专利名称：检测鲜肉鲜奶食品综合毒性的方法
技术领域：
本发明涉及一种检测鲜肉鲜奶食品综合毒性的方法，属食品安全和环境保护的技术领域。
背景技术：
食品安全是不可忽视的，对市场上供应的鲜肉、鲜奶等的食用安全性，目前按国家规定的标准进行检测。所述的检测项目包括抗生素残留量、重金属含量、食品添加剂量等。所采用的方法，都为化学分析法，检测时间长、操作繁杂，还需要有昂贵的仪器设备，因此不仅检测成本高、时间长，而且对样品有没有急性生物毒性不能快速作出判断，尤其是对所有可能存在于样品中具有生物毒性的物质的总的综合毒性无法确定。例如，国标规定检测食品中的几种重金属的含量，所述的化学分析法可以很精确地测出含量，最终判定检测食品是否合格，但却不能对所检测的各种重金属的毒性大小作出判断，尤其不能判断几种重金属共同存在时的综合的、总的生物毒性的大小。而且，获得结果的时间太长，往往不能在这些检测的新鲜食品上市前就做出结果。其次，如果样品中存在国标未规定检测的重金属或其他毒物，它们所产生的生物毒性就会被漏检，从而威胁食用者的健康和安全。这类事件时有发生，例如含有瘦肉精的猪肉如果没有专门的化学检测，人们不会知道瘦肉精存在于鲜肉中，一旦食用就会发生严重的中毒事件。在目前化学合成物大量出现，经常被轻率地用于食品中，有关部门对此缺乏事前监测的有效手段，因为用化学分析法或物理方法检测所得的结果往往是滞后的，缺乏事前监测的有效手段和防范方法是目前常规方法存在的重大缺陷。
发明内容
本发明的目的是推出一种检测鲜肉鲜奶食品综合毒性的方法。
为实现上述目的，本发明采用以下的技术方案。所述的方法利用发光细菌的特性在给定的条件下，发光细菌的发光强度会随外界毒物的含量而改变，检测鲜肉鲜奶食品综合毒性，包括发光细菌的准备、检测样品的准备、发光细菌的发光检测三个步骤。本发明采用的发光细菌是淡水发光细菌—青海弧菌Q67菌株(Vibrioqinghaiensis Q67)，见朱文杰，汪杰，陈晓耘等，“发光细菌-新种-青海弧菌”，海洋与湖沼，25(3)273-278。将鲜肉食品样品的浸出液或鲜奶食品的样品与青海弧菌Q67菌株的菌液混合均匀，通过检测青海弧菌Q67菌株的发光强度，判定所测的鲜肉鲜奶食品的样品中所有毒物合在一起的综合毒性，给出所测的鲜肉鲜奶食品可否安全食用的结论。
现详细描述本发明的技术方案。
一种检测鲜肉食品综合毒性的方法，其特征在于，具体操作步骤第1步 发光细菌的准备1.1分步发光细菌菌种采用我国独有的淡水发光细菌—青海弧菌Q67菌株，1.2分步培养基成分MgSO42.47g，MgCO30.79g，MgBr20.09g，MgCl20.109g，CaCO30.103g，KCl 0.122g，NaCl 8.29g，Mg(HCO3)20.50g，酵母膏5g，胰胨5g，甘油3g，琼脂20g，溶于1000mL蒸馏水中，制成斜面培养基，121℃下灭菌20min，贮于4℃冰箱备用，1.3分步测试用菌液的制备将1.1分步中所述的青海弧菌Q67菌株的菌种移接到1.2分步中得到的斜面培养基上，15-25℃下培养12h-18h，此时青海弧菌Q67菌株的细菌发光明亮，用10ml生理盐水将菌苔从斜面培养基上轻柔冲刷下来，摇匀，用生理盐水调整菌液浓度，使菌液浓度OD600＝0.3，得测试用菌液，取0.1ml测试用菌液，加入置有2ml生理盐水的样品测试管中，用测光仪检测青海弧菌Q67菌株的细菌的发光，发光强度在200-500万光子/秒时，测试用菌液可以使用，生理盐水是浓度为0.85％的NaCl溶液；第2步 