抗hmgb1的高亲和力抗体及其用法的制作方法

专利名称：：抗hmgb1的高亲和力抗体及其用法的制作方法抗HMGB1的高亲和カ抗体及其用法本申请是国际申请PCT/US2005/037734，国际申请日2005年10月21日，中国国家阶段申请号200580041546.0，名称“抗HMGBl的高亲和カ抗体及其用法”的发明专利申请的分案申请。I.
背景技术：
：炎症通常由促炎细胞因子,例如肿瘤坏死因子(TNF)、白介素(IL)-Ia、IL-Iβ、IL-6、血小板活化因子(PAF)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和其它化合物诱导。几种不同类型的细胞能产生这些促炎细胞因子，最重要的是免疫细胞(例如，单核细胞、巨噬细胞和嗜中性白细胞)，但非免疫细胞，例如成纤维细胞、成骨细胞、平滑肌细胞、上皮细胞和神经元也能产生。这些促炎细胞因子在炎性细胞因子级联反应的早期可导致各种疾病。炎性细胞因子级联反应导致许多疾病的有害特征，包括炎症和凋亡。包括特征为局部和全身性反应的慢性和急性疾病，包括但不限于涉及胃肠道及相关组织的疾病(例如阑尾炎、消化道、胃和十二指肠溃疡、腹膜炎、胰腺炎、溃疡性伪膜急性和局部缺血性结肠炎、憩室炎、会厌炎、失迟缓症、胆管炎、胆嚢炎、腹部疾病、肝炎、克罗恩病、肠炎和惠普尔病)；全身性或局部炎性疾病和病症(例如哮喘、过敏、过敏性休克、免疫复合物病、器官局部缺血、再灌注损伤、器官坏死、枯草热、脓毒症、败血症、内毒素性休克、恶病质、高烧、嗜酸性肉芽肿、肉芽肿病和结节病)；涉及泌尿生殖系统和相关组织的疾病(例如脓毒性流产、附睾炎、阴道炎、前列腺炎和尿道炎)；涉及呼吸系统和相关组织的疾病(例如支气管炎、肺气肿、鼻炎、囊性纤维化病、肺炎、C0PD、成人呼吸窘迫综合征、pneumoultramicroscopicsilico-volcanoconiosis、肺泡炎、细支气管炎、咽炎、胸膜炎和鼻窦炎)；各种病毒(例如流感病毒、呼吸道合胞病毒、HIV、こ肝病毒、丙肝病毒和疱疹病毒)、细菌(例如弥散性菌血症、登革热)、真菌(例如念珠菌病)和原生动物及多细胞寄生虫(例如疟疾、丝虫病、阿米巴病和棘球囊(hydatidcysts))感染导致的疾病；皮肤病和皮肤病症(例如银屑病、烧伤、皮炎、皮肌炎、灼伤、荨麻疹、疣和风疹)；涉及心血管系统和相关组织的疾病(例如血管炎、脉管炎、心内膜炎、动脉炎、动脉粥样硬化、血栓性静脉炎、心包炎、充血性心カ衰竭、心肌炎、心肌局部缺血、结节性多动脉炎、再狭窄和风湿热)；涉及中枢和外周神经系统和相关组织的疾病(例如阿耳茨海默病、脑膜炎、脑炎、多发性硬化症、脑梗塞、脑栓塞、格-巴综合征(Guillame-Barresyndrome)、神经炎、神经痛、脊髓损伤、麻痹和眼色素层炎)；骨、关节、肌肉和结缔组织的疾病(例如各种关节炎和关节痛、骨髄炎、筋膜炎、佩吉特病、痛风、牙周病、类风湿性关节炎和滑膜炎)；其它自身免疫疾病和炎性疾病(例如重症肌无力、甲状腺炎、全身性红斑狼疮、古德帕斯丘综合征、贝切特综合征、同种异体移植物排斥、移植物抗宿主病、I型糖尿病、强直性脊柱炎、贝格尔病、I型糖尿病、强直性脊柱炎、贝格尔病和莱特综合征)；以及各种癌症、肿瘤和增殖性疾病(例如何杰金病)；以及在任何情况中，对任何原发性疾病的宿主炎性或免疫应答。早期促炎细胞因子(例如，TNF、IL-I等)介导炎症，诱导高迁移率族蛋白I(HMGl)(也称为HMG-1、HMG1和HMGB1)的后期释放，该蛋白在血清中累积，介导迟发性致死并进ー步诱导早期促炎细胞因子。HMGl先前鉴定为称为高迁移率族(HMG)DNA-结合蛋白家族的奠基成员(foundingmember)，这些蛋白对DNA结构和稳定性至关重要。几乎在40年前鉴定它为能结合双链DNA，但不具序列特异性的遍在表达的核蛋白。HMGl结合使DNA弯曲从而促进核蛋白复合物的形成和稳定，有利于，例如糖皮质激素受体和RAG重组酶的基因转录。HMGl分子有3个结构域称为HMGA和HMGB框(box)的两个DNA结合基序，和酸性羧基末端。两个HMG框是高度保守的80个氨基酸，L-形结构域。HMG框也在其它转录因子，包括RNA聚合酶I转录因子、人上游结合因子和淋巴特异性因子中表达。