一种人血清中谷氨酸脱羧酶抗体快速检测试纸条的制作方法
【专利摘要】本实用新型公开了一种人血清中谷氨酸脱羧酶抗体快速检测试纸条，包括背衬底板，该背衬底板上设置有硝酸纤维素膜、样品结合垫和吸水膜，该样品结合垫和吸水膜分别叠压在硝酸纤维素膜的两端上；该样品结合垫上包被有标记物标记的GAD抗原和鼠IgG，所述标记物为胶体金、有色微球、荧光乳胶微球、时间分辨荧光乳胶纳米微球、量子点中的一种；该硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，该检测线包被有另一个表位的GAD抗原，该质控线包被有羊抗鼠IgG。本实用新型具有反应迅速、灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点，可广泛应用于谷氨酸脱羧酶抗体的临床免疫检验和科学研究中；且试纸条制作方便，可批量生产；体积小，便于携带。
【专利说明】
-种人血清中谷氨酸脱錢酶抗体快速检测试纸条
技术领域
[0001] 本实用新型属于免疫层析检测技术领域，具体设及一种人血清中谷氨酸脱簇酶抗 体快速检测试纸条。
【背景技术】
[0002] 谷氨酸脱簇酶(GAD)抗体在I型糖尿病不同的发病阶段均可持续高水平存在。与 ICA和IAA相比，GAD抗体与成人晚发自身免疫性糖尿病(LADA)关系更密切，在检出成人晚发 自身免疫性糖尿病时价值更大。糖尿病发病时GAD抗体的状态是预测其临床过程的理想指 标，它可W将LADA与Π 型糖尿病区别开来，为正确分型提供确切的指标，从而更好地指导治 疗。GAD抗体检测作为理想工具适用于大规模人群中I型糖尿病高危人群的筛查，需要有一 种人血清中谷氨酸脱簇酶抗体快速检测试纸条。 【实用新型内容】
[0003] 本实用新型的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种人血清中谷氨酸脱 簇酶抗体快速检测试纸条。
[0004] 本实用新型解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0005] -种人血清中谷氨酸脱簇酶抗体检测试纸条，包括背衬底板，该背衬底板上设置 有硝酸纤维素膜、样品结合垫和吸水膜，该样品结合垫和吸水膜分别叠压在硝酸纤维素膜 的两端上;该样品结合垫上包被有标记物标记的GAD抗原和鼠 IgG，所述标记物为胶体金、有 色微球、巧光乳胶微球、时间分辨巧光乳胶纳米微球、量子点中的一种;该硝酸纤维素膜上 设有检测线和质控线，该检测线包被有另一个表位的GAD抗原，该质控线包被有羊抗鼠 IgG。
[0006] -实施例中：所述巧光乳胶微球的巧光物质为直接巧光物质异硫氯酸巧光素、四 乙基罗丹明、四甲基异硫氯酸罗丹明、巧光素 C巧中的一种。
[0007] -实施例中:所述时间分辨巧光乳胶纳米微球为铜系元素巧光乳胶纳米微球。
[000引一实施例中:所述铜系元素为館，铺，衫或铺中的一种。
[0009] 一实施例中:所述样品结合垫为玻璃纤维素膜或聚醋膜。
[0010] -实施例中：所述样品结合垫为玻璃纤维素膜或聚醋膜经表面活性剂缓冲液浸泡 处理后干燥而得。
[0011] -实施例中:所述试纸条外还包裹有一壳体。
[0012] 本技术方案与【背景技术】相比，它具有如下优点：
[0013] 1.传统的检测试纸条分别设有样品垫和结合垫，血清/血浆等样品首先与样品垫 接触，样品垫对样品进行预处理，去除样品中杂质颗粒，调节样品液抑值或粘度等，减缓样 品渗透速度，有利于样品的均匀分布;经样品垫预处理过后的均匀的样品再流动至结合垫 上与标记抗体发生结合，才能够保证反应的准确性，如果不经预处理，样品在结合垫上的结 合量无法把握，且结合稳定性也差;而本实用新型采用一个样品结合垫代替传统的样品垫 和结合垫，该样品结合垫上准确而均匀地分布有标记抗体，既能保证样品得到预处理，又能 保证样品结合一定量的标记抗体，保证了反应的准确性，经检测，灵敏度和特异性良好；同 时，也使得试纸条结构和制备过程得到简化。