鲜肉样品的准备取鲜肉样品50g，剪切成长约5cm，宽约3mm的肉丝，用50ml生理盐水浸泡15min，10000rpm的转速下离心10min，取上清液，作为样品上清液，备用，对照选用国家质量体系认证的免检鲜肉，取对照鲜肉样品50g，用上述样品处理方法同样处理，取上清液，作为对照上清液，备用；第3步 发光细菌的发光检测取三个测试小杯，每杯加2ml第2步的得到的样品上清液，制成三个平行样，另取三个测试小杯，每杯加2ml第2步得到的对照上清液，制成三个平行样，以15s的时间间隔依次向各杯加0.2ml 1.3分步制得的测试用菌液，放置30min，用发光检测仪以15s的时间间隔依次测定各杯的发光强度，记录每杯的发光值，计算样品的三个平行样的平均发光值和对照的三个平行样的平均发光值，按下式计算相对发光强度
，根据算出的相对发光强度，查对表1，表1
得检测的鲜肉样品的综合毒性安全、不安全或可疑。
一种检测鲜奶食品综合毒性的方法，其特征在于，具体操作步骤第1步 发光细菌的准备1.1分步 发光细菌菌种采用我国独有的淡水发光细菌—青海弧菌Q67菌株，1.2分步 培养基成分MgSO42.47g，MgCO30.79g，MgBr20.09g，MgCl20.109g，CaCO30.103g，KCl 0.122g，NaCl 8.29g，Mg(HCO3)20.50g，酵母膏5g，胰胨5g，甘油3g，琼脂20g，溶于1000mL蒸馏水中，制成斜面培养基，121℃下灭菌20min，贮于4℃冰箱备用，1.3分步 测试用菌液的制备将1.1分步中所述的青海弧菌Q67菌株的菌种移接到1.2分步中得到的斜面培养基上，15-25℃下培养12h-18h，此时青海弧菌Q67菌株的细菌发光明亮，用10ml生理盐水将菌苔从斜面培养基上轻柔冲刷下来，摇匀，用生理盐水调整菌液浓度，使菌液浓度OD660＝0.3，得测试用菌液，取0.1ml测试用菌液，加入置有2ml生理盐水的样品测试管中，用测光仪检测青海弧菌Q67菌株的细菌的发光，发光强度在200-500万光子/秒时，测试用菌液可以使用，生理盐水是浓度为0.85％的NaCl溶液；第2步 鲜奶样品的准备取鲜奶样品50ml，作为待测鲜奶，对照选用国家质量体系认证的无抗生素的免检鲜奶，取对照鲜奶样品50ml，作为对照鲜奶；第3步 发光细菌的发光检测取三个测试小杯，每杯加2ml第2步的得到的待测鲜奶，制成三个平行样，另取三个测试小杯，每杯加2ml第2步得到的对照鲜奶，制成三个平行样，以15s的时间间隔依次向各杯加0.2ml 1.3分步制得的测试用菌液，放置30min，用发光检测仪以15s的时间间隔依次测定各杯的发光强度，记录每杯的发光值，计算样品的三个平行样的平均发光值和对照的三个平行样的平均发光值，按下式计算相对发光强度
，根据算出的相对发光强度，查对表1，表1
得检测的鲜奶样品的综合毒性安全、不安全或可疑。
本发明利用发光细菌对外界毒物反应灵敏的特点，采用我国独有的淡水发光细菌-青海弧菌Q67菌株作为检测用菌种，用于对鲜肉鲜奶食品的安全检测。与背景技术相比，本发明有以下的优点
