专利名称：一种检测前哨淋巴结转移的方法
技术领域：
本发明属生物材料检测领域，具体涉及一种提高前哨淋巴结病理检查准确性的方法。
术中SLN的病理检查是乳腺癌前哨淋巴结活检中的关键步骤，其意义在于能指导进一步手术方案。如果术中SLN病理检查为阴性，而术后石蜡切片发现淋巴结中有癌转移，则患者需接受第二次手术，这对于身心已受到沉重打击的乳腺癌患者来说，无疑是雪上加霜，而且两次手术也增加了医疗费用。如果术中SLN病理为阳性而行腋淋巴结清扫，术后石蜡切片却未发现淋巴结中有癌转移，则增加了术后上肢水肿、肩关节运动受限等并发症。
前哨淋巴结术中病理检查的方法有多种。Veronesi等报道术中SLN冰冻检查的准确率为83.2％，假阴性率为24％。Turner等术中联合应用冰冻切片及印片的方法对SLN进行病理诊断，准确率为93.2％，假阴性率为8.4％。当对SLN的石蜡标本行连续切片进行转移灶检测后，此术中联合诊断方法的假阴性率可上升到25.8％。Viale等术中对SLN行连续切片及快速免疫组化染色，虽然提高了SLN转移的检出率，但其缺点为损失了大量的淋巴结组织，而无法进行石蜡切片的最终诊断，且延长了术中的等候时间，费用昂贵，无法在我国普及。国内苏逢锡等报告术中单一使用冰冻切片进行SLN病理检查，与石蜡病理相符率仅为91.3％。
本发明方法按下述步骤进行1.注射示踪剂本发明使用的放射性示踪剂为99mTc标记的硫胶体(99mTc-Sulphur colloid，99mTc-SC)，标记率＞95％。使用的γ探测仪为Capintec Gammed IV，配备CdTe半导体探头(Capentic，Inc.，美国)。使用单光子发射断层扫描仪(SPECT)行术前淋巴显像，型号ELSCINTAPEX-409AG，配备低能高分辨率平行孔准直器。术前10～16个小时将注射在患者肿瘤周围的3，6，9，12点的乳腺组织中。每一点的注射量为0.5～1.0ml，放射活度为1.0～2.5mCi。2.术前淋巴显像注射99mTc-SC后，于5、30、60、120，240分钟以及11-16小时应用SPECT进行前位及前斜位淋巴显像。3.热点探测术前采用γ探测仪由注射点向腋窝、内乳区、锁骨上区及锁骨下区反复探测放射性药物热点的分布情况。热点(Hot spot)的定义为腋窝或内乳区注射点以外的放射性计数最高的点，其10秒钟γ-计数至少高出25点。找出热点后在皮肤上做标记。4.前哨淋巴结活检连续硬膜外麻醉成功后，先切取肿块送冰冻检查证实诊断。而后在皮肤标记的热点附近选取前哨淋巴结活检的切口，方向与行腋窝清扫的切口一致。术中在γ-探测仪上显示的计数、声音频度的导引下调整方向，逐层切开，找到放射性核素浓聚的淋巴结即前哨淋巴结，予以摘除。切取淋巴结的部位以及体外放射计数均分别记录。5.病理检查对前哨淋巴结进行细针穿刺后做细胞学检查。然后其中一半淋巴结仍可进行冰冻切片检查，另一半可用于后续分子生物学检测。手术结束后，所有标本立即浸泡于福尔马林溶液中固定，24小时内做石蜡包埋，行常规病理检查。
