一种快速测定饲料用木聚糖酶酶活力的方法
【专利摘要】本发明公开了一种快速测定饲料用木聚糖酶酶活力的方法。该测定饲料用木聚糖酶酶活力的方法，包括如下步骤：将用于测定饲料用木聚糖酶酶活力的麦麸加到含有待测饲料用木聚糖酶液体中，获得酶解反应液；将所述酶解反应液进行酶解反应，测定所述酶解反应产生的可溶解物的质量，得到所述待测饲料用木聚糖酶的酶活力；以干重计，所述用于测定饲料用木聚糖酶酶活力的麦麸中淀粉的质量百分含量为≤0.01％。该方法既可以快速检测饲料用木聚糖酶在缓冲溶液中的酶活力，又可以快速检测饲料用木聚糖酶在离体动物消化液中的酶活力。饲料生产企业和养殖户可以参照本发明的方法对木聚糖酶的酶活力进行分析和比较，适用于饲料用木聚糖酶的研究、生产和应用。
【专利说明】
一种快速测定饲料用木聚糖酶酶活力的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及饲料领域中一种快速测定饲料用木聚糖酶酶活力的方法。
【背景技术】
[0002] 木聚糖酶是目前饲料工业中应用很广的单体酶，也是一种很成熟的饲料酶，约占 整个饲料酶产值的20%左右。木聚糖酶可以将饲料中的非淀粉多糖（NSPS)分解成较小聚 合度的低聚糖和木糖，从而改善饲料性能，消除或降低非淀粉多糖在动物肠胃中因粘度较 大而引起的抗营养作用；同时它还可以破坏植物细胞壁的结构，提高内源性消化酶的活性， 提高饲料养分的利用率，是一种很好的饲料添加剂，也是一种极有发展前途的饲料用酶。
[0003] 随着木聚糖酶在饲料中的广泛应用，对木聚糖酶酶活力评价方法的需求也越来越 迫切。长期以来，木聚糖酶酶活力的分析测定一直是饲料工业领域中很有争议的话题，现有 分析方法所提供的分析数据的实用性和重复性都不理想。目前，木聚糖酶酶活力的评价主 要以桦木木聚糖（birch wood xylan)和燕麦木聚糖（oat xylan)为底物，所用桦木木聚糖 (birch wood xylan)和燕麦木聚糖（oat xylan)纯度高而且能够溶于水，但是饲料成分相 对比较复杂，其中所含的不溶于水的化合物通常会与饲料原料中的其它成分（木质素和纤 维）相互交联在一起，组成结构复杂的聚合体，因此纯化的桦木木聚糖（birch wood xylan) 和燕麦木聚糖（oat xylan)不能模拟木聚糖酶在体内作用时所面对的复杂底物成分。动物 饲养试验虽然直观，可靠性也比较好，但是试验的时间太长（至少需要2个月），成本很高， 在实际生产过程中很难推广，与科研过程中的快速分析要求相差甚远。
[0004] 另外，木聚糖酶还有很多同工酶，它们对酸碱环境的适应性、对温度的耐受性以及 对动物消化道环境的抗逆性都有差异，用目前标准的实验室分析方法是很难区别的，而实 际生产应用却很需要这些数据。
[0005] 因此，探索并建立一种更为科学、客观和简便评价木聚糖酶酶活力的体外检测方 法是迫切需要的。
【发明内容】
[0006] 本发明所要解决的技术问题是如何快速、更符合实际地测定饲料用木聚糖酶的酶 活力。
[0007] 为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种测定饲料用木聚糖酶酶活力的方 法。
[0008] 本发明所提供的一种测定饲料用木聚糖酶酶活力的方法，包括如下步骤：将用于 测定饲料用木聚糖酶酶活力的麦麸加入到含有待测饲料用木聚糖酶的液体中，获得酶解反 应液；将所述酶解反应液进行酶解反应，测定所述酶解反应产生的可溶解物的质量，得到所 述待测饲料用木聚糖酶的酶活力；以干重计，所述用于测定饲料用木聚糖酶酶活力的麦麸 中淀粉的质量百分含量为彡〇. 01% (如〇. 01% )。