[0014] 2.本实用新型的人血清中谷氨酸脱簇酶抗体检测试纸条，包被有标记物标记的 GAD抗原和鼠 IgG，所述标记物为胶体金、有色微球、巧光乳胶微球、时间分辨巧光乳胶纳米 微球、量子点中的一种，上述标记物为巧光物质标记或有色物质标记，具有反应迅速、灵敏 度高、特异性强、易于辨别、稳定性好等特点，可广泛应用于谷氨酸脱簇酶抗体的临床免疫 检验和科学研究中。
[0015] 3.本实用新型的试纸条制作方便，可批量生产;体积小，便于携带。
【附图说明】
[0016] 下面结合附图和实施例对本实用新型作进一步说明。
[0017] 图1为本实用新型的人血清中谷氨酸脱簇酶抗体检测试纸条结构示意图。
[0018] 附图标记:样品结合垫1;标记物标记的GAD抗原和鼠 IgG 2;硝酸纤维素膜3;检测 线4;质控线5;吸水膜6;背衬底板7。
【具体实施方式】
[0019] 下面通过实施例具体说明本实用新型的内容：
[0020] 请查阅图1，一种人血清中谷氨酸脱簇酶抗体检测试纸条，包括背衬底板7，该背衬 底板7上设置有硝酸纤维素膜3、样品结合垫1和吸水膜6,该样品结合垫1和吸水膜6分别叠 压在硝酸纤维素膜3的两端上；该样品结合垫1上包被有标记物标记的GAD抗原和鼠 IgG 2， 所述标记物为胶体金、有色微球、巧光乳胶微球、时间分辨巧光乳胶纳米微球或量子点中的 一种;该硝酸纤维素膜3上设有检测线4(Τ线)和质控线5(C线），检测线4(Τ线)包被有另一个 表位的GAD抗原，质控线5(C线)包被有羊抗鼠 IgG。
[0021] 上述试纸条可W通过W下制备方法制备：
[0022] 1)硝酸纤维素膜(NC膜)处理
[0023] 将NC膜贴至背衬底板的制定位置，取TRIS缓冲液(5mM TRIS pH 7.8缓冲液)将另 一个表位的GAD抗原稀释至Img/ml，用于制备T线；用0.05M的MES缓冲液将羊抗鼠 IgG抗体稀 释至Img/ml，用于制备C线；按化1/cm划液量，通过biodot划膜仪将上述两种稀释后的GAD抗 原和羊抗鼠 IgG抗体均匀的划至NC膜上制备T线和C线;将划好的NC膜放置于37Γ干燥箱中， 干燥过夜。
[0024] 2)样品结合垫的处理
[0025] 玻璃纤维素膜用含有表面活性剂的缓冲液(配方：100mMPB(pH7.4)，其中含有 1.5%NaCl，5%BSA、0.5%吐溫-20和5%薦糖)浸泡进行预封闭后，50°C干燥过夜;将标记物 标记的GAD抗原和相同标记物标记的鼠 IgG抗体按照1:1的比例充分混合后，用0.05M的MES 缓冲液按照1:10的比例稀释，通过Biodot仪器的air jet喷头按照ΙΟμΙ/cm的量超声喷雾至 干燥好的玻璃纤维素膜上，5(TC干燥过夜，制备得到样品结合垫。
[0026] 其中，根据需要，所述标记物可W为胶体金、有色微球、巧光乳胶微球、时间分辨巧 光乳胶纳米微球或量子点中的一种;所述巧光乳胶微球的巧光物质可W为直接巧光物质异 硫氯酸巧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氯酸罗丹明、巧光素切5中的一种;所述时间分辨 巧光乳胶纳米微球为铜系元素的巧光乳胶纳米微球;所述铜系元素为館，铺，衫或铺中的一 种;本实施例之中，所述标记物为有色微球。
[0027] 3)组装
[0028] 将步骤2)得到的样品结合垫固定叠压在步骤1)得到的硝酸纤维素膜的一端，并将 吸水膜固定叠压在硝酸纤维素膜的另一端，用裁膜仪按每条4mm的宽度进行裁剪，并装入层 析条壳体中，即得成品。
