本发明生物医学材料领域，具体涉及一种定向偶联免疫吸附材料及其制备方法和应用。
背景技术：
1、近年来，全球单抗药物发展迅速，2020年全球最畅销top 10产品中，有5个属于单抗药物。在下游的抗体药物纯化中，protein a 层析介质在捕获阶段起着至关重要的作用，随着动物细胞表达抗体产品大规模高效培养技术的快速发展，下游纯化工艺越来越成为抗体药物生产中主要的技术瓶颈。随着技术的发展，蛋白a层析填料的耐碱性进一步增强，吸附性能也在不断提高，由最初的20mg/ml提高至60mg/ml以上。
2、层析填料的吸附性能与固相微球有关，微球的粒径越小，表面积越大，接入的配基密度更高，吸附性能也更高。影响吸附性能的另一因素是配基的偶联方式。常用的蛋白质偶联技术主要通过氨基进行偶联，蛋白质上含有大量的氨基，会形成多点偶联，由于空间位阻的作用，造成吸附性能的下降。近年来出现了单点偶联的方法，以提高介质的吸附性能。cn110624274a通过碘乙酰基或者溴乙酰基与rprotein a-cys配体上的巯基反应合成蛋白a填料。cn113406320a、cn109781978a、cn112305222a通过双功能交联剂smcc等（4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯）与巯基的加成反应进行偶联。碘乙酰的方法因中间体碘基或溴基团较活泼，反应速度快，工艺的稳定性控制难度大；smcc溶解性较差，其磺化后的衍生物sulfo-smcc稳定性和溶解性均较好，但是制备工艺复杂，价格昂贵。
3、为了获得更好的定向偶联效果，有必要开发一种新型的定向偶联免疫吸附剂。
技术实现思路
1、本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种定向偶联免疫吸附材料及其制备方法和应用。
2、本发明所采取的技术方案是：
3、本发明的第一个方面，提供：
4、一种定向偶联免疫吸附材料，所述吸附剂载体为具有环氧基的聚乙烯醇多糖复合微球，吸附剂配基为重组蛋白，所述重组蛋白通过巯基与所述聚乙烯醇多糖复合微球上的环氧基反应，定向偶联在微球表面。
5、在一些定向偶联免疫吸附材料的实例中，所述聚乙烯醇多糖复合微球通过将多糖与环氧修饰的聚乙烯醇通过乳化法反应获得。
6、在一些定向偶联免疫吸附材料的实例中，所述环氧基位于微球表面和内部。
7、在一些定向偶联免疫吸附材料的实例中，所述聚乙烯醇多糖复合微球中环氧基的摩尔含量为20～40 μmol/g。
8、在一些定向偶联免疫吸附材料的实例中，所述聚乙烯醇多糖复合微球的粒径为40～70 μm。
9、在一些定向偶联免疫吸附材料的实例中，所述多糖选自纤维素、琼脂糖、葡聚糖和壳聚糖中的至少一种。
10、在一些定向偶联免疫吸附材料的实例中，所述聚乙烯醇多糖复合微球中环氧基的摩尔含量为20～40 μmol/g，所述聚乙烯醇多糖复合微球的粒径为40～70 μm。
11、本发明的第二个方面，提供：
12、本发明第一个方面所述定向偶联免疫吸附材料的制备方法，包括如下步骤：
13、s1) 将多糖与环氧修饰的聚乙烯醇溶解，然后通过乳化法获得聚乙烯醇多糖复合微球；
14、s2) 将重组蛋白溶解于缓冲液中，必要时加入二硫键还原剂，混合得到重组蛋白溶液；
15、s3) 将所述聚乙烯醇多糖复合微球和所述重组蛋白溶液混合交联反应，交联反应完成后加入封端试剂封端，清洗得到定向偶联免疫吸附剂。
16、在一些制备方法的实例中，重组蛋白的投料量为5～30mg/ml微球。
17、在一些制备方法的实例中，所述二硫键还原剂选自三(2-羧乙基)膦、β-巯基乙醇、二硫苏糖醇和3-（2-甲酰乙基）膦盐酸盐中的至少一种。
