专利名称：血液糖化白蛋白含量检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型属于医学体外诊断领域，具体是一种可用于检测人或动物血液糖化白 蛋白含量的试剂盒。
背景技术：
糖尿病一旦发病，根治非常困难，如果耽误治疗，会引起一系列的并发症，如视网 膜炎，肾病、神经疾病等。为了防止这些并发症的出现，严格的血糖控制非常必要。糖化白蛋白(GA)与糖化血红蛋白(GHb)和糖化血清蛋白(GSP) —样属于糖尿病 控制的指标。其中GHb代表过去6周 8周血糖水平，GA和GSP可有效反映患者过去2周 3周平均血糖水平，适用于短期监控。GA的测定不受进食、胆红素、尿酸、肌酐、血红蛋白及 维生素C的干扰，尤其是排除了肝硬化、肾衰竭、溶血性贫血和蛋白质结构异常对血浆蛋白 量的影响，弥补了 GHb测定的不足。目前市场上检测GA的产品主要是ELISA试剂盒，以及高效液相色谱法(HPLC)为 原理的专用分析仪，如日本TOSHO公司的全自动GA分析仪，另有日本旭化成的酶法糖化白 蛋白值测定试剂盒(Lucica GA-L)，其检测步骤分为两步一是测糖化白蛋白的浓度，将血 清中糖化白蛋白酶解成糖化氨基酸，再用酮胺氧化酶将其氧化生成葡萄糖酮醛和氨基酸、 过氧化氢，利用过氧化物酶及双色原与过氧化氢发生显色反应比色得到糖化白蛋白的浓 度；第二步是用溴甲酚紫法测白蛋白的浓度。最后用糖化白蛋白的浓度除以白蛋白的浓度 得到糖化白蛋白值(％)。
实用新型内容本实用新型的目的在于提供一种组成更加简单、使用方便，能够快速准确的检测 人或动物血液糖化白蛋白的试剂盒。本实用新型试剂盒尤其适用于测定糖尿病人的血液糖化白蛋白的含量，使患者在 治疗中能够有效的控制血糖含量。本实用新型通过以下技术方案实现本实用新型提供一种血液糖化白蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，包括盒盖、盒 体以及置于盒体中的三个试剂单元；三个试剂单元各包括至少一个独立密封容器，分别盛 装有前处理液、NBT法果糖胺测量试剂和白蛋白测定试剂。所述至少一个独立密封容器指 每个试剂单元至少包含一个独立密封容器，也可以包含一个以上的独立密封容器，这些容 器共同构成相应的试剂单元。所述盒体可以是正方体形状或长方体形状，盒盖具有与之相 应的形状并能与盒体构成一个完整的包装盒；盒盖可以单边连接在盒体上，或与盒体相互 独立。本实用新型血液糖化白蛋白含量检测试剂盒的三个试剂单元的独立密封容器为 试剂瓶，所述试剂瓶由瓶体和瓶盖组成。试剂瓶可以为圆柱形、四棱柱形或其他适合的形 状。
3[0010]本实用新型血液糖化白蛋白含量检测试剂盒的三个试剂单元的独立密封容器可 以彼此独立地放置，或相邻的独立密封容器的彼此相连，形成一体，例如，第一试剂单元的 独立密封容器与第二试剂单元的独立密封容器相连，第二试剂单元的独立密封容器与第三 试剂单元的独立密封容器相连，三部分独立密封容器在外形上形成一体结构，其内部仍保 持是各自独立。其连接可以是外壁直接相连，或借助支架连接为一体。本实用新型血液糖化白蛋白含量检测试剂盒还可以包括有固定物，如泡沫塑料、 海绵等。固定物填充于独立密封容器周围，起到固定、抗震的作用。本实用新型血液糖化白蛋白含量检测试剂盒的三个试剂单元所包括的独立密封 容器，分别盛装有前处理液、NBT法果糖胺测量试剂和白蛋白测定试剂。所述的前处理液包含酮胺氧化酶，其含量为10U/ml 100KU/ml。所述的NBT法果糖胺测量试剂包含有无水碳酸钠，氯化硝基四氮唑蓝。前者含量 为 20mmol/l lmol/1，后者含量为 10mmol/l 1 0. 5mol/l。所述的白蛋白测定试剂包含有溴甲酚绿0. 20 1. 0mmol/l,pH4. 0 6. 