专利名称：藏降脂制剂的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及藏降脂制剂，特别是藏降脂胶囊的质量控制方法。
背景技术：
高脂血症是心脑血管疾病的基本因素，也是高血压、冠心病、动脉粥样硬化等病症明确的一环因素，严重威胁人类的健康。降脂药物的研发一直是医药行业的重要课题。高脂血症主要与胆固醇、动物脂肪摄入过多和脂肪代谢紊乱有关，目前，高脂血症主要采取饮食疗法，以低脂肪低糖食物为主，无效时加用降脂药治疗。藏降脂胶囊记载于国家药品标准，标准编号WS-10864(ZD-0864)-2002。藏医认为藏降脂胶囊具有通道血脉，行气凉血的作用，用于血热引起的高脂血症；中医认为藏降脂胶囊具有活血化痰的作用，用于痰瘀血阻引起的高脂血症。藏降脂胶囊源于著名藏医药学家帝玛·丹增彭措(1673—？)的《医著选集》，藏文名为“居日尼阿”，至今已有300余年的临床应用史，是藏医用于清血除脂的代表性药方。《四部医典》(秘诀部)记载“瘦比肥胖好、滋补要适度，一切内科疾病由消化不良而生”。青海省藏医药研究所在原方“居日尼阿”的基础上，根据《四部医典》所载原方，科学配伍，不断改进和完善，研制成藏降脂胶囊，经长期临床试验证明藏降脂胶囊组方科学，疗效显著。如今，藏降脂已被认证为青海省高新技术产品。藏降脂胶囊为青海金诃藏药药业股份有限公司产品，在原质量标准基础上增加了薄层色谱法定性鉴别产品中甘青青兰，该法简单、方便，专属性较强，并将原质量标准中薄层扫描含量测定法修订为高相液相色谱法测含量；增加了大黄中4种主要成分的含量测定，该方法同时测定大黄中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚5种主要成分。通过改进质量标准，对本品的工艺要求更严格，同时质量标准更严谨，科学。这些质量控制方法不仅适用于藏降脂胶囊，而且适用于以藏降脂的处方制备的其他剂型的藏降脂类制剂。
发明内容
本发明的目的在于，克服现有技术的不足，提供了一种藏降脂类制剂，尤其是藏降脂胶囊的新的质量检测方法。其内容如下
本发明藏降脂制剂处方组成藏锦鸡儿39.3g、余甘子31.48、短管兔耳草23.58、 紫檀香23. 5g、印度獐牙菜23.5g、诃子23.5g、沙棘膏23.5g、大黄23. 5g、塞北紫堇 23. 5g、甘青青兰23. 5g、干姜15. 8g。本发明的藏降脂制剂可以为上述处方药材直接粉碎制成或经提取加工后制成的胶囊剂、颗料剂、浓缩丸、散剂或片剂等剂型，本发明的检测方法适用于上述但不限于上述藏降脂制剂。本发明胶囊制剂为藏锦鸡儿39.3g、余甘子31. 4g、短管兔耳草23. 5g、紫檀香 23. 5g、印度獐牙菜23.5g、诃子23.5g、沙棘膏23. 5g、大黄23. 5g、塞北紫堇23. 5g、甘青青兰23.5g、干姜15. 8g，以上十一味，粉碎成细粉，混勻，装入胶囊，制成1000粒，即得。
甘青青兰的定性鉴别
取产品内容物粉末2、g，加乙醚30ml，超声处理30min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇 5ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘青青兰对照药材0. 5g，加乙醚30ml，超声处理30min， 滤过，滤液挥干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为甘青青兰对照药材溶液。照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述2种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(6(T90°C )-醋酸乙酯-甲醇为展开剂，石油醚(6(T90°C )-醋酸乙酯-甲醇体积份数比为疒10:广3 :0. 5 1.5展开，取出，晾干，喷以体积份数比为10% 硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。齐墩果酸的定性鉴别
取产品内容物粉末2、g，加甲醇40ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 5ml溶解，作为供试品溶液。另取齐墩果酸对照品，加甲醇制成每Iml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述2种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸为展开剂， 甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸体积份数比为6 18 2^6 0. 25、. 75，展开，取出，晾干，喷以体积份数比为体积份数比为10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。大黄的定性鉴别
取产品内容物粉末广5g，加甲醇20ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水IOml 溶解，再加盐酸lml，置水浴中加热回流30min，立即冷却，用乙醚振摇提取2次，每次20ml， 合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0. lg，同法制成对照药材溶液。再取大黄酸对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。 照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述3种溶液各6μ1，分别点于同一硅胶H薄层板上，以石油醚(60°C -900C)-甲酸乙酯-甲酸为展开剂， 甲酸乙酯-甲酸体积份数比为疒22 :2 8:0. 5 1.5展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点；置氨蒸气熏后，日光下检视，斑点变为红色。本发明还提供了通过测定藏降脂制剂中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚，来测定大黄的含量的方法，控制藏降脂制剂的质量。藏降脂胶囊中大黄的含量是采用高效液相色谱法测定大黄中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量确定。大黄的测定方法为