[0009] 上述方法中，所述含有待测饲料用木聚糖酶的液体可为含有待测饲料用木聚糖酶 的缓冲溶液或含有待测饲料用木聚糖酶的离体动物消化液。所述含有待测饲料用木聚糖酶 的缓冲溶液可用所述待测饲料用木聚糖酶和醋酸-醋酸钠缓冲溶液配制，所述含有待测饲 料用木聚糖酶的离体动物消化液可用所述待测饲料用木聚糖酶和所述离体动物消化液配 制。所述离体动物消化液具体可为离体动物胃液或离体动物肠液，所述离体动物胃液具体 可为离体猪胃液，所述离体动物肠液具体可为离体猪小肠液。
[0010] 上述方法中，所述酶解反应液中，所述木聚糖酶的浓度可为0. 196-0. 500mg/mL， 具体可为0. 196mg/mL或0. 500mg/mL ;所述麦麸的浓度可为39. 2-50.0 mg/mL，具体可为： 39. 2mg/mL或50.0 mg/mL ;所述木聚糖酶与所述麦麸的质量比可为1 : (100-200)，具体可为 1:200 或 1:100〇
[0011] 上述方法中，所述酶解反应的反应温度可为37-39. 5°C，具体可为37°C。
[0012] 上述方法中，所述酶解反应液的pH值可为3. 2-6. 5,具体可为3. 2-5. 5、5. 5-6. 5、 3. 2、5. 5和6. 5 ;所述酶解反应时间可为30-270min，具体可为30-100min、100-270min、 30min、60min、90min、lOOmin、120min、150min、180min、210min、240min 或 270min〇
[0013] 上述方法中，所述可溶解物的质量可按照公式3获得，所述公式3为：可溶解物质 量=麦麸总质量-残留物质量；所述麦麸总质量为所述用于测定饲料用木聚糖酶酶活力的 麦麸的干重；所述残留物质量为将所述木聚糖酶酶解反应后的溶液在相对离心力为500g 的条件下离心lmin获得的酶解反应后的残留物干重；所述可溶解物的质量以干重计。
[0014] 上述方法中，所述用于测定饲料用木聚糖酶酶活力的麦麸可按照下述用于测定饲 料用木聚糖酶酶活力的麦麸的制备方法制备。
[0015] 为解决上述技术问题，本发明还提供了上述用于测定饲料用木聚糖酶酶活力的麦 麸的制备方法。
[0016] 本发明所提供的用于测定饲料用木聚糖酶酶活力的麦麸的制备方法，包括如下步 骤：将麦麸进行糊化反应，获得糊化后的麦麸；向所述糊化后的麦麸中加入淀粉酶得到淀 粉酶反应体系，进行淀粉酶酶解反应，获得淀粉酶酶解后的麦麸；向所述淀粉酶酶解后的麦 麸中加入糖化酶得到糖化酶反应体系，进行糖化酶酶解反应，获得糖化酶酶解后的麦麸；将 所述糖化酶酶解后的麦麸进行清洗，得到所述用于测定饲料用木聚糖酶酶活力的麦麸。
[0017] 上述用于测定饲料用木聚糖酶酶活力的麦麸的制备方法中，所述糊化反应可为在 95-KKTC反应10_15min，具体可为在98°C反应12min。
[0018] 所述淀粉酶反应体系中，所述淀粉酶可为α -淀粉酶，所述α -淀粉酶和所述糊化 后的麦麸的配比可为40000Ua -淀粉酶：(8. 74-12) kg以干重计的所述糊化后的麦麸，所述 α -淀粉酶和所述糊化后的麦麸的配比具体可为40000U α -淀粉酶：8. 74kg以干重计的所 述糊化后的麦麸；所述淀粉酶酶解反应可为在65-70 °C反应25-30min，具体可为在65°C反 应 30min。
