℃烘干，研磨成粉状，再重复上述水洗-烘干-研磨步骤2次，即得。2)高分子纳米纤维膜制备：将步骤1)合成的磺酸基聚苯乙烯高分子聚合物溶解于THF:DMF(1/3，v/v)有机溶剂中，配置成浓度为15％的聚合物溶液，采用静电纺丝技术，在纺丝接收距离15cm的阴极收集铝箔上放置直径14mm圆形盖玻片，施加15kV电压，聚合物溶液流量控制在0.7mL/h，收集制备纳米纤维膜。3)等离子体处理纳米纤维膜表面：将步骤2)制备的纳米纤维膜放置在等离子体发生器中，于30W强度下照射40s，得到表面亲水性的纳米纤维膜。4)空白猪肉样品中磺胺药物加标样品的制备：取5.00±0.05g无磺胺兽药残留匀质猪肉置于50mL离心管中，精密称定，加入磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺噁唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲噁唑、磺胺异噁唑、磺胺苯酰、磺胺地索辛和磺胺苯吡唑对照品混合溶液25～100μL，制备成含上述各磺胺类药物浓度在50～200μg/kg(指每种磺胺类药物质量/匀质猪肉质量的质量浓度)的系列加标样品溶液，加入10mL乙酸乙酯，摇床震荡20min(300r/min)后，10000r/min离心5min(4℃)，吸取上清液，残渣再用10mL乙酸乙酯重复提取一次。合并上清液，于60℃水浴氮气吹干，加入2.5mL的0.020mol/L的Na2EDTA溶液(pH4)，涡旋混合1min。5)市售猪肉样品的制备：取5.00±0.05g市售待检测匀质猪肉置于50mL离心管中，精密称定，加入10mL乙酸乙酯后摇床震荡20min(300r/min)后，10000r/min离心5min(4℃)，吸取上清液，残渣再用10mL乙酸乙酯重复提取一次。合并上清液，于60℃水浴氮气吹干，加入2.5mL的0.020mol/L的Na2EDTA溶液(pH4)，涡旋混合1min。6)SPE样品净化与提取：将步骤3)制备的亲水性磺酸基纳米纤维膜置于市售13mm直径的PP可拆卸过滤器中，分别用1.0mL甲醇和1.0mL的Na2EDTA溶液(0.020mol/L，pH4)活化纤维膜后，将步骤4)和5)制备的系列加标溶液和待测样品溶液各2mL以0.7mL/min的恒定速度重复通过固相萃取柱，之后用2.0mL的Na2EDTA溶液(0.020mol/L，pH4)淋洗固相萃取柱。再加入2.5mL甲醇(含0.1％甲酸，v/v)洗脱吸附的目标化合物，洗脱液于60℃水浴氮气吹干，用液相色谱分析用流动相(0.1％的甲酸水溶液:乙腈＝90/10，v/v)定容至1.0mL，即得。7)根据步骤4)制备的系列加标溶液通过固相萃取、液相色谱分析后得到的数据拟合标准曲线(见表1)，将步骤5)得到的液相色谱数据与标准曲线进行对比，得到步骤5)制备的实际市售猪肉样品的磺胺类药物残留的种类及其残留量。将实施例1中所制备的材料(plasma-PSSA)及固相萃取方法与普通的聚苯乙烯(PS)纳米纤维膜和国标规定方法(MCX小柱)等进行对比，结果见图4。同时将实施例1所得结果与文献报道方法进行对比(表2)。通过上述对比可见，该方法对高脂肪含量的猪肉中的磺胺类药物残留具有较好的富集净化效果，且方法快速、简便。表1空白猪肉样品中13种磺胺类药物残留(SAs)的线性、回收率(高、中、低)测定结果表2猪肉中磺胺类药物残留的测定与文献比较结果注：[1]GambaV,TerzanoC,FioroniL,MorettiS,DusiG,GalariniR.Developmentandvalidationofaconfirmatorymethodforthedeterminationofsulphonamidesinmilkbyliquidchromatographywithdiodearraydetection.Analyticachimicaacta.2009；637(1-2):18-23.[2]KishidaK,FurusawaN.Matrixsolid-phasedispersionextractionandhigh-performanceliquidchromatographicdeterminationofresidualsulfonamidesinchicken,JournalofchromatographyA,2001；937:49-55.