近年来，发现HMGA框用作HMG促炎作用的竞争性抑制剂，HMGB框具有HMG的主要促炎活性(參见，例如US20040005316)。与诱导炎症的凋亡细胞相反，已证明HMGl是长期找寻的坏死(细胞)被动释放的核危险信号。HMGl也显示在需要こ酰化该分子的过程中由激活的巨噬细胞或单核细胞主动分泌，从而能从核中易位至分泌性溶酶体并分泌HMGl的こ酰化形式。參见PCT/IB2003/005718。因此，坏死细胞被动释放的HMGl和炎性细胞主动分泌的HMGBl是不同的分子。此外，HMGl涉及作为内毒素血症中迟发性致死的细胞因子介质。參见，例如美国专利6，468，533和6，448，223。更具体地说，已证明细菌内毒素(脂多糖(LPS))能激活单核细胞/巨噬细胞释放HMGl作为激活的晩期效应，从而导致有毒的血清HMGl水平升高。抗HMGl的抗体显示能防止内毒素的致死作用，即使当抗体给药延迟至早期细胞因子效应后。与其它促炎细胞因子相似，HMGl是单核细胞的强效激活物。气管内应用HMGl可导致急性肺损伤，而抗-HMGl抗体可保护避免内毒素诱导的肺水肿。此外，在患有脓毒症或失血性休克的危急病人中血清HMGl水平升高，与存活者相比，未存活者的水平显著较高。胞外HMGl通过高级糖基化终产物的受体(RAGE)和Toll样受体(TLR)家族成员转导信号而成为炎性级联反应的强效介质。參见，例如美国专利公布号US20040053841。高迁移率族蛋白2(HMG2)(也称为HMGB2和HMG-2)是同样源于基因复制的HMGl近亲。其存在于许多细胞类型中，并且与HMGl共有许多(如果不是所有)生化特性(Bustin，1999，Mol.Cell.Biol.，19,5237-46和Thomas等，2001，TrendsBiochem.Sci.，26，167-74)。虽然在成年小鼠组织中，HMG2不及HMGl丰富，并且分布更有限，但其在淋巴器官、睾丸和肺中较为丰富，在这些器官中也起到炎症介质的作用。与HMGl相似，在许多自身免疫疾病中HMG2也是自身抗体(如核外周抗嗜中性白细胞胞质抗体)的明显靶抗原，所述疾病包括全身性风湿病(Uesugi等，1998，JRheumatol.,25:703-9)，溃疡性结肠炎(Sobajima等，1998,ClinExpImmunol.,111:402-7)和青少年特发性关节炎(Wittemann等，1990,ArthritisRheum.,331378-83;Rosenberg等，2000,JRheumatol.，27,2489-93)。鉴于能与HMGl及其多肽片段(例如，HMGA和HMGB框)结合的抗体已显示能调节HMGl的活性(例如，促炎活性)，和调节人HMGl活性可能对于许多疾病和病症具有深远的治疗应用，本领域需要鉴定具有HMGl高亲和カ和低免疫原性井能与HMGl及其多肽片段特异性结合的抗体。类似地，对于许多疾病和病症，能调节HMG2活性的分子(例如，能与HMG2及其多肽片段特异性结合的抗体)也可以是有用的治疗剂。2.发明概述本发明部分根据发现了能与HMGl(在本文也称为“HMGB1”)及其抗原性片段特异性结合的高亲和カ抗体。本发明的高亲和カ抗体和含有其的药物组合物可用于许多目的，例如作为抵御各种炎性疾病和病症的治疗剂，所述疾病和病症例如是脓毒症、类风湿性关节炎、腹膜炎、克罗恩病、再灌注损伤、败血症、内毒素性休克、囊性纤维化病、心内膜炎、银屑病、关节炎(如，银屑病关节炎)、过敏性休克、器官局部缺血、再灌注损伤、脊髓损伤和同种异体移植物排斥。此外，本发明的高亲和カ抗体可用于诊断性应用。在本发明的一个实施方式中，本发明高亲和カ抗体能特异性结合的多肽含有人或其它动物(例如哺乳动物和无脊椎动物)的HMGl多肽或由其构成(或基本上由其构成)。在一具体实施方式中，本发明高亲和カ抗体能特异性结合的多肽含有人HMGl多肽(SEQIDNO:1或SEQIDNO2)或由其构成。本领域熟知人和其它动物的全长HMGl多肽(參见，例如US20040005316;6，468，533和6，448，223)。