[0019] 所述α -淀粉酶的一个酶活力单位是指在60°C和pH值为6. 0的条件下，每小时水 解可溶性淀粉产生出1 μ mol麦芽糖所需要的α -淀粉酶的量。
[0020] 所述α_淀粉酶可为北京东华强盛生物工程有限公司的产品，产品目录号为 107658305。
[0021] 所述糖化酶反应体系中，所述糖化酶和所述淀粉酶酶解后的麦麸的配比可为 1600000U糖化酶：（8. 74-12) kg以干重计的所述淀粉酶酶解后的麦麸，所述糖化酶和所述 淀粉酶酶解后的麦麸的配比具体可为1600000U糖化酶：8. 74kg以干重计的所述淀粉酶酶 解后的麦麸；其中所述淀粉酶酶解后的麦麸的质量以所述糊化后的麦麸的干重计，所述糖 化酶酶解反应可为在95-KKTC反应30-90min，具体可为在95°C反应60min。
[0022] 所述糖化酶的一个酶活力单位是指在40°C和pH值为4. 6的条件下，每小时水解可 溶性淀粉产生lmg葡萄糖所需要的糖化酶的量。
[0023] 所述糖化酶可为北京东华强盛生物工程有限公司的产品，产品目录号为1003301。
[0024] 所述清洗用水进行，所述清洗的次数可为3-4次，具体可为3次。
[0025] 上文中，所述麦麸为大麦麸。
[0026] 本发明所提供的上述方法在鉴别饲料用木聚糖酶酶活力中的应用也属于本发明 的保护范围。
[0027] 实验证明，本发明的测定饲料用木聚糖酶酶活力的方法能够直观、简便，客观全面 地测定饲料用木聚糖酶的酶活力。本发明的测定饲料用木聚糖酶酶活力的方法，以淀粉含 量< 0. 01 %的麦麸为底物，既可以快速检测饲料用木聚糖酶在缓冲溶液中的酶活力，又可 以快速检测饲料用木聚糖酶在离体动物消化液中的酶活力。饲料生产企业和养殖户可以参 照本发明的方法对木聚糖酶的酶活力进行分析和比较，适用于饲料用木聚糖酶的研究、生 产和应用。
【具体实施方式】
[0028] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐 明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
[0029] 下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
[0030] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0031] 下述实施例中的木聚糖酶A为山东苏柯汉生物工程有限公司的酸性木聚糖酶，木 聚糖酶B为江苏奕农生物工程有限公司的木聚糖酶妙释，木聚糖酶C为宁夏夏盛实业集团 有限公司的饲料级木聚糖酶，木聚糖酶D为保罗蒂姆汉（潍坊）生物科技有限公司的酸性 木聚糖酶，木聚糖酶X为河南绿洲化工产品有限公司的木聚糖酶，木聚糖酶Y为巩义市益康 生物科技有限公司的益康饲料用木聚糖酶，木聚糖酶Z为沧州市中信生物科技有限公司的 君诺木聚糖酶。
[0032] 下述实施例中的α-淀粉酶为北京东华强盛生物工程有限公司的产品，产品目录 号为107658305 ;该α -淀粉酶的一个酶活力单位是指在60°C和pH值为6. 0的条件下，每 小时水解可溶性淀粉产生出1 μ mol麦芽糖所需要的α -淀粉酶的量。
[0033] 下述实施例中的糖化酶为北京东华强盛生物工程有限公司的产品，产品目录号为 1003301 ;该糖化酶的一个酶活力单位是指在40°C和pH值为4. 6的条件下，每小时水解可 溶性淀粉产生lmg葡萄糖所需要的糖化酶的量。