1、快速在1小时内可以得出检测结果，一般可在所述的鲜肉鲜奶食品上市前完成其食用安全与否的检测和判断。若用目前的国家标准的检测法检测，则往往要几天才会有结果，不可能在所述的鲜肉鲜奶食品上市前完成其食用安全与否的检测和判断。
2、食用安全性判断是否有急性生物毒性物质存在于检测样品中，可对待测鲜肉鲜奶食品样品作出安全、不安全或可疑的判断。若采用国家标准的检测法检测，则除了得知检测物的浓度外，不能对待测鲜肉鲜奶食品样品作出安全、不安全或可疑的判断。例如采用国家标准的检测法可检测出汞之类的重金属的含量，但无法判断在该种含量状况时，所述的鲜肉鲜奶食品对食用者是否安全。
3、能检测待测样品中所有的毒物的综合毒性采用国标的某一方法只能针对检测某种物质，对于规定检测之外的物质，则根本就检测不出任何结果。所以漏检不可避免，导致急性中毒事件的发生。而本方法利用发光细菌检测到的结果则是对存在于待测样品中所有的毒物的综合毒性的反映。因此，即使从未出现过的新的化学合成毒物，只要对生物体有毒，一定会对发光细菌发生影响，并灵敏地从发光细菌的发光强弱上反映出来。
4、检测灵敏度高现代光子检测技术能检测光强非常微弱的光和微小的光强变化。所以用发光细菌的发光检测对毒物的反应极其灵敏，比一般生物细胞的反应要灵敏几个数量级。本方法采用的青海弧菌Q67菌株对各类毒物均有灵敏的反应。
5、可检测的物质的范围宽广本方法所用的青海弧菌Q67菌株是淡水发光菌，在淡水，即在不含氯化钠的水中就能生长和发光，因此，用青海弧菌Q67菌株检测待测样品的综合毒性时，待测样品中无需添加氯化钠，使可检测的物质包括那些理化特性会受氯化钠影响的物质，扩大了可检测的物质的范围。若用海洋发光菌，则需在样品中添加氯化钠至3％的终浓度，如此高浓度的氯化钠会改变有的样品的理化特性，从而影响到检测结果的正确性。例如，在牛奶中加入3％的氯化钠，会使牛奶凝乳变性。因此，海洋发光菌是根本无法直接用于牛奶检测的。
具体实施例方式
现结合实施例详细说明本发明的技术方案。所有的实施例完全按照上述的检测方法的操作步骤进行操作。以下仅罗列每个步骤的关键技术数据。
实施例1 检测新鲜牛奶的综合毒性本实施例依次检测三个牌号的三种新鲜牛奶的综合毒性，三种新鲜牛奶分别为1、无抗生素光明牛奶，2、蒙牛纯鲜奶，和3、伊利纯鲜奶。
1、检测无抗生素光明牛奶的综合毒性第2步中，鲜奶样品是无抗生素光明牛奶，对照选用无抗生素光明牛奶；第3步中，算出的相对发光强度为112％，查对表1，得检测的无抗生素光明牛奶的综合毒性安全。
2、检测蒙牛纯鲜奶的综合毒性第2步中，鲜奶样品是蒙牛纯鲜奶，对照选用无抗生素光明牛奶；第3步中，算出的相对发光强度为118％，查对表1，得检测的蒙牛纯鲜奶的综合毒性安全。
3、检测无抗生素光明牛奶的综合毒性第2步中，鲜奶样品是伊利纯鲜奶，对照选用无抗生素光明牛奶；第3步中，算出的相对发光强度为112％，查对表1，得检测的伊利纯鲜奶的综合毒性安全。
实施例2 检测鲜猪肉的综合毒性本实施例依次检测三个牌号的五种鲜猪肉的综合毒性，五种鲜猪肉分别为1、国家质量体系认证的鲜猪肉，2、放心猪肉1，3、放心猪肉2，4、从农贸市场购买的普通猪肉1，和从农贸市场购买的普通猪肉2。
1、检测国家质量体系认证的鲜猪肉的综合毒性第2步中，鲜肉样品是国家质量体系认证的鲜猪肉，对照选用国家质量体系认证的鲜猪肉；第3步中，算出的相对发光强度为99％，查对表1，得检测的国家质量体系认证的鲜猪肉的综合毒性安全。