人HMGBl的氨基酸序列(GenBank登录号NP_002119)MGKGDPKKPRGKMSSYAFFVQTCREEHKKKHPDASVNFSEFSKKCSERWKTMSAKEKGKFEDMAKADKARYEREMKTYIPPKGETKKKFKDPNAPKRPPSAFFLFCSEYRPKIKGEHPGLSI⑶VAKKLGEMWNNTAADDKQPYEKKAAKLKEKYEKDIAAYRAKGKPDAAKKGVVKAEKSKKKKEEEEDEEDEEDEEEEEDEEDEDEEEDDDDE(SEQIDNO1)人HMGBl的氨基酸序列(GenBank登录号AAA64970)MGKGDPKKPTGKMSSYAFFVQTCREEHKKKHPDASVNFSEFSKKCSERWKTMSAKEKGKFEDMAKADKARYEREMKTYIPPKGETKKKFKDPNAPKRLPSAFFLFCSEYRPKIKGEHPGLSI⑶VAKKLGEMWNNTAADDKQPYEKKAAKLKEKYEKDIAAYRAKGKPDAAKKGVVKAEKSKKKKEEEEDEEDEEDEEEEEDEEDEEDEEDDDDE(SEQIDNO2)在本发明的另ー实施方式中，本发明高亲和カ抗体能特异性结合的多肽含有人或其它动物(例如哺乳动物和无脊椎动物)的HMG2多肽或由其构成(或基本上由其构成)。在另ー实施方式中，本发明高亲和カ抗体能特异性结合的多肽含有人HMG2多肽(SEQIDN021)或由其构成。本领域熟知人和其它动物的全长HMG2多肽。參见，例如Majumdar等，1991，NucleicAcidsRes.,19:6643;Shirakawa等，1992，JBiolChem，267:6641_6645。人HMGB2的氨基酸序列(GenBank登录号AAA58659)MGKGDPNKPRGKMSSYAFFVQTCREEHKKKHPDSSVNFAEFSKKCSERWKTMSAKEKSKFEDMAKSDKARYDREMKNYVPPKGDKKGKKKDPNAPKRPPSAFFLFCSEHRPKIKSEHPGLSI⑶TAKKLGEMWSEQSAKDKQPYEQKAAKLKEKYEKDIAAYRAKGKSEAGKKGPGRPTGSKKKNEPEDEEEEEEEEDEDEEEEDEDEE(SEQIDNO:21)在本发明的另ー实施方式中，本发明高亲和カ抗体能特异性结合的多肽含有哺乳动物(或其它动物)的HMGlA框或HMGlB框多肽(优选人HMGl多肽)或由其构成(或基本上由其构成)。本领域熟知人和其它动物的HMGlA框及HMGlB框多肽的氨基酸序列高度保守(參见，例如US20040005316;6，468，533;6，448，223和US20040053841)。人HMGBlA框(SEQIDNO3)PTGKMSSYAFFVQTCREEHKKKHPDASVNFSEFSKKCSERWKTMSAKEKGKFEDMAKADKARYEREMKTYIPPKGET人HMGBlB框(SEQIDNO4)FKDPNAPKRLPSAFFLFCSEYRPKIKGEHPGLSI⑶VAKKLGEMWNNTAADDKQPYEKKAAKLKEKYEKDIAAY在本发明还有另ー实施方式中，本发明高亲和カ抗体能特异性结合的多肽含有哺乳动物(或其它动物)的HMG2A框或HMG2B框多肽(优选人HMG2多肽)或由其构成(或基本上由其构成)。本领域熟知人和其它动物的HMG框多肽的氨基酸序列高度保守。參见，例如Jantzen等，1990,Nature,344:830-6；Kolodrubetz,1990,NucleicAcidsRes.，18:5565；Laudet等，1993，NucleicAcidsRes.,21:2493-501和Thomas等，2001，TrendsBiochemSci.,26:167_74。人HMGB2A框(SEQIDNO:22)PRGKMSSYAFFVQTCREEHKKKHPDSSVNFAEFSKKCSERWKTMSAKEKSKFEDMAKSDKARYDREMKNYVPPK⑶K人HMGB2B框(SEQIDNO:23)KKKDPNAPKRPPSAFFLFCSEHRPKIKSEHPGLSI⑶TAKKLGEMWSEQSAKDKQPYEQKAAKLKEKYEKDIAAY本发明也包括能与含有衍生自HMGl和/或HMG2的A框和B框的氨基酸残基或者由其构成(或基本上由其构成)的表位特异结合的抗体。