专利名称：一种流动注射化学发光法在线检测穿心莲内酯的方法
技术领域：
本发明属植物化学、天然产物化学、食品化学、分析化学、有机化学、生物化学、植物次生代谢物质的生理学、植物生物活性物质、穿心莲内酯的提取和纯化及结晶、穿心莲的栽培和育种、穿心莲内酯在食品、药品中的安全检测领域，特别涉及一种流动注射化学发光法在线检测穿心莲内酯的方法。
背景技术：
穿心莲为常用中药，具有清热解毒、凉血消肿等功效。临床上多用于上呼吸道感染、急性菌痢、胃肠炎、感冒发热及高血压等心血管疾病的治疗。并作为消炎利胆片、清火桅麦片等的原料广泛用于中成药生产。随着抗生素滥用及不良反应的增加，开发具有良好抗菌效果的中药的呼声越来越高。穿心莲作为抗菌作用显著的中药，越来越受到医药界关注。因此，对穿心莲内酯的含量检测也成为必不可少的重要组成部分。穿心莲的化学成分主要为内酯类和黄酮类。内酯类有穿心莲内酯；新穿心莲内酯； 脱羟基穿心莲内酯；高穿心莲内酯；14-脱氧-11氧(代)穿心莲内酯；14-脱氧-11、12-二脱氧穿心莲内酯；穿心莲内酯甙；14-去氧穿心莲内酯甙等。目前分析检测穿心莲内酯的方法有6种方法①高压液相色谱(谢春英，苏薇薇 2000 ；宋粉云，钟兆健，邓红2002)；②薄层色谱(顾利红，朱品业2000;王海龙，赵庆华，赵玉2000)；③电位滴定法(韦娟1999)；④比色法(郭彬等2002)；⑤流动注射分析法(包玮鸳2003)；⑥化学发光法(汪宝琪等1994;张慧，林洁华2010)等。上述各种检测方法有*定的缺点①高压液相色谱法仪器比较贵，同时要有该专业技术人员，一名优秀的检测师的培养很花时间，另外专用色谱纯的流动相和色谱柱比较贵；②薄层色谱法所用的化学试剂比较多，适合于小样品的纯化；③电位滴定法和④比色法检测限大，且重现性差；⑤流动注射分析法使用紫外检测，检测限大，稳定性差；这几种方法都适合于大学及研究所对穿心莲内酯的研究；⑥汪宝琪、张慧等做的化学发光法化学试剂比较多，测样速度慢，同时他们的方法使用乙醇为溶剂溶解穿心莲内酯，只适合于工业化生产的检查，不适合于农业田间育种或栽培时对叶片中穿心莲内酯含量的检测；相比之下，我们克服了上述各种情况，使用流动注射化学发光分析仪让操作更加简单，检测成本低，标准曲线的线性好，检测限低，该方法做为常规性测定手段易于被农业生产和工业生产的企业所应用。
发明内容
本发明的目的是提供一种流动注射化学发光法在线检测穿心莲内酯的方法。具体步骤为用0. 08 0. 12mol/L H2SO4 作为溶剂配制 3. OX KTW/L 的硫酸铈铵(Ce (IV))， 用二次蒸馏水作为溶剂配制6. OX Krtiol/L的Na2SO3溶液，用二次蒸馏水为溶剂配制浓度为25 μ g/mL穿心莲内酯标准溶液和样品穿心莲内酯溶液。主动泵分别将上述浓度的载流 Na2SO3溶液和穿心莲内酯标准溶液以30 60r/min的流速通过相应的管道进行三通混合， 输入流动注射化学发光分析仪。待基线平稳后，副动泵将硫酸铈铵溶液以50 80r/min的流速通过十六通注射阀，注样时间10 20秒，各液混合，流入流通池检测其化学发光强度， 记录数据，作出标准曲线方程；然后重复上述操作过程，测试样品穿心莲内酯的化学发光强度，代入标准曲线方程，计算样品穿心莲内酯的含量。上述测试过程及各种化学试剂均保持在35°C恒温条件下，上述试剂均为分析纯。在优化的条件下，穿心莲内酯标准溶液的浓度在1 25 μ g/mL范围内与发光强度 Δ I呈线性关系，这表明可利用这一方法对穿心莲内酯作定量分析。本发明所述流动注射化学发光法由于其灵敏度高，重复性好，线性范围宽，仪器设备简单，操作简单，检测成本低，可在线进行常规性测定，易于应用到工业或农业生产中。
