用于检测补体结合性抗体的方法和组合物的制作方法

专利名称：用于检测补体结合性抗体的方法和组合物的制作方法
用于检测补体结合性抗体的方法和组合物
背景技术：
补体系统是血液中的一组复杂的蛋白，其与抗体和其它因子协同地作为免疫反应、变态反应、免疫化学反应和免疫病理学反应的介质起重要作用。补体系统的活化可以导致广范围的反应，诸如不同种类的细胞、细菌和原生动物的调理作用和裂解，病毒的失活， 和炎性过程的直接介导。通过它的几种组分的激素-样活性，补体系统可以募集和支持其它体液和细胞效应系统的参与。这些又可以诱导白细胞的定向迁移，触发来自肥大细胞的组胺释放，并刺激溶酶体组分从吞噬细胞的释放。补体系统由至少20种不同的血浆蛋白组成，所述蛋白能彼此、与抗体和与细胞膜相互作用。当活化时，这些蛋白中的许多与其它蛋白相结合形成酶，以切割和活化系统中的其它蛋白。这些蛋白的相继活化(称作补体级联)遵循2个主要途径；经典途径和替代途径。两个途径都集中在C3，并使用共同的末端主干(terminal trunk)，其导致细胞裂解、细菌调理作用和裂解、或病毒灭活。经典途径可以被抗原-抗体复合物、聚集的免疫球蛋白和非免疫学物质(诸如DNA 和胰蛋白酶-样酶)活化。活化的经典途径连续地包含4种命名为Cl、C4、C2和C3的组分。这些组分可以分成2个功能单位Cl或识别单位；和C4、C2和C3或活化单位。5个命名为C5、C6、C7、C8和C9的额外组分定义膜攻击复合物(MAC)，形成两个途径共有的末端主干，后者导致细胞裂解。替代途径使用因子B，并绕过C1-C4-C2步骤，在C3处活化。经典途径从Cl-复合物开始，所述Cl-复合物由一个Clq分子和2个都具有Clr 和Cls的分子组成。通过Clq对来自类别M和G的抗体(与抗原复合)的结合，或通过Clq 对病原体表面的结合，触发Cl-复合物的活化。Clr和Cls都是丝氨酸蛋白酶。Clq的结合导致Clq分子的构象变化，这又导致2个Clr分子的活化，随后是Cls分子的活化。为了防止该级联的自发活化，用Cl-抑制剂(一种丝氨酸蛋白酶抑制剂)抑制Clr和Cls。一旦被活化，Cl-复合物结合并切割C2和C4，生成Ch和C4b。C2a和C4b然后结合，以形成C4bh 复合物，称作C3-转变酶。C3-转变酶的生成导致C3被切割成C3a和C3b ；后者连接Ch和 C4b (C3转变酶)，以生成C5转变酶，它是MAC的最初组分。补体途径的活化的研究和测量，可以提供许多可能的生物学障碍的指征。补体途径已经涉入发病机制或广谱的人疾病和病理学病症的症候学。这样的疾病包括几种类型的免疫复合物疾病、自身免疫病(尤其是系统性红斑狼疮)和感染性疾病(诸如发现涉及革兰阴性细菌、病毒、寄生物、真菌的感染的那些)和各种皮肤疾病、肾脏疾病和血液病。有些障碍可能是由于患者的补体不足。本领域需要用于以快速、灵敏且特异性的方式检测患者样品中的补体结合性抗体的方法，尤其在精确地且决定性地区分特定抗原的方面。本发明解决了这些需要。相关文献美国专禾Ij号 6，514，714 和 6，150，122 ;Wahrmann 等人，J. Immunol. Methods. 275 (1-2) 149-60 (2003 ；禾口 Smith 等 A, Am. J. Transplant. 7(12)2809-15(2007)。

发明内容
本发明提供了用于使用补体因子Clq灵敏且特异性地检测生物样品中的补体结合性抗体的方法，所述补体因子Clq包括在生物样品中存在的自体补体因子Clq和结合自体补体因子Clq的可检测地标记的抗体、外源性人补体因子Clq和结合外源性人补体因子 Clq的可检测地标记的抗体、可检测地标记的外源性人补体因子Clq、或自体补体因子Clq 和外源性人补体因子Clq的组合。本发明也表征了用于本发明方法中的试剂盒、系统和装置。在一个方面，本发明提供了用于测定来自受试者的生物样品中是否存在特异性地结合目标抗原的补体结合性抗体的方法，所述方法通过下述进行使其上面固定有目标抗原(AgI)的固体基质接触来自受试者的生物样品和补体因子Clq，其中所述接触的时间足以允许样品中的抗-AgI补体结合性抗体结合AgI，并允许补体因子Clq结合抗-AgI补体结合性抗体；使用能特异性地结合补体因子Clq的至少一种可检测地标记的配体温育固体基质，所述补体因子Clq结合在与AgI结合的抗-AgI补体结合性抗体上；并检测是否存在结合到补体因子Clq上的可检测地标记的配体，以测定生物样品中是否存在特异性地结合 AgI的补体结合性抗体。在有些实施方案中，所述补体因子Clq是自体补体因子Clq。在其它实施方案中， 所述补体因子Clq是外源性补体因子Clq。在其它实施方案中，所述补体因子Clq是自体补体因子Clq和外源性补体因子Clq的组合。在有些实施方案中，所述固体基质是多孔板。在其它实施方案中，所述固体基质是膜。在其它实施方案中，所述固体基质是微粒，如聚苯乙烯珠、乳胶珠或磁珠。在有些实施方案中，所述固体基质是细胞。在其它实施方案中，所述固体基质是细胞膜。在有些实施方案中，所述生物样品是血清、血液、唾液、血浆或尿。在有些实施方案中，所述可检测地标记的配体是可检测地标记的抗体或其结合片段。在有些实施方案中，所述可检测标记是荧光染料、生色团、酶、连接分子、生物素分子、电子供体、电子受体、染料、金属或放射性核素。在另一个方面，本发明提供了用于测定来自受试者的生物样品中是否存在特异性地结合目标抗原的补体结合性抗体的方法，所述方法通过下述进行使其上面固定有目标抗原(AgI)的固体基质接触来自受试者的生物样品和直接标记的外源性补体因子Clq，其中所述接触的时间足以允许样品中的抗-AgI补体结合性抗体结合AgI，并允许所述直接标记的外源性补体因子Clq结合抗-AgI补体结合性抗体；并检测是否存在结合到抗-AgI补体结合性抗体上的直接标记的外源性Clq，以测定生物样品中是否存在特异性地结合AgI 的补体结合性抗体。在有些实施方案中，所述固体基质是多孔板。在其它实施方案中，所述固体基质是膜。在其它实施方案中，所述固体基质是微粒，如聚苯乙烯珠、乳胶珠或磁珠。在有些实施方案中，所述固体基质是细胞。在其它实施方案中，所述固体基质是细胞膜。在有些实施方案中，所述生物样品是血清、血液、唾液、血浆或尿。在有些实施方案中，所述直接标记的外源性Clq被荧光染料、生色团、酶、连接分子、生物素分子、电子供体、电子受体、染料、金属或放射性核素标记。
在另一个方面，本发明提供了用于测定来自受试者的生物样品中是否存在特异性地结合人白细胞抗原(HLA)的补体结合性抗体的方法，所述方法通过下述进行用不同亚类的微粒的集合和补体因子Clq温育来自受试者的生物样品，其中每个微粒包被有不同的纯化的HLA亚型，所述HLA亚型源自呈递相同HLA的细胞群体，且其中所述温育的时间足以允许生物样品中的抗-HLA补体结合性抗体结合HLA，并允许所述补体因子Clq结合生物样品中的抗-HLA补体结合性抗体；用能特异性地结合补体因子Clq的至少一种可检测地标记的配体温育所述微粒，所述补体因子Clq结合在与HLA结合的抗-HLA补体结合性抗体上； 并检测是否存在结合到补体因子Clq上的可检测地标记的配体，以测定是否存在补体结合性抗体。在有些实施方案中，所述补体因子Clq是自体补体因子Clq。在其它实施方案中， 所述补体因子Clq是外源性补体因子Clq。在其它实施方案中，所述补体因子Clq是自体补体因子Clq和外源性补体因子Clq的组合。在有些实施方案中，所述微粒是琼脂糖珠。在其它实施方案中，所述微粒是乳胶珠。在其它实施方案中，所述微粒是磁珠。在有些实施方案中，所述生物样品是血清、血液、 唾液、血浆或尿。在有些实施方案中，所述可检测地标记的配体是可检测地标记的抗体或其结合片段。在有些实施方案中，所述可检测标记是荧光染料、生色团、酶、连接分子、生物素分子、电子供体、电子受体、染料、金属或放射性核素。在有些实施方案中，所述检测是通过流式细胞术。在另一个方面，本发明提供了用于测定来自受试者的生物样品中是否存在特异性地结合人白细胞抗原(HLA)的补体结合性抗体的方法，所述方法通过下述进行用不同亚类的微粒的集合和直接标记的外源性补体因子Clq温育来自受试者的生物样品，其中每个微粒包被有不同的纯化的HLA亚型，所述HLA亚型源自呈递相同HLA的细胞群体，且其中所述温育的时间足以允许生物样品中的抗-HLA补体结合性抗体结合HLA，并允许所述补体因子Clq结合生物样品中的抗-HLA补体结合性抗体；并检测是否存在结合到抗-HLA补体结合性抗体上的直接标记的外源性补体因子Clq，以测定生物样品中是否存在特异性地结合 HLA的补体结合性抗体。在有些实施方案中，所述微粒是琼脂糖珠。