衍生自A框及B框的氨基酸残基的表位可以是A和B框相连得到的线形多肽，或者可以是含有A和B框氨基酸残基的三维构象多肽。在本发明的另ー实施方式中，本发明高亲和カ抗体能与含有人(或其它动物)HMGBl的多肽片段或由其构成(或基本上由其构成)的抗原性HMGBl多肽片段特异性结合。在本发明的另ー实施方式中，本发明高亲和カ抗体能与含有人(或其它动物)HMGB2的多肽片段或由其构成(或基本上由其构成)的抗原性HMGB2多肽片段特异性结合。特别考虑的本发明高亲和カ抗体能与こ酰化和/或非こ酰化HMGl及其抗原性片段特异性结合。也特别考虑了本发明高亲和カ抗体能区分这两种形式。还特别考虑本发明高亲和カ抗体能与こ酰化和/或非こ酰化HMG2及其抗原性片段特异性结合。也特别考虑了本发明高亲和カ抗体能区分这两种形式。在本发明的具体实施方式中，能与HMGl及其抗原性片段特异性结合的抗体是人源化抗体或人抗体。在本发明的另一具体实施方式中，能与HMG2及其抗原性片段特异性结合的抗体是人源化抗体或人抗体。本发明的另ー实施方式是能以小于1(Γ5Μ、或小于1(Γ6Μ、或小于ΙΟΙ、或小于1(Γ8Μ、或小于1(Γ9Μ、或小于1(T1QM、或小于1(ΓηΜ、或小于1(Γ12Μ、或小于1(Γ13Μ的解离常数或Kd(koff/kon)与HMGl及其抗原性片段特异性结合的抗体。本发明的另ー实施方式是能以小于1(Γ5Μ、或小于1(Γ6Μ、或小于ΙΟΙ、或小于1(Γ8Μ、或小于1(Γ9Μ、或小于1(T1QM、或小于1(ΓηΜ、或小于1(Γ12Μ、或小于1(Γ13Μ的解离常数或Kd(koff/kon)与HMG2及其抗原性片段特异性结合的抗体。在另ー实施方式中，本发明抗体能以小于IX10、'或小于3XΙΟ、—1的Ktjff与HMGl和/或其抗原性片段结合。在其它实施方式中，本发明抗体与HMGl和/或其抗原性片段结合的Ktjff小于ΙΟ、—1、小于5XΙΟ、—1、小于ΙΟ、—1、小于δΧΙΟΛΓ1、小于ΙΟ、—1、小于5ΧKT5S'小于KT6S'小于5XKT6S'小于l(T7s'小于5Χl(T7s'小于1θΛベ、小于5Χ1θΛ'小于ΙΟΛ—1、小于δΧΙΟΛ—1或小于KT10S'在另ー实施方式中，本发明抗体能以小于IX10、'或小于3XΙΟ、—1的Ktjff与HMG2和/或其抗原性片段结合。在其它实施方式中，本发明抗体与HMG2和/或其抗原性片段结合的Ktjff小于ΙΟ、—1、小于5XΙΟ、—1、小于ΙΟ、—1、小于δΧΙΟΛΓ1、小于ΙΟ、—1、小于5ΧKT5S'小于KT6S'小于5XKT6S'小于l(T7s'小于5Χl(T7s'小于1θΛベ、小于5Χ1θΛ'小于ΙΟΛ—1、小于δΧΙΟΛ—1或小于KT10S'在另ー实施方式中，本发明抗体与HMGl和/或其抗原性片段结合的缔合速率常数或km速率至少是IO5M-1S'至少SXlO5M-1S'至少lOfs—1、至少5X10''至少IO7MW至少5XIO7M-1s'至少IO8IT1S'或至少IO9IT1s'在另ー实施方式中，本发明抗体与HMG2和/或其抗原性片段结合的缔合速率常数或km速率至少是IO5M-1S'至少SXlO5M-1S'至少lOfs—1、至少5X10''至少IO7MW至少5XIO7M-1s'至少IO8IT1S'或至少IO9IT1s'考虑本发明高亲和カ抗体能与HMGl特异性结合而不与HMG2结合，或者能与HMG2特异性结合而不与HMGl结合。还考虑本发明高亲和カ抗体与HMGl和HMG2都能特异性结合(例如，能特异性识别存在于HMGl和HMG2中的表位的抗体)。考虑本发明高亲和カ抗体分别能与HMGl或能与HMG2特异性结合，和能与HMG2或能与HMGl交叉反应。还考虑本发明高亲和カ抗体能以相同或不同的结合亲和力与HMGl和HMG2结合。本发明的高亲和カ抗体包括但不限于合成抗体、单克隆抗体、重组产生的抗体、胞内抗体、多特异性抗体(包括双特异性抗体)、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、合成抗体、单链Fv(scFv)、Fab片段、F(ab’)片段、ニ硫键连接的Fv(sdFv)(包括双特异性sdFv)和抗独特型(杭-Id)抗体及以上任何抗体的表位结合片段。