专利名称：制作用于平板扩散法的斑孔凝胶板的模具的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及用于制作斑孔凝胶板的模具，具体涉及一种制作用于平板扩散法的 斑孔凝胶板的模具。
背景技术：
平板扩散法是一种经典的实验方法，被广泛应用于众多生物医学试验，如单向、 双向免疫扩散沉淀试验，抗生素效价、抗生素抑菌试验，以及酶或蛋白质活性鉴定试验等等 。这些试验均是在有斑孔(若干微孔)的凝胶板上进行，通过对孔中加样后，样品向孔周边 凝胶中扩散，与凝胶中所含的相关物质发生接触，若产生生物学反应，则形成环形的反应带 ，即可直接或特殊显色得以观察。由于斑孔凝胶板是平板扩散法的载体，因此，斑孔凝胶板 的制作质量决定了实验的最终观察效果，同时，制作斑孔凝胶板的方便性与安全性也是实验 人员关心的问题。
目前制作斑孔凝胶板的方法是使用人工挖孔法，即先将凝胶倒入培养皿中，等凝固后， 再使用打孔器打孔。由于大多数打孔器是使用管状物来打孔，有时甚至使用针或者刀等利器 来打孔。这些方法有以下弊端1.打孔时很容易使孔的底部发生破损和/或孔周边发生裂缝 ，使加入的样品在凝胶底部扩散或者沿着裂缝向外周扩散，导致样品丢失，使试验结果的数 据不准确，甚至试验失败；2.受人为因素影响大。由于是多个微孔并且要求所述微孔在凝胶 板上均匀分布，在打孔过程中，因为个体的差异，在打孔的时候不能保证所述微孔均匀分布 ，不仅不美观，而且不能保证所述微孔的深度一致，造成试验结果不精确。3.操作不方便。 需要多道工序完成制作凝胶板及打孔工作，特别是当有些胶具有毒性时，繁琐的工序就会大 大增加危害的可能性。
此外根据不同实验的需求，可能要采用不同性质的胶(如聚丙烯酰胺凝胶，琼脂 糖凝胶等，并加入一些相关试剂，如抗生素，营养成分，酶或其它蛋白等)，而且对浓度 有严格要求。因此，在制胶板过程中，无论胶的浓度如何，除打好孔外，还要确保胶面平整 ，这一点也是获取高质量胶板的基本要素之一。目前保持胶面平整的方法，是采用传统的水 压法，以给胶面均匀而轻微的压力，避免胶面产生皱褶。S卩配置凝胶时，在凝胶表面加水 。这种方法极易使凝胶的浓度稀释，而使凝胶微孔孔径发生变化而不能满足实验的要求，同时还会浪费试剂。
因此，需要一种制作安全、方便、质量高的凝胶板的模具。 发明内容
本实用新型针对现有技术的不足，提供一种制作用于平板扩散法的斑孔凝胶板的模具。 采用本实用新型模具可以方便、安全的制作出微孔的深度一致、分布均匀、胶面平整、微孔 底部的凝胶板没有破损和裂纹的高质量斑孔凝胶板。
实现本实用新型的技术方案所述模具包括底板槽、垫片和制孔盖，所述底板槽侧壁上 具有至少两个向上并向底板槽外倾斜的突出槽，突出槽的槽口与底板槽内表面连通，突出槽 的上端口高于底板槽的上缘；所述垫片边缘具有用于与底板槽的突出槽让位的缺口，垫片中 间有若干个通孔，所述通孔与制孔盖的凸起相对设置；制孔盖底面设有向下延伸的凸起，制 孔盖上表面设有手柄。
所述垫片与制孔盖为分别设置或垫片与制孔盖的底面一体连接。
所述垫片的直径大于底板槽的直径。
突出槽高于底板槽的侧壁，等分侧壁的圆周。
所述底板槽、制孔盖采用透明的玻璃材料或有机玻璃材料。
所述底板槽及其相应的垫片和制孔盖的底平面形状可为圆形或长方形或正方形或椭圆形
所述制孔盖凸起为圆柱形或锥形或横截面为花瓣型或纵截面为U形。 所述制孔盖凸起的高度小于底板槽内侧壁高与垫片厚度相加的高度。 由于采用上述技术方案，在模具的底板槽侧壁设置两个以上的突出槽，突出槽的槽口与 底板槽内表面连通，既用于加入凝胶液，也可排气，使加料简单、方便，避免加液时的试剂 抛洒。在底板槽与制孔盖之间具有加凝胶液的空间，凝胶液从突出槽加入后，凝胶胶面在垫 片和制孔盖的轻微的压力下，能够保证胶面的平整。采用本实用新型所述模具制作凝胶板时 ，先将垫片放在底板槽上，再将制孔盖放在垫片上，制孔盖的凸起穿过垫片上的通孔位于底 板槽中。将凝胶液加入到底板槽内，这时制孔盖的凸起位于凝胶液中，当凝胶液凝固后，凸 起使凝胶成孔，握持手柄提起制孔盖，凸起同时被制孔盖带走，再取走垫片，在凝胶板上原 来凸起的位置形成孔深一致、分布均匀的斑孔(微孔)。所得凝胶板微孔的孔深一致，孔底 没有破损和裂纹，即得到胶面平整的高质量的凝胶板。因此，采用本实用新型制作的斑孔凝 胶板有操作简单、安全方便和质量高的优点。