在其它实施方案中，所述微粒是乳胶珠。在其它实施方案中，所述微粒是磁珠。在有些实施方案中，所述生物样品是血清、血液、 唾液、血浆或尿。在有些实施方案中，所述直接标记的外源性Clq被荧光染料、生色团、酶、 连接分子、生物素分子、电子供体、电子受体、染料、金属或放射性核素标记。在有些实施方案中，所述检测是通过流式细胞术。在另一个方面，本发明提供了用于测定来自受试者的生物样品中是否存在特异性地结合目标抗原的补体结合性抗体的试剂盒，所述试剂盒包括其上面固定有目标抗原 (AgI)的固体基质；能特异性地结合补体因子Clq的可检测地标记的配体；和用于测定来自受试者的生物样品中是否存在针对目标抗原的补体结合性抗体的说明书。在有些实施方案中，所述固体基质是多孔板。在其它实施方案中，所述固体基质是膜。在其它实施方案中，所述固体基质是微粒，诸如琼脂糖珠、聚苯乙烯珠、乳胶珠或磁珠。 在有些实施方案中，所述固体基质是细胞。在其它实施方案中，所述固体基质是细胞膜。在有些实施方案中，所述生物样品是血清、血液、唾液、血浆或尿。在有些实施方案中，所述可检测地标记的配体是可检测地标记的抗体或其结合片段。在有些实施方案中，所述可检测标记是荧光染料、生色团、酶、连接分子、生物素分子、电子供体、电子受体、染料、金属或放射性核素。在另一个方面，本发明提供了用于测定来自受试者的生物样品中是否存在特异性地结合目标抗原的补体结合性抗体的试剂盒，所述试剂盒包括其上面固定有目标抗原 (AgI)的固体基质；能结合补体结合性抗体的直接标记的外源性Clq ；和用于测定来自受试者的生物样品中是否存在针对目标抗原的补体结合性抗体的说明书。在有些实施方案中，所述固体基质是多孔板。在其它实施方案中，所述固体基质是膜或细胞。在其它实施方案中，所述固体基质是微粒，诸如琼脂糖珠、聚苯乙烯珠、乳胶珠或磁珠。在其它实施方案中，所述固体基质是细胞膜。在有些实施方案中，所述生物样品是血清、血液、唾液、血浆或尿。在有些实施方案中，所述直接标记的外源性Clq被荧光染料、生色团、酶、连接分子、生物素分子、电子供体、电子受体、染料、金属或放射性核素标记。在另一个方面，本发明提供了用于测定来自受试者的生物样品中是否存在针对人白细胞抗原(HLA)的补体结合性抗体的试剂盒，所述试剂盒包括微粒亚类的集合，其中每个微粒亚类包被有不同的纯化的HLA，以代表单个细胞系或多个细胞系的HLA抗原群体，使得该集合模仿正常人群体中的HLA分布；能特异性地结合补体因子Clq的可检测地标记的配体；和用于测定来自受试者的样品中是否存在针对HLA的补体结合性抗体的说明书。在有些实施方案中，所述微粒是琼脂糖珠、乳胶珠、磁珠或聚苯乙烯珠。在有些实施方案中，所述生物样品是血清、血液、唾液、血浆或尿。在有些实施方案中，所述可检测地标记的配体是可检测地标记的抗体或其结合片段。在有些实施方案中，所述可检测标记是荧光染料、生色团、酶、连接分子、生物素、电子供体、电子受体、染料、金属或放射性核素。在另一个方面，本发明提供了用于测定来自受试者的生物样品中是否存在针对人白细胞抗原(HLA)的补体结合性抗体的试剂盒，所述试剂盒包括微粒亚类的集合，其中每个微粒亚类包被有不同的纯化的HLA，以代表单个细胞系或多个细胞系的HLA抗原群体，使得该集合模仿正常人群体中的HLA分布；能结合补体结合性抗体的直接标记的外源性Clq ； 和用于测定来自受试者的样品中是否存在针对HLA的补体结合性抗体的说明书。在有些实施方案中，所述微粒是琼脂糖珠、乳胶珠、磁珠或聚苯乙烯珠。在有些实施方案中，所述生物样品是血清、血液、唾液、血浆或尿。在有些实施方案中，所述直接标记的外源性Clq被标记荧光染料、生色团、酶、连接分子、生物素、电子供体、电子受体、染料、 金属或放射性核素。本领域技术人员在阅读下面更充分地描述的本发明的细节后，会明白本发明的这些和其它目的、优点和特征。


当结合附图阅读时，从下面的详细描述可以最好地理解本发明。应当强调，根据普通实践，附图的不同部件不是按规定比例。相反，为了清楚，不同部件的尺度被任意放大或缩小。附图中包括下述图。图1提供了本公开内容的一个实施方案的一般示意图。使其上面固定有抗原或单个可辨别的目标抗原(AgI)的固体基质接触疑似含有抗-AgI补体结合性抗体(CFAb)的生物样品。如图所示，所述样品还可能包括非-补体结合性抗体(非-CFAb)以及特异性地结合相同样品中的补体结合性抗体的自体和/或外源性Clq。在温育后，如果存在的话， 所述抗-AgI补体结合性抗体特异性地结合固定化的Agl，且所述Clq特异性地结合结合的抗-AgI补体结合性抗体。使所述固体基质接触特异性地结合人Clq的可检测地标记的抗-人Clq(抗-hClq)抗体。然后使用本领域已知的方法，测定所述可检测标记的存在。图2提供了本公开内容的另一个实施方案的一般示意图。在该实施方案中，在使所述固体基质接触样品之前，将可检测地标记的抗-Clq (抗-hClq)抗体直接加入到生物样品中。或者，可以将抗-hClq抗体和生物样品同时引入固体基质中。图3提供了本公开内容的另一个实施方案的一般示意图。在该实施方案中，在使所述固体基质接触样品之前，将可检测地标记的外源性Clq直接加入到生物样品中。或者， 可以将可检测地标记的外源性Clq和生物样品同时引入固体基质中，或可以在已经将生物样品引入基质中以后，将可检测地标记的外源性Clq引入固体基质中。在该实施方案中，象在其它实施方案中一样，使用本领域已知的方法，测定可检测地标记的外源性Clq的存在。图4提供了本公开内容的另一个实施方案的一般示意图。该实施方案类似于在图 1中所述的实施方案，且以类似的方式起作用。但是，在该实施方案中，其上面固定有抗原或单个可辨别的目标抗原(AgI)的固体基质是珠子、微珠、微球、微粒、细胞或膜。图5提供了本公开内容的另一个实施方案的示意图。该实施方案类似于在图2中所述的实施方案，且以类似的方式起作用。但是，在该实施方案中，其上面固定有抗原或单个可辨别的目标抗原(AgI)的固体基质是珠子、微珠、微球、微粒、细胞或膜。图6提供了本公开内容的另一个实施方案的示意图。该实施方案类似于在图3中所述的实施方案，且以类似的方式起作用。但是，在该实施方案中，其上面固定有抗原或单个可辨别的目标抗原(AgI)的固体基质是珠子、微珠、微球、微粒、细胞或膜。图7显示了一步法和两步法Clq的确定预期抗体的能力的对比。图8显示了使用常见的LMX-IgG试验不起作用的静脉内丙种球蛋白(IVIG)掺加 (spiking)的结果。图表示测试在缓冲液中稀释的和在IVIG中稀释的阴性对照血清，如在 IVIG体外抑制试验中所进行的，并使用抗-IgG标记的第二个步骤(当前的商业试验)。图9与图8相同，只是掺加患者血清。结果表明，如果将IVIG加入血清中，并用抗-IgG检测，不可能检测出患者抗体的抑制(在缓冲液中稀释的样品中可见)。图10显示了用于测定IVIG的抑制的补体-依赖性的细胞毒性(⑶C)试验和Clq 试验的对比。CDC试验是以前可用于该测定的唯一试验。图11显示了在成年人心脏患者血清上的实际的IVIG体外抑制Clq试验，表明如果治疗患者，仅AM能被IVIG抑制。图12A-12B显示了在监测成年人心脏患者血清(具有每个后续治疗)的AM抗体的变化中，LMX-Clq(图12A)和LMX-IgG(图12B)试验的对比。(与图11相同的患者)。图13A-i;3B显示了具有IVIG后续治疗的所有患者的抗体的监测，LMX-Clq(图 12A)和LMX-IgG(图12B)试验。注意到使用LMX-IgG试验，难以观察抗体的抑制/消失。图14显示了体外IVIG抑制Clq试验的结果，其类似于图11，但是所述结果来自儿科肾患者，表明B57、B58抗体会被IVIG有效地抑制。图15显示了体外和体内结果的并行对比。左图(与图14相同)显示了体外IVIG抑制，右图显示了相同血清日期的患者在IVIG输注之前和之后。图16A-N的表显示了 ClQ验证实验的结果。图17A-J的表显示了 ClQ-IVIG验证实验的结果。图18提供了直接标记的Clq试验的一般示意图。图19A-B提供了使用LMX-Clq试验的直接和间接标记Clq之间的对比。图20A-B提供了在体外LMX-Clq IVIG抑制试验中间接标记Clq (图20A)和在体外LMX-Clq IVIG抑制试验中直接标记Clq(图20B)之间的对比。定义术语“补体结合性抗体”是指这样的抗体，其特异性地结合病原体上的抗原，并启动免疫系统的补体级联，所述补体级联将携带抗原的靶物(例如，细胞)或病原体从生物体清除。一般而言，补体结合性抗体是被补体因子Clq识别和特异性地结合的IgM或IgG抗体。Clq补体因子是活化血清补体系统的Cl酶复合物的亚基。