[3]FangGZ,HeJX,WangS.Multiwalledcarbonnanotubesassorbentforon-linecouplingofsolid-phaseextractiontohigh-performanceliquidchromatographyforsimultaneousdeterminationof10sulfonamidesineggsandpork.JournalofchromatographyA.2006；1127(1-2):12-7.[4]GaoR,ZhangJ,HeX,ChenL,ZhangY.Selectiveextractionofsulfonamidesfromfoodbyuseofsilica-coatedmolecularlyimprintedpolymernanospheres.AnalyticalandBioanalyticalChemistry.2010；398(1):451-61.[5]HeJ,TangH,YouL,ZhanH,ZhuJ,LuK.Fragment-imprintedmicrospheresfortheextractionofsulfonamides.MicrochimicaActa.2013；180(9-10):903-10.[6]KarimiM,AboufazeliF,ZhadHRLZ,SadeghiO,NajafiE.DeterminationofSulfonamidesinChickenMeatbyMagneticMolecularlyImprintedPolymerCoupledtoHPLC-UV.FoodAnalyticalMethods.2014；7(1):73-80.实施例2(鸡肉样品中13种磺胺药物残留分析)1)磺酸基聚苯乙烯高分子聚合物的合成：将2.5mL苯乙烯单体、0.5g的4-乙烯基苯磺酸钠和0.15g碳酸钠置于三角反应瓶，加入10mL超纯水，于75℃磁子搅拌反应10min，再加入0.20g过硫酸钠引发剂，继续75℃磁子搅拌反应24h。反应结束后停止搅拌，将乳白色悬浊液冷却至室温，加入1mL乙酸破乳，充分混匀后放置一段时间，离心沉降(14000r/min，30min)，弃去上层清液，取下层沉淀置入烧杯，水洗后放入真空干燥箱中60℃烘干，研磨成粉状，再重复上述水洗-烘干-研磨步骤2次，即得。2)高分子纳米纤维膜制备：将步骤1)合成的磺酸基聚苯乙烯高分子聚合物溶解于THF:DMF(2/2，v/v)有机溶剂中，配置成浓度为12％的聚合物溶液，采用静电纺丝技术，在纺丝接收距离15cm的阴极收集铝箔上放置直径14mm圆形盖玻片，施加12kV电压，聚合物溶液流量控制在0.8mL/h，收集制备纳米纤维膜。3)等离子体处理纳米纤维膜表面：将步骤2)制备的纳米纤维膜放置在等离子体发生器中，于30W强度下照射40s，得到表面亲水性的纳米纤维膜。4)空白鸡肉样品中磺胺药物加标样品的制备：取5.00±0.05g无磺胺兽药残留匀质鸡肉置于50mL离心管中，精密称定，加入磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺噁唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲噁唑、磺胺异噁唑、磺胺苯酰、磺胺地索辛和磺胺苯吡唑对照品混合溶液25～100μL，制备成含上述各磺胺类药物50～200μg/kg(指每种磺胺类药物质量/匀质鸡肉质量的质量浓度)的系列加标样品溶液，加入10mL乙酸乙酯，摇床震荡20min(300r/min)后，10000r/min离心5min(4℃)，吸取上清液，残渣再用10mL乙酸乙酯重复提取一次。合并上清液，于60℃水浴氮气吹干，加入2.5mL的0.010mol/L的Na2EDTA溶液(pH3.5)，涡旋混合1min。