0，或含有 溴甲酚紫0. 20 1. 0mmol/l,pH4. 0 6. 0，或同时含有溴甲酚绿和溴甲酚紫，前者0. 10 1. Ommol/1，后者 0. 10 1. Ommol/1。本实用新型试剂盒的设计原理如下通过原理分析，我们先通过配制含有酮胺氧 化酶的前处理液，该酶可以使内因性的糖化氨基酸转化成葡萄糖酮醛、氨根离子和双氧水 而除去，这时样本中只含糖化血红蛋白和糖化血清蛋白。由于糖化血红蛋白的比例很少，因 此通过校正后，其影响可以忽略不计。通过果糖胺(NBT)测定的糖化血清蛋白浓度后，再通 过溴甲酚绿(或溴甲酚紫或两者混合的试剂)测量白蛋白总浓度，最后计算出两者的比例。 校正后可得到糖化血清白蛋白测量值。本实用新型由三个试剂单元组成，比现有的酶法糖化白蛋白值测定试剂盒减少1 种试剂单元，其结构紧凑，拆取方便，操作简单，应用灵活，可满足不同检测目的的需求。而 且由于使用NBT法，因此使本产品的成本大大降低，为产品市场推广奠定基础。本适用新型成本低，操作简单，比日本旭化成的酶法糖化白蛋白值测定试剂盒少 一种试剂，而且与市售产品检测结果有很强的相关性，经过校正后，可以得到与市售产品相 似的结果，符合临床检测的需要，为控制糖尿病病人病情起到的积极作用。以下通过附图和具体实施方式
对本实用新型作进一步的详细说明，具体实施方式以举例的目的给出，并不构成对本实用新型的任何限制。
图1 本实用新型盒盖打开时的立体结构图。图2 图1沿A-A线的剖面图。图3 —体结构的独立密封容器。图4:图3的剖面图。图5 借助支架连接为一体的三个试剂单元(I )。图6 借助支架连接为一体的三个试剂单元(II )。其中，1为盒盖，2为盒体，3为第一试剂单元，4为第二试剂单元，5为第三试剂单 元，6为固定物，7为连接支架。
具体实施方式
实施例1如图1和图2，本实用新型血液糖化白蛋白含量检测试剂盒，包括盒盖1和盒体2， 以及第一试剂单元3、第二试剂单元4、第三试剂单元5，每个试剂单元由一个可密封的试剂 瓶组成，三个试剂单元分别盛装有前处理液，NBT法果糖胺测量试剂，白蛋白测定试剂，上述 试剂单元顺序放置于盒体2中，本实用新型盒盖1和盒体2可密封，使用前打开。以下结合在东芝40生化分析仪上使用本产品对本实用新型作进一步说明。1.首先设定生化分析仪参数，测量样本中糖化血清蛋白的含量，具体如下取本实用新型第一个试剂单元3中盛装的前处理液(Rl)，100ul，然后取样本 IOul，反应3分钟后，加入本实用新型第二个试剂单元4中盛装的果糖胺试剂200ulR2，在主 波长为548nm和副波长为700nm下检测，在56，62处读点，检测反应完成后得到检测结果； 根据以上方法，使用相应的定标品，完成对果糖胺检测试剂的定标，完成定标后，检测相应 的质控品，如果质控品检测结果在要求的范围内，使用相同方法完成对样本的检测。2.再更换另外一个通道，检测样本中血清白蛋白的含量，具体如下取本实用新型第一个试剂单元5中盛装的白蛋白试剂R3，250ul，然后再取样本 2ul，在检测主波长600nm，副波长700nm下进行检测，在25，28处读点，检测反应完成后得到 检测结果；根据以上方法，使用相应的定标品，完成对白蛋白试剂的定标，完成定标后，检测 相应的质控品，如果质控品检测结果在要求的范围内，再完成对样本的检测。3.测量结果的校准。由于存在血红蛋白对测量结果的干扰，因此这些干扰必需通过校准，使本方法检
测的结果与市售产品检测结果相近。本实施例采用如下的校准公式