它由链A、B和C的9 个二硫键连接的二聚体组成，所述链具有由N-端非螺旋区、三螺旋(胶原的)区和C-端球状头组成的共同结构(Smith等人Biochem. J. 1994. 301 =249-256)。Clq参与宿主防御、 炎症、细胞凋亡、自身免疫、细胞分化、器官发生、冬眠和胰岛素抗性的肥胖症。已经在Clq 家族中鉴别出5个严格保守的残基(Kishore等人Trends in Immunology 2004. 25(10) 551-561)。每个Clq结构域表现出具有胶冻卷(jelly-roll)拓扑学的10链-夹心折叠， 其由2个5链β-折叠(A'、A、H、C、F)和(B'、B、G、D、E)组成，各自由反向平行链组成。 一般而言，Clq补体因子存在于动物的血清中，且对补体结合性抗体具有结合特异性和结合亲和力，所述补体结合性抗体也存在于动物的血清中。Clq补体因子与补体结合性抗体的结合活化免疫系统的补体级联。“自体的”是指源自相同患者样品，作为另一个组分。例如，提及的自体Clq是指， 所述Clq存在于相同受试者样品中，作为补体结合性抗体。“外源性的”是指不是天然地源自特定生物体的组分。例如，提及的外源性Clq是指，所述Clq源自不同于具有补体结合性抗体的受试者样品的生物体或系统。本发明的“亲和试剂”具有分析物结合域、部分或组分，其对靶分析物具有高结合亲和力。高结合亲和力是指至少约10_4M、通常至少约10、或更高、例如101或更高的结合亲和力。亲和试剂可以是多种不同类型的分子中的任一种，只要它表现出对靶蛋白的必要的结合亲和力(当作为标记的亲和配体存在时)。这样，所述亲和试剂可以是小分子或大分子配体。小分子配体是指大小范围为从约50至约10，000道尔顿、通常从约50至约5，000道尔顿、更通常从约100至约1000道尔顿的配体。大分子配体是指分子量大小为约10，000道尔顿或更大的配体。特别感兴趣的大分子亲和配体是抗体及其结合片段和模仿物。在抗体是亲和配体的情况下，它们可以源自多克隆组合物(使得存在特异性差异的抗体的异质群体各自用相同的标记核酸标记)或单克隆组合物(其中对靶蛋白具有相同特异性的相同抗体的同质群体各自用相同标记(例如，荧光团)来标记)。这样，亲和配体可以是单克隆、寡克隆和/或多克隆抗体。在其它实施方案中，亲和配体是抗体结合片段或模仿物，其中这些片段和模仿物具有对靶蛋白的必要的结合亲和力。例如，通过切割完整的蛋白，例如通过蛋白酶或化学切割，可以制备诸如Fv、(Fab’)2和Fab等抗体片段。也感兴趣的是重组产生的抗体片段， 诸如单链抗体或scFv，其中这样的重组产生的抗体片段保留上述抗体的结合特征。这样的重组产生的抗体片段通常至少包括主题抗体的VH和VL结构域，从而保留主题抗体的结合特征。使用任意方便的方法，诸如在美国专利号5，851，829和5，965，371 (它们的公开内容通过引用并入本文)中公开的方法，可以容易地制备本发明的这些重组产生的抗体片段或模仿物。上述的抗体、其片段和模仿物可以从商业来源得到，和/或使用任意方便的技术制备，其中产生多克隆抗体、寡克隆抗体、单克隆抗体、其片段和模仿物(包括其重组衍生物.)的方法是本领域技术人员已知的。“表位”是指特定B细胞和T细胞对其做出应答的抗原上的部位。该术语也与 “抗原决定簇”或“抗原决定基”互换使用。一个表位可以在该表位独有的空间构象中包含1个或多个氨基酸，诸如3个或更多个氨基酸。通常，一个表位包括至少5个这样的氨基酸，且更常见地，由至少8-10个这样的氨基酸组成。测定氨基酸的空间构象的方法是本领域已知的，且包括例如X-射线晶体学和2-维核磁共振。此外，使用本领域众所周知的技术，可以容易地鉴别给定蛋白中的表位。参见，例如，Geysen等人，Proc. Natl. Acad. Sci.USA(1984)81 :3998-4002(general method of rapidly synthesizing peptides to determine the location of immunogenic epitopes in a given antigen)；美国专利
4,708,871 (procedures for identifying and chemically synthesizing epitopes of antigens)；禾口 Geysen 等人,Molecular Immunology (1986) 23 :709-715 (technique for identifying peptides with high affinity for a given antibody)。在证实一禾中抗体阻断另一种抗体对靶抗原的结合能力的简单免疫测定中，可以鉴别识别相同表位的抗体。“特异性地结合”或“特异性的结合”是指抗体对特定抗原的高亲合力(avidity)和 /或高亲合力(affinity)结合。抗体对在特定抗原上的它的表位的结合亲合力(avidity) 和/或亲和力(affinity)大于相同抗体对不同表位(尤其是作为特定目标抗原的可能存在于结合的分子中或相同样品中的不同表位)的结合。但是，补体结合性抗体可以对不同目标抗原上的不同表位具有相同的或类似的亲合力(avidity)和/或亲和力(affinity)。 这样，“特异性地结合”或“特异性的结合”无意从结合超过一种目标抗原中排除给定的补体结合性抗体。特异性地结合目标多肽的抗体可以能够在弱的、仍然可检测的水平(例如，对目标多肽表现出的结合的10%或更低)结合其它多肽。通过例如使用适当的对照，可以容易地将这种弱结合或背景结合与特定抗体对目标多肽的结合辨别开。“可检测地标记的配体”或“可检测地标记的第二配体”是指具有连接的可检测标记的配体，其中所述配体能特异性地结合其它化合物。配体的实例包括、但不限于，保留结合特异性的抗体或抗体片段。通过化学缀合，可以连接可检测标记，但是在所述标记是多肽时，备选地通过基因工程技术来连接。用于产生可检测地标记的蛋白的方法是本领域众所周知的。可检测标记可以选自多种本领域已知的这样的标记，但是通常是放射性同位素、生色团、荧光团、荧光染料、酶(例如，辣根过氧化物酶)、接头分子、或发射出可检测信号(例如，放射性、荧光、颜色)或在所述标记暴露于它的底物后发射出可检测信号的其它部分或化合物。不同的可检测标记/底物对(例如，辣根过氧化物酶/ 二氨基联苯胺、 抗生物素蛋白/抗生蛋白链菌素、萤光素酶/萤光素)、用于标记抗体的方法和使用标记的第二抗体来检测抗原的方法，是本领域众所周知的。[注参见，例如，Harlow和Lane， 编·(Antibodies :A Laboratory Manual (1988) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.)]。“直接标记的Clq”是指具有连接的可检测标记的外源性Clq分子。通过化学缀合， 可以连接可检测标记，但是在所述标记是多肽时，备选地通过基因工程技术来连接。用于产生可检测地标记的蛋白的方法是本领域众所周知的。可检测标记可以选自多种本领域已知的这样的标记，但是通常是放射性同位素、生色团、荧光团、酶(例如，辣根过氧化物酶)、接头分子、或发射出可检测信号(例如，放射性、荧光、颜色)或在所述标记暴露于它的底物后发射出可检测信号的其它部分或化合物。不同的可检测标记/底物对(例如，辣根过氧化物酶/ 二氨基联苯胺、抗生物素蛋白/抗生蛋白链菌素、萤光素酶/萤光素)、用于标记抗体的方法和使用标记的第二抗体来检测抗原的方法，是本领域众所周知的。[注参见，例如，Harlow 禾口 Lane，编.(Antibodies :A Laboratory Manual(1988)Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N· Y·)]0当用于分离的化合物的上下文中时，本文使用的术语“分离的”是指处于这样的环境中的目标化合物，所述环境不同于所述化合物天然存在的环境。“分离的”意在包括这样的化合物，其在大量富含目标化合物的样品中，和/或其中所述目标化合物部分地或基本上被纯化。术语“分离的”包括这样的情况，其中化合物不伴有至少一些在它的天然状态通常伴有的物质。例如，关于多肽，术语“分离的”通常是指这样的氨基酸分子，其缺少(全部或一部分)它在自然界中通常伴有的序列；或指序列，如它在自然界中存在的，但是具有与它伴随的异源序列。本文使用的“纯化的”是指，所述物质包含至少约75% (按重量计算)的总蛋白， 至少约80%是优选的，且至少约90%是特别优选的。本文使用的术语“基本上纯的”是指从它的天然环境取出的化合物，且至少60%、优选75%和最优选90%缺少天然伴随它的其它组分。