2、检测放心猪肉1的综合毒性第2步中，鲜肉样品是放心猪肉1，对照选用国家质量体系认证的鲜猪肉；第3步中，算出的相对发光强度为85％，查对表1，得检测的放心猪肉1的综合毒性可疑。
3、检测放心猪肉2的综合毒性第2步中，鲜肉样品是放心猪肉2，对照选用国家质量体系认证的鲜猪肉；第3步中，算出的相对发光强度为93％，查对表1，得检测的放心猪肉2的综合毒性安全。
4、检测普通猪肉1的综合毒性第2步中，鲜肉样品是普通猪肉1，对照选用国家质量体系认证的鲜猪肉；第3步中，算出的相对发光强度为84％，查对表1，得检测的普通猪肉1的综合毒性可疑。
5、检测普通猪肉2的综合毒性第2步中，鲜肉样品是普通猪肉2，对照选用国家质量体系认证的鲜猪肉；第3步中，算出的相对发光强度为77％，查对表1，得检测的普通猪肉1的综合毒性不安全。
实施例3 检测鲜牛肉的综合毒性本实施例依次检测两个牌号的三种鲜牛肉的综合毒性，三种鲜牛肉分别为1、国家质量体系认证的鲜牛肉，2、普通牛肉1，和3、普通牛肉2。
1、检测国家质量体系认证的鲜牛肉的综合毒性第2步中，鲜肉样品是国家质量体系认证的鲜牛肉，对照选用国家质量体系认证的鲜牛肉；第3步中，算出的相对发光强度为109％，查对表1，得检测的普通牛肉1的综合毒性安全。
2、检测普通牛肉1的综合毒性第2步中，鲜肉样品是普通牛肉1，对照选用国家质量体系认证的鲜牛肉；第3步中，算出的相对发光强度为98％，查对表1，得检测的普通牛肉1的综合毒性安全。
3、检测普通牛肉2的综合毒性第2步中，鲜肉样品是普通牛肉2，对照选用国家质量体系认证的鲜牛肉；第3步中，算出的相对发光强度为89％，查对表1，得检测的普通牛肉2的综合毒性可疑。
权利要求
1.一种检测鲜肉食品综合毒性的方法，其特征在于，具体操作步骤第1步发光细菌的准备1.1分步发光细菌菌种采用我国独有的淡水发光细菌-青海弧菌Q67菌株，1.2分步培养基成分MgSO42.47g，MgCO30.79g，MgBr20.09g，MgCl20.109g，CaCO30.103g，KCl 0.122g，NaCl 8.29g，Mg(HC03)20.50g，酵母膏5g，胰胨5g，甘油3g，琼脂20g，溶于1000mL蒸馏水中，制成斜面培养基，121℃下灭菌20min，贮于4℃冰箱备用，1.3分步测试用菌液的制备将1.1分步中所述的青海弧菌Q67菌株的菌种移接到1.2分步中得到的斜面培养基上，15-25℃下培养12h-18h，此时青海弧菌Q67菌株的细菌发光明亮，用10ml生理盐水将菌苔从斜面培养基上轻柔冲刷下来，摇匀，用生理盐水调整菌液浓度，使菌液浓度OD600＝0.3，得测试用菌液，取0.1ml测试用菌液，加入置有2ml生理盐水的样品测试管中，用测光仪检测青海弧菌Q67菌株的细菌的发光，发光强度在200-500万光子/秒时，测试用菌液可以使用，生理盐水是浓度为0.85％的NaCl溶液；第2步鲜肉样品的准备取鲜肉样品50g，剪切成长约5cm，宽约3mm的肉丝，用50ml生理盐水浸泡15min，10000rpm的转速下离心10min，取上清液，作为样品上清液，备用，对照选用国家质量体系认证的免检鲜肉，取对照鲜肉样品50g，用上述样品处理方法同样处理，取上清液，作为对照上清液，备用；第3步发光细菌的发光检测取三个测试小杯，每杯加2ml第2步的得到的样品上清液，制成三个平行样，另取三个测试小杯，每杯加2ml第2步得到的对照上清液，制成三个平行样，以15s的时间间隔依次向各杯加0.2ml 1.3分步制得的测试用菌液，放置30min，用发光检测仪以15s的时间间隔依次测定各杯的发光强度，记录每杯的发光值，计算样品的三个平行样的平均发光值和对照的三个平行样的平均发光值，按下式计算相对发光强度
