同步快速检测配制酒中8种人工合成着色剂的lc-ms/ms方法
【专利摘要】本发明公开了一种同步快速检测配制酒中8种人工合成着色剂的LC?MS/MS方法。所述的8种人工合成着色剂为新红、靛蓝、酸性紫6B、罗丹明B、酸性红、喹啉黄、萘酚黄和亮黑。本发明首先加热除去乙醇、调酸后，采用自组装的固相萃取净化小柱(阳离子交换填料+阴离子交换填料)对不同性质的人工合成着色剂实现同步净化、富集，采用LC?MS/MS一次色谱过程进行配制酒中8种人工合成着色剂的同时定量测定。该方法操作简单，净化效果好，灵敏度高，重现性好，可广泛应用于配制酒中上述8种人工合成着色剂的检测。
【专利说明】
同步快速检测配制酒中8种人工合成着色剂的LC-MS/MS方法
技术领域
[0001] 本发明设及一种同步快速检测配制酒中多种人工合成着色剂的方法，具体设及一 种可同时对配制酒中8种人工合成着色剂进行提取、净化、定量测定的固相萃取/LC-MS/MS 方法。
【背景技术】
[0002] 人工合成着色剂是通过化学合成的方法生产的有机色素，主要W苯、甲苯、糞等芳 控类化工产品为原料，经过横化、面化、偶氮化等一系列有机反应化合而成。其成本低廉、色 泽鲜艳、着色力强、性能稳定，在食品生产加工行业中被广泛应用。但人工合成着色剂大多 为偶氮类化合物，过量食用可对人体有致崎致癌作用。近年来，为了加强对食用合成着色剂 的管理，许多国家对食用合成色素的理化性质及安全性做了深入细致的研究，明确限定了 食用合成色素的使用品种、使用范围及使用量。美国严禁在加工食品中使用偶氮玉红、罗丹 明B、哇嘟黄、糞酪黄、酸性紫6B和亮黑等，允许使用說蓝、新红;欧盟严禁使用新红、罗丹明 B、糞酪黄和酸性紫6B，允许使用說蓝、偶氮玉红、哇嘟黄、亮黑，但有限量要求;我国GB2760- 2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》对說蓝、新红、偶氮玉红、哇嘟黄的使用也有 严格的限量要求，罗丹明B、糞酪黄、亮黑和酸性6B紫则严禁使用。
[0003] 目前，国内外用于食品中多种合成着色剂的检测方法主要有分光光度法、高效液 相色谱法、高效液相串联质谱法等。分光光度法操作繁琐、定性定量准确度较差。液相色谱 法是目前应用最广泛的检测方法，但是缺乏配套的确证技术，无法满足复杂的食品基质中 目标物的定性确证要求。已报道的检测食品中合成着色剂的LC-MS/MS方法，只设及单一系 列着色剂且无普适的前处理净化手段。因此，建立一种同时提取、净化、同步快速定量检测 配制酒中新红、說蓝、酸性紫6B、罗丹明B、酸性红、哇嘟黄、糞酪黄和亮黑8种人工合成着色 剂的方法变得尤为重要。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种同步快速检测配制酒中8种人 工合成着色剂的LC-MS/MS方法。该方法同步提取、一次过柱萃取净化、一次色谱过程定量分 析配制酒中的8种人工合成着色剂，包括新红、說蓝、酸性紫6B、罗丹明B、酸性红、哇嘟黄、糞 酪黄和亮黑。该方法操作简单、灵敏度高、重现性好、准确率高。
[0005] 本发明所采用的技术方案为:一种同步快速检测配制酒中8种人工合成着色剂的 LC-MS/MS方法，其特征是，
[0006] 所述的8种人工合成着色剂为新红、說蓝、酸性紫6B、罗丹明B、酸性红、哇嘟黄、糞 酪黄和亮黑；
[0007] 具体包括W下步骤：
[000引（1)制备:取配制酒样品，加热除去乙醇，加入超纯水，用巧樣酸水溶液调试pH值至 3-6,得待净化溶液；
[0009] (2)净化：
[0010] a、同时萃取8种人工合成着色剂的固相萃取小柱的组装:取40-60WI1阳离子交换填 料和40-60WI1阴离子交换填料，填充于底端为聚乙締筛板的聚丙締小柱内，填料上端再W聚 乙締筛板固定；