18、在一些制备方法的实例中，所述二硫键还原剂在反应体系中的浓度为2～15mm。
19、在一些制备方法的实例中，聚乙烯醇多糖复合微球的制备方法具体包括：
20、1)将多糖水溶液和环氧修饰的聚乙烯醇水溶液混合，搅拌得到水相溶液，所述水相溶液中的环氧基的摩尔含量为30～55μmol/g；
21、2)将表面活性剂溶于油相获得油相溶液；
22、3)所述水相溶液与油相溶液混合得到乳液，充分乳化、固化得到复合微球。
23、在一些制备方法的实例中，制备聚乙烯醇多糖复合微球时，所述多糖水溶液中多糖的质量分数为1%～10%。
24、在一些制备方法的实例中，制备聚乙烯醇多糖复合微球时，所述环氧修饰的聚乙烯醇水溶液中，环氧修饰的聚乙烯醇的质量分数为5～20wt.％。
25、在一些制备方法的实例中，制备聚乙烯醇多糖复合微球时，所述水相溶液的温度为60～75℃。
26、在一些制备方法的实例中，制备聚乙烯醇多糖复合微球时，所述搅拌的时间为30～150min。
27、在一些制备方法的实例中，制备聚乙烯醇多糖复合微球时，所述表面活性剂选自司班40、司班60、司班80和司班85、吐温20中的至少一种。
28、在一些制备方法的实例中，制备聚乙烯醇多糖复合微球时，所述油相选自液体石蜡、环己烷和甲苯中的至少一种。
29、在一些制备方法的实例中，制备聚乙烯醇多糖复合微球时，所述表面活性剂在油相中的含量为0.1%～5%。
30、在一些制备方法的实例中，所述环氧修饰的聚乙烯醇的制备方法包括：
31、a)将聚乙烯醇和水混合，加热得到聚乙烯醇水溶液；
32、b)降温后加入环氧化试剂，在碱性环境下反应即得环氧修饰的聚乙烯醇。
33、在一些制备方法的实例中，制备所述环氧修饰的聚乙烯醇时，所述聚乙烯醇的羟基与环氧化试剂的摩尔比为(1～10):1。
34、在一些制备方法的实例中，制备所述环氧修饰的聚乙烯醇时，所述环氧化试剂选自双缩水甘油醚、季戊四醇缩水甘油醚、环氧氯丙烷的至少一种。
35、在一些制备方法的实例中，制备所述环氧修饰的聚乙烯醇时，降温至37～70℃后加入双缩水甘油醚。
36、在一些制备方法的实例中，制备所述环氧修饰的聚乙烯醇时，所述环氧修饰的聚乙烯醇的环氧基的摩尔含量为90～150μmol/g。
37、本发明的第三个方面，提供：
38、定向偶联免疫吸附材料在制备蛋白分离纯化剂或血液净化剂中的应用，所述定向偶联免疫吸附材料如本发明第一个方面所述，或按本发明第二个方面所述的制备方法制备得到。
39、本发明的有益效果是：
40、本发明一些实例的定向偶联免疫吸附材料，制备的反应条件温和，可以在更低的温度(如室温)下有效偶联重组蛋白，偶联后重组蛋白的活性损失更小，可以更好的吸附目标物质。
41、本发明一些实例的定向偶联免疫吸附材料，多糖复合微球制备过程中，聚乙烯醇上修饰的环氧基一方面可以与多糖的羟基交联形成醚键，增加微球强度，无需进行二次交联，另一方面，表面裸露的环氧基可以作为活性基团，起到预活化作用。复合微球制备完成后即可直接与蛋白偶联制备吸附剂，活化和二次偶联在制球过程中即可完成。
42、本发明一些实例的定向偶联免疫吸附材料，复合微球表面的环氧基为聚乙烯醇提供，延长微球与偶联蛋白之间的距离，减少空间位阻，对蛋白性能影响小。
43、本发明一些实例的定向偶联免疫吸附材料，可以利用重组蛋白上巯基与环氧基进行定点偶联，空间位阻小，可以充分暴露蛋白的活性位点从而显著提高吸附性能。
44、本发明一些实例的定向偶联免疫吸附材料，多糖与聚乙烯醇在成球前即部分交联，复合微球内部和表面均有活性环氧基团，活性位点增加，蛋白偶联密度提高。