附图为本发明所用15. 00 μ g/mL的穿心莲内酯标准溶液的发光图谱。
具体实施例方式实施例用0. lmol/L H2SO4作为溶剂配制3. 0 X 10_4mol/L的硫酸铈铵(Ce(IV))，用二次蒸馏水作为溶剂配制6. 0 X 10_3mol/L的Na2SO3溶液，用二次蒸馏水为溶剂配制浓度为25 μ g/ mL穿心莲内酯标准溶液和样品穿心莲内酯溶液。主动泵分别将上述浓度的载流妝2503溶液和穿心莲内酯标准溶液以45r/min的流速通过相应的管道进行三通混合，输入流动注射化学发光分析仪。待基线平稳后，副动泵将硫酸铈铵溶液以65r/min的流速通过十六通注射阀，注样时间15秒，各液混合，流入流通池检测其化学发光强度，记录数据，作出标准曲线方程；然后重复上述操作过程，测试样品穿心莲内酯的化学发光强度，代入标准曲线方程， 计算样品穿心莲内酯的含量。上述测试过程及各种化学试剂均保持在35 °C恒温条件下，上述试剂均为分析纯。
权利要求
1. 一种流动注射化学发光法在线检测穿心莲内酯的方法，其特征在于具体步骤为用 0. 08 0. 12mol/L H2SO4作为溶剂配制3. 0 X 10_4mol/L的硫酸铈铵(Ce (IV))，用二次蒸馏水作为溶剂配制6. 0X10_3mol/L的Na2SO3溶液，用二次蒸馏水为溶剂配制浓度为25 μ g/mL 穿心莲内酯标准溶液和样品穿心莲内酯溶液；主动泵分别将上述浓度的载流N%S03溶液和穿心莲内酯标准溶液以30 60r/min的流速通过相应的管道进行三通混合，输入流动注射化学发光分析仪；待基线平稳后，副动泵将硫酸铈铵溶液以50 80r/min的流速通过十六通注射阀，注样时间10 20秒，各液混合，流入流通池检测其化学发光强度，记录数据，作出标准曲线方程；然后重复上述操作过程，测试样品穿心莲内酯的化学发光强度，代入标准曲线方程，计算样品穿心莲内酯的含量；上述测试过程及各种化学试剂均保持在35°C恒温条件下，上述试剂均为分析纯。
全文摘要
本发明公开了一种流动注射化学发光法在线检测穿心莲内酯的方法。配制硫酸铈铵溶液(Ce(IV))，Na2SO3溶液，穿心莲内酯标准溶液和样品穿心莲内酯溶液。主动泵分别将上述的Na2SO3溶液和穿心莲内酯标准溶液以30～60r/min的流速通过相应的管道进行三通混合，输入流动注射化学发光分析仪。待基线平稳后，副动泵将硫酸铈铵溶液以50～80r/min的流速通过十六通注射阀，注样时间10～20秒，各液混合，流入流通池检测其化学发光强度，记录数据，作出标准曲线方程；重复上述操作，测试样品穿心莲内酯化学发光强度，代入标准曲线方程，计算样品穿心莲内酯的含量。本发明检测方法简单，检测成本低，可在线进行常规性测定，易于应用到工农业生产中。
文档编号G01N21/76GK102262085SQ20111009430
公开日2011年11月30日 申请日期2011年4月13日 优先权日2011年4月13日
发明者李子院, 李海云, 王秀丽, 蒋泽军, 郝再彬, 黄斌 申请人:桂林理工大学