[0029] 本实用新型的试纸条利用双抗原夹屯、法进行检测，方法如下：将样品量取75化滴 加到样品垫上，样品中的GAD-Ab与样品垫上标记物标记的抗原结合，形成抗体-标记抗原复 合物。经层析原理，液体中的抗体-标记抗原复合物和鼠 IgG依次与硝酸纤维素膜上的GAD抗 原(T线)和羊抗鼠抗体(C线）形成抗原-抗体-标记抗原复合物和抗原-标记抗体结合物。结 合有标记抗原的T线将会呈现颜色或巧光，颜色越深或巧光强度越强说明血清中的GAD-Ab 浓度越高。质控线表示此次层析过程有效。
[0030] 本实施例之中采用的标记物是有色微球，如果用的是蓝色微球就会呈现蓝色，用 的是红色微球就会呈现红色;若标记物为胶体金、巧光乳胶微球、时间分辨巧光乳胶纳米微 球或量子点，其检测原理与有色微球类似，若标记物为胶体金，也可通过颜色变化用肉眼直 接判断;若标记物为巧光乳胶微球、时间分辨巧光乳胶纳米微球或量子点，采用现有的巧光 分析仪器即可配套辅助阅读。
[0031] 结果判定:用肉眼观察，T线和C线同时显色的样本即为阳性样本;T线未显色而C线 显色为阴性样本;T线和C线均未显色为无效检测。
[0032] 实验例：同已上市产品检测试剂盒临床血样测值对比
[0033] 采用本实用新型的一种人血清中谷氨酸脱簇酶抗体检测试纸条与已上市GAD-Ab 检测试剂盒同时检测45份I型糖尿病和35份II型糖尿病人标本，分别进行测试，比较结果如 表1和2所示，说明本实用新型的试纸条在45份I型糖尿病样本中的检测灵敏度为100%，特 异性为93.3% ;在35份II型糖尿病样本中的检测灵敏度为100%，特异性为100%。
[0034] 表1 I型糖尿病测试结果对比
[0035]
[0036] 表2 II型糖尿病测试结果对比
[0037]
[0038] W上所述，仅为本实用新型较佳实施例而已，故不能依此限定本实用新型实施的 范围，即依本实用新型专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本实用新 型涵盖的范围内。
【主权项】
1. 一种人血清中谷氨酸脱羧酶抗体检测试纸条，其特征在于:包括背衬底板，该背衬底 板上设置有硝酸纤维素膜、样品结合垫和吸水膜，该样品结合垫和吸水膜分别叠压在硝酸 纤维素膜的两端上;该样品结合垫上包被有标记物标记的GAD抗原和鼠 IgG，所述标记物为 胶体金、有色微球、焚光乳胶微球、时间分辨焚光乳胶纳米微球、量子点中的一种;该硝酸纤 维素膜上设有检测线和质控线，该检测线包被有另一个表位的GAD抗原，该质控线包被有羊 抗鼠 IgG。2. 根据权利要求1所述的一种人血清中谷氨酸脱羧酶抗体检测试纸条，其特征在于:所 述荧光乳胶微球的荧光物质为直接荧光物质异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫 氰酸罗丹明、焚光素 Cy5中的一种。3. 根据权利要求1所述的一种人血清中谷氨酸脱羧酶抗体检测试纸条，其特征在于:所 述时间分辨荧光乳胶纳米微球为镧系元素荧光乳胶纳米微球。4. 根据权利要求3所述的一种人血清中谷氨酸脱羧酶抗体检测试纸条，其特征在于:所 述镧系元素为铕，钺，钐或镝中的一种。5. 根据权利要求1所述的一种人血清中谷氨酸脱羧酶抗体检测试纸条，其特征在于:所 述样品结合垫为玻璃纤维素膜或聚酯膜。6. 根据权利要求5所述的一种人血清中谷氨酸脱羧酶抗体检测试纸条，其特征在于:所 述样品结合垫为玻璃纤维素膜或聚酯膜经表面活性剂缓冲液浸泡处理后干燥而得。7. 根据权利要求1至6中任一项所述的一种人血清中谷氨酸脱羧酶抗体检测试纸条，其 特征在于:所述试纸条外还包裹有一壳体。
【文档编号】G01N33/58GK205484370SQ201521131186
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2015年12月30日
【发明人】许元峰, 袁新, 吕怀谷
【申请人】厦门依柯利斯医疗科技有限公司