[0034] 实施例1、用于测定饲料用木聚糖酶酶活力的麦麸的制备
[0035] 称取10kg普通商品麦麸，用60kg清水在常温（20-30°C )浸泡24h，清洗其中的泥 渣和其它可溶性杂物，撇除漂浮的皮壳和麦秸等粗纤维。用清水反复清洗3次，然后再过 滤、挤压，获得洁净的麦麸，麦麸中含水量为65%。将获得的麦麸分批平摊在托盘上，挑除 其中没有破碎的麦粒，得到麦麸原料，该麦麸原料的干重为8. 74kg。在容量为100L的不锈 钢容器中，加入8. 74kg上述麦麸原料，再加入45kg蒸馏水，然后通蒸汽加热升温至98°C， 保温12min，充分糊化麦麸中残留的淀粉。糊化结束后冷却至65°C，加入10g淀粉液化酶 (α -淀粉酶，酶活为4000u/g)，反应30min。然后逐步加热至95°C，再加入20g糖化酶（酶 活为80000u/g)，反应60min，以充分糖化残留的淀粉成为溶解于水的葡萄糖和麦芽糖。糖 化结束后自然冷却至室温（20-30°C )，过滤，挤压，获得滤渣，再用蒸馏水清洗滤渣3次，以 充分滤除残留的葡萄糖和麦芽糖，获得纯净的麦麸，麦麸中的含水量为65%，重量为22kg。 把含水量为65%的22kg麦麸分批平摊在托盘上进行常温（20-30°C)气流干燥24h，得到用 于测定饲料用木聚糖酶酶活力的麦麸7. 6kg。以干重计，该用于测定饲料用木聚糖酶酶活力 的麦麸中淀粉质量百分含量为〇. 01%。
[0036] 将该用于测定饲料用木聚糖酶酶活力的麦麸分装在密封的容器中，于4°C冰箱中 保存备用。
[0037] 实施例2、饲料用木聚糖酶在醋酸-醋酸钠缓冲溶液中的酶活力测定
[0038] 醋酸-醋酸钠缓冲溶液的配制：在5000mL蒸馏水中加入4. 5mL冰醋酸和34. 85g 无水醋酸钠，搅拌lOmin，使醋酸钠彻底溶解得到醋酸-醋酸钠缓冲溶液，该醋酸-醋酸钠缓 冲溶液中醋酸根离子的浓度为〇. lmol/L，pH值为5. 5。
[0039] 含有饲料用木聚糖酶A的缓冲溶液的配制：向烧杯中加入1. 000g粉状饲料用木聚 糖酶A，然后加入50mL上述醋酸-醋酸钠缓冲溶液，磁力搅拌10min后转移到100mL容量瓶 中，并用上述醋酸-醋酸钠缓冲溶液定容至l〇〇mL，配置成质量百分浓度为1 %的饲料用木 聚糖酶A的缓冲溶液。
[0040] 取9个500mL的三角瓶，依次编号为1、2、3、4、5、6、7、8和9，分别向每个三角瓶中 加入250mL上述醋酸-醋酸钠缓冲溶液，再向每个三角瓶中分别加入10. 0g实施例1的用 于测定饲料用木聚糖酶酶活力的麦麸，在37°C恒温水浴中放置30min，然后再向9个三角瓶 中按编号从1至9的顺序依次分别加入5mL质量百分浓度为1 %的饲料用木聚糖酶A的缓 冲溶液，分别得到1-9号饲料用木聚糖酶A的酶解反应液。
[0041 ] 将9个装有饲料用木聚糖酶A的酶解反应液的三角瓶放置在37°C恒温水浴中，按 照编号顺序从1-9号三角瓶中（与加入饲料用木聚糖酶A溶液的顺序一致），每隔30min抽 取一个三角瓶（第30min抽取1号三角瓶，第60min抽取2号三角瓶，第90min抽取3号三 角瓶，第120min抽取4号三角瓶，第150min抽取5号三角瓶，第180min抽取6号三角瓶， 第210min抽取7号三角瓶，第240min抽取8号三角瓶，第270min抽取9号三角瓶），将三 角瓶中的酶解反应后的溶液在相对离心力为500g的条件下离心lmin获得酶解反应后的 残留物，依次得到1号三角瓶中的酶解反应后的残留物，2号三角瓶中的酶解反应后的残留 物，3号三角瓶中的酶解反应后的残留物，4号三角瓶中的酶解反应后的残留物，5号三角瓶 中的酶解反应后的残留物，6号三角瓶中的酶解反应后的残留物，7号三角瓶中的酶解反应 后的残留物，8号三角瓶中的酶解反应后的残留物和9号三角瓶中的酶解反应后的残留物。 分别将各个编号的酶解反应后的残留物置于托盘中，做好标记，在80°C恒温箱中均气流干 燥4h，得到干燥后的残留物，测定干燥后残留物的质量，计算可溶解物的质量、降解率和降 解速度，其中：