本文使用的“生物样品”是指从受试者分离的组织或流体样品，其在本发明的背景下，通常是指疑似含有抗-AgI补体结合性抗体的样品，该样品在任选的加工后，可以在体外试验中分析。典型的目标样品包括、但不一定限于，血液、血浆、血清、血细胞、尿、唾液和粘液。样品也包括体外细胞培养组分的样品，包括但不限于在培养基中培养细胞和组织得到的条件培养基，例如，重组细胞和细胞组分。本文使用的术语“人白细胞抗原系统”或“HLA”是指主要组织相容性复合物，其跨染色体6的短臂上的大约350万个碱基对。它可分成3个单独的区域，它们包含I类、II 类、和III类基因。在人类中，I类HLA复合物的长度是约20001Λ，且含有约20个基因。在 I类区域中存在编码确定地表征的I类MHC分子的基因，命名为HLA-A、HLA-B和HLA-C。另外，存在非经典的I类基因，它们包括HLA-E、HLA-F, HLA-G, HLA-H、HLA-J和HLA-X以及称作MIC的新家族。II类区域含有称作HLA-DP、HLA-DQ和HLA-DR基因座的3个基因。这些基因编码命名为HLA-DR、DP和DQ的经典II类MHC分子的α和β链。在人类中，还在II 类中鉴别出命名为DM、DN和DO的非经典的基因。III类区域含有超过36个基因的异质集合。本文使用的“纯化的HLA亚型”是指在下面的表中所述的HLA亚型的基本上纯化的抗原。当关于用“不同的HLA亚型”包被的微珠使用时，是指每个微珠群体包被有不同的 HLA抗原亚型。本文使用的“HLA抗原群体”是指在任意一个集合中发现的特定HLA抗原群体，其可以是天然存在的或非天然存在的，诸如在一个特定的细胞或组织类型中。本文使用的“正常人群体中的HLA分布”是指在正常人群体中发现的特定HLA抗原群体，诸如在一个特定的细胞或组织类型或个体中。术语“评估”包括任意形式的测量，且包括测定元件是否存在。术语“测定”、“测量”、“评价”、“评估”和“试验”互换使用，且包括定量和定性测定。评估可以是相对的或绝对的。“评估……的存在”包括，测定存在的某物的量，和/或测定它是否存在。本文使用的术语“测定”、“测量”、“评估”和“试验”互换使用，且包括定量和定性测定。术语“固体基质”是指在其上面可以固定化抗原和/或抗体的固体支持物。示例性的固体基质包括多孔平板、膜(包括硝酸纤维素膜和聚乙烯膜)、细胞和细胞膜、珠子、微粒、微球和微珠。本发明的方法可以用任意材料的微粒、微球、微珠或珠子实现，例如硅石， 金，乳胶，诸如聚苯乙烯、聚砜、聚乙烯或水凝胶等的聚合物。另外，微粒、微球、珠子或微珠可能是磁性的。进一步指出，可以撰写权利要求来排除任意的任选要素。这样，该陈述意在用作关于权利要求要素的陈述所使用的诸如“唯一”、“仅”等排它性术语或“阴性”限制的使用的前提基础。
具体实施例方式本发明提供了用于使用补体因子Clq灵敏且特异性地检测生物样品中的补体结合性抗体的方法，所述补体因子Clq包括在生物样品中存在的自体补体因子Clq和结合自体补体因子Clq的可检测地标记的抗体、外源性人补体因子Clq和结合外源性人补体因子 Clq的可检测地标记的抗体、可检测地标记的外源性人补体因子Clq、或自体补体因子Clq 和外源性人补体因子Clq的组合。本发明也表征了用于本发明方法中的试剂盒、系统和装置。在描述本发明之前，应当理解，本发明不限于所述的特定实施方案，因为它们当然可以变化。还应当理解，本文使用的术语仅仅是用于描述特定实施方案的目的，无意进行限制，因为本发明的范围仅由所附的权利要求书限定。在提供值的范围的情况下，应当理解，也具体地公开了在该范围的上限和下限之间的每个插入值(在下限单位的十分之一内，除非上下文另有明确指示)。在任意所述值或在所述范围内的插入值与任意其它所述值或在所述范围内的插入值之间的每个更小的范围，也被包括在本发明内。在该范围中可以独立地包括或排除这些更小的范围的上限和下限，且在本发明内还包括这样的每个范围，其中两个、任一个、或没有边界值被包含在更小的范围内，这适用于所述范围中的任意特别排除的边界值。在所述范围包括边界值之一或二者时，在本发明内还包括这样的每个范围，其排除那些边界值之一或二者。除非另有定义，在本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解相同的含义。尽管与本文所述那些类似或等效的任意方法和材料可以用于实践或测试本发明，现在描述一些可能的和优选的方法和材料。本文提及的所有出版物都通过引用并入本文，以公开和描述所述出版物引用的方法和/或材料。应当理解，在存在矛盾的情况下，本公开内容替代并入的出版物的任意公开内容。必须指出，如在本文中和在所附的权利要求书中所使用的，单数形式“一个”、“一种”和”该”包括复数指示物，除非上下文另有明确指示。因而，例如，提及的“细胞”包括多个这样的细胞，提及的“该化合物”包括一种或多种化合物和本领域技术人员已知的其等效物，以此类推。本文讨论的出版物仅因为它们在本申请的提交日之前的公开而提供。本文中的任何内容都不应当解释为承认，本发明因为先前发明而在这些出版物之前没有获得资格。此外，提供的出版物的日期可能不同于实际的出版日，后者可能需要独立地确认。检测方法如上面所总结的，本发明提供了测定生物样品中是否存在补体结合性抗体的方法。本发明的方法使用补体因子Clq(例如自体的或外源性的)来鉴别在相同生物样品中存在的特异性地结合目标抗原的补体结合性抗体。所述方法通常包括，使其上面固定有目标抗原(AgI)的固相支持物接触疑似含有特异性地结合目标抗原的补体结合性抗体的生物样品。如果存在，所述补体结合性抗体会特异性地结合固定化在固相支持物上的抗原，且Clq会结合所述补体结合性抗体。然后通过使固相支持物接触特异性地结合结合的Clq的可检测地标记的抗-Clq抗体，可以测定 Clq结合。或者，可以在试验中使用直接标记的Clq，且可以直接地测量该直接标记的Clq 的结合，无需使用可检测地标记的抗-Clq抗体。所述生物样品通常包括非-补体结合性抗体以及补体结合性抗体。本发明的一个优点是，它可以区分两种不同的抗体，无论是通过使用在相同样品中存在的Clq，还是通过使用外源性Clq。通过使用在相同样品中存在的Clq，所述试验提供有关的补体结合性抗体的灵敏且特异性的检测，这在使用异源的Clq(诸如源自兔血清的Clq)时不会发生。容易明白，本文所述的试验的设计可以进行大量变化，且许多形式是本领域已知的。下面的描述仅仅作为指导而提供，使用本领域众所周知的技术，本领域技术人员可以容易地改进所述方案。目标抗原(AgI)能引起抗体的抗原或抗原决定簇适用于本发明中。这样的抗原或抗原决定簇可以是，例如，源自正常人[例如，人白细胞抗原(HLA)]、细菌、病毒、寄生物或真菌来源、或者异常组织(诸如肿瘤抗原)的那些。抗原通常是可以针对它产生抗体的任意分子，包括需要佐剂的存在或与另一种分子缀合以诱导抗体形成的分子。抗原可以是肽或蛋白、碳水化合物、核酸或脂质。术语“抗原”也包括天然存在的分子的一部分，例如，蛋白的亚基、或含有功能结构域或生物学相关基序的蛋白片段。合适的抗原包括但不限于，细胞周期相关蛋白、 组织特异性蛋白、肿瘤标志物、细胞因子、主要组织相容性复合蛋白、热休克蛋白和病原体相关蛋白(其中病原体可能是细菌、病毒、真菌、原生动物、多细胞寄生物或朊病毒)、以及与输血抗原和组织分型有关的碳水化合物残基、脂多糖、鞘脂类等。示例性的抗原是引发保护动物免于疾病的免疫应答的那些。这种抗原的实例包括但不限于原生动物寄生物抗原、 蠕虫寄生物抗原、外寄生物抗原、真菌抗原、细菌抗原和病毒抗原。病毒抗原的实例包括源自下述的抗原，诸如乙型肝炎病毒(HBV)，人免疫缺陷病毒(HIV)、流感病毒A型、埃巴病毒(EBV)、单纯疱疹病毒(HSV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、 人巨细胞病毒(HCMV)、水痘带状疱疹病毒(VZV)和麻疹病毒。细菌抗原的实例包括、但不限于来自下述的抗原放线菌属、杆菌属、拟杆菌属、博德特菌属(Bordetella)、巴尔通体属(Bartonella)、疏螺旋体属(Borrelia)、布鲁杆菌属(Brucella)、弯曲杆菌属、 二氧化碳噬纤维菌属(Capnocytophaga)、梭菌属、棒杆菌属、考克斯体属(Coxiel la)、 嗜皮菌属、肠球菌属、埃里希体属、埃希氏菌属、弗朗西丝菌属、梭杆菌属、血巴尔通体属 (Haemobartonella)、螺杆菌属、克雷伯菌属、L型细菌、钩端螺旋体属、利斯特菌属、分枝杆菌属、支原体属、新立克次氏体属、诺卡尔菌属、巴斯德菌属、消化球菌属、消化链球菌属、 变形杆菌属、假单胞菌属、立克次氏体属、罗克利马体菌属(Rochalimaea)、沙门菌属、志贺菌属、葡萄球菌属、链球菌属和耶尔森菌属。