，根据算出的相对发光强度，查对表1，表1
得检测的鲜肉样品的综合毒性安全、不安全或可疑。
2.一种检测鲜奶食品综合毒性的方法，其特征在于，具体操作步骤第1步发光细菌的准备1.1分步发光细菌菌种采用我国独有的淡水发光细菌-青海弧菌Q67菌株，1.2分步培养基成分MgSO42.47g，MgCO30.79g，MgBr20.09g，MgCl20.109g，CaCO30.103g，KCl 0.122g，NaCl 8.29g，Mg(HCO3)20.50g，酵母膏5g，胰胨5g，甘油3g，琼脂20g，溶于1000mL蒸馏水中，制成斜面培养基，121℃下灭菌20min，贮于4℃冰箱备用，1.3分步测试用菌液的制备将1.1分步中所述的青海弧菌Q67菌株的菌种移接到1.2分步中得到的斜面培养基上，15-25℃下培养12h-18h，此时青海弧菌Q67菌株的细菌发光明亮，用10ml生理盐水将菌苔从斜面培养基上轻柔冲刷下来，摇匀，用生理盐水调整菌液浓度，使菌液浓度OD660＝0.3，得测试用菌液，取0.1ml测试用菌液，加入置有2ml生理盐水的样品测试管中，用测光仪检测青海弧菌Q67菌株的细菌的发光，发光强度在200-500万光子/秒时，测试用菌液可以使用，生理盐水是浓度为0.85％的NaCl溶液；第2步鲜奶样品的准备取鲜奶样品50ml，作为待测鲜奶，对照选用国家质量体系认证的无抗生素的免检鲜奶，取对照鲜奶样品50ml，作为对照鲜奶；第3步发光细菌的发光检测取三个测试小杯，每杯加2ml第2步的得到的待测鲜奶，制成三个平行样，另取三个测试小杯，每杯加2ml第2步得到的对照鲜奶，制成三个平行样，以15s的时间间隔依次向各杯加0.2ml 1.3分步制得的测试用菌液，放置30min，用发光检测仪以15s的时间间隔依次测定各杯的发光强度，记录每杯的发光值，计算样品的三个平行样的平均发光值和对照的三个平行样的平均发光值，按下式计算相对发光强度
，根据算出的相对发光强度，查对表1，表1
得检测的鲜奶样品的综合毒性安全、不安全或可疑。
全文摘要
一种检测鲜肉鲜奶食品综合毒性的方法，属食品安全和环境保护的技术领域。在给定的条件下，发光细菌的发光强度会随外界毒物的含量而改变，检测鲜肉鲜奶食品综合毒性，包括发光细菌的准备、检测样品的准备、发光细菌的发光检测三个步骤。发光细菌是淡水发光细菌——青海弧菌Q67菌株。将鲜肉食品样品的浸出液或鲜奶食品的样品与青海弧菌Q67菌株的菌液混合均匀，通过检测的青海弧菌Q67菌株的发光强度，判定所测的鲜肉鲜奶食品的样品中所有毒物合在一起的综合毒性，给出所测的鲜肉鲜奶食品可否安全食用的结论。有快速、能检测待测样品的综合毒性、检测灵敏度高和可检测的物质的范围宽广等优点。
文档编号G01N33/12GK101071103SQ20071004207
公开日2007年11月14日 申请日期2007年6月15日 优先权日2007年6月15日
发明者朱文杰, 徐亚同, 吴淑杭, 熊蔚蔚 申请人:华东师范大学