本发明的其它非排他性实施方式包括具有某些优选生化特征(例如特定的等电点(PD或解链温度(Tm))的本发明高亲和カ抗体。在一个实施方式中，本发明的高亲和カ抗体具有5.5-9.5的pi。在一个实施方式中，本发明的高亲和カ抗体具有约65°C-约120°C的Tm。本发明的具体实施方式也包括能以高亲和力与HMGl特异性结合的具体抗体(及其片段)，所述抗体由美国模式培养物保藏所(10801UniversityBoulevard,Manassas,Va.20110-2209)保藏并分别指定了ATCC保藏号PTA-6142(2004年8月4日保藏)、PTA-6143(2004年8月4日保藏)、PTA-6259(2004年10月19曰保藏)和PTA-6258(2004年10月19日保藏)(在本文也分别称为“S2”、“S6”、“S16”和“G4”)。这些保藏物按照国际承认用于专利程序的微生物保存布达佩斯条约的条款而维持。由于提及的这些抗体株按照布达佩斯条约的条款而维持，则签署了布达佩斯条约的专利局可获得这些抗体株。本发明的其它具体实施方式也包括能以高亲和力与HMGl特异性结合并含有至少ー个本文所述可变区(參见，例如图2A-J和SEQIDNO:5-20、24-27和30-73)的具体抗体(及其片段)。具有本文所述抗体的至少I个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个CDR(參见，例如图2A-J中下划线所示的CDR和SEQIDNO:74-103)的抗体是本发明的具体实施方式。具有所保藏抗体的至少I个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个⑶R的抗体是本发明的具体实施方式。本发明实施方式也考虑编码这些抗体(及其片段)的分离的多核苷酸。此外，本发明包括能与本文所述抗-HMGl抗体的相同表位(例如，HMGl肽中的91-169或150-183表位)特异性结合的任何抗体。在一具体实施方式中，本发明包括能与所保藏抗体的相同表位特异性结合的抗体。具体考虑了这些抗体能以至少相等的亲和力、或更好的亲和力、或较低的亲和カ与所保藏抗体的相同表位特异性结合。编码这些抗体(及其片段)的分离的多核苷酸也是本发明的具体实施方式。本发明的实施方式包括编码任何本发明高亲和カ抗体的分离的多核苷酸。在其它实施方式中，本发明涉及含有本发明高亲和カ抗体和药学上可接受的赋形剂的组合物，例如药物组合物。在一具体实施方式中，组合物含有能与HMGl的A框(例如，SEQIDNO3内的表位)特异性结合的本发明高亲和カ抗体。在另一具体实施方式中，组合物含有能与HMGl的B框(例如，SEQIDNO:4,28,29内的表位)特异性结合的本发明高亲和カ抗体。在还有另一具体实施方式中，组合物含有与衍生自HMGl和/或HMG2的A框及B框的表位特异性结合的本发明高亲和力抗体。也考虑本发明组合物可含有本发明高亲和カ抗体的组合,例如与A框特异性结合的抗体和与B框特异性结合的抗体的组合。本发明组合物含有単独的本发明高亲和カ抗体或其与其它活性治疗性分子和/或佐剂，例如类固醇，其它抗炎分子或其它抗体治疗剂的组合。更具体地说，本发明组合物含有早期脓毒症介质的拮抗剂。早期脓毒症介质的拮抗剂是ー种实施方式，细胞因子的拮抗剂选自TNF、IL-Ia、IL-1β、MIF和IL-6。在本发明的另ー实施方式中，本文所述组合物能抑制由炎性细胞因子级联反应激活所介导或以其为特征的病症，包括急性和慢性炎性病症。在本发明还有另ー实施方式中，本文所述组合物在动物CLP脓毒症模型(例如，小鼠或小猪CLP模型)中比对照组合物的保护カ更高(高至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%)。在本发明还有另ー实施方式中，本文所述组合物在动物关节炎模型(例如，大鼠ΑΙΑ、小鼠被动或主动CIA模型)中比对照组合物的保护カ更高(高至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%)。在本发明还有另ー实施方式中，本文所述组合物在动物关节炎模型(例如，大鼠ΑΙΑ、小鼠被动或主动CIA模型)中減少骨丧失和/或软骨损伤比对照组合物更低(低至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%)。