[0011] b、柱活化:将上述固相萃取小柱依次用pH值6-7的水、甲醇活化；
[0012] C、加样淋洗:转移上述待净化液至固相萃取小柱，依次用抑值3-6的水、甲醇淋洗 S阳柱；
[0013] d、洗脱:低真空吹干SPE柱，用3%-6%的氨化甲醇洗脱待分析成分并接收，收集液 于50°C氮气吹干，加水溶解，满流混合后过0.22皿滤膜，供LC-MS/MS分析；
[0014] (3)检测:步骤(2)得到的待测样品用液相色谱-串联四级杆质谱进行测定。
[0015] 优选的，具体包括W下步骤：
[0016] (1)制备:取配制酒样品于烧杯中缓缓加热至70°C揽拌除去乙醇，密封标识，待用； 称取样品IOg于25mL容量瓶中，加入IOmL超纯水，用巧樣酸水溶液调试抑值至3-6，超纯水定 容得待净化溶液；
[0017] (2)净化：
[0018] a、同时萃取8种人工合成着色剂的固相萃取小柱(6mL)的组装：分别称取40-80mg 40-60皿阳离子交换填料和40-80mg 40-60WI1阴离子交换填料，填充于底端为聚乙締筛板的 聚丙締小柱内，填料上端再W聚乙締筛板固定；
[0019] 所述的阳离子交换填料为选自苯横酸键合聚苯乙締二乙締苯共聚物(PCX)、苯横 酸键合硅胶(SCX)、丙横酸键合硅胶(PRS)中的至少一种，优选PCX填料；
[0020] 所述的阴离子交换填料为选自聚酷胺(PA)、N此氨丙基键合硅胶、多胺化聚苯乙締 二乙締苯共聚物(PWAX)填料中的至少一种，优选PWAX填料；
[0021] 所述的阳离子交换填料和阴离子交换填料的比例为重量比1:0.5~1:2;优选重量 比 1:1;
[0022] 优选的，采用60m评巧+eOmgPWAX固相萃取小柱对样品进行净化处理；
[0023] b、柱活化:将上述固相萃取小柱依次用4-8mL pH值6-7的水、4-8mL甲醇活化；
[0024] C、加样淋洗:转移上述待净化液8-15血至固相萃取小柱，依次用4-8mL pH值3-6的 水、4-8mL甲醇淋洗SPE柱；
[0025] d、洗脱：低真空吹干STO柱，用4-8mL 3%-6%的氨化甲醇（优选6ml的5%氨化甲 醇)洗脱待分析成分并接收，收集液于50°C氮气吹干，用水定容至1. OmL，满流混合后过0.22 皿滤膜，供LC-MS/MS分析。
[0026] (3)检测:步骤(2)得到的待测样品用液相色谱-串联四级杆质谱进行测定。
[0027] 优选的，所述步骤(3)中液相色谱-串联四级杆质谱的仪器参数条件如下：
[00巧]液相色谱条件为：
[0029]
[0030]
[0031]
[0032] 选择反应监测母离子、子离子和碰撞能量如表2所示。实际测试时保留时间可W在 表2基础上±5%。
[0033] 本发明的有益效果：
[0034] 本发明对配制酒中8种人工合成着色剂的含量检测进行了研究，样品用巧樣酸水 溶液调试pH值至3-6后，用自组装固相萃取小柱净化，采用LC-MS/MS定量测定。该方法可实 现性质不同的人工合成着色剂一次过柱萃取净化、一次色谱过程定量分析，操作简单、灵敏 度高、重现性好、准确率较高。可广泛应用于配制酒中新红、說蓝、酸性紫6B、罗丹明B、酸性 红、哇嘟黄、糞酪黄和亮黑8种人工合成着色剂的检测。
[0035] 本发明利用自组装的固相萃取净化小柱，且采用阴离子填料和阳离子填料按一定 比例混装的方式制成固相萃取小柱，对样品提取液进行净化处理，可在有效除去干扰物的 同时实现对不同性质人工合成着色剂的净化、富集，方法灵敏度、准确度和精确度均符合食 品添加剂分析标准，具有一定的新颖性和适用性。同时上述方式，相比采用两根不同的固相 萃取柱分开萃取的方式节省了时间和成本。且本发明自组装小柱，可W根据样品中色素含 量适当调整填料的粒径和用量，方便适用。本发明首次使用PWAX柱进行固相萃取，它的吸附 容量大，萃取效果好。