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积份数比为0. 1%的磷酸为流动相；甲醇-1%磷酸水溶液体积份数比为80-90:10-20，检测波长为 430nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、 大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每Iml含芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、各80ug，大黄素甲醚40ug的溶液，分别精密量取
5上述对照品溶液各anl，混勻，即得(即每Iml中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各 16ug，含大黄素甲醚8ug)。供试品溶液的制备本品研细后，取粉末2g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声20-40 min,放冷，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过， 精密量取取续滤液5ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加体积百分比为8%盐酸水溶液IOml，超声2 分钟，再加三氯甲烷10ml，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗内，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次IOml，合并三氯甲烷液，减压回收溶液至干，残渣加甲醇使溶解， 转移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每粒含大黄以芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚总量计不得少于0. 3mgoHPLC法测定藏降脂胶囊中大黄的含量 1.仪器、试药和供试样品
仪器高效液相色谱仪日立L-2100泵，日立检测器L-MOO检测器；岛津AUW220D电子天平
对照品芦荟大黄素对照品(批号110795-201007)、大黄酸对照品(批号 110757-200206)、大黄素对照品(110756-200100)、大黄酚对照品(110796-201017)、大黄素甲醚对照品(110758-201013)购自中国药品生物制品检定所。样品藏降脂胶囊(青海金诃藏药药业股份有限公司)，生产批号090501、090502、 090503。2.色谱条件选择
按文献及药典中大黄中测定方法，均无法同时测定藏降脂中大黄的5个蒽醌类成分， 单纯改变流动相及提取方法均不能达到要求。改用大黄蒽醌类特征吸收峰430nm后，发现藏降脂中大黄的5个蒽醌类成分均得到很好色谱分离，且阴性样品无干扰。以甲醇-体积百分比为0. 1%的磷酸水溶液为流动相，甲醇-体积百分比为0. 1% 的磷酸水溶液在90:10到70:30均能达到含量检查要求。3.对照品制备
精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每Iml含芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照、 大黄酚对照品各80ug，大黄素甲醚40ug的溶液，分别精密量取上述对照品溶液各anl，混勻，即得。4.供试品制备
本品研细后，取粉末2g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，精密量取取续滤液5ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加体积百分比为8%的盐酸水溶液10ml，超声2分钟，再加三氯甲烷10ml， 加热回流1小时，放冷，置分液漏斗内，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次 10ml，合并三氯甲烷液，减压回收溶液至干，残渣加甲醇使溶解，转移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得。
5.系统适用性试验及阴性干扰的考察
在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μ 1， 注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚与其相邻色谱峰的分离度大于1. 5，且阴性对照无干扰。见附
图1。6.标准曲线的制备和线性关系的考察
精密量取对照品贮备液溶液(芦荟大黄素；34. 5ug/ml、大黄酸33. 2mg/ml、大黄素 32. 4mg/ml、大黄酚各33. 6ug/ml，含大黄素甲醚 17. 8ug/ml)lml、3 ml,5 ml、8ml、10ml，分别置IOml容量瓶中，无水乙醇稀释至刻度，摇勻，各精密进样10 μ 1，以峰面积(A)对对照品浓度(C)进行线性回归，见表1 表5。表1芦荟大黄素标准曲线结果
权利要求
1.一种藏降脂制剂的质量检测方法，其特征在于通过甘青青兰的定性鉴别、齐墩果酸的定性鉴别、大黄的定性鉴别，及同时测定藏降脂制剂大黄中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量的方法，控制藏降脂制剂的质量。
2.根据权利要求1所述的一种藏降脂制剂的质量检测方法，其特征在于该方法采用高效液相色谱法，测定大黄中芦荟大黄素的含量，测定大黄中大黄酸的含量，测定大黄中大黄素的含量，测定大黄中大黄酚的含量，测定大黄中大黄素甲醚的含量。