所述细针穿刺细胞学检查的具体步骤为用一手固定前哨淋巴结，另一手持套有7号针头的10ml一次性针筒，取前哨淋巴结上、前、左三个穿刺点进行细针穿刺，每个穿刺点各取浅、中、深三个平面，(以1/4为界)吸取细胞，反复抽吸数次。如抽吸后针头内有少量血液或组织液，则可拔针；如未见液体，则出针前将针头与针筒分离，排出筒中气体，除去负压后针筒与针头相连出针，送检，制成均匀涂片，在涂片干燥前用乙醚酒精固定液固定，以防止细胞自溶。所述固定液每100ml中含95％酒精49.5ml，医用乙醚49.5ml，冰醋酸1ml。固定10分钟后，用水洗去固定液，浸入苏木素染液5分钟，水冲洗，在显微镜下观察所取细胞，其中核大、核染色深、核浆比例失调的细胞为阳性。
本发明所述的冰冻切片检查，使用恒温冷冻切片，切片过程在恒温箱内进行。所用仪器包括组织托盘和切片刀冷冻温度稳定在-20℃，使用自动贴片装置，切片厚度为5um，组织块大于1×1cm。
本发明联合检测方法的优点为1.冰冻切片为组织学检查，细针穿刺为细胞学检查，它能不同角度、不同层面地吸取细胞，可检测到位于其它层面的转移灶。所述两种检查方法的结合，能保证有足够的淋巴组织用于石蜡切片的检查。2.冰冻切片与石蜡切片只能对一半SLN进行检查(一半用于分子生物学检测)，而细针穿刺能吸取另一半SLN的细胞而不影响其后续分子生物学的检测。3.术中等侯时间短，冰冻切片约需20分钟，细针穿刺约需15分钟，两种检查能同时进行。4.医疗成本低。
权利要求
1.一种检测前哨淋巴结转移的方法，采用放射性核素作为示踪剂，术前进行淋巴显像，术中在γ探测仪引导下进行前哨淋巴结活检，其特征在于术中病理检查是联合使用冰冻切片检查与细针穿刺检查的方法，
2.根据权利要求1所述的检测前哨淋巴结转移的方法，其特征在于所述的细针穿刺检查方法中，对前哨淋巴结进行多角度多层面的细针穿刺后做细胞学检查，然后，其中一半淋巴结进行冰冻切片检查，另一半用于后续分子生物学检测。
3.根据权利要求1和2所述的检测前哨淋巴结转移的方法，其特征在于所述的细针穿刺检查方法中，取前哨淋巴结上、前、左三个穿刺点进行细针穿刺，每个穿刺点以1/4为界，各取浅、中、深三个平面吸取细胞。
4.根据权利要求1和2所述的检测前哨淋巴结转移的方法，其特征在于所述的细针穿刺检查方法中，采用套有7号针头的10ml一次性针筒。
5.据权利要求1所述的检测前哨淋巴结转移的方法，其特征在于所述的细针穿刺检查方法中，吸取细胞后制成均匀涂片，在涂片干燥前用乙醚酒精固定液固定，以防止细胞自溶，所述固定液每100ml中含95％酒精49.5ml，医用乙醚49.5ml，冰醋酸1ml。
6.根据权利要求1所述的检测前哨淋巴结转移的方法，其特征在于所述的冰冻切片检查，使用恒温冷冻切片，切片过程在恒温箱内进行，所用仪器冷冻温度稳定在-20℃。
全文摘要
本发明属生物材料检测领域，具体涉及一种提高前哨淋巴结病理检查准确性的方法。本发明采用放射性核素作为示踪剂，术前进行淋巴显像，术中在γ探测仪引导下进行前哨淋巴结活检，联合使用冰冻切片与细针穿刺的方法，可从不同角度、不同层面地吸取细胞，检测其它层面的转移灶，并保证有足够的淋巴组织用于后续石蜡切片和分子生物学的检测。本方法可明显提高术中前哨淋巴结病理检查的准确性。具有不损伤前哨淋巴结细胞结构和术中等候时间短、医疗成本低等优点。
文档编号G01N33/60GK1412561SQ0213650
公开日2003年4月23日 申请日期2002年8月14日 优先权日2002年8月14日
发明者张 杰, 沈坤炜, 尼尔马, 沈镇宙, 邵志敏, 韩企夏, 刘邦令, 庄传经, 吴炅, 陆劲松, 柳光宇, 张家新 申请人:复旦大学附属肿瘤医院