[0042] 降解率=(麦麸总质量-残留物质量）/麦麸总质量X 100%公式1
[0043] 降解速度=(麦麸总质量-残留物质量）/降解时间 公式2
[0044] 可溶解物质量=麦麸总质量-残留物质量 公式3
[0045] 公式1、公式2和公式3中的麦麸总质量均为实施例1的用于测定饲料用木聚糖酶 酶活力的麦麸的干重，残留物质量和可溶解物质量均为干重，结果如表1所示。
[0046] 表1、醋酸-醋酸钠缓冲溶液（pH值为5. 5)中木聚糖酶A的酶活力测定结果
[0049] 本实施例中饲料用木聚糖酶A的一个酶活力单位是指在37°C和pH值为5. 5的条 件下，每分钟从实施例1的用于测定饲料用木聚糖酶酶活力的麦麸中释放出1 μπιο?可溶解 物所需要的饲料用木聚糖酶Α的量。
[0050] 随着酶解反应时间的延长，产生的可溶解物的质量不断增加，用于测定饲料用木 聚糖酶酶活力的麦麸的降解率也不断增加；随着酶解反应时间的延长，用于测定饲料用木 聚糖酶酶活力的麦麸中的可降解物质比例不断减少，使得降解速度不断下降，这种情况符 合实际。
[0051] 实施例3、饲料用木聚糖酶在离体猪胃液中的酶活力测定
[0052] 在屠宰场收集30个猪胃（猪的体重在95_130kg之间），收集猪胃内的内容物，混 合均匀，用8层医用纱布挤压过滤混匀后的猪胃内容物，收集过滤液，获得2000mL猪胃食糜 过滤液，然后将猪胃食糜过滤液在l〇〇〇rpm条件下离心lmin，获得1600mL猪胃食糜过滤液 上清液并进行pH值测定，pH值为3. 2,作为分析饲料用木聚糖酶酶活力的离体猪胃液。
[0053] 取4个500mL三角瓶，分别加入0. lg饲料用木聚糖酶A、饲料用木聚糖酶B、饲料 用木聚糖酶C和饲料用木聚糖酶D (都是粉状酶），每个三角瓶中只加入一种酶，将只加入 饲料用木聚糖酶A的三角瓶编号为A，将只加入饲料用木聚糖酶B的三角瓶编号为B，将只 加入饲料用木聚糖酶C的三角瓶编号为C，将只加入饲料用木聚糖酶D的三角瓶编号为D ; 再分别向编号为A、B、C和D的三角瓶中各加入200mL上述作为分析饲料用木聚糖酶酶活 力的离体猪胃液，磁力搅拌2min后在37°C恒温水浴中保温2min，使得饲料用木聚糖酶充分 溶解，得到含有木聚糖酶A的离体猪胃液，含有木聚糖酶B的离体猪胃液，含有木聚糖酶C 的离体猪胃液和含有木聚糖酶D的离体猪胃液。向含有木聚糖酶A的离体猪胃液，含有木 聚糖酶B的离体猪胃液，含有木聚糖酶C的离体猪胃液和含有木聚糖酶D的离体猪胃液中 依次加入10. 0g实施例1的用于测定饲料用木聚糖酶酶活力的麦麸，获得饲料用木聚糖酶 A的酶解反应液、饲料用木聚糖酶B的酶解反应液、饲料用木聚糖酶C的酶解反应液和饲料 用木聚糖酶D的酶解反应液。在37°C恒温水浴中反应lOOrnin，获得饲料用木聚糖酶A的酶 解反应后的溶液、饲料用木聚糖酶B的酶解反应后的溶液、饲料用木聚糖酶C的酶解反应后 的溶液和饲料用木聚糖酶D的酶解反应后的溶液。