真菌抗原的实例包括、但不限于来自下述的抗原犁头霉属、支顶孢属、链格孢属、曲霉菌属、蛙粪霉菌属(Basidiobolus)、双极霉属、 芽生菌属、念珠菌属、衣原体属、球孢菌属、耳霉属、隐球菌属、弯孢属(Curvalaria)、表皮癣菌属、外小杯菌(Exophiala)、地丝菌属、组织胞浆菌属、马杜拉分枝菌属、马拉色霉菌属 (Malassezia)、小孢子菌属、小丛梗孢属、被孢霉菌、毛霉菌属、拟青霉属、青霉属、单胞瓶霉属、瓶霉属、原壁菌属、假霉样真菌属(Pseudallescheria)、假小托菌属、腐霉菌属、鼻孢子菌属、根霉菌属、线状担子菌属、孢子丝菌属、匍柄霉属、发癣菌属、毛孢子菌属和木丝霉属。原生动物和蠕虫寄生物抗原的实例包括、但不限于来自下述的抗原巴贝虫属、小袋虫属、贝诺孢子虫属(Besnoitia)、隐孢子虫属、艾美球虫属、脑炎微孢子虫属、内阿米巴属、贾第虫属、哈蒙德虫属、肝簇虫属、等孢子球虫属、利什曼原虫属、微孢子属、新孢子虫属、微粒子虫属、五鞭毛滴虫属、疟原虫属、肺孢子虫属(Pneumocystis)、肉孢子虫属、血吸虫属、泰勒虫属、弓形虫属和锥虫属、棘唇线虫属、猫圆线虫属、钩虫属、管圆线虫属、蛔虫属、布鲁丝虫属、仰口线虫(Bimostomum)、毛细线虫属、夏柏特线虫属、古柏线虫属、环体线虫属、网尾线虫属、膨结线虫属、棘唇属、裂头属、复孔绦虫属、恶丝虫属、龙线虫属、蛲虫属、类丝虫属、 血矛线虫属、兔唇蛔属、罗阿丝虫属、曼森线虫属、缪勒线虫属、侏形吸虫属、板口线虫属、细颈线虫属、结节线虫属、盘尾丝虫属、后睾吸虫属、胃线虫属、副丝虫属、并殖吸虫属、副蛔虫属、泡翼属线虫、原圆线虫属、腹腔丝虫属、旋尾线虫属、迭宫绦虫属、冠丝虫属、类圆线虫属 (Strongyloides)、圆线虫属、吸吮线虫属、弓蛔线虫属、弓蛔虫属、毛线虫属、毛圆线虫属、 鞭虫属、钩虫属和吴策线虫属。外寄生物抗原的实例包括、但不限于来自下述的抗原(包括保护性抗原以及变应原)蚤；蜱，包括硬蜱和软蜱；蝇类，诸如蠓、蚊子、沙蝇、黑蝇、马蝇、 角蝇、鹿蝇、采采蝇、厩蝇、蝇蛆病致病蝇和咬蚊；蚂蚁；蜘蛛、虱；螨；和真虫，诸如臭虫和接吻虫。 示例性的抗原包括、但不限于杯状病毒抗原、冠状病毒抗原、疱疹病毒抗原、免疫缺陷病毒抗原、传染性腹膜炎病毒抗原、白血病病毒抗原、猫泛白细胞减少症 (panleukopenia)病毒抗原、细小病毒抗原、狂犬病病毒抗原、巴尔通体属抗原、耶尔森菌属抗原、恶丝虫属抗原、弓形虫属抗原、肿瘤抗原、蚤抗原、跳变应原、蠓抗原、蠓变应原、螨抗原和螨变应原。特别优选的抗原包括狂犬病毒糖蛋白G抗原；心丝虫PLA2、P39、P4、P22U、 Gp^、虾红素、半胱氨酸蛋白酶、巨噬细胞迁移抑制因子、毒液变应原、ΤΡΧ-1、ΤΡΧ-2、转谷氨酰胺酶、锚蛋白和天冬酰胺酶抗原；蚤丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、氨肽酶、丝氨酸蛋白酶抑制剂、羧酸酯酶、保幼激素酯酶和环氧化物水解酶抗原；蚤唾液抗原；耶尔森菌属Fl和V抗原；和刚地弓形虫抗原。在本发明中使用的抗原可以是通过基因重组方法产生的抗原，或是基于通过基因重组测定的基因序列或肽序列而化学合成的抗原。因而，通过下述方式制备重组抗原用酶等处理已知的基因组序列或通过使用基因重组技术从天然病毒或细胞的分子克隆得到的 DNA序列，或进行化学合成，并由微生物、动物、植物、昆虫等表达得到的DNA序列或修饰的 DNA序列，以得到重组抗原；或通过下述方式制备肽或修饰的肽称作液相方法的肽化学合成，或使用上述信息的固相方法。肽的固相合成方法通常以有利的方式通过自动化的肽合成仪器来实现。预吸附在有些实施方案中，任选地首先使生物样品接触交叉反应性抗原。一般而言，使生物样品接触交叉反应性抗原，会导致生物样品中交叉反应性抗体的清除，同时还未清除抗-AgI (目标抗原)特异性的补体结合性抗体，其如果存在，以可检测水平(例如，通过使用试验来检测本文所述的特定抗-AgI特异性的补体结合性抗体)保留在样品中。因此，用于接触生物样品的交叉反应性抗原通常不包含将要用于检测预吸附的生物样品中是否存在抗-AgI特异性的补体结合性抗体的AgI。接触可以如下完成，例如，使生物样品接触一种或多种本文所述的交叉反应性抗原。可以在连续的步骤中，使生物样品接触交叉反应性抗原，然后接触具有固定化的AgI的特定固体支持物。在有些实施方案中，在检测样品中的特定抗-AgI特异性的补体结合性抗体之前，使生物样品接触根据本发明的交叉反应性抗原，以从样品中“预吸附”非特异性的抗体。除非另有特别指出，本文使用的“预吸附”不一定表示，首先使生物样品接触交叉反应性抗原，然后使样品接触AgI，而是表示，直到样品已经暴露于交叉反应性抗原之后，才检测特定抗-AgI特异性的补体结合性抗体。样品制备在主题方法的实践中，测定来自受试者的样品中抗-AgI特异性的补体结合性抗体的存在。在有些实施方案中，测定的样品是这样的样品，它是或源自含有特异性地结合 AgI的补体结合性抗体的任意最初来源。在其它实施方案中，所述样品是含有不足补体的任意最初来源或从其得到。这样的样品包括，其中已经通过热灭活来破坏补体或Clq的那些样品，和其中外源性地供给Clq的那些样品。因此，合适的样品来源源自这样的流体，已经向其中释放了特异性地结合AgI的补体结合性抗体。感兴趣的样品来源包括、但不限于许多不同的体液，尤其是血液或血液制品，例如，血清、血浆和全血、血细胞和尿。样品体积可以是与特定测定形式相容的任意体积。在有些实施方案中，在测定特异性地结合AgI的补体结合性抗体是否存在之前，在合适的溶液中稀释样品。一般而言，适用于稀释生物样品的溶液包括缓冲液，诸如磷酸盐缓冲盐水(PBS)，且可以包括额外的物质，例如，非特异性的阻滞剂诸如牛血清白蛋白(BSA)、去污剂诸如Triton-X-IOO等。适用于试验的对照样品包括、但不限于从不具有抗-AgI特异性的补体结合性抗体的人受试者收集的血液、血清、全血或尿(即，阴性对照)，或含有已知的、预定量的抗-AgI特异性的补体结合性抗体的样品(即，阳性对照)。在许多实施方案中，人样品的合适的最初来源是血液样品。这样，在主题试验中采用的样品通常是血液衍生的样品。血液衍生的样品可以源自全血或其级分，例如，血清、血浆等，其中在某些实施方案中，样品源自允许凝结的血液，并分离和收集血清，以用于试验。在其中样品是血浆、血清或血清-衍生的样品的实施方案中，所述样品通常是流体样品。可以采用用于产生流体血清样品的任意方便的方法。在许多实施方案中，所述方法通过皮肤穿刺(例如，手指针刺、静脉穿刺术)将静脉血抽入凝固管或血清分离器管，允许血液凝结，并从凝结的血液中离心出血清。然后收集和储存血清直到试验。类似地，可以如下从患者收集血浆样品把静脉血抽入试管中，并离心血液，使血细胞聚集在试管底部。然后可以收集和储存样品的液体部分(它是血浆)直到试验。得到患者-衍生的样品后，对样品进行试验，以测定抗-AgI特异性的补体结合性抗体的存在。可以以多种方式处理受试者样品，从而增强抗-AgI特异性的补体结合性抗体的存在的检测。例如，在样品是血液的情况下，在试验之前，可以从样品去除红血细胞(例如， 通过离心)。通过使用本领域众所周知的规程(例如酸沉淀、醇沉淀、盐沉淀、疏水沉淀、过滤(使用能保留大于30kD的分子的过滤器，例如Centrim 30 )、亲和纯化)来浓缩样品， 也可以增强抗-AgI特异性的补体结合性抗体的存在的检测。试验形式固体支持物固定化的AgI在本文中用作诊断剂，以检测生物样品中是否存在反应性的抗-AgI特异性的补体结合性抗体。典型地，所述试验通常包含，将液相中未结合的抗体与抗原-补体结合性抗体复合物结合的固相支持物分离。该试验一般地描述在图1、图 2和图3中(关于基本上平坦的固体支持物(例如，膜或微量滴定孔形式))和在图4、图5 和图6中(关于微珠固体支持物)。可以用于实践本发明的固体支持物包括基质诸如硝酸纤维素(例如，以膜或微量滴定孔形式)；聚氯乙烯(例如，片层或微量滴定孔)；聚苯乙烯； 乳胶(例如，珠子、微珠、微粒、微球或微孔滴定板)；聚偏氟乙烯；重氮化的纸；尼龙膜；聚乙烯膜，活化的珠子，磁性反应珠子，细胞和细胞膜等。在有些实施方案中，在试验之前，在合适的溶液中稀释生物样品。一般而言，适用于稀释生物样品的溶液包括缓冲液，诸如磷酸盐缓冲盐水(PBS)，且可以包括额外的物质， 例如，非特异性的阻滞剂诸如牛血清白蛋白(BSA)、去污剂诸如Triton-X-IOO等。一般而言，首先在合适的结合条件下，使固体支持物与液相组分(例如，一种或多种特定的目标抗原(AgI))反应，使得所述组分充分固定化在支持物上。