专利名称：一种快速检测饲料用非淀粉多糖酶效价的方法
技术领域：
本发明涉及一种快速检测饲料用非淀粉多糖酶效价的方法。
背景技术：
饲料用非淀粉多糖酶是目前饲料工业中应用最广的饲料酶，主要包括木聚糖酶、 纤维素酶、葡聚糖酶、果胶酶和甘露聚糖酶，它们少部分以单体酶形式使用，大部分以复合酶形式使用。在我国，非淀粉多糖酶占饲料酶市场总量的65%左右。在欧洲和北美，非淀粉多糖酶占饲料酶市场总量的70%左右。对于非淀粉多糖酶的分析测定，无论是单体酶还是复合酶，都很繁琐，而且分析数据的实用性和重复性也不理想。目前，实验室的分析底物都是纯度比较高而且容易溶于水的聚合物，但是它们实际的天然底物都是不溶于水的聚合物，而且这些聚合物往往相互交联在一起，组成成分也比较复杂。非淀粉多糖酶对天然底物的降解效率很差，往往只有可溶性底物的5 10%左右，而且很难准确定量。动物饲养试验虽然直观，可靠性也比较好，但是试验的时间太长(至少需要2个月)，成本也很高，在实际生产过程中很难推广，对于科研过程中要求的快速分析要求甚远。
发明内容
本发明的目的是提供一种快速检测饲料用非淀粉多糖酶效价的方法。本发明提供的检测饲料用非淀粉多糖酶效价的方法，包括如下步骤以本发明提供的不含淀粉的麦麸为底物，将其与待测饲料用非淀粉多糖酶混匀进行酶解反应，反应完毕后测定剩余所述底物的干重，按照如下公式计算得到降解效率，根据所得降解效率评价所述待测非淀粉多糖酶的效价
^酶解反应前的底物干重-酶解反应后的乘1J余底物干重ιηηο/
降解效率=-祐如匕认十& 丁去-X100% ο
酶解反应目ij的底物干重该方法所述酶解反应步骤中，酶解温度选择饲养动物消化道的温度。本发明提供的麦麸制备方法，包括如下步骤将麦麸原料浸泡、洗净后，剔除其中完整的麦粒，再与水混匀后进行糊化反应，加入α -淀粉酶进行反应，反应完毕后再与糖化酶进行反应，反应完毕后得到所述不含淀粉的麦麸。上述方法的所述糊化反应步骤中，温度为95 100°C，时间为10 15分钟；所述加入α -淀粉酶进行反应步骤中，温度为65 70°C ;时间为25 30分钟；所述与糖化酶进行反应步骤中，温度为95 100°C，时间为60分钟。所述α -淀粉酶的酶活为4000u/g ;所述糖化酶的酶活为80000u/g。所述制备不含淀粉的麦麸的方法，还包括如下步骤在所述与糖化酶进行反应完毕后，将产物自然冷却至室温后水洗并常温干燥，得到所述不含淀粉的麦麸。所述水洗次数为3 4次，所述干燥步骤中，时间为20 24小时。
按照上述方法制备得到的不含淀粉的麦麸，也属于本发明的保护范围。所述不含淀粉的麦麸中，淀粉的质量百分含量不超过O. 01 %，含水量为8. 0%。本发明提供的快速检验饲料用非淀粉多糖酶效价的方法，以消除淀粉的麦麸为分析底物，在设定的温度和溶液中加入需要分析的饲料用非淀粉多糖酶。这种饲料酶可以是单体酶，也可以是复合酶。经过设定的反应时间以后，经过滤洗涤、干燥，测定残留底物的干重，计算降解效率，以此作为主要指标评价比较所分析酶的效价。这种试验方法不仅可以快速检测单酶在实验室配制缓冲液中的效价，也可以快速检测复合酶在实验室配制的缓冲液中的效价。不仅可以快速检测单酶在动物消化液中的效价，也可以快速检测复合酶在动物消化液中的效价。该方法直观、简便，不需要很精密的分析仪器，而且能同时检验动物消化道的环境对酶蛋白作用效果的影响，从而能更客观全面地反映这些饲料酶的实际效价。饲料生产企业和养殖户可以参照上述方法对非淀粉多糖酶的效价进行分析和比较，适用于饲料用非淀粉多糖酶的研究、生产和应用，特别适用于畜禽和水产饲料中非淀粉多糖酶效价的快速检测。
图I为缓冲液中的麦麸降解效果。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明并不限于以下实施例。所述方法如无特别说明均为常规方法。所述原料如无特别说明均能从公开商业途径而得。实施例I :称取IOkg普通商品麦麸，用60kg清水在常温(20 30°C )浸泡24小时，清洗其中的泥渣和其它可溶性杂物，撇除漂浮的皮壳和麦秸等粗纤维。用清水反复清洗3次，然后再过滤、挤压，获得洁净的麦麸，其含水量为65%，总重量为25kg。将所得麦麸分批平摊在托盘上，挑除其中没有破碎的麦粒。这部分没有破碎的麦粒虽然很少，但是对后期实验结果的精度有影响，所以必须剔除。