将饲料用木聚糖酶A的酶解反应后的溶 液、饲料用木聚糖酶B的酶解反应后的溶液、饲料用木聚糖酶C的酶解反应后的溶液和饲料 用木聚糖酶D的酶解反应后的溶液依次在相对离心力为500g的条件下离心lmin，获得饲料 用木聚糖酶A的酶解反应后的残留物、饲料用木聚糖酶B的酶解反应后的残留物、饲料用木 聚糖酶C的酶解反应后的残留物和饲料用木聚糖酶D的酶解反应后的残留物，收集上述各 种饲料用木聚糖酶的酶解反应后的残留物。分别将各种饲料用木聚糖酶的酶解反应后的残 留物置于托盘中，做好标记，在80°C恒温箱中均气流干燥4h，得到干燥后的残留物，测定干 燥后残留物的质量，计算可溶解物的质量和降解率，其中：
[0054] 降解率=(麦麸总质量-残留物质量）/麦麸总质量X 100%公式1
[0055] 可溶解物质量=麦麸总质量-残留物质量 公式3
[0056] 公式1和公式3中的麦麸总质量均为实施例1的用于测定饲料用木聚糖酶酶活力 的麦麸的干重，残留物质量和可溶解物质量均为干重，结果如表2所示。
[0057] 表2、离体猪胃液中四种饲料用木聚糖酶的酶活力测定结果
[0058]
[0059] 本实施例中饲料用木聚糖酶的一个酶活力单位是指在37°C和pH值为3. 2的条件 下，每分钟从实施例1的用于测定饲料用木聚糖酶酶活力的麦麸中释放出1 μπιο?可溶解物 所需要的饲料用木聚糖酶的量。
[0060] 表2中根据四种饲料用木聚糖酶在相同实验条件下释放可溶解物的降解率表明， 饲料用木聚糖酶C的功效最显著。
[0061] 实施例4、饲料用木聚糖酶在离体猪小肠液中的酶活力测定
[0062] 在屠宰场收集20副猪小肠（猪的体重在95_130kg之间），收集猪小肠道内的内容 物，混合均匀。用纱布包埋挤压过滤混匀后的猪小肠内容物，收集过滤液，获得2000mL猪小 肠食糜过滤液。将获得的猪小肠食糜过滤液存放在一个塑料桶中，4°C冰箱中存放24h，然后 在lOOOrpm条件下离心2min，获得1600mL猪小肠食糜过滤液上清液并进行pH值测定，pH 值为6. 5,作为分析饲料用木聚糖酶酶活力的离体猪小肠液。
[0063] 取3个500mL三角瓶，分别加入0. lg饲料用木聚糖酶X、饲料用木聚糖酶Y和饲 料用木聚糖酶Z，每个三角瓶中只加入一种酶，将只加入饲料用木聚糖酶X的三角瓶编号为 X，将只加入饲料用木聚糖酶Y的三角瓶编号为Y，将只加入饲料用木聚糖酶Z的三角瓶编号 为Z ;再分别向编号为X、Y和Z的三角瓶中各加入200mL上述作为分析饲料用木聚糖酶酶 活力的离体猪小肠液，在37°C恒温水浴中保温5min，使得饲料用木聚糖酶充分溶解，得到 含有木聚糖酶X的离体猪小肠液，含有木聚糖酶Y的离体猪小肠液和含有木聚糖酶z的离 体猪小肠液。向含有木聚糖酶X的离体猪小肠液，含有木聚糖酶Y的离体猪小肠液和含有 木聚糖酶Z的离体猪小肠液中依次加入10.0 g实施例1的用于测定饲料用木聚糖酶酶活力 的麦麸，获得饲料用木聚糖酶X的酶解反应液、饲料用木聚糖酶Y的酶解反应液和饲料用木 聚糖酶Z的酶解反应液。在37°C恒温水浴中反应lOOmin，获得饲料用木聚糖酶X的酶解反 应后的溶液、饲料用木聚糖酶Y的酶解反应后的溶液和饲料用木聚糖酶Z的酶解反应后的 溶液。将饲料用木聚糖酶X的酶解反应后的溶液、饲料用木聚糖酶Y的酶解反应后的溶液 和饲料用木聚糖酶Z的酶解反应后的溶液依次在相对离心力为500g的条件下离心lmin，获 得饲料用木聚糖酶X的酶解反应后的残留物、饲料用木聚糖酶Y的酶解反应后的残留物和 饲料用木聚糖酶Z的酶解反应后的残留物，收集上述各种饲料用木聚糖酶的酶解反应后的 残留物。分别将各种饲料用木聚糖酶的酶解反应后的残留物置于托盘中，做好标记，在80°C 恒温箱中均气流干燥4h，得到干燥后的残留物，测定干燥后残留物的质量，计算可溶解物的 质量和降解率，其中：
