一种氧化石墨烯分散固相萃取-反萃取检测磺胺类药物残留的方法
【专利摘要】本发明公布了一种氧化石墨烯分散固相萃取?反萃取检测磺胺类药物残留的方法，属于分析化学检测领域。方法包括：（1）提取：称取试样加入乙腈，均质1min，加入无水硫酸钠，振荡、离心后收集上清液旋转蒸发浓缩至干。（2）分散固相萃取：将残渣溶解后转移至15mL离心管中，加入氧化石墨烯，涡旋震荡，进行分散固相萃取；（3）反萃取及检测：将分散固相萃取后的溶液连同氧化石墨烯通过有机相滤器，弃去流出液；然后进行反萃取，收集反萃取液，氮气吹干，用流动相溶残渣，进仪器检测。本发明的有益效果是，利用氧化石墨烯分散固相萃取?反萃取技术，建立了磺胺类药物残留的检测方法，减少了基质干扰，提高了检测效率，方法快捷、高效。
【专利说明】
-种氧化石墨稀分散固相萃取-反萃取检测横胺类药物残留 的方法
技术领域
[0001] 本发明设及一种氧化石墨締分散固相萃取-反萃取检测横胺类药物残留的方法， 尤其是一种基于氧化石墨締分散固相萃取-反萃取技术结合液相色谱串联质谱检测食品中 横胺类药物残留的方法，属于分析化学检测领域。
【背景技术】
[0002] 横胺类药物(sulfonamides，SAS)因具有广谱抗菌、廉价方便等优点而被广泛应用 于养殖环节，但其过量使用会在食用动物产品中残留，危害人类健康。世界各国均有关于横 胺类残留的最高限量要求，我国规定横胺类药物在动物源性食品中的最高残留限量总和为 lOOiig/kg。
[0003] 分散固相萃取技术因其具有快捷、高效、成本低廉等的特点而被广泛使用，其技术 核屯、是在样品提取液中直接加入除水剂和杂质吸附剂，提取液经离屯、后直接进行仪器分 析。目前可W用于分散固相萃取的材料有〇8、6〔8、？54、碳纳米管等。
[0004] 氧化石墨締是一种由天然石墨制备、与碳纳米管结构相似的碳纳米材料，是单原 子层厚度的二维结构纳米材料，其比表面积理论上可达2900mVg，是所有碳纳米材料中比 表面积最大的材料。在氧化石墨締制备过程中，其表面形成了大量的活性基团如簇基、幾 基、径基、环氧基等，因此，氧化石墨締不仅具有足够大的比表面积，同时还拥有足够高的表 面功能基团密度，是一种性能优异的吸附剂。
【发明内容】
[0005] 本发明提供了一种氧化石墨締分散固相萃取-反萃取检测横胺类药物残留的方 法。
[0006] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:一种氧化石墨締分散固相萃取-反 萃取检测横胺类药物残留的方法，包括如下步骤。
[0007] (1)提取:称取2-5g试样，加入15-30血乙腊，均质l-3min，再加入无水硫酸钢，振荡 提取I-Smin后，8000-9000r/min条件下离屯、6-8min，收集上清液于梨形瓶中，在40°C水浴中 旋转蒸发浓缩至干。
[000引（2)分散固相萃取:将步骤（1)中残渣用乙腊-水溶解，转移至15mL离屯、管中，加入 氧化石墨締，满旋震荡，进行分散固相萃取。
[0009] (3)反萃取及检测：将分散固相萃取后的溶液通过有机相滤膜，弃去流出液;然后 使用反萃取试剂进行反萃取，收集反萃取液，氮气吹干，用流动相溶解，进液相色谱-串联质 谱化C-MS/MS)进行检测。
[0010] 方法中横胺类药物包括横胺喀晚（S U 1 f a d i a Z i n e，S D Z )、横胺甲嗯挫 (sulfamethoxazole，SMZ)、横胺间甲氧喀晚（Siilf amonomethoxin，SMM)、横胺对甲氧喀晚 (sulfamete;r，SMT)、横胺二甲氧喀晚（sulfadimethoxine，SDM)、横胺哇嗯口林 (sulfaquinoxaline，SQX)。
[0011] 步骤(2)所述的氧化石墨締用量为15mg。
