专利名称：一种油菜硫甙的速测方法及其测试板的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于对油菜籽中硫甙含量进行速测的方法及其测定所用的测试板，它的应用能有效促进双低油菜的推广和发展，以提高油菜的内在品质。
背景技术：
油菜是我国第一大油料作物，菜籽油占我国食用植物油总量的60％，而菜籽饼粕则是饲料业的优质蛋白源。双低油菜即低芥酸低硫甙油菜，它对油菜籽中芥酸和硫甙两项内在化学品质指标有明确的限量，其中菜籽油芥酸含量应低于2％，这样的菜籽油营养价值高，有益于人体健康；菜籽饼粕中硫甙的含量应低于30μmol/g，这样的饼粕毒性低，蛋白含量高，氨基酸组成平衡，是优质的饲料蛋白源。而普通油菜中其芥酸和硫甙的含量可分别高达40％和100μmol/g以上，造成普通菜籽油芥酸含量高，营养价值低，饼粕因硫甙降解产物对畜禽有毒而难于用作饲料。因此双低油菜是目前油料发展的方向。然而，要发展双低油菜，能否快速有效地进行芥酸硫甙含量的测定是一项急需解决的配套措施，否则就无法将双低油菜与普通油菜分开收购、单独加工，难以实现双低油菜的优质优用。就硫甙的测定来说，目前已存在有硫甙的液相色谱测定方法，但该方法不仅程序复杂，耗时长，费用高，而且需要在实验室借助昂贵的仪器设备来进行，这显然不适于在分布面广、检测量大的种植和收购现场使用；也存在有氯化钯法测定硫甙的方法，虽测试方法较为简便，但因测量误差大、不稳定而不能实用。
发明内容
本发明所要解决的是针对现有技术存在的问题而提供一种简便有效的油菜硫甙速测方法及其测试板，以促进双低油菜的推广和发展。
本发明油菜硫甙速测方法的技术方案为取1-5g菜籽样品粉碎后，称取0.20-0.80g置于具塞试管中，加入1.0-5.0ml蒸馏水，摇匀，发生硫甙降解反应，反应数分钟后过滤，取20-80μl滤液置于硫甙测试板，加入磷酸二氢钾水溶液60-240μl反应数分钟后，形成有色产物，由于溶液颜色深浅与样品中硫甙含量有关，采用分光光度法并根据标准曲线用测量仪即可测定硫甙含量。
上述方案中，菜籽样品粉碎后的细度为30-50目；磷酸二氢钾水溶液的浓度为20-80mmol/L，制取方法为室温下取分析纯磷酸二氢钾6.80g溶解后，定溶至1000ml，紫外线灭菌后，用瓶分装；硫甙的测试结果用μmol/g表示。
本发明的硫甙测试板由下述方法制作而成称取6.0-6.5mg显色剂(Chrom G)用无水乙醇溶解后定溶10ml，取5-20μl置于测试板每孔，真空干燥1-2小时后待用，称取18.24-34.20g磷酸氢二钾溶解后，定溶1000ml，用磷酸调pH6.0后备用，将硫甙测试酶(Gln MEN)溶于上述磷酸氢二钾缓冲液，配制浓度为80-180U/ml，取10-50μl置于上述测试板每孔，冷冻真空干燥2小时后即成。
本发明的测定硫甙的机理在于利用酶的专一性，使菜籽中硫甙与内源酶和特异性外源酶产生反应，反应后生成产物再与显色剂反应形成有特征吸收峰的有色产物，由于溶液颜色深浅与样品中硫甙含量有关，采用分光光度法用一定波长单色光根据标准曲线用测量仪即可测定硫甙的含量。
本发明的优点在于1、测试方法简便，测试速度快，可适于各种油菜籽品种的测试；2、测试费用低，速测仪的价格低，体积小，有助于该项技术的普及推广；3、测定精度较高，误差为±4μmol/g，达到了国际标准；4、对环境适应性强，便于在现场使用，实用性强，能有效促进双低油菜的产业化发展。
图1为本发明速测方法的流程框图。
具体实施例方式
以下详细说明本发明的实施例。
实施例1称取2g华双3号油菜菜籽样品粉碎，细度40目，取0.50g于具塞试管，加入3.0ml蒸馏水并摇匀，发生硫甙降解反应，室温下反应3-10分钟后过滤，取50μl滤液置于硫甙测试板，加入磷酸二氢钾水溶液150μl，反应5-15分钟形成有色产物，根据硫甙含量与形成有色产物间相关关系，用测量仪测出硫甙含量为27.5μmol/g。