5)市售鸡肉样品的制备：取5.00±0.05g市售待检测鸡肉置于50mL离心管中，精密称定，加入10mL乙酸乙酯后摇床震荡20min(300r/min)后，10000r/min离心5min(4℃)，吸取上清液，残渣再用10mL乙酸乙酯重复提取一次。合并上清液，于60℃水浴氮气吹干，加入2.0mL的0.010mol/L的Na2EDTA溶液(pH3.5)，涡旋混合1min。6)SPE样品净化与提取：将步骤3)制备的亲水性磺酸基纳米纤维膜置于市售13mm直径的PP可拆卸过滤器中，分别用1.0mL甲醇和1.0mL的Na2EDTA溶液(0.010mol/L，pH3.5)活化纤维膜后，将步骤4)和5)制备的系列加标溶液和待测样品溶液各2mL以0.6mL/min的恒定速度重复通过固相萃取柱，之后用2.0mL的Na2EDTA溶液(0.010mol/L，pH3.5)淋洗固相萃取柱。再加入2.5mL甲醇(含0.1％甲酸，v/v)洗脱吸附的目标化合物，洗脱液于60℃水浴氮气吹干，用液相色谱分析用流动相(0.1％的甲酸水溶液:乙腈＝90/10，v/v)定容至2.0mL，即得。7)根据步骤4)制备的系列加标溶液通过固相萃取、液相色谱分析后得到的数据拟合标准曲线，将步骤5)得到的液相色谱数据与标准曲线进行对比，得到步骤5)制备的实际市售鸡肉样品中的磺胺类药物残留的种类及其其残留量。实施例3(牛肉样品中13种磺胺药物残留分析)1)磺酸基聚苯乙烯高分子聚合物的合成：将5.0mL苯乙烯单体、1.0g的4-乙烯基苯磺酸钠和0.30g碳酸钠置于三角反应瓶，加入20mL超纯水，于65℃磁子搅拌反应10min，再加入0.20g过硫酸铵引发剂，继续65℃磁子搅拌反应12h。反应结束后停止搅拌，将乳白色悬浊液冷却至室温，加入2mL甲酸破乳，充分混匀后放置一段时间，离心沉降(18000r/min，30min)，弃去上层清液，取下层沉淀置入烧杯，水洗后放入真空干燥箱中55℃烘干，研磨成粉状，再重复上述水洗-烘干-研磨步骤2次，即得。2)高分子纳米纤维膜制备：将步骤1)合成的磺酸基聚苯乙烯高分子聚合物溶解于THF:DMF(1/3，v/v)有机溶剂中，配置成浓度为15％的聚合物溶液，采用静电纺丝技术，在纺丝接收距离15cm的阴极收集铝箔上放置直径14mm圆形盖玻片，施加15kV电压，聚合物溶液流量控制在0.7mL/h，收集制备纳米纤维膜。3)等离子体处理纳米纤维膜表面：将步骤2)制备的纳米纤维膜放置在等离子体发生器中，于30W强度下照射50s，得到表面亲水性的纳米纤维膜。4)空白牛肉样品中磺胺药物加标样品的制备：取5.00±0.05g无磺胺兽药残留匀质牛肉置于50mL离心管中，精密称定，加入磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺噁唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲噁唑、磺胺异噁唑、磺胺苯酰、磺胺地索辛和磺胺苯吡唑对照品混合溶液25～100μL，制备成含上述各磺胺类药物50～200μg/kg(指每种磺胺类药物质量/匀质牛肉质量的质量浓度)的系列加标样品溶液，加入10mL乙酸乙酯，摇床震荡20min(300r/min)后，10000r/min离心5min(4℃)，吸取上清液，残渣再用10mL乙酸乙酯重复提取一次。合并上清液，于60℃水浴氮气吹干，加入2.5mL的0.020mol/L的Na2EDTA溶液(pH4.5)，涡旋混合1min。5)市售牛肉样品的制备：取5.00±0.05g市售待检测匀质牛肉置于50mL离心管中，精密称定，加入10mL乙酸乙酯后摇床震荡20min(300r/min)后，8000r/min离心5min(4℃)，吸取上清液，残渣再用10mL乙酸乙酯重复提取一次。合并上清液，于60℃水浴氮气吹干，加入2.5mL的0.020mol/L的Na2EDTA溶液(pH4.5)，涡旋混合1min。6)SPE样品净化与提取：将步骤3)制备的亲水性磺酸基纳米纤维膜置于市售13mm直径的PP可拆卸过滤器中，分别用1.0mL甲醇和1.0mL的Na2EDTA溶液(0.020mol/L，pH4.5)活化纤维膜后，将步骤4)和5)制备的系列加标溶液和待测样品溶液各2mL以0.7mL/min的恒定速度重复通过固相萃取柱，之后用2.0mL的Na2EDTA溶液(0.020mol/L，pH4.5)淋洗固相萃取柱。