[0012] 步骤(2)分散固相萃取时间为2min。
[OOU]步骤(3)所述的反萃取试剂为含氨5%的乙腊。
[0014] 步骤(3)所使用的反萃取试剂体积为5mL。
[0015] 步骤(3)仪器检测所使用的液相色谱-串联质谱配有电喷雾离子源(ESI)。
[0016] 检测时的色谱条件为： 色谱柱:Poroshel 1 120 EC-C18，3.0 X IOOmm，2.7皿;柱溫：30°C ;进样体积：5化;流动 相:A为甲醇;B为0.1%甲酸水;流速:0.3mL/min。
[0017] 流动相梯度洗脱程序：O-Imin，10-30%A; l-3min，30-80%A; 3-7min，80%A; 7-9min， 8〇-10〇/〇A;9-10min，10〇/〇A。
[0018] 检测时的质谱条件为： 离子源：喷射流离子聚焦电喷雾离子源；扫描模式：正离子模式;检测方式：多反应监 ;干燥气溫度:350°C ;干燥气流速：lOL/min;雾化气压力:45psi ;銷气溫度:350°C ;銷气流 速:1 IL/min;毛细管电压:4000V;碰撞气:高纯氮;各离子对驻留时间均为40ms。
[0019] 表1横胺类药物的质谱参数。
[0020] 本发明的有益效果是，利用氧化石墨筛分散固相萃取-反萃取技术，建立了简便、 快速的横胺类药物残留检测方法，减少了基质干扰，回收率高，提高了检测效率，所建立的 方法快捷、高效、实用性强。
【附图说明】
[0021] 图1是本发明所设及横胺类药物的多反应监测(MRM)图。其中，1.横胺喀晚；2.横 胺甲嗯挫;3.横胺对甲氧喀晚;4.横胺间甲氧喀晚;5.横胺哇嗯嘟;6.横胺二甲氧喀晚。
【具体实施方式】
[0022] W鸡肉检测为例来说明本发明。
[00剖仪器设备： 美国Agilent公司1290-6460液相色谱-串联质谱仪，配有喷射流离子聚焦电喷雾离子 源(AJS-ESI);德国IKA公司GM200型高速均质机；日本东京理化MMV-1000W型振荡器；日本 Hitachi公司CR22G虹型高速冷冻离屯、机;瑞±811。111公司R215型旋转蒸发仪;德国IKA公司 MS3型满旋混匀器。
[0024] 材料与试剂： 氧化石墨締由济宁利特纳米技术有限责任公司提供；乙腊为色谱纯;无水硫酸钢(650 °C灼烧地，冷却后胆存于干燥器中，备用）、氨水为分析纯;实验用水为超纯水。
[0025] 标准品：横胺喀晚、横胺甲嗯挫、横胺对甲氧喀晚、横胺间甲氧喀晚、横胺二甲氧喀 晚、横胺哇嗯嘟，均购自德国化公司，纯度均在98%W上。
[00%] 样品前处理。
[0027] 提取:称取5g试样(精确至0.Olg)于50ml离屯、管中，加入15mL乙腊，均质Imin,再加 入IOg无水硫酸钢，振荡提取Imin后，在4°C，900化/min条件下离屯、Smin，重复操作一次，合 并提取液，加入IOmL乙腊饱和的正己烧，振荡，静置分层，将乙腊层转移至梨形瓶中，在40°C 水浴中旋转蒸发浓缩至干。残渣用ImL乙腊-水溶液(10+90,体积比）溶解，待净化。
[00%]净化:将残渣溶解液转移至含有15mg氧化石墨締的15mL离屯、管中，满旋2min，将溶 液连同氧化石墨締过0.22WI1有机相滤器，弃去流出液，氧化石墨締留在滤器内；然后使用 SmL含5%氨水的乙腊进行反萃取，收集反萃取液至15mL离屯、管中，氮气吹干后用ImL流动相 溶解，过0.22皿有机相滤膜，上机检测。
[0029] 液相色谱条件。
[0030] 色谱柱：Poroshell 120 EC-C18,3.0X100mm，2.7wii。
[00川柱溫：30 °C。
[0032] 进样体积：5化。
[0033] 流动相:A为甲醇、B为0.1%甲酸水。