本实用新型所述模具采用玻璃或有机玻璃等材料制作，其表面光滑，既便于胶凝固后拆、透明材质亦便于观察和控制制胶的质量。
图l为本实用新型一种实施例；
图2为本实用新型另一种实施例；
图3为本实用新型的平面示意图。
附图中，l为底板槽，2为突出槽，2a为突出槽的上端口， 3为垫片，3a为通孔，4为缺口 ，5为制孔盖，6为手柄，7为凸起。
具体实施方式
实施例l
参照图1和图3，制作用于平板扩散法的斑孔凝胶板的模具的模具包括底板槽l和制孔盖 5，底板槽l可以采用容量器皿状，底板槽1和制孔盖5均采用透明的玻璃材料，或有机玻璃材 料，便于观察凝胶板的制作过程。底板槽1采用的玻璃或有机玻璃材料厚度为1.3 mm，底板 槽外形为平底圆形容器，直径为70mm，其内侧壁高度约2.5 mm，相应的垫片和制孔盖的底平 面形状还也可采用长方形、正方形或椭圆形，即根据需要制作的凝胶板外形选用的不同形状 。所述底板槽侧壁上具有至少两个突出槽2，突出槽的槽口与底板槽内表面连通，突出槽的 上端口2a高于底板槽的上缘，用于加入凝胶液。突出槽2可以为2个、3个、4个或5个，所述 突出槽等分侧壁的圆周，便于从不同的方向向底板槽内加入凝胶液，使凝胶液可以均匀的加 入，避免气泡产生。本实用新型采用三个突出槽，三个突出槽位于底板槽侧壁上，等分侧壁 的圆周。突出槽高于底板槽的侧壁，突出槽向上并向底板槽外倾斜，突出槽具有添加凝胶、 排气、固定垫片作用，并且还可以充当缓冲池。本实施例突出槽向外倾斜的角度为60。，高 度为5mm，槽口宽为15 mm。制孔盖与底板槽之间是有一垫片3，所述垫片与制孔盖为分别设 置或垫片与制孔盖的底面一体连接，本身实施例的垫片与制孔盖为分别设置。所述垫片3边 缘具有用于与底板槽的突出槽让位的缺口4，让位的缺口4与突出槽间隙配合，使垫片能被突 出槽卡住而不发生旋转。垫片的厚度为2.5mm，直径80 mm，垫片的直径大于底板槽的直径， 用于盖于底板槽上，封闭底板槽的上平面，并且便于在制作过程中的取、放。垫片中间具有 若干个通孔3a，通孔与制孔盖的凸起的数量和位置相对应。所述通孔3a为四个孔，孔径为 5mm。制孔盖底面设有向下延伸的若干个凸起7，用于凝胶板的制孔。本实施例采用4个凸起 ，凸起的纵截面为U形，高度为4mm，根部直径4.9mm，等分于盖板中心17 mm半径的圆弧上， 凸起的直径略小于垫片中间的通孔，使凸起能无间隙地插进并穿过垫片上的各通孔。凸起的 下部略小于上部，用于减少在制作凝胶板后，凸起从凝胶板中退出的阻力，便于将制盖板从凝胶板中取出。制孔盖上表面设有手柄6，在凝胶板制作完成后，拉动手柄可以提起制孔盖 。所述制孔盖的凸起的高度小于底板槽槽高与垫片厚度相加的高度，在制作凝胶板上的斑孔 时，斑孔底部的凝胶板不会损坏。本实施例所述结构命名为模具l。 实施例2
参见图2，实施例2与实施例1的不同之处是垫片3与制孔盖5的底面一体连接，其余结构 、使用效果和功能均相同。本实施例所述结构为模具2。
底板槽及其相应的垫片和制孔盖的底平面形状采用圆形或长方形或正方形或椭圆形以及 制孔盖凸起为圆柱形或锥形或横截面为花瓣型或纵截面为U形，同样可以达到与本实用新型 所述的效果。
本实用新型所述模具的大小、所采用材料的厚度、微孔的数目、深度、孔径等，可根据 不同的实验要求设置。
采用本实用新型模具1或2制作聚丙烯酰胺凝胶板的过程如下