再加入2.0mL甲醇(含0.1％甲酸，v/v)洗脱吸附的目标化合物，洗脱液于60℃水浴氮气吹干，用液相色谱分析用流动相(0.1％的甲酸水溶液:乙腈＝90/10，v/v)定容至1.0mL，即得。7)根据步骤4)制备的系列加标溶液通过固相萃取、液相色谱分析后得到的数据拟合标准曲线，将步骤5)得到的液相色谱数据与标准曲线进行对比，得到步骤5)制备的实际市售牛肉样品的磺胺类药物残留的种类及其残留量。实施例4(牛奶样品中13种磺胺药物残留分析)1)磺酸基聚苯乙烯高分子聚合物的合成：将10.0mL苯乙烯单体、2.0g的4-乙烯基苯磺酸钠和0.60g碳酸钠置于三角反应瓶，加入40mL超纯水，于65℃磁子搅拌反应10min，再加入0.20g过硫酸铵引发剂，继续65℃磁子搅拌反应12h。反应结束后停止搅拌，将乳白色悬浊液冷却至室温，加入4mL乙酸破乳，充分混匀后放置一段时间，离心沉降(18000r/min，30min)，弃去上层清液，取下层沉淀置入烧杯，水洗后放入真空干燥箱中60℃烘干，研磨成粉状，再重复上述水洗-烘干-研磨步骤2次，即得。2)高分子纳米纤维膜制备：将步骤1)合成的磺酸基聚苯乙烯高分子聚合物溶解于THF:DMF(1/3，v/v)有机溶剂中，配置成浓度为10％的聚合物溶液，采用静电纺丝技术，在纺丝接收距离10cm的阴极收集铝箔上放置直径14mm圆形盖玻片，施加10kV电压，聚合物溶液流量控制在0.7mL/h，收集制备纳米纤维膜。3)等离子体处理纳米纤维膜表面：将步骤2)制备的纳米纤维膜放置在等离子体发生器中，于30W强度下照射30s，得到表面亲水性的纳米纤维膜。4)空白牛奶样品中磺胺药物加标样品的制备：取5.00±0.05g无磺胺兽药残留的牛奶置于50mL离心管中，精密称定，加入磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺噁唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲噁唑、磺胺异噁唑、磺胺苯酰、磺胺地索辛和磺胺苯吡唑对照品混合溶液25～100μL，制备成含上述各磺胺类药物50～200μg/kg(指每种磺胺类药物质量/牛奶质量的质量浓度)的系列加标样品溶液，加入10mL乙酸乙酯，摇床震荡20min(300r/min)后，10000r/min离心5min(4℃)，吸取上清液，残渣再用10mL乙酸乙酯重复提取一次。合并上清液，于60℃水浴氮气吹干，加入2.0mL的0.020mol/L的Na2EDTA溶液(pH4)，涡旋混合1min。5)市售牛奶样品的制备：取5.00±0.05g市售待检测牛奶置于50mL离心管中，精密称定，加入10mL乙酸乙酯后摇床震荡20min(300r/min)后，10000r/min离心5min(4℃)，吸取上清液，残渣再用10mL乙酸乙酯重复提取一次。合并上清液，于60℃水浴氮气吹干，加入2.5mL的0.020mol/L的Na2EDTA溶液(pH4)，涡旋混合1min。6)SPE样品净化与提取：将步骤3)制备的亲水性磺酸基纳米纤维膜置于市售13mm直径的PP可拆卸过滤器中，分别用1.0mL甲醇和1.0mL的Na2EDTA溶液(0.020mol/L，pH4)活化纤维膜后，将步骤4)和5)制备的系列加标溶液和待测样品溶液各2mL以0.7mL/min的恒定速度重复通过固相萃取柱，之后用2.0mL的Na2EDTA溶液(0.020mol/L，pH4)淋洗固相萃取柱。再加入2.5mL甲醇(含0.1％甲酸，v/v)洗脱吸附的目标化合物，洗脱液于60℃水浴氮气吹干，用液相色谱分析用流动相(0.1％的甲酸水溶液:乙腈＝90/10，v/v)定容至1.0mL，即得。7)根据步骤4)制备的系列加标溶液通过固相萃取、液相色谱分析后得到的数据拟合标准曲线，将步骤5)得到的液相色谱数据与标准曲线进行对比，得到步骤5)制备的实际市售牛奶样品的磺胺类药物残留的种类及其残留量。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和等同形式的替换，这些改进和等同替换得到的技术方案也应属于本发明的保护范围。