专利名称：一种同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法
技术领域：
本发明属医学检验领域，涉及体内药物的分析测定方法，尤其涉及一种同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法。
背景技术：
抑郁症(depression)是一种常见的情感障碍性精神疾病，具有高发病率，高复发率、高致残率、高负担率的特征。舍曲林(Sertraline)、西酞普兰(Citalopram)、氟西汀(Fluoxetine)、帕罗西汀 (Paroxetine)、文拉法辛(Venlafaxine)是传统的一线抗抑郁治疗药物。由于这些药物在人体内的药代动力学个体差异较大、治疗窗窄，药物间相互作用对药动学的影响较大，药动学特性与抗抑郁的效果、药物不良反应的发生有密切的联系，因此开展对上述药物的治疗药物监测有临床意义。目前我国抗抑郁药的药物浓度监测的方法主要为高效液相色谱法(HPLC)和免疫测定法(IM)。这类方法特异性相对较好，经济又方便。但是HPLC法的灵敏度对于治疗窗在纳克级的药物检测不能完全达到临床要求(如通常患者的舍曲林治疗浓度为 10-50ng · πιΓ1)，此外，HPLC法的特异性虽然优于免疫测定法，但是仅仅由保留时间作为物质的判断依据可靠性欠妥。且生物样本中干扰物较多，在保证高灵敏度、高分离度的条件下，并不能很好的进行抗抑郁药物浓度监测。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法。提供一种简便、快速、灵敏的测定多种抗抑郁药血药浓度的方法。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的一种同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法，包括以下步骤(1)待测样品的预处理(a)取血浆待测样品，按照1 2.5(v/v)比例加入蛋白沉淀剂乙腈(含0. 1 % ν/ ν甲酸)，涡旋30s, 13000rpm离心5min，上清液取出。(b)取尿液待测样品，经0. 22μπι微孔滤膜过滤，取续滤液按照1 3(ν/ν)比例加入蛋白沉淀剂乙腈(含0. ν/ν甲酸)，涡旋30s，13000rpm离心5min，上清液取出。(2)样品分离与分析将步骤(1)预处理后得到的上清液注入快速液相色谱系统， 在合适的液相条件下进行分离分析，最后进入三重四极质谱检测器，在合适的质谱条件下检测，最终通过色谱软件采集处理数据，计算样品中的药物浓度。进一步地，所述合适的液相条件是色谱柱hrbax SB-C18 (3. 5 μ m, 3. 0 X 150mm), 流动相甲醇(含0· ν/ν甲酸)水(含0. ν/ν甲酸)=66 34，流速0. ^iLmirT1, 柱温25°C。所述合适的质谱条件是舍曲林Sertraline m/z306. 4 — 159. 2 (fragmentor 120，CE 30)，西酞普兰 Escitalopram m/z 325.5 — 109. 3 (fragmentor 120，CE30)，氟西汀 Fluoxetine m/z 310. 3 — 44. 4 (fragmentor 120，CE 10)，帕罗西汀 Paroxetine m/z 330.3 — 192. 3 (fragmentor 120，CE 20)，文拉法辛 Venlafaxine m/z 278.3 — 58. 4 (fragmentor 120，CE 20)，异丙嗪(内标)Promethazine m/z 285.3 ^ 86. 3(fragmentor 120，CE 15)。本发明的有益效果是，本发明同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法快速准确， 灵敏可靠，分析成本低，适用于临床常规检测和药动学研究。在本发明方法测定条件下， 人体内源性物质以及常用合并用药均不干扰测定。药物线性范围分别是舍曲林2.0 2000. Ong · ι ΙΛ 西酞普兰 0. 5 500. Ong · πι Λ 氟西汀 1. 0 1000. Ong · πι Λ 帕罗西汀 3. 0 3000. Ong · mL—1，文拉法辛0. 4 4000. Ong · mL—1，线性相关系数(r2)大于0. 99，方法回收率大于80%，RSD小于15%。