任选地，通过首先将AgI偶联到具有更好结合性质的蛋白上，可以增强抗原向支持物上的固定化。合适的偶联蛋白包括、但不限于大分子诸如包括牛血清白蛋白(BSA)在内的血清白蛋白、钥孔戚血蓝素、免疫球蛋白分子、甲状腺球蛋白、卵白蛋白和本领域技术人员众所周知的其它蛋白。 可以用于将抗原结合到支持物上的其它分子包括多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚合的氨基酸、 氨基酸共聚物等。这样的分子和将这些分子偶联到AgI上的方法，是本领域普通技术人员众所周知的。参见，例如，Brinkley, M. A. Bioconjugate Chem. (1992)3 :2_13 ；Hashida 等人，J. Appl. Biochem. (1984)6 :56-63 ；禾口 Anjaneyulu 禾口 Staros, International J. of Peptide and Protein Res. (1987)30:117—124。在使固体支持物接触AgI后，通过洗涤，从支持物去除任意未固定化的Agl。然后在合适的结合条件下，使支持物结合的AgI接触疑似含有抗-AgI补体结合性抗体的生物样品。如果存在，所述补体结合性抗体会特异性地结合固定化的AgI。在样品中存在的Clq (例如自体的或外源性的)会结合补体结合性抗体，所述补体结合性抗体结合在固定化在固相支持物上的AgI上。在样品中存在的Clq可以是来自生物样品自身的自体Clq，或可以是外源性Clq。在有些实施方案中，然后通过使固相支持物接触特异性地结合Clq的可检测地标记的抗-Clq抗体，来测定结合的Clq。然后可以使用本领域众所周知的技术，检测可检测地标记的抗-Clq抗体的存在。在有些实施方案中，以连续的方式进行测定，首先使固相支持物接触含有抗-AgI 补体结合性抗体和Clq的生物样品，然后使固相支持物接触可检测地标记的抗-Clq抗体。 该方案如图1所述。在其它实施方案中，使固相支持物同时接触生物样品和可检测地标记的抗-Clq抗体。该方案如图2所述。在有些实施方案中，在试验中使用可检测地标记的外源性Clq。在这样的实施方案中，使固相支持物同时接触目标样品和可检测地标记的外源性Clq。然后使用本领域众所周知的技术，检测结合的Clq。该方案如图3所述。更具体地，在有些实施方案中，可以使用ELISA方法，其中微孔滴定板的孔包被有特定AgI (例如，特定AgI被固定化在表面上)。然后将含有或疑似含有抗-AgI补体结合性抗体和Clq (例如自体的或外源性的)的样品加入包被的孔中。任选地，使用样品或其等分试样作为对照，可以平行地测定一系列含有已知浓度的抗-AgI补体结合性抗体的标准品。 通常，约0. 001至Iml样品(稀释的，或以其它方式得到)是足够的，通常约0. Olml会满足需要。此外，在某些实施方案中，将每个样品和标准品加入多个孔中，从而可以得到各自的平均值。将实验和对照样品各自与固体支持物一起温育足以发生抗体与抗原结合的时间。 通常，约0. 1至3小时是足够的，通常1小时会满足需要。在足以允许抗体结合固定化的Agl、和在样品中存在的Clq结合补体结合性抗体 (其结合在固定化的AgI上)的温育时段后，可以任选地洗涤平板，以去除未结合的抗体。 通常，在适当PH(通常7-8)的稀释的非离子型去污剂介质可以用作洗涤介质。在洗涤步骤中可以使用等渗缓冲液，诸如磷酸盐缓冲盐水。在某些实施方案中，在试验过程中不进行洗涤。在一个替代实施方案中，首先使含有或疑似含有抗-AgI补体结合性抗体的生物样品接触溶液中的交叉反应性抗原，以提供预吸附的混合物。在足以允许抗体结合交叉反应性抗原的温育时段后，然后将含有“残余”抗体的预吸附的混合物加入到用特定AgI包被的微孔滴定板的孔中。在足以允许来自预吸附的混合物的“残余”抗-AgI补体结合性抗体结合固定化的Agl、和在样品中存在的Clq(例如自体的或外源性的)结合补体结合性抗体 (其结合在固定化的AgI上)的温育时段后，可以任选地洗涤平板，以去除未结合的抗体。 在某些实施方案中，不进行洗涤。加入可检测地标记的第二结合分子，其结合结合在补体结合性抗体上的Clq。允许第二结合分子与结合抗-AgI补体结合性抗体(例如，与固定化在表面上的特定AgI抗原结合的补体结合性抗体)的任意Clq(例如自体的或外源性的)反应，任选地洗涤平板，并使用本领域众所周知的方法检测第二结合分子的存在。因而，在一个具体实施方案中，使用包含针对自体Clq的抗体的第二结合物，可以容易地检测来自生物样品的结合的抗-AgI补体结合性抗体和自体Clq的存在。在另一个实施方案中，使用包含直接标记的外源性Clq的第二结合物，可以容易地检测来自生物样品的结合的抗-AgI补体结合性抗体的存在。许多抗-人Clq分子是本领域已知的(例如， 可商业得到的山羊抗-人Clq、绵羊抗-人Clq等)，它们可以容易地缀合到可检测标记上，
19以促进自体或外源性Clq的直接或间接检测。允许直接测量免疫复合物的标记的实例包括放射性标记，诸如％或1251、荧光团、染料、珠子、化学发光剂、胶体颗粒等。允许间接测量结合的标记的实例包括酶，其中底物可以提供有色的或荧光的产物。可以直接地(例如放射性同位素)或通过结合一种或多种额外的分子(例如结合到标记的抗体上的表位)检测标记。根据本发明可以使用的荧光化合物的非限制性实例包括荧光染料诸如荧光素(FITC) 或Alexa 488,Cy 3或Cy 5和绿荧光蛋白、以及藻红蛋白(PE)PE_Cy5、PerCP、ECD等。在有些实施方案中，所述抗体被共价结合的酶标记，在加入合适的底物后，所述酶能提供可检测的产物信号。适用于缀合物中的酶的实例包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、苹果酸脱氢酶等。当不可商业得到时，通过本领域技术人员已知的技术，可以容易地产生这样的抗体-酶缀合物。在这样的试验中，可检测地标记的抗-Clq抗体或直接标记的Clq的浓度通常是约 0. 1至500 μ g/ml，诸如约150 μ g/ml。含有可检测地标记的抗-Clq抗体的溶液通常被缓冲至约pH 6. 5-9. 5的范围。温育时间应当足以使可检测地标记的抗-Clq抗体结合可得到的自体或外源性Clq。通常，约0.1至3小时是足够的，通常40分钟会满足需要。在已经清除非特异性地结合的物质后，通过常规方式，检测由结合的可检测地标记的抗-Clq抗体生成的信号。例如，当所述可检测标记是荧光化合物时，使用流式细胞术或其它类似的技术，诸如Luminex xMap系统，可以检测标记的存在。当使用酶缀合物时，提供适当的酶底物，从而形成可检测的产物。更具体地，当过氧化物酶是选择的酶缀合物时，优选的底物组合是H2A 和0-苯二胺，其在适当的反应条件下产生有色的产物。适用于其它酶缀合物(诸如上面公开的那些)的底物是本领域技术人员已知的。合适的反应条件以及用于检测不同的有用缀合物或它们的产物的装置，也是本领域技术人员已知的。例如，对于底物0-苯二胺的产物， 使用分光光度计方便地测量在490-495nm的吸光度。也可以在溶液中进行试验，使得在生物样品中存在的AgI和抗体在沉淀条件下形成复合物。在一个具体实施方案中，使用本领域已知的偶联技术，诸如通过直接化学偶联或间接偶联，可以将特定AgI固定化在固相颗粒(例如，琼脂糖珠、乳胶珠等)上。然后在合适的结合条件下，使AgI-包被的颗粒和游离的交叉反应性抗原(例如，未固定化在固相颗粒上)接触疑似含有抗-AgI补体结合性抗体的生物样品。结合的抗-AgI补体结合性抗体和Clq(例如，自体或外源性的)之间的交联，造成颗粒-抗原-抗体复合物聚集体的形成， 使用洗涤和/或离心，可以将所述聚集体从样品中沉淀和分离出来。使用许多标准方法中的任一种，诸如上述的那些免疫诊断方法，包括使用可检测地标记的抗-Clq抗体，可以分析反应混合物，以测定抗体-抗原复合物是否存在。在另一个实施方案中，可以将特定AgI固定化在第一固相颗粒(例如，琼脂糖珠等)上，并可以将交叉反应性抗原固定化在第二固相颗粒(例如，磁珠)上，其中第一固相颗粒和第二固相颗粒是不同的。在这样的实施方案中，然后在合适的结合条件下，使交叉反应性抗原-包被的颗粒和特定AgI-包被的颗粒接触疑似含有抗-AgI补体结合性抗体的生物样品。然后可以从样品分离颗粒-交叉反应性抗原-抗体复合物。例如，在将交叉反应性抗原结合到第一颗粒(诸如磁性珠)上的情况下，使用许多标准方法中的任一种，可以从溶液分离颗粒-交叉反应性抗原-抗体复合物。然后可以使用上述方法，分析反应混合物， 以测定是否存在补体结合性抗体-特定AgI抗原复合物。