[0036] 本发明的方法中，8种人工合成着色剂同时进行提取、净化等前处理(本发明的8种 物质为非同系物，由于不同物质的性质不同，在提取的过程中，很难把所有目标物都提取完 全，但是，本发明的方法，同时提取、净化，并且8种目标物提取比较完全，实施例中的回收率 就可W说明运点），并且一次上机检测，节约时间和成本。
【附图说明】
[0037] 图1为甲醇巧mmol乙酸锭水溶液8种人工合成着色剂MRM色谱图；
[0038] 图2 8种人工合成着色剂混合标准溶液的MRM色谱图；其中图2a为正离子模式下酸 性紫和罗丹明B的MRM色谱图；图化为负离子模式下新红、說蓝、偶氮玉红、哇嘟黄、糞酪黄、 亮黑的MRM色谱图；
[0039] 图3葡萄酒样品中8种人工合成着色剂的MRM色谱图；
[0040] 图4葡萄酒加标样品中8种人工合成着色剂的MRM色谱图；
[0041] 图5是实施例1加标样品的MRM色谱图；
[0042] 图6是实施例巧日标样品的MRM色谱图；
【具体实施方式】
[0043] 为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的 内容不仅仅局限于下面的实施例，实施例不应视作对本发明保护范围的限定。
[0044] 1仪器与试剂
[0045] 液相色谱串联质谱仪：Aglientl200高效液相色谱仪，API4000质谱仪（美国AB SCIEX);感量为O.lmg的分析天平（瑞±梅特勒公司纯水器（美国Millipore公 司）；N-EVAP24氮吹仪(美国）；量程为10-100化、100-1000化移液枪化ppendof公司）。
[0046] 新红、說蓝、酸性紫6B、罗丹明B、酸性红、哇嘟黄、糞酪黄和亮黑标准品（自制）；甲 醇：色谱纯(Merk公司）；乙腊：色谱纯(Merk公司）；甲酸：色谱纯(Merk公司）；乙酸锭：分析 纯;巧樣酸:分析纯;氨水:分析纯;无水乙醇:分析纯;PWAX填料:Agela Technologies公司； PCX填料：Agela Technologies公司；SCX填料:Agela Technologies公司；PRS填料:Agela Technologies公司；NH2氨丙基键合硅胶填料:Agela Technologies公司；C18SPE萃取柱： Agela Technologies公司；阳离子交换(PCX)S阳萃取柱:Agela I'echnologies公司；聚酷胺 (PA)S阳萃取柱:Agela Technologies公司。
[0047] 2标准溶液配制
[004引分别称取新红、說蓝、酸性红、哇嘟黄、糞酪黄、酸性紫6B、罗丹明B、亮黑8种着色剂 标准品各100.0 mg,用水溶解后，并分别定容于IOOmL栋色容量瓶中，即得lOOOmg/L标准储备 液。栋色瓶储存于-18°C备用。
[0049] 取空白样品按上述提取和净化方法进行处理，得到空白基质提取净化液。用该基 质溶液稀释标准储备制成系列标准工作溶液，进行LC-MS/MS分析。W标准工作液的浓度为 横坐标，峰面积为纵坐标，绘制相关线性方程。
[0050] 3样品提取与净化
[0化1] 3.1制备：
[0052]取SOOmL样品于烧杯中缓缓加热至70°C揽拌除去乙醇，密封标识，待用；称取样品 IOg于25血容量瓶中，加入IO血超纯水，用巧樣酸水溶液调试抑值至3-5，超纯水定容得待净 化溶液；
[0化3] 3.2净化：
[0054] 3.2.1同时萃取8种人工合成着色剂的固相萃取小柱的组装：分别称取40-80mg 40-60皿阳离子交换填料和40-80mg 40-60WI1阴离子交换填料，填充于底端为聚乙締筛板的 聚丙締小柱内，填料上端再W聚乙締筛板固定；