实施例2取4g中双5号油菜菜籽样品粉碎，细度50目，取0.60g于具塞试管，加入3.6ml蒸馏水并摇匀，发生硫甙降解反应，室温下反应8分钟后过滤，取60μl滤液置于硫甙测试板，加入磷酸二氢钾水溶液180μl，反应9分钟形成有色产物，根据硫甙含量与形成有色产物间相关关系，用测量仪测定硫甙含量为25.6μmol/g。
实施例3为本发明硫甙测试板的实施例称取6.2mg显色剂(Chrom G)用无水乙醇溶解后定溶10ml，取10μl置于测试板每孔，真空干燥1-2小时后待用，称取22.8g磷酸氢二钾溶解后，定溶1000ml，用磷酸调pH6.0后备用，将硫甙测试酶(Gln MEN)溶于上述磷酸氢二钾缓冲液，配制浓度为100U/ml，取20μl置于上述测试板每孔，冷冻真空干燥2小时后即成。
权利要求
1.一种油菜硫甙的速测方法，其特征在于取1-5g菜籽样品粉碎后，称取0.20-0.80g置于具塞试管中，加入1.0-5.0ml蒸馏水，摇匀，发生硫甙降解反应，反应数分钟后过滤，取20-80μl滤液置于硫甙测试板，加入磷酸二氢钾水溶液60-240μl反应数分钟后，形成有色产物，采用分光光度法并根据标准曲线用测量仪即可测定硫甙含量。
2.按权利要求1所述的油菜硫甙的速测方法，其特征在于菜籽样品粉碎后的细度为30-50目。
3.按权利要求1或2所述的油菜硫甙的速测方法，其特征在于磷酸二氢钾水溶液的浓度为20-80mmol/L。
4.按权利要求3所述的油菜芥酸的速测方法，其特征在于称取2g菜籽样品粉碎，细度40目，取0.50g于具塞试管，加入3.0ml蒸馏水并摇匀，发生硫甙降解反应，室温下反应3-10分钟后过滤，取50μl滤液置于硫甙测试板，加入磷酸二氢钾水溶液150μl，反应5-15分钟形成有色产物，根据硫甙含量与形成有色产物间相关关系，用测量仪测出硫甙含量。
5.按权利要求3所述的油菜芥酸的速测方法，其特征在于取4g菜籽样品粉碎，细度50目，取0.60g于具塞试管，加入3.6ml蒸馏水并摇匀，发生硫甙降解反应，室温下反应8分钟后过滤，取60μl滤液置于硫甙测试板，加入磷酸二氢钾水溶液180μl，反应9分钟形成有色产物，根据硫甙含量与形成有色产物间相关关系，用测量仪测出硫甙含量。
6.一种油菜硫甙的速测测试板，其特征在于它由下述方法制作而成称取6.0-6.5mg显色剂(Chrom G)用无水乙醇溶解后定溶10ml，取5-20μl置于测试板每孔，真空干燥1-2小时后待用，称取18.24-34.20g磷酸氢二钾溶解后，定溶1000ml，用磷酸调pH6.0后备用，将硫甙测试酶(GlnMEN)溶于上述磷酸氢二钾缓冲液，配制浓度为80-180U/ml，取10-50μl置于上述测试板每孔，冷冻真空干燥2小时后即成。
全文摘要
本发明涉及一种用于对油菜籽中硫甙含量进行速测的方法及其测定所用的测试板,它的应用能有效促进双低油菜的推广和发展,以提高油菜有内在品质。本发明油菜硫甙速测方法的技术方案为:取1－5g菜籽样品粉碎后,称取0.20－0.80g置于具塞试管中,加入1.0－5.0ml蒸馏水,摇匀,发生硫甙降解反应,反应数分钟后过滤,取20－80μl滤液置于硫甙测试板,加入磷酸二氢钾水溶液60－240μl反应数分钟后,形成有色产物,由于溶液颜色深浅与样品中硫甙含量有关,采用分光光度法并根据标准曲线用测量仪即可测定硫甙含量。本发明测试方法简便,测试速度快,费用低,可适于各种油菜籽品种的测试;测定精度较高,对环境适应性强,便于在现场使用,实用性强。
文档编号G01N21/77GK1341851SQ0113350
公开日2002年3月27日 申请日期2001年9月28日 优先权日2001年9月28日
发明者李培武, 张文, 周霞, 李光明, 杨湄, 吴渝, 汪雪芳, 吴宣诚, 仝乘风, 胡乐华, 甘东生, 孟子园, 陈小媚, 丁小霞, 陈洪, 谢立华 申请人:中国农业科学院油料作物研究所