在本发明还有另ー实施方式中，本文所述组合物在人中減少骨丧失和/或软骨损伤比对照组合物更低(低至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%)。在本发明另ー实施方式中，本文所述组合物在啮齿类关节炎模型中比Renbrel(加或不加氨甲喋呤)的保护カ更高(高至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%)。在本发明还有另ー实施方式中，本文所述组合物在人中比Eenbrel(加或不加氨甲喋呤)的保护カ更高(高至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%)。在本发明还有另ー实施方式中，本文所述组合物在小鼠腹膜炎模型中比对照组合物的保护カ更高(高至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%)。本发明考虑的其它实施方式包括治疗或预防关节炎，例如类风湿性关节炎、破骨细胞介导的疾病或其它炎性关节疾病的方法，其包括给予本文所述抗体组合物。在另ー实施方式中，本发明包括治疗或预防关节炎，例如类风湿性关节炎、破骨细胞介导的疾病或其它炎性疾病的方法，其包括给予能与HMGl或其抗原性片段(例如，HMGB框)特异性结合的任何抗体(或抗体组合物)，而无论该抗体的结合亲和力。在另ー实施方式中，本发明包括治疗或预防关节炎，例如类风湿性关节炎、破骨细胞介导的疾病或其它炎性疾病的方法，其包括给予能与HMG2或其抗原性片段(例如，HMGB框)特异性结合的任何抗体(或抗体组合物)，而无论该抗体的结合亲和力。在另ー实施方式中，本发明包括治疗或预防关节炎，例如类风湿性关节炎、破骨细胞介导的疾病或其它炎性疾病的方法，其包括给予能与HMGl和/或HMG2或其抗原性片段(例如，HMGB框)特异性结合的抗体组合(或抗体组合物)，而无论该抗体的结合亲和力。在本发明还有另ー实施方式中，本文所述组合物在人或啮齿类SCI模型中缓解脊髓损伤(SCI)的严重性比对照组合物更好(好至少10%、至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%)。在其它具体实施方式中，本发明涉及给予和利用本发明组合物和抗体来治疗和预防各种炎性病症的方法，所述病症包括慢性和急性病症，例如阑尾炎、消化道、胃和十二指肠溃疡、腹膜炎、胰腺炎、溃疡性伪膜急性和局部缺血性结肠炎、憩室炎、会厌炎、失迟缓症、胆管炎、胆嚢炎、肝炎、克罗恩病、肠炎和惠普尔病、哮喘、过敏、过敏性休克、免疫复合物病、器官局部缺血、再灌注损伤、器官坏死、枯草热、脓毒症、败血症、内毒素性休克、恶病质、高烧、嗜酸性肉芽肿、肉芽肿病、结节病、脓毒性流产、附睾炎、阴道炎、前列腺炎和尿道炎、支气管炎、肺气肿、鼻炎、囊性纤维化病、肺炎、pneumoultramicroscopicsilico-volcanoconiosis、肺泡炎、细支气管炎、咽炎、胸膜炎、鼻窦炎、流感、呼吸道合胞病毒感染、疱疹感染、HIV感染、こ肝病毒感染、丙肝病毒感染、弥散性菌血症、登革热、念珠菌病、疟疾、丝虫病、阿米巴病、棘球囊、烧伤、皮炎、皮肌炎、灼伤、荨麻疹、疣、风疹、血管炎、脉管炎、心内膜炎、动脉炎、动脉粥样硬化、血栓性静脉炎、心包炎、心肌炎、心肌局部缺血、结节性多动脉炎、风湿热、阿耳茨海默病、腹部疾病、充血性心カ衰竭、再狭窄、C0PD、成人呼吸窘迫综合征、脑膜炎、脑炎、多发性硬化症、脑梗塞、脑栓塞、格-巴综合征、神经炎、神经痛、脊髄损伤、麻痹、眼色素层炎、关节炎、关节痛、骨髄炎、筋膜炎、佩吉特病、痛风、牙周病、类风湿性关节炎、滑膜炎、重症肌无力、甲状腺炎、全身性红斑狼疮、古德帕斯丘综合征、贝切特综合征、同种异体移植物排斥、移植物抗宿主病、I型糖尿病、强直性脊柱炎、贝格尔病、I型糖尿病、强直性脊柱炎、贝格尔病和莱特综合征和何杰金病。本发明也涉及抑制哺乳动物细胞释放促炎细胞因子的方法。该方法包括用足够量的本发明抗体或抗体组合物处理细胞以抑制细胞释放促炎细胞因子。