[0055] 所述的阳离子交换填料为选自苯横酸键合聚苯乙締二乙締苯共聚物(PCX)、苯横 酸键合硅胶(SCX)、丙横酸键合硅胶(PRS)中的至少一种，所述的阴离子交换填料为选自丙 基乙二胺(PSA)、聚酷胺(PA)、多胺化聚苯乙締二乙締苯共聚物(PWAX)填料中的至少一种；
[0056] 所述的阳离子交换填料和阴离子交换填料的比例为重量比1:0.5~1:2。
[0化7] 3.2.2柱活化:将上述固相萃取小柱依次用4-8mL pH值6-7的水、4-8mL甲醇活化。
[0化引 3.2.3加样淋洗:转移上述待净化液8-15血至固相萃取小柱，依次用4-8mL pH值3- 6的水、4-8mL甲醇淋洗S阳柱。
[0059] 3.2.4洗脱:低真空吹干S阳柱，用4-8mL 3 %-6%的氨化甲醇洗脱待分析成分并接 收，收集液于50°C氮气吹干，用水定容至1. OmL，满流混合后过0.22皿滤膜，供LC-MS/MS分 析。4检测
[0060] 待测样品用液相色谱-串联四级杆质谱进行测定，仪器参数条件见下表1，选择反 应监测母离子、子离子和碰撞能量见表2。
[0061] 表1液相色谱-串联四级杆质谱的仪器参数条件
[0062]
[0063]表2 8种人工合成着色剂的LC-MS/MS分析参数
[0064]
[00化]5.结果与讨论
[0066] 5.1色谱质谱条件的优化
[0067] 5.1.1流动相的选择
[006引比较了乙腊+0.1 %甲酸水溶液，甲醇巧mmol/L乙酸锭水溶液，甲醇+0.1 %甲酸水 溶液不同流动相对色谱图的影响。研究发现W乙腊+0.1 %甲酸水、甲醇+0.1 %甲酸水为流 动相，有的目标物峰形差，离子化响应值低。甲醇巧mmol/L乙酸锭水溶液为流动相，采用梯 度洗脱，8种色素能够快速分离，且每种化合物色谱峰对称尖锐，分离效果较好，MRM色谱图 如附图1所示。
[0069] 5.1.2质谱测定条件的优化
[0070] 首先分别采用浓度为50化g/L的标准溶液W蠕动累连续进样的方式进行母离子全 扫描，确定每种农药的母离子质量数，然后再W母离子进行2级碰撞扫描，选择两个丰度比 较高的子离子作为定性和定量离子。同时优化质谱条件，确定质谱最佳条件，建立多离子反 应监测模式。图2a为正离子模式下酸性紫和罗丹明B的MRM色谱图；图化为负离子模式下新 红、說蓝、偶氮玉红、哇嘟黄、糞酪黄、亮黑的MRM色谱图。
[0071] 5.2样品基质效应的消除
[0072] 电喷雾离子源化SI)易受样品基质的影响。试验中发现样品基质对离子化有抑制 作用，不同色素受样品基质抑制程度不同，不同样品基质对色素离子化抑制程度也存在差 异。糞酪黄，哇嘟黄受样品基质影响较大;新红、說蓝、酸性紫6B、酸性红、亮黑、罗丹明B影响 较小。为消除样品基质效应，应W空白样品提取液作为标注溶液的稀释液来消除样品基质 效应。
[0073] 5.化H值对回收率的影响
[0074] 罗丹明B、糞酪黄、哇嘟黄、新红、說蓝、酸性紫6B、酸性红、亮黑8种着色剂均为水溶 性，因此采用水作为溶剂提取。本研究比较了提取后直接过柱和调节抑再过柱净化带来的 影响，发现:水样直接上柱哇嘟黄、酸性红附着能力弱，在甲醇净化时会溶出，回收率变差。 改变抑为3,4,5时发现pH = 4时效果最好，因此本文选择了水作为提取溶剂，提取后调节提 取液抑为4。
[00巧]5.4净化S阳柱的选择
[0076]常用来做色素的SI^净化萃取柱有阳离子交换（如PCX)SI^柱、阴离子交换柱（如 PWAX、PA) S阳柱及Cl 8粉制成的STO柱等，Cl 8粉具有疏水作用对非极性的组分有吸附作用， 常用来去除杂质，对水溶性的着色剂几乎没有吸附能力。根据着色剂酸碱性的不同，填料有 选择性的吸附目标物，如PCX粉对目标物罗丹明B有很好的吸附，但对其他酸性着色剂吸附 差;PA粉、PWAX粉对酸性着色剂有很好的选择性吸附性。由于8种着色剂中既有酸性也有碱 性化合物，本课题主要研究采用一次过柱解决净化问题。优选地，采用PCX粉:PWAX为填料时 吸附两种性质的化合物能力最佳，60m评CX:60mgPWAX/6mL自行填制净化萃取柱对样品进行 净化处理。