3.根据权利要求2所述的一种藏降脂制剂的质量检测方法，其特征在于测定大黄中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的样品处理方法为a.对照品溶液的制备精密称取芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每Iml含芦荟大黄素对照品、大黄酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品各80ug，大黄素甲醚40ug的溶液，分别精密量取上述对照品溶液各anl，混勻，即得对照品溶液，其中每Iml中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚各16ug，含大黄素甲醚Sug ；b.供试品溶液的制备本品或本品内容物研细后，取粉末1 3g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，精密量取续滤液5ml，置烧瓶中，挥去溶剂，加体积百分比为8%盐酸水溶液 10ml，超声2分钟，再加三氯甲烷10ml，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗内，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次IOml，合并三氯甲烷液，减压回收溶液至干，残渣加甲醇使溶解，转移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，滤过，取续滤液，即得。
4.根据权利要求1或2所述的一种藏降脂制剂的质量检测方法，其特征在于测定大黄中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的色谱操作条件为a.色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积百分比为0. 1%的磷酸水溶液为流动相，甲醇-体积百分比0. 1%磷酸水溶液的体积份数比为 80-90:10-20 ；检测波长为430nm ；理论塔板数按大黄素峰计算应不低于3000 ；b.测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定， 即得。
5.根据权利要求1所述的一种藏降脂制剂的质量检测方法，其特征在于包括下列一种或几种定性鉴别方法a.甘青青兰的定性鉴别取产品或产品内容物2 8g，加乙醚30ml，密塞，超声处理30min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘青青兰对照药材0. 5g，加乙醚30ml，密塞， 超声处理30min，滤过，滤液挥干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为甘青青兰对照药材溶液；照中华人民共和国药典2010年版一部附录VI B试验薄层色谱法，吸取上述2种溶液各5ul， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以沸程6(T90°C石油醚-醋酸乙酯-甲醇为展开剂，沸程 60 90°C石油醚-醋酸乙酯-甲醇的体积份数比为7 10:1 3 :0. 5 1.5展开，取出， 晾干，喷以体积百分比为10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；b.齐墩果酸的定性鉴别取产品或产品内容物2 8g，加甲醇40ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5ml溶解，作为供试品溶液；另取齐墩果酸对照品，加甲醇制成每Iml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中华人民共和国药典2010年版一部附录VI B试验薄层色谱法，吸取上述 2种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸为展开剂，甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸体积份数比为6 18 :2 6 0. 25 0. 75展开，取出，晾干，喷以体积百分比为10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；c.大黄的定性鉴别取产品或产品内容物1 5g，加甲醇20ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加水IOml溶解，再加盐酸1ml，置水浴中加热回流30min，立即冷却，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材 0. lg，同法制成对照药材溶液；再取大黄酸对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照中华人民共和国药典2010年版一部附录VI B试验薄层色谱法，吸取上述3种溶液各6μ1，分别点于同一硅胶H薄层板上，以沸程60°C -90°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸为展开剂，沸程60°C -90°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸体积份数比为7 22 =2^8:0. 5 1. 5 ；展开， 取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的5个橙黄色荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点；置氨蒸气熏后，日光下检视，斑点变为红色。
全文摘要
本发明公开了一种关于藏降脂制剂的质量检测方法，特别是藏降脂胶囊的质量检测方法。在原质量标准基础上增加了薄层色谱法定性鉴别产品中的甘青青兰这个专属性较强的鉴别方法，并将原质量标准中薄层扫描法测定大黄酚含量修订为高相液相色谱法测定总蒽醌含量；该方法同时测定大黄中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚5种主要成分。经过试验研究，本发明质量检测方法中的鉴别方法在样品的供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。用本发明所述的含量测定方法测定藏降脂制剂中的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量，结果表明，该方法线性关系良好，回收率试验准确度较高，具有极好的重复性和稳定性，可以准确、严密地控制藏降脂制剂的质量。
文档编号G01N30/90GK102397517SQ20111018860
公开日2012年4月4日 申请日期2011年7月5日 优先权日2011年7月5日
发明者刘玉芹, 宋洋, 张义智, 李丽, 邵成雷, 高英涵 申请人:山东阿如拉药物研究开发有限公司