使用前先将模具清洗干净，高温灭菌，待模具干燥之后，将底板槽平放，合好垫片和制 孔盖。在一干净的小烧杯中配制10ml聚丙烯酰胺凝胶，凝胶成分如下去离子水(ddH20) 3.2ml， 30。/。丙烯酉先胺4ml， 1. 5mol/L、 pH=8. 8的Tris-HC12. 6ml， 10。/。的SDS 0. lml， 10%过硫 酸铵O. lml， TEMED 0.005ml。混匀之后，从底板槽的突出槽缓慢倒进底板槽内，观察，尽量 避免产生气泡。加至凝胶的液面与垫片下底面接触，利用制孔盖和垫片的自身重量使凝胶表 面有轻微的压力，以保证胶面的平整。室温下静置或者37度温箱孵育至凝胶凝固成型，按住 垫片，取下制孔盖，再移走垫片，既得孔深一致、孔底没有破损和裂纹、平整美观的斑孔凝 胶板。所得凝胶板用于后续试验。
实验斑孔扩散法检测溶菌酶的活性
采用上述方法制备斑孔凝胶板(其中，按实验要求，配胶时加入肽聚糖0.0264ml)。 在斑孔加入阳性对照鸡溶菌酶，阴性对照小牛血清白蛋白，以及实验过程提取的上清液l和 上清液2。置于37。C的湿盒中孵育16小时，取出凝胶置于染液缸中，加入染色液(1% K0H， 0.01%的亚甲基蓝)染色30min，倒去染液，反复用去离子水清洗，直至结果清晰(溶菌酶 的活性与孔径周围退色程度成正比，蓝色背景为对照)。
实验过程中，样品在凝胶底部没有扩散现象，试验结果准确、清晰。 以上所述仅为本实用新型的较佳实施例，并非用来限定本实用新型的实施范围；如果不 脱离本实用新型的精神和范围，对本实用新型进行修改或者等同替换的，均应涵盖在本实用 新型权利要求的保护范围当中。
权利要求1.一种制作用于平板扩散法的斑孔凝胶板的模具，其特征在于所述模具包括底板槽、垫片和制孔盖，所述底板槽侧壁上具有至少两个向上并向底板槽外倾斜的突出槽，突出槽的槽口与底板槽内表面连通，突出槽的上端口高于底板槽的上缘；所述垫片边缘具有用于与底板槽的突出槽让位的缺口，垫片中间有若干个通孔，所述通孔与制孔盖的凸起相对设置；制孔盖底面设有向下延伸的凸起，制孔盖上表面设有手柄。
2 根据权利要求l所述的制作用于平板扩散法的斑孔凝胶板的模具， 其特征在于所述垫片与制孔盖为分别设置或垫片与制孔盖的底面一体连接。
3 根据权利要求1或2所述制作用于生物实验的斑孔凝胶板的模具， 其特征在于所述垫片的直径大于底板槽的直径。
4 根据权利要求l所述制作用于生物实验的斑孔凝胶板的模具，其特 征在于所述底板槽、制孔盖采用透明的玻璃材料或有机玻璃材料。
5 根据权利要求l所述制作用于生物实验的斑孔凝胶板的模具，其特 征在于所述底板槽及其相应的垫片和制孔盖的底平面形状可为圆形或长方形或正方形或椭 圆形。
6 根据权利要求l所述制作用于生物实验的斑孔凝胶板的模具，其特 征在于所述制孔盖凸起为圆柱形或锥形或横截面为花瓣型或纵截面为U形。
7 根据权利要求l所述制作用于生物实验的斑孔凝胶板的模具，其特 征在于所述制孔盖凸起的高度小于底板槽内侧壁高与垫片厚度相加的高度。
专利摘要本实用新型涉及制作用于平板扩散法的斑孔凝胶板的模具，所述模具包括底板槽、垫片和制孔盖，所述底板槽侧壁上具有至少两个向上并向底板槽外倾斜的突出槽，突出槽的槽口与底板槽内表面连通，突出槽的上端口高于底板槽的上缘；所述垫片边缘具有用于与底板槽的突出槽让位的缺口，垫片中间有若干个通孔，所述通孔与制孔盖的凸起相对设置；制孔盖底面设有向下延伸的凸起，制孔盖上表面设有手柄。采用本实用新型模具可以方便、安全的制作出微孔的深度一致、分布均匀、胶面平整、微孔底部的凝胶板没有破损和裂纹的高质量斑孔凝胶板。
文档编号G01N37/00GK201421458SQ20092030481
公开日2010年3月10日 申请日期2009年6月22日 优先权日2009年6月22日
发明者国 卫, 彦 李, 宁 王, 江 郑, 陈元树 申请人:中国人民解放军第三军医大学第一附属医院