μ/。Λ_果糖胺试剂检测结果δ 9 _ GA(/°)-白蛋白试剂检测结果Χ88·2-0·80实施例2如图3和图4，本实用新型血液糖化白蛋白含量检测试剂盒的三个试剂单元的独 立密封容器可以彼此相连形成一体，第一试剂单元3、第二试剂单元4、第三试剂单元5的独 立密封容器的外壁直接相连形成一体。实施例3本实用新型血液糖化白蛋白含量检测试剂盒的三个试剂单元的独立密封容器可 以借助支架形成一体，如图5和图6。组成第一试剂单元3、第二试剂单元4、第三试剂单元 5的独立密封容器的外壁借助支架7连接为一体，图5和图6分别表示两种不同结构和形状 的支架。
权利要求血液糖化白蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，包括盒盖、盒体以及置于盒体中的三个试剂单元，三个试剂单元各包括至少一个独立密封容器，分别盛装有前处理液、NBT法果糖胺测量试剂和白蛋白测定试剂。
2.如权利要求1所述的血液糖化白蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，所述的三个试 剂单元的独立密封容器为试剂瓶，所述试剂瓶由瓶体和瓶盖组成。
3.如权利要求1所述的血液糖化白蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，所述的独立密 封容器彼此独立地放置。
4.如权利要求1所述的血液糖化白蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，所述的独立密 封容器与相邻的独立密封容器相连形成一体，其连接方式选自以下方式之一相邻独立密 封容器外壁直接相连或借助支架连接为一体。
5.如权利要求1所述的血液糖化白蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还 包括有固定物，固定物填充于独立密封容器周围，所述固定物选自泡沫塑料、海绵之一种。
6.如权利要求1至5任一所述的血液糖化白蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，所述的 前处理液包含酮胺氧化酶，其含量为10U/ml 100KU/ml。
7.如权利要求1至5任一所述的血液糖化白蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，所 述的NBT法果糖胺测量试剂包含无水碳酸钠和氯化硝基四氮唑蓝；无水碳酸钠的含量为 20mmol/l lmol/1，氯化硝基四氮唑蓝的含量为10mmol/l 1 0. 5mol/l。
8.如权利要求1至5任一所述的血液糖化白蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，所述 的白蛋白测定试剂含有溴甲酚绿和溴甲酚紫之一种，包含有溴甲酚绿时，其浓度为0. 20 1. Ommol/1, pH4. 0 6. 0 ；包含有溴甲酚紫时，其浓度为0. 20 1. Ommol/1, pH4. 0 6. 0。
9.如权利要求1至5任一所述的血液糖化白蛋白含量检测试剂盒，其特征在于，所述的 白蛋白测定试剂含有溴甲酚绿和溴甲酚紫，溴甲酚绿浓度为0. 10 l.Ommol/1，溴甲酚紫 浓度为 0. 10 1. Ommol/1 ο
专利摘要本实用新型提供一种血液糖化白蛋白含量检测试剂盒，包括盒盖、盒体以及置于盒体中的三个试剂单元，三个试剂单元各包括至少一个独立密封容器，分别盛装有前处理液、NBT法果糖胺测量试剂和白蛋白测定试剂。本实用新型试剂盒结构紧凑，拆取方便，操作简单，应用灵活，可满足不同检测目的的需求，且生产成本大大降低。本实用新型试剂盒可用于人或动物血液糖化白蛋白含量的检测。
文档编号G01N21/78GK201689054SQ20102020843
公开日2010年12月29日 申请日期2010年5月27日 优先权日2010年5月27日
发明者吴静, 孟菲, 王军峰, 王宇飞, 王辉 申请人:上海执诚生物技术有限公司