[0034] 流动相梯度洗脱程序：O-Imin，10-30%A; l-3min，30-80%A; 3-7min，80%A; 7-9min， 8〇-10〇/〇A;9-10min，10〇/〇A。
[0035] 流速:〇.3mL/min。
[0036] 质谱条件。
[0037] 离子源:喷射流离子聚焦电喷雾离子源。
[0038] 扫描模式:正离子模式。
[0039] 检测方式:多反应监测。
[0040] 干燥气溫度:325°C。
[0041 ] 干燥气流速:1化/min。
[0042] 雾化气压力:45psi。
[0043] 銷气溫度:350°C。
[0044] 銷气流速:llL/min。
[0045] 毛细管电压:4000V。
[0046] 碰撞气:高纯氮。
[0047] 各离子对驻留时间均为40ms。
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[0049] 方法评价。
[0050] 为避免基质效应的影响，采用基质加标的方式配制标准溶液进行上机测定，浓度 分别为5、10、50、100、300、50化邑/1。实验结果表明，在5~20化邑/1浓度范围内，6种横胺的线 性关系良好，定量限可达化g/kg。
[0051 ] 准确称取5 g(精确至O.Olg)样品，分别准确添加50化、100化、150化1.00 mg/LS 个水平的6种横胺混合标准品溶液，在优化实验条件下进行前处理并上机测定，每个水平平 行测定6次，计算回收率和精密度。其平均回收率为77%~96%，精密度10~15%。
[0052]所述实施例仅仅是本发明的一个优选的实施例，并不是对本发明的范围进行限 定。基于本发明实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下，对本发明的 技术方案进行的各种改进、优化，进而获得的所有其他实施例，均属于本发明权利要求书所 声明的保护范围。
【主权项】
1. 一种氧化石墨烯分散固相萃取-反萃取检测磺胺类药物残留的方法，其特征在于，所 述方法包括以下步骤： (1) 提取:称取2-5g试样，加入15-30mL乙腈，均质l-3min，再加入无水硫酸钠，振荡提取 l_5min后，8000-9000r/min条件下离心6_8min，收集上清液于梨形瓶中，在40°C水浴中旋转 蒸发浓缩至干； (2) 分散固相萃取:将步骤（1)中残渣用乙腈-水溶解，转移至15mL离心管中，加入氧化 石墨烯，涡旋震荡，进行分散固相萃取； (3) 反萃取及检测：将分散固相萃取后的溶液通过有机相滤器，弃去流出液，氧化石墨 烯留在滤器内；然后使用反萃取试剂进行反萃取，收集反萃取液，氮气吹干，用流动相溶解， 进液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)进行检测。2. 根据权利要求1所述的一种氧化石墨烯分散固相萃取-反萃取检测磺胺类药物残留 的方法，其特征是:步骤(2)所述的氧化石墨烯用量为15mg。3. 根据权利要求1所述的一种氧化石墨烯分散固相萃取-反萃取检测磺胺类药物残留 的方法，其特征是:步骤(2)分散固相萃取时间为2min。4. 根据权利要求1所述的一种氧化石墨烯分散固相萃取-反萃取检测磺胺类药物残留 的方法，其特征是:步骤(3)所述的反萃取试剂为含氨5%的乙腈。5. 根据权利要求1所述的一种氧化石墨烯分散固相萃取-反萃取检测磺胺类药物残留 的方法，其特征是:步骤(3)所使用的反萃取试剂体积为5mL。
【文档编号】G01N30/02GK105954414SQ201610315260
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年5月14日
【发明人】倪永付
【申请人】中华人民共和国济宁出入境检验检疫局