[0077] 5.5洗脱液的选择
[0078] 本研究测试了纯甲醇洗脱上样后的SPE柱，发现目标化合物几乎洗脱不下来。比较 1%、2%、4%、5%、6%、10%氨化甲醇作为洗脱液的洗脱效果。发现同样取6mL洗脱液时， 5 %氨化甲醇能洗脱完全，因此采用5 %氨化甲醇作为洗脱液。
[00巧]5.6方法验证
[0080] 5.6.1方法的线性和检出限
[0081 ]将空白样品按上述提取和净化过程进行处理，得到空白基质提取净化液。用该基 质溶液将标准液稀释成罗丹明B标准系列：20iig/L，40iig/L，80iig/L，160iig/L，200iig/l;酸性 紫标准系列50]ig/L，lOOjig/L，200]ig/L，400]ig/L，500]ig/L;其余六种标准系列均为IOOjig/L， 200yg/L，400yg/L，800yg/L，1000yg/L的混合标准工作液，LC/MS/MS进行分析后，计算得到 标准曲线及相关系数，见表3。由此可见8种色素在线性范围内具有良好的线性关系，相关系 数在0.9889-0.9991之间。
[0082] 方法的检出限化OD) W空白样品基质稀释标准曲线上的最低浓度出峰时，取信噪 比S/N = 3和样品处理过程的稀释倍数计算得出。定量限化OQ) W空白样品基质稀释标准曲 线上的最低浓度出峰时，取信噪比S/N=10和样品处理过程的稀释倍数计算得出。具体数据 见表3。
[0083] 表3 8种色素的线性方程、线性范围、相关系数和方法检出限
[0084]
[00化]5.6.2回收率和精密度
[0086] 对阴性配制酒样品进行添加回收实验。由于酸性紫、罗丹明B响应值高，分别添加 浓度酸性紫为20、50、10化肖/1^;罗丹明8为5、10、5化肖/1^;其余6种色素添加浓度分别为50、 100、200iig/kg。称样后加入标准溶液，满旋混匀放置0.化后按上文进行样品处理。每个水平 重复6次，测精密度。结果见表4。可见，8种色素在配制酒中添加平均回收率在78.6%-102% 之间，相对标准偏差(RSD)均小于8.0%。
[0087] 表4样品中8种色素回收率和精密度实验结果
[008引
[0089]
[0090] 5.7方法的应用
[0091] 葡萄酒样加入罗丹明B、糞酪黄，哇嘟黄、新红、說蓝、酸性紫6B、酸性红、亮黑标准 溶液的样品，按"3样品提取与净化"的实验步骤操作完毕后上机，测得色谱图分别如图3和 图4所示。从色谱图中可W看出，葡萄酒样品基质不干扰8种人工着色剂的测定，加标样品回 收较好，但罗丹明B在空白中有本底，需要扣空白。
[0092] 实验表明，采用本法可同步净化、同时检测配制酒中8种人工合成着色剂，简便快 速，准确灵敏、重现性好，完全满足进出口食品的产品质量控制要求。
[0093] 实施例1:
[0094] 葡萄酒样品中8种人工合成着色剂的测定。
[00M] 3样品提取与净化
[0096] 3.1 提取
[0097] 取SOOmL样品于烧杯中缓缓加热至70°C揽拌除去乙醇，密封标识，待用。
[009引称取样品IOg于25mL容量瓶中，加入10血超纯水，用巧樣酸水溶液调试抑值至4,超 纯水定容得待净化溶液；
[0099] 3.2 净化
[0100] 3.2.1同时萃取8种人工合成着色剂的固相萃取小柱的组装:分别称取60mg 40-60 皿PCX阳离子交换填料和60mg 40-60皿PWAX混合型弱阴离子交换填料，填充于底端为聚乙 締筛板的聚丙締小柱内，填料上端再W聚乙締筛板固定；