图1是空白血浆色谱图；图2是空白血浆+标准品色谱图；图3是提取离子后的空白血浆+标准品色谱图；其中，(A)为文拉法辛，⑶为异丙嗪(内标)，(C)为舍曲林，⑶为氟西汀，(E)为西酞普兰，(F)为帕罗西汀。
具体实施例方式本发明采用快速液相-三重四极质谱联用技术(LC-MS)的方法，保留了高效液相色谱法的优势，且利用质谱的高灵敏度、高特异性的特点，对联合用药引起的多类抗抑郁药复杂组分可同时监测，包括监测六类抗抑郁药物三环类抗抑郁药、单胺氧化酶抑制剂、 5-HT再摄取抑制剂、5-HT/NE再摄取抑制剂、NE/特异性5-HT受体拮抗剂、5-HT平衡抗抑郁剂等，不仅满足对单位药物的浓度监测，还可以满足同时测定多种药物及代谢产物的需求， 方法灵敏，准确度高。本发明同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法，具体如下1待测样品的预处理(1)取血浆待测样品，按照1 2.5(v/v)比例加入蛋白沉淀剂乙腈(含0.1% ν/ ν甲酸)，涡旋30s, 13000rpm离心5min，上清液取出。(2)取尿液待测样品，经0. 22μπι微孔滤膜过滤，取续滤液按照1 3 (ν/ν)比例加入蛋白沉淀剂乙腈(含0. ν/ν甲酸)，涡旋30s，13000rpm离心5min，上清液取出。2样品分离与分析将上述预处理后得到的上清液注入快速液相色谱系统(Agilent RPLC1200)，在合适的液相条件下进行分离分析，最后进入三重四极质谱检测器(6410Triple Quad LC/MS 三重四极杆质谱仪)，在合适的质谱条件下检测，最终通过色谱软件Agilent MassHunter Workstation Software version B. 01. 04采集处理数据，计算样品中的药物浓度。该方法可以使样品中药物的检出灵敏度达到纳克级。本发明可用于血浆样品、尿液样品中五种抗抑郁药的浓度测定。血浆样品中五种抗抑郁药的浓度测定取血浆待测样品按1 2. 5 (ν/ν)比例加入蛋白沉淀剂乙腈(含0. ν/ν甲酸)，涡旋，离心，取上清液进样，质谱检测器检测。上述
4测定方法中，加入的蛋白沉淀剂为乙腈(含0. ν/ν甲酸)。尿液样品中五种抗抑郁药的浓度测定取尿液待测样品，经0. 22μπι微孔滤膜过滤，取续滤液按照1 3(ν/ν)比例加入蛋白沉淀剂乙腈(含0.1% ν/ν甲酸)，涡旋，离心， 取上清液进样，质谱检测器检测。上述测定方法中合适的液相条件是色谱柱hrbax SB-C18 (3. 5 μ m, 3. OX 150mm)， 流动相甲醇(含0· ν/ν甲酸)水(含0. ν/ν甲酸)=66 34，流速0. ^iLmirT1, 柱温25°C。上述测定方法中合适的质谱条件是舍曲林Sertraline m/ ζ 306. 4 — 159. 2(fragmentor 120，CE 30)，西酞普兰 Escitalopram m/z 325. 5 — 109. 3(fragmentorl20, CE 30)，氟西汀 Fluoxetine m/z 310. 3 — 44. 4 (fragmentor 120，CE 10)，帕罗西汀 Paroxetine m/z 330. 3 — 192. 3 (fragmentor 120，CE 20)，文拉法辛 Venlafaxine m/z 278. 3 ^ 58. 4 (fragmentor 120，CE 20)，异丙嗪(内标)Promethazinem/z 285.3 ^ 86.3 (fragmentor 120，CE 15)。下面根据附图和实施例详细描述本发明，本发明的目的和效果将变得更加明显。实施例1 色谱条件美国Agilent RPLC 1200高效液相色谱仪，包括在线脱气、二元泵、柱温箱、自动进样器、6410Triple Quad LC/MS/MS三重四极杆质谱仪和色谱工作站；色谱柱Jorbax SB-C18(3. 5μπι,3. 0X150mm)；流动相甲醇(含 0.1% 甲酸)水(含0.1% 甲酸)= 66 34，流速 0. 