在这些实施方式中，所述细胞是能释放促炎细胞因子的任何细胞，包括但不限于外周血单核细胞和巨噬细胞。此外，所述促炎细胞因子可选自TNF、IL-Ia、IL-1β、MIF和IL-6。在一具体实施方式中，所述细胞是巨噬细胞，所述促炎细胞因子选自TNF、IL-la、IL-li3、MIF和IL_6。在ー个实施方式中，可采用这些方法来处理患有以炎性细胞因子级联反应激活为特征的病症或处于患病风险的患者细胞。本文列举了具体的病症。在相关实施方式中，本发明涉及治疗以炎性细胞因子级联反应激活为特征的患者病症的方法。该方法包括给予患者本发明的抗体或抗体组合物。已列举了具体的病症。3.附图简述图I.人HMGl和HMG2的比对。图2.本发明的人抗-HMGl抗体的重链(Vh)和轻链(Vj可变区的核苷酸序列和相应的氨基酸序列。下划线处CDR(Kabat定义)。A)S2Vl(SEQIDNO.:5_6)；B)S2Vh(SEQIDNO.7-8)；C)S6Vl(SEQIDNO.:9-10)；D)S6Vh(SEQIDNO.:1ト12)；E)S16Vl(SEQIDNO.:13-14)；F)S16Vh(SEQIDNO.:15-16)；G)G4Vl(SEQIDNO.:17-18)；H)G4Vh(SEQIDNO.:19-20)；I)E11Vl(SEQIDNO.:24-25);和J)E11Vh(SEQIDNO.:26-27)。SEQIDNO.指氨基酸序列和核苷酸序列，详见表3。图3.人抗-HMBl抗体的物理特性。A)人抗-HMBl抗体的等电聚焦(IEF)分析图表明不同的人抗-HMGl抗体的pi值范围广泛(例如，约7.77-约9.24)。B)人抗-HMGl抗体的示差扫描量热法(DSC)分析图表明不同的人抗-HMGl抗体的Tm值范围广泛(例如，约660C-约90°C)。C)IEF和DSC分析的图示表明pi和Tm值之间不直接相关。图4.人抗-HMGl抗体的结合动力学和特异性。图A)几种人抗-HMGl抗体的HMGl捕捉ELISA结合曲线，显示这些抗体对大肠杆菌(E.coli)产生的重组HMGl具有不同的亲和力。图B)几种人抗-HMGl抗体的HMGl捕捉ELISA结合曲线比较了对重组HMGl(左图)和天然核HMGl(右图)的捕捉情况，表明S16和G4能与HMGl的两种形式结合，而S2、S6和SlO与重组HMGl的结合优于和天然核HMGl的结合。图C)几种人抗-HMGl抗体的HMGl捕捉ELISA结合曲线比较了天然核的、坏死的和激活的HMGl的捕捉情况，表明S6和G4(程度较低)能以不同的亲和カ与各种形式结合，而S16不能。图D)为几种人抗-HMGl抗体进行的捕捉ELISA试验结合曲线，比较了两种不同的捕捉形式固定的抗体(正方形)和固定的HMGl(三角形)，表明Ell和S17(程度较低)对于可溶性HMGl具有较高亲和力，而G2、G4、G9和G12显示与固定的或可溶性HMGl结合的差异小。图E)ELISA数据显示了几种人抗-HMGl抗体对HMGI和HMG2的相对结合亲和力，表明在该试验中，所测试的大多数抗体(G2、G4、G9、G12、S3、G20、G34、G35、S2、S6、S10、S14和S17)是HMGl特异性的，而S12和S16显示与HMGl和HMG2均有一定结合，Ell显示对HMG2具有较高结合亲和力。这些试验的数据和其它未显示的数据总结于表I。图5.HMGlB框表位的作图研究。显示了几种人抗-HMGl抗体的HMGlB框肽ELISA结合曲线。这些曲线表明S12、S16和G4能与HMGl肽91-169结合(图A)。S12也能与HMGl肽150-183结合(图B)。其余测试的抗体(S2、S6、S10、G2和G9)不能与该试验中测试的任一HMGlB框肽结合。图6.许多人抗-HMGl抗体能抑制HMGl刺激人PBMC释放细胞因子。图A显示了几种人抗-HMGl抗体(G9、S14、G20、S2、S6和S17)抑制重组HMGl刺激IL-1B、IL-6和TNF-a释放的活性的代表性剂量反应曲线。结果以所释放细胞因子的pg/ml(上图)和抑制百分比(下图)作图。图B显示了几种人抗-HMGl抗体(G4、S6、S16和S6+S16)和RAGE-Fc融合蛋白抑制重组HMGl刺激IL-6释放的代表性剂量反应曲线。