在另一个实施方案中，使用本发明诊断感染(例如，细菌或病毒)的方法包括，用于检测样品中是否存在抗-AgI补体结合性抗体的试验装置的应用，其通过下述进行首先任选地使样品接触交叉反应性抗原，以去除会与特定AgI交叉反应的任意抗体，然后使样品接触特定Agl，以结合样品中的任意抗-AgI补体结合性抗体。在这样的实施方案中，所述试验装置至少包含样品施用区、预吸附区和检测区，且由能传导流体流动的膜(诸如硝酸纤维素膜条)组成。任选地，所述膜可以提供在刚性的或半刚性的支持表面上，该支持表面诸如聚乙烯条。在代表性的实施方案中，所述预吸附区插入在样品施用区和检测区之间。 所述区域的位置可以使得，流体沿着膜的侧向流造成样品的所有组分首先接触预吸附区， 然后接触检测区。这样，通过跨膜的毛细管作用，促进沿着膜从样品施用区向预吸附区、然后向检测区的流体流动。示例性的侧向流试验装置和使用侧向流试验装置的检测方法提供在例如美国专利号6，146，589中，其公开内容通过引用并入本文。在代表性的实施方案中，将交叉反应性抗原固定化在预吸附区中，并将特定AgI 固定化在检测区中。通过首先将样品加入样品施用区，并通过跨膜条的毛细管作用使样品迁移，检测抗-AgI补体结合性抗体是否存在。随着样品跨膜条迁移，样品首先接触预吸附区中的固定化的交叉反应性抗原，以提供预吸附的样品。预吸附的样品然后迁移至检测区， 在这里接触固定化的特定Agl。如果存在，抗-AgI补体结合性抗体特异性地结合固定化的 Agl，且Clq(例如，自体或外源性的)然后特异性地结合结合的抗-AgI补体结合性抗体。然后可以如上所述，使可检测地标记的抗-Clq抗体接触检测区，以检测Clq和抗-AgI补体结合性抗体复合物的存在。使可检测地标记的抗-Clq抗体分子与任意捕获的样品Clq反应， 并使用上述的和本领域众所周知的方法，检测第二结合分子的存在。在任意上述实施方案中，可以采用1-6次洗涤，使用足够的体积，以彻底洗掉存在的任意非特异性地结合的蛋白或其它分子。试剂盒也提供了可用于实践上述主题方法的试剂盒。用于实践主题方法的试剂盒至少包括用于测定源自人受试者的样品中是否存在抗-AgI补体结合性抗体的试剂，其中这样的试剂盒可以包括特定AgI和/或包含特定AgI的免疫测定装置、可检测地标记的抗-Clq 抗体、直接标记的外源性Clq、以及信号产生系统的成员(诸如酶底物)等；用于实现主题检测试验的不同缓冲液；用于测定样品中是否存在抗-AgI补体结合性抗体的参比物；等。在有些实施方案中，所述组合物提供在适用于稀释生物样品的溶液中。一般而言， 适用于稀释生物样品的溶液包括缓冲液诸如磷酸盐缓冲盐水(PBQ，且可以包括额外的物质，例如，非特异性的阻滞剂诸如牛血清白蛋白(BSA)、去污剂诸如Triton-X-IOO等。所述试剂盒可以另外包括一种或多种可以用于制备患者衍生出的样品的试剂，诸如肝素、聚蔗糖-泛影葡胺、裂解缓冲液、蛋白酶抑制剂等。另外，主题试剂盒可以另外包括一种或多种用于样品分级的组分，诸如电泳介质或其前体，例如聚丙烯酰胺凝胶的干燥前体，一种或多种缓冲介质或其组分等。在某些实施方案中，所述试剂盒另外至少包括含有参照数据的信息储存和呈现介质，试验结果可以与所述参照数据对比，以便诊断感染，例如，与上述的特异性地结合源自细菌或病毒来源的目标抗原的抗-AgI补体结合性抗体的存在正相关或负相关的参照数据。所述信息储存和呈现介质可以是任意方便的形式，诸如在包装插页上的打印信息，存在于电子储存介质(例如磁盘、CD-ROM)上的电子文件，等。在其它实施方案中，所述试剂盒可以包括用于得到参照数据的替代方式，例如用于“在线”得到参照数据的网站。所述试剂盒可以另外包括用于得到患者样品的工具，例如注射器。主题试剂盒通常另外包括关于实现主题方法的说明书，其中这些说明书可以存在于包装插页上和/或试剂盒的包装上。最后，所述试剂盒可以另外包括一种或多种来自其它生化试验的试剂，所述其它生化试验用于检测抗-AgI补体结合性抗体的存在。所述试剂盒组分可以存在于单独的容器中，或一种或多种组分可以存在于相同的容器中，其中容器可以是储存容器和/或在试剂盒的预期试验中使用的容器。驢也提供了可用于实践上述主题方法的装置。用于实践主题方法的装置至少包括用于测定源自人受试者的样品中是否存在抗-AgI补体结合性抗体的试剂，其中这样的装置可以包括固定化在固体支持物表面上的特定AgI和任选的交叉反应性抗原，该固体支持物诸如微孔滴定板或微珠，诸如琼脂糖或乳胶珠子。在某些实施方案中，给微孔滴定板提供独特的Agl，其固定化在平板的每个孔的表面上。在其它实施方案中，给微孔滴定板提供相同的Agl，其固定化在平板的一个或多个孔的表面上。在某些实施方案中，给微珠群体提供Agl，其固定化在微珠群体的表面上。在某些实施方案中，给微珠群体提供独特的Agl，其固定化在微珠的每个亚群体的表面上。例如， 提供微珠群体，其包括10个亚群体，其中每个亚群体包括一种独特的固定化的Agl。例如， 可以将30种I类HLA抗原(表1和表幻和30种II类HLA抗原(表2和表4)固定化在微珠(诸如乳胶珠)的表面上，它们是单个抗原形式(表1和2)或在亚群体中(表3和4)， 用于鉴别特异性地结合一种HLA亚型的补体结合性抗体。表权利要求
1.一种用于测定来自受试者的生物样品中是否存在特异性地结合目标抗原的补体结合性抗体的方法，所述方法包括使其上面固定有目标抗原(AgI)的固体基质接触来自受试者的生物样品和补体因子 Clq，其中所述接触的时间足以允许所述样品中的抗-AgI补体结合性抗体结合所述AgI，并允许补体因子Clq结合所述抗-AgI补体结合性抗体；使用能特异性地结合所述补体因子Clq的至少一种可检测地标记的配体温育所述固体基质，所述补体因子Clq结合在与所述AgI结合的抗-AgI补体结合性抗体上；并且检测是否存在结合到所述补体因子Clq上的可检测地标记的配体，以测定所述生物样品中是否存在特异性地结合所述AgI的补体结合性抗体。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述补体因子Clq是自体补体因子Clq。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述补体因子Clq是外源性补体因子Clq。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述补体因子Clq是自体补体因子Clq和外源性补体因子Clq的组合。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述固体基质是多孔板。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述固体基质是膜。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述固体基质是微粒。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述微粒是聚苯乙烯珠子。
9.如权利要求7所述的方法，其中所述微粒是乳胶珠。
10.如权利要求7所述的方法，其中所述微粒是磁珠。
11.如权利要求1所述的方法，其中所述固体基质是细胞。
12.如权利要求1所述的方法，其中所述固体基质是细胞膜。
13.如权利要求1所述的方法，其中所述生物样品是血清、血液、唾液、血浆或尿。
14.如权利要求1所述的方法，其中所述可检测地标记的配体是可检测地标记的抗体或其结合片段。
15.如权利要求1所述的方法，其中可检测标记是荧光染料、生色团、酶、连接分子、生物素分子、电子供体、电子受体、染料、金属或放射性核素。
16.一种用于测定来自受试者的生物样品中是否存在特异性地结合目标抗原的补体结合性抗体的方法，所述方法包括使其上面固定有目标抗原(AgI)的固体基质接触来自受试者的生物样品和直接标记的外源性补体因子Clq，其中所述接触的时间足以允许所述样品中的抗-AgI补体结合性抗体结合所述Agl，并允许所述直接标记的外源性补体因子Clq结合所述抗-AgI补体结合性抗体；并且检测是否存在结合到所述抗-AgI补体结合性抗体上的直接标记的外源性Clq，以测定所述生物样品中是否存在特异性地结合所述AgI的补体结合性抗体。
17.如权利要求16所述的方法，其中所述固体基质是多孔板。
18.如权利要求16所述的方法，其中所述固体基质是膜。
19.如权利要求16所述的方法，其中所述固体基质是微粒。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述微粒是聚苯乙烯珠子。
21.如权利要求19所述的方法，其中所述微粒是乳胶珠。