4mL · mirT1，柱温 25 °C。样品预处理取血浆样品200 μ L，精密加入336ng · mL—1异丙嗪溶液(内标)20 μ L，涡旋混合 10s,再精密加入600 μ L乙腈，涡旋混合30s，13000rpm高速离心5min，取上清液10 μ L进样。线性实验分别精密称取舍曲林、西酞普兰、氟西汀、帕罗西汀、文拉法辛对照品适量，用流动相溶解，配成不同浓度的工作溶液，空白血浆稀释定容，制成含舍曲林2. 031,4. 062，20. 31， 101. 55,203. 1,507. 75，1015. 5，2031ng · mlA 西酞普兰 0. 642，1. 284,6. 42,32. 1,64. 2， 160. 5，321，642ng .ι Γ1、氟西汀 0. 988，1. 976,9. 88,49. 4,98. 8，247，494，988ng .mL—1、帕罗西汀 3. 274，6. 548，32. 74，163. 7，327. 4，818. 5，1637，3274ng .ι Γ1、文拉法辛 0. 412，0. 824， 4. 12，20. 6，41. 2，103，206，412ng · ml/1的系列浓度标准血样。各取含药物血浆200 μ L按 “样品预处理”方法操作。以待测组分与内标峰面积比与待测组分的浓度作加权线性回归， 表1为回归方程和线性相关。表1 回归方程和线性相关准确度和精密度
权利要求
1.一种同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤(1)待测样品的预处理(a)取血浆待测样品，按照1 2.5(v/v)比例加入蛋白沉淀剂乙腈(含0.1% ν/ν甲酸)，涡旋30s, 13000rpm离心5min，上清液取出。(b)取尿液待测样品，经0.22μπι微孔滤膜过滤，取续滤液按照1 3(ν/ν)比例加入蛋白沉淀剂乙腈(含0.1% ν/ν甲酸)，涡旋30s，13000rpm离心5min，上清液取出。(2)样品分离与分析将步骤(1)预处理后得到的上清液注入快速液相色谱系统，在合适的液相条件下进行分离分析，最后进入三重四极质谱检测器，在合适的质谱条件下检测， 最终通过色谱软件采集处理数据，计算样品中的药物浓度。
2.根据权利要求1所述同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法，其特征在于，所述合适的液相条件是色谱柱hrbax 58-(18(3.511111，3.0\150讓)，流动相甲醇(含0. ν/ ν 甲酸)水(含 0. 1 % ν/ν 甲酸)=66 34，流速 0. 4mL · min—1，柱温 25°C。
3.根据权利要求1所述同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法，其特征在于， 所述合适的质谱条件是舍曲林 Sertraline m/z 306. 4 — 159. 2 (fragmentor 120， CE 30)，西酞普兰 Escitalopram m/z 325.5 — 109. 3 (fragmentor 120，CE 30)， 氟西汀 Fluoxetine m/z 310. 3 — 44.4 (fragmentor 120，CE 10)，帕罗西汀 Paroxetinem/z 330.3 — 192. 3 (fragmentor 120，CE 20)，文拉法辛 Venlafaxine m/z 278.3 — 58. 4 (fragmentor 120，CE 20)，异丙嗪(内标)Promethazine m/z 285.3 ^ 86. 3(fragmentor 120，CE 15)。
全文摘要
本发明公开了一种同时测定多种抗抑郁药血药浓度的方法，该方法为对待测样品经过预处理后，在分析色谱柱分离，然后用质谱检测器进行检测。该方法样品取样少，前处理过程简单，分析周期短，检测灵敏度高，能同时测定多种抗抑郁药的血药浓度，适用面广，成本低，适合于临床常规血药浓度的监测。
文档编号G01N30/02GK102175778SQ201010581038
公开日2011年9月7日 申请日期2010年12月3日 优先权日2010年12月3日
发明者申屠建中, 窦静 申请人:杭州谷歌科技有限公司