在容量为100升的不锈钢容器中，加入上述获得的清洁麦麸， 再加入45kg蒸馏水，然后通蒸汽加热升温至98°C，保持12分钟，充分糊化麦麸中残留的淀粉。然后冷却至65°C，加入10克淀粉液化酶(α -淀粉酶，酶活为4000u/g，购自北京东华强盛生物工程有限公司，产品目录号为107658305。)，保持30分钟。然后逐步加热至95°C， 再加入20克糖化酶(酶活为80000u/g，购自北京东华强盛生物工程有限公司，产品目录号为1003301)，保温60分钟，以充分糖化残留的淀粉成为溶解于水的葡糖糖和麦芽糖。自然冷却至室温，过滤，挤压，获得渣滤，再用蒸馏水清洗滤渣3次，以充分滤除残留的葡萄糖和麦芽糖，获得纯净的麦麸，其含水量为65%，重量为22kg。把含水量为65%的22kg麦麸分批平摊在托盘上进行常温气流干燥，24小时以后基本达到恒重，得到纯麦麸7. 6kg，含水量为8. 0%，残余淀粉含量不超过O. 01 %，分装在密封在容器中，于4°C冰箱中保存。实施例2取12个500ml的三角瓶，在每个三角瓶中加入250ml缓冲液(pH值为5. 5，在 5000ml蒸馏水中加入4. 5ml冰醋酸和34. 85克无水醋酸钠，彻底溶解，醋酸根离子的浓度为
O.lmol/L)，接着再各加入10克实施例I制备所得的麦麸，其含水量为8. O %、淀粉含量不超过O. 01 %，在37°C恒温放置在水浴中，然后在这12个三角瓶中加入等量的待分析饲料酶 A。每隔30分钟抽取一个三角瓶，用8层医用纱布进行过滤，时间不超过2分钟。过滤结束后，用250ml蒸馏水清洗，3次过后取过滤渣，平摊在不锈钢托盘上，80°C气流干燥8小时至恒重，再常温冷却2小时，然后称重，按照如下公式计算得到降解效率，根据所得降解效率评价待分析饲料酶A的效价
权利要求
1.一种检测饲料用非淀粉多糖酶效价的方法，包括如下步骤以权利要求7或8所述不含淀粉的麦麸为底物，将其与待测饲料用非淀粉多糖酶混匀进行酶解反应，反应完毕后测定剩余所述底物的干重，按照如下公式计算得到降解效率，根据所得降解效率评价所述待测非淀粉多糖酶的效价攸础袖去—酶解反应前的底物干重-酶解反应后的剩余底物干重I ΛΛ0/酶解反应前的底物干重Χ O。
2.一种制备不含淀粉的麦麸的方法，包括如下步骤将麦麸原料浸泡、洗净后，剔除其中完整的麦粒，再与水混匀后进行糊化反应，加入α -淀粉酶进行反应，反应完毕后再与糖化酶进行反应，反应完毕后得到所述不含淀粉的麦麸。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述糊化反应步骤中，温度为95 100°C，时间为10 15分钟；所述加入α -淀粉酶进行反应步骤中，温度为65 70°C ;时间为25 30分钟；所述与糖化酶进行反应步骤中，温度为95 100°C，时间为60分钟。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于所述α-淀粉酶的酶活为4000u/g ； 所述糖化酶的酶活为80000u/g。
5.根据权利要求2-4任一所述的方法，其特征在于所述制备不含淀粉的麦麸的方法， 还包括如下步骤在所述与糖化酶进行反应完毕后，将产物自然冷却至室温后水洗并常温气流干燥，得到所述不含淀粉的麦麸。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述水洗次数为3 4次，所述干燥步骤中，时间为20 24小时。
7.权利要求2-6任一所述方法制备得到的不含淀粉的麦麸。
8.根据权利要求7所述的麦麸，其特征在于所述不含淀粉的麦麸中，淀粉的质量百分含量不超过O. 01 %。
全文摘要
本发明公开了一种检测饲料用非淀粉多糖酶效价的方法。该方法，包括如下步骤以本发明提供的不含淀粉的麦麸为底物，将其与待测饲料用非淀粉多糖酶混匀进行酶解反应，反应完毕后测定剩余所述底物的干重，计算降解效率，根据所得降解效率评价所述待测非淀粉多糖酶的效价。该方法不仅可以快速检测单酶在实验室配制缓冲液中的效价，也可以快速检测复合酶在实验室配制的缓冲液中的效价。不仅可以快速检测单酶在动物消化液中的效价，也可以快速检测复合酶在动物消化液中的效价。
文档编号G01N5/04GK102590013SQ20121000852
公开日2012年7月18日 申请日期2012年1月12日 优先权日2012年1月12日
发明者刘绪同, 曹云鹤, 王园, 王春林, 陆文清 申请人:中国农业大学