[0101] 3.2.2柱活化:将上述固相萃取小柱依次用6mL pH值6-7的水、6mL甲醇活化；
[0102] 3.2.3加样淋洗:转移上述待净化液IOmL至固相萃取小柱，依次用6mL pH 4的水、 6mL甲醇淋洗S阳柱。
[0103] 3.2.4洗脱:低真空吹干SPE柱，用6mL 5 %的氨化甲醇洗脱待分析成分并接收，收 集液于50°C氮气吹干，用水定容至1. OmL，满流混合后过0.22皿滤膜，供LC-MS/MS分析。
[0104] 4 检测
[0105] 待测样品用液相色谱-串联四级杆质谱进行测定，仪器参数条件见表1，选择反应 监测母离子、子离子和碰撞能量见表2;其加标样品的MRM色谱图如图5所示，该样品回收率 和精密度实验结果见表4。
[0106] 实施例2
[0107] 黄酒样品中8种人工合成着色剂的测定。
[0108] 3样品提取与净化
[0109] 3.1 提取
[0110] 取约SOOmL样品于烧杯中缓缓加热至70°C揽拌除去乙醇，密封标识，待用。
[01川称取样品IOg于25mL容量瓶中，加入10血超纯水，用巧樣酸水溶液调试抑值至4，超 纯水定容得待净化溶液；
[0112] 3.2 净化
[0113] 3.2.1同时萃取8种人工合成着色剂的固相萃取小柱的组装：分别称取分别称取 60mg 40-60皿PCX阳离子交换填料和60mg 40-60皿PWAX混合型弱阴离子交换填料，填充于 底端为聚乙締筛板的聚丙締小柱内，填料上端再W聚乙締筛板固定；
[0114] 3.2.2柱活化:将上述固相萃取小柱依次用6mL pH值6-7的水、6mL甲醇活化；
[011引 3.2.3加样淋洗:转移上述待净化液IOmL至固相萃取小柱，依次用6mL pH值4的水、 6mL甲醇淋洗SPE柱。
[0116] 3.2.4洗脱:低真空吹干SPE柱，用6mL 5 %的氨化甲醇洗脱待分析成分并接收，收 集液于50°C氮气吹干，用水定容至1. OmL，满流混合后过0.22皿滤膜，供LC-MS/MS分析。
[0117] 4 检测
[0118] 待测样品用液相色谱-串联四级杆质谱进行测定，仪器参数条件见表1，选择反应 监测母离子、子离子和碰撞能量见表2;其加标样品的MRM色谱图如图6所示，该样品回收率 和精密度实验结果见表4。
【主权项】
1. 一种同步快速检测配制酒中8种人工合成着色剂的LC-MS/MS方法，其特征是， 所述的8种人工合成着色剂为新红、靛蓝、酸性紫6B、罗丹明B、酸性红、喹啉黄、萘酚黄 和亮黑； 具体包括以下步骤： (1) 制备：取配制酒样品，加热除去乙醇，加入超纯水，用柠檬酸水溶液调试pH值至3-6， 得待净化溶液； (2) 净化： a、 同时萃取8种人工合成着色剂的固相萃取小柱的组装:取40-60μπι阳离子交换填料和 40-60μπι阴离子交换填料，填充于底端为聚乙烯筛板的聚丙烯小柱内，填料上端再以聚乙烯 筛板固定； 所述的阳离子交换填料和阴离子交换填料的比例为重量比1:0.5~1:2; b、 柱活化:将上述固相萃取小柱依次用pH值6-7的水、甲醇活化； c、 加样淋洗:转移步骤（1)的待净化溶液至固相萃取小柱，依次用pH值3-6的水、甲醇淋 洗固相萃取小柱； d、 洗脱：吹干固相萃取小柱，用3%-6%的氨化甲醇洗脱待分析成分并接收，收集液氮 气吹干，加水溶解，涡流混合后过0.22μπι滤膜，供LC-MS/MS分析； (3) 检测:步骤(2)得到的待测样品用液相色谱-串联四级杆质谱进行测定。2. 如权利要求1所述的一种同步快速检测配制酒中8种人工合成着色剂的LC-MS/MS方 法，其特征是，所述步骤(3)中液相色谱-串联四级杆质谱的仪器参数条件如下： 液相色谱条件为： 色Thermo Syncronis C18 (??,Ι?Η?：. 3.0μι?