[0064] 降解率=(麦麸总质量-残留物质量）/麦麸总质量X 100%公式1
[0065] 可溶解物质量=麦麸总质量-残留物质量 公式3
[0066] 公式1和公式3中的麦麸总质量均为实施例1的用于测定饲料用木聚糖酶酶活力 的麦麸的干重，残留物质量和可溶解物质量均为干重，结果如表3所示。
[0067] 表3、离体猪小肠液中三种饲料用木聚糖酶的酶活力测定结果
[0068]
[0069] 本实施例中饲料用木聚糖酶的一个酶活力单位是指在37°C和pH值为6. 5的条件 下，每分钟从实施例1的用于测定饲料用木聚糖酶酶活力的麦麸中释放出1 μπιο?可溶解物 所需要的饲料用木聚糖酶的量。
[0070] 表3中根据三种饲料用木聚糖酶在相同实验条件下释放可溶解物的降解率表明， 饲料用木聚糖酶X的功效最显著。
【主权项】
1. 一种测定饲料用木聚糖酶酶活力的方法，包括如下步骤：将用于测定饲料用木聚糖 酶酶活力的麦麸加入到含有待测饲料用木聚糖酶的液体中，获得酶解反应液；将所述酶解 反应液进行酶解反应，测定所述酶解反应产生的可溶解物的质量，得到所述待测饲料用木 聚糖酶的酶活力；以干重计，所述用于测定饲料用木聚糖酶酶活力的麦麸中淀粉的质量百 分含量为< 0. 01 %。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述酶解反应的反应温度为37-39. 5°C。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述酶解反应液的pH值为3. 2-6. 5。4. 根据权利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：所述用于测定饲料用木聚糖 酶酶活力的麦麸的制备方法包括将麦麸进行糊化反应，获得糊化后的麦麸；向所述糊化后 的麦麸中加入淀粉酶得到淀粉酶反应体系，进行淀粉酶酶解反应，获得淀粉酶酶解后的麦 麸；向所述淀粉酶酶解后的麦麸中加入糖化酶得到糖化酶反应体系，进行糖化酶酶解反应， 获得糖化酶酶解后的麦麸；将所述糖化酶酶解后的麦麸进行清洗，得到所述用于测定饲料 用木聚糖酶酶活力的麦麸。5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述糊化反应在95-100 °C反应 10_15min〇6. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述淀粉酶酶解反应在65-70°C反应 25-30min〇7. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述糖化酶酶解反应在95-KKTC反应 30-90min〇8. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述清洗用水进行，所述清洗的次数为 3-4 次。9. 权利要求1-8中任一所述方法在鉴别饲料用木聚糖酶酶活力中的应用。
【文档编号】C12Q1/34GK105986006SQ201510044030
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2015年1月28日
【发明人】蒋慧
【申请人】北京晟亚育达生物科技有限公司