22.如权利要求19所述的方法，其中所述微粒是磁珠。
23.如权利要求16所述的方法，其中所述固体基质是细胞。
24.如权利要求16所述的方法，其中所述固体基质是细胞膜。
25.如权利要求16所述的方法，其中所述生物样品是血清、血液、唾液、血浆或尿。
26.如权利要求16所述的方法，其中所述直接标记的外源性Clq被荧光染料、生色团、 酶、连接分子、生物素分子、电子供体、电子受体、染料、金属或放射性核素标记。
27.一种用于测定来自受试者的生物样品中是否存在特异性地结合人白细胞抗原 (HLA)的补体结合性抗体的方法，所述方法包括用不同亚类的微粒的集合和补体因子Clq温育来自受试者的生物样品，其中每个微粒包被有不同的纯化的HLA亚型，所述HLA亚型源自呈递相同HLA的细胞群体，且其中所述温育的时间足以允许所述生物样品中的抗-HLA补体结合性抗体结合所述HLA，并允许所述补体因子Clq结合所述生物样品中的抗-HLA补体结合性抗体；用能特异性地结合补体因子Clq的至少一种可检测地标记的配体温育所述微粒，所述补体因子Clq结合在与所述HLA结合的抗-HLA补体结合性抗体上；并且检测是否存在结合到所述补体因子Clq上的可检测地标记的配体，以测定是否存在补体结合性抗体。
28.如权利要求27所述的方法，其中所述补体因子Clq是自体补体因子Clq。
29.如权利要求27所述的方法，其中所述补体因子Clq是外源性补体因子Clq。
30.如权利要求27所述的方法，其中所述补体因子Clq是自体补体因子Clq和外源性补体因子Clq的组合。
31.如权利要求27所述的方法，其中所述微粒是琼脂糖珠。
32.如权利要求27所述的方法，其中所述微粒是乳胶珠。
33.如权利要求27所述的方法，其中所述微粒是磁珠。
34.如权利要求27所述的方法，其中所述生物样品是血清、血液、唾液、血浆或尿。
35.如权利要求27所述的方法，其中所述可检测地标记的配体是可检测地标记的抗体或其结合片段。
36.如权利要求27所述的方法，其中可检测标记是荧光染料、生色团、酶、连接分子、生物素分子、电子供体、电子受体、染料、金属或放射性核素。
37.如权利要求27所述的方法，其中所述检测是通过流式细胞术。
38.一种用于测定来自受试者的生物样品中是否存在特异性地结合人白细胞抗原 (HLA)的补体结合性抗体的方法，所述方法包括用不同亚类的微粒的集合和直接标记的外源性补体因子Clq温育来自受试者的生物样品，其中每个微粒包被有不同的纯化的HLA亚型，所述HLA亚型源自呈递相同HLA的细胞群体，且其中所述温育的时间足以允许所述生物样品中的抗-HLA补体结合性抗体结合 HLA,并允许所述补体因子Clq结合所述生物样品中的抗-HLA补体结合性抗体；并且检测是否存在结合到所述抗-HLA补体结合性抗体上的直接标记的外源性补体因子 Clq,以测定所述生物样品中是否存在特异性地结合HLA的补体结合性抗体。
39.如权利要求38所述的方法，其中所述微粒是琼脂糖珠。
40.如权利要求38所述的方法，其中所述微粒是乳胶珠。
41.如权利要求38所述的方法，其中所述微粒是磁珠。
42.如权利要求38所述的方法，其中所述生物样品是血清、血液、唾液、血浆或尿。
43.如权利要求38所述的方法，其中所述直接标记的外源性Clq被荧光染料、生色团、 酶、连接分子、生物素分子、电子供体、电子受体、染料、金属或放射性核素标记。
44.如权利要求38所述的方法，其中所述检测是通过流式细胞术。
45.一种用于测定来自受试者的生物样品中是否存在特异性地结合目标抗原的补体结合性抗体的试剂盒，所述试剂盒包含其上面固定有目标抗原(AgI)的固体基质；能特异性地结合补体因子Clq的可检测地标记的配体；和用于测定来自受试者的生物样品中是否存在针对目标抗原的补体结合性抗体的说明书。
46.如权利要求45所述的试剂盒，其中所述固体基质是多孔板。
47.如权利要求45所述的试剂盒，其中所述固体基质是膜。
48.如权利要求45所述的试剂盒，其中所述固体基质是微粒。
49.如权利要求48所述的试剂盒，其中所述微粒是琼脂糖珠。
50.如权利要求48所述的试剂盒，其中所述微粒是乳胶珠。
51.如权利要求48所述的试剂盒，其中所述微粒是磁珠。
52.如权利要求45所述的试剂盒，其中所述生物样品是血清、血液、唾液、血浆或尿。
53.如权利要求45所述的试剂盒，其中所述可检测地标记的配体是可检测地标记的抗体或其结合片段。
54.如权利要求45所述的试剂盒，其中可检测标记是荧光染料、生色团、酶、连接分子、 生物素分子、电子供体、电子受体、染料、金属或放射性核素。
55.一种用于测定来自受试者的生物样品中是否存在特异性地结合目标抗原的补体结合性抗体的试剂盒，所述试剂盒包含其上面固定有目标抗原(AgI)的固体基质； 能结合补体结合性抗体的直接标记的外源性Clq ；和用于测定来自受试者的生物样品中是否存在针对目标抗原的补体结合性抗体的说明书。
56.如权利要求55所述的试剂盒，其中所述固体基质是多孔板。
57.如权利要求55所述的试剂盒，其中所述固体基质是膜。
58.如权利要求55所述的试剂盒，其中所述固体基质是细胞。
59.如权利要求55所述的试剂盒，其中所述固体基质是微粒。
60.如权利要求59所述的试剂盒，其中所述微粒是琼脂糖珠。
61.如权利要求59所述的试剂盒，其中所述微粒是乳胶珠。
62.如权利要求59所述的试剂盒，其中所述微粒是磁珠。
63.如权利要求58所述的试剂盒，其中所述微粒是聚苯乙烯珠子。
64.如权利要求55所述的试剂盒，其中所述生物样品是血清、血液、唾液、血浆或尿。
65.如权利要求55所述的试剂盒，其中所述直接标记的外源性Clq被荧光染料、生色团、酶、连接分子、生物素分子、电子供体、电子受体、染料、金属或放射性核素标记。
66.一种用于测定来自受试者的生物样品中是否存在针对人白细胞抗原(HLA)的补体结合性抗体的试剂盒，所述试剂盒包含微粒亚类的集合，其中每个微粒亚类包被有不同的纯化的HLA，以代表单个细胞系或多个细胞系的HLA抗原群体，使得所述集合模仿正常人群体中的HLA分布；能特异性地结合补体因子Clq的可检测地标记的配体；和用于测定来自受试者的样品中是否存在针对HLA的补体结合性抗体的说明书。
67.如权利要求66所述的试剂盒，其中所述微粒是琼脂糖珠。
68.如权利要求66所述的试剂盒，其中所述微粒是乳胶珠。
69.如权利要求66所述的试剂盒，其中所述微粒是磁珠。
70.如权利要求66所述的试剂盒，其中所述微粒是聚苯乙烯珠子。
71.如权利要求66所述的试剂盒，其中所述生物样品是血清、血液、唾液、血浆或尿。
72.如权利要求66所述的试剂盒，其中所述可检测地标记的配体是可检测地标记的抗体或其结合片段。
73.如权利要求66所述的试剂盒，其中可检测标记是荧光染料、生色团、酶、连接分子、 生物素、电子供体、电子受体、染料、金属或放射性核素。
74.一种用于测定来自受试者的生物样品中是否存在针对人白细胞抗原(HLA)的补体结合性抗体的试剂盒，所述试剂盒包含 微粒亚类的集合，其中每个微粒亚类包被有不同的纯化的HLA，以代表单个细胞系或多个细胞系的HLA抗原群体，使得所述集合模仿正常人群体中的HLA分布；能结合补体结合性抗体的直接标记的外源性Clq ；和用于测定来自受试者的样品中是否存在针对HLA的补体结合性抗体的说明书。
75.如权利要求74所述的试剂盒，其中所述微粒是琼脂糖珠。
76.如权利要求74所述的试剂盒，其中所述微粒是乳胶珠。
77.如权利要求74所述的试剂盒，其中所述微粒是磁珠。
78.如权利要求74所述的试剂盒，其中所述微粒是聚苯乙烯珠子。
79.如权利要求74所述的试剂盒，其中所述生物样品是血清、血液、唾液、血浆或尿。
80.如权利要求74所述的试剂盒，其中所述直接标记的外源性Clq被荧光染料、生色团、酶、连接分子、生物素、电子供体、电子受体、染料、金属或放射性核素标记。
全文摘要
本发明提供了用于使用补体因子C1q灵敏且特异性地检测生物样品中的补体结合性抗体的方法，所述补体因子C1q包括在生物样品中存在的自体补体因子C1q和结合自体补体因子C1q的可检测地标记的抗体、外源性人补体因子C1q和结合外源性人补体因子C1q的可检测地标记的抗体、可检测地标记的外源性人补体因子C1q、或自体补体因子C1q和外源性人补体因子C1q的组合。本发明也表征了用于本发明方法中的试剂盒、系统和装置。
文档编号G01N33/535GK102203610SQ200980144639
公开日2011年9月28日 申请日期2009年11月25日 优先权日2008年12月1日
发明者D·B·蒂安, G·陈 申请人:利兰·斯坦福青年大学托管委员会