ι, 150mmx2.1mm 流动相 甲醇，5 mmol乙酸铵水溶液 流速 0.25 mL/min 进样量 丨ΟμL 柱温 3〇'υ 梯度洗脱程序时间(mm) 甲醇(％) 5 mmol乙酸铵水溶液(％) 0.00 5 95 10.00 95 5 13.00 95 5 13*10 5 95 20 00 % 95 质谱条件为： 离子源 电喷雾离子源 扫描方式 ESI源正负离子分段扫描模式 监测方式 多反应监测 电喷雾电压 4500 V 离子源温度 500 ( 载气流速 15 L/min 雾化器压力 45psi。3. 如权利要求2所述的一种同步快速检测配制酒中8种人工合成着色剂的LC-MS/MS方 法，其特征是，8种人工合成着色剂的LC-MS/MS分析参数如下表所示：4. 如权利要求1-3中任意一项所述的一种同步快速检测配制酒中8种人工合成着色剂 的LC-MS/MS方法，其特征是，所述阳离子交换填料为选自苯磺酸键合聚苯乙烯二乙烯苯共 聚物PCX、苯磺酸键合硅胶SCX、丙磺酸键合硅胶PRS中的至少一种。5. 如权利要求4中所述的一种同步快速检测配制酒中8种人工合成着色剂的LC-MS/MS 方法，其特征是，所述阳离子交换填料为苯磺酸键合聚苯乙烯二乙烯苯共聚物PCX。6. 如权利要求1-3中任意一项所述的一种同步快速检测配制酒中8种人工合成着色剂 的LC-MS/MS方法，其特征是，所述的阴离子交换填料为选自聚酰胺PA、NH 2氨丙基键合硅胶、 多胺化聚苯乙烯二乙烯苯共聚物PWAX填料中的至少一种。7. 如权利要求6所述的一种同步快速检测配制酒中8种人工合成着色剂的LC-MS/MS方 法，其特征是，所述的阴离子交换填料为多胺化聚苯乙烯二乙烯苯共聚物PWAX填料。8. 如权利要求1-3中任意一项所述的一种同步快速检测配制酒中8种人工合成着色剂 的LC-MS/MS方法，其特征是，具体包括以下步骤： (1) 制备:取配制酒样品于烧杯中缓缓加热至70°C搅拌除去乙醇，密封标识，待用;称取 样品10g于25mL容量瓶中，加入10mL超纯水，用柠檬酸水溶液调试pH值至3-6，超纯水定容得 待净化溶液； (2) 净化： a、同时萃取8种人工合成着色剂的固相萃取小柱的组装:分别称取40_80mg 40-60μηι阳 离子交换填料和40-80mg 40-60μπι阴离子交换填料，填充于底端为聚乙烯筛板的聚丙烯小 柱内，填料上端再以聚乙烯筛板固定； b、 柱活化:将上述固相萃取小柱依次用4-8mL pH值6-7的水、4-8mL甲醇活化； c、 加样淋洗:转移步骤（1)的待净化溶液8-15mL至固相萃取小柱，依次用4-8mL pH值3-6的水、4-8mL甲醇淋洗固相萃取小柱； d、 洗脱:低真空吹干固相萃取小柱，用4-8mL 3%-6%的氨化甲醇洗脱待分析成分并接 收，收集液于50°C氮气吹干，用水定容至1. OmL，涡流混合后过0.22μπι滤膜，供LC-MS/MS分 析； (3)检测:步骤(2)得到的待测样品用液相色谱-串联四级杆质谱进行测定。9. 如权利要求8所述的一种同步快速检测配制酒中8种人工合成着色剂的LC-MS/MS方 法，其特征是，分别称取60mg 40-60μπι苯磺酸键合聚苯乙烯二乙烯苯共聚物PCX填料和60mg 40-60μπι多胺化聚苯乙烯二乙烯苯共聚物PWAX填料。10. 如权利要求8所述的一种同步快速检测配制酒中8种人工合成着色剂的LC-MS/MS方 法，其特征是，所述洗脱步骤采用6ml的5 %氨化甲醇。
【文档编号】G01N30/06GK105954413SQ201610309435
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年5月11日
【发明人】郑新华, 王乐, 韩焕美, 张景然
【申请人】济南出入境检验检疫局检验检疫技术中心