图C显示了Ell、S13、S16、S17、G4、G9、S6、RAGE-Fc和A框融合蛋白抑制天然活化的HMGl刺激IL-6释放的代表性剂、量反应曲线。从这些数据和其它未显示数据计算的IC5tl值总结于表I。图7.几种人抗-HMGl抗体抑制小鼠巨噬细胞(mM0)中HMGl刺激的细胞因子基因表达。显示了用缓冲液，单用重组HMGl(E-HMGBl)，联用E-HMGBl加人同种型对照(HuIgG)，人抗-HMGl抗体(E11、G2、G4、S6和寡克隆(oligoclonal))以及小鼠和人RAGE-Fc融合蛋白处理的小鼠巨噬细胞中IL-Iβ(左)或TNF-a(右)的相对基因表达。E11、G2、G4和寡克隆以及两种RAGE-Fc融合蛋白均稳定地抑制IL-Iβ表达。G2和小鼠RAGE-Fc融合蛋白稳定地抑制TNF-a表达。这些数据和未显示的其它数据总结于表I。图8.人抗-HMGl抗体的亚组阻断重组HMGl与RAGE结合。采用ELISA结合试验检测HMGl与RAGE-Ig融合体的结合情況。显示了许多人抗-HMGl抗体的抑制百分率。G2、G4、S10、S16、S2和S6显示明显能阻断HMGl和RAGE的结合，而E11、G12、G16、G20、G34、G9、寡克隆、S12、S14和S17不能阻断。这些数据和未显示的其它数据总结于表I。图9.Ell部分阻断TLR4激活。采用细胞萤光素酶报道系统检测HMGl诱导的TLR4激活。显示了单用培养基、单用重组HMGl(rHMGB)和联用rHMGB加S2、Ell、S6、G4、S14或多克隆抗体处理的细胞的萤光素酶总活性。Ell显示明显能阻断HMGl诱导的TLR4激活。这些数据和未显示的其它数据总结于表I。图10.抑制重组HMGl与Thp-I细胞(结合)。显示了E11、G2和RAGE-Fc融合蛋白抑制重组HMGl与Thp-I细胞结合的代表性剂量反应曲线。从这些数据和其它未显示数据计算的IC5。值总结于表I。图11.人抗-HMGl抗体在脓毒症小鼠CLP模型中具有保护作用。显示的脓毒症小鼠CLP模型的代表性存活曲线比较了用人杭-HMGl抗体或人同种型对照抗体(R3-47)的处理。G4(图A和B)、S16(图A和D)、S6(图C)、E11和寡克隆(均在图D中)抗-HMGl抗体能改善存活率高达60%。图12.HMGl在几种炎性疾病模型中上调。在第10天收获的未处理被动CIA小鼠前爪中，存在的HMGl水平发现比正常小鼠中存在的至少增加了10倍(图A)。在未处理主动CIA小鼠的关节中，发现后爪(右)中HMGB1、RAGE、TLR2、TLR4和TLR9的相对基因表达水平升高，而前爪(左)中只有HMGB1、RAGE和TLR2的相对基因表达水平升高(均在图B中)。在未处理主动CIA小鼠中，发现关节后爪(图)和前爪(图)中IL-lb、IL-6和TNF-a的相对基因表达水平均升高(图C)。AIA大鼠踝关节中HMGBl水平升高(右上图)与爪炎症评分增加(左上图)和相对体重降低(左下图)相关(均在图D中)。发现用金黄色葡萄球菌(S.aureus)攻击的动物血清中HMBGl、IL_1B和TNF_a水平升高(图E)，其中HMGBl水平从攻击后2小时开始恒定升高，TNF-a在2小时显示早期高峰，然后在约7小时降低至接近基线，在约12小时出现第二高峰，而IL-6在约2小时出现高峰，然后缓慢升高。ALI小鼠BAL液中HMGBl水平在给予LPS后50小时内增加至16ng/ml以上，最显著升高始于约第26小时(左图)，与BAL液中观察到的细胞总数最大增高相关(右图)(均在图F中)。(显示了)用PBS、人同种型对照(HuIgG)、抗-HMGl抗体G4、HMG1A-框-Fe融合蛋白、氨甲喋呤(Methyltrexate)(MTX)、MTX+HuIgG、MTX+Renbrel和MTX+G4处理后AIA大鼠踝关节中HMBGl(左上图)和IL-6(左下图)的水平。也显示了用HuIgG、G4或MTX+HuIgG治疗后AIA大鼠踝关节中的TNF-a水平(右上图)。单用G4和MTX+HuIgG或MTX+Renbrel显示HMGUIL-6和TNF-a水平降低，然而联用MTX+G4显示降低作用最惊人。这些数据与各种处理时爪炎症评分所见的降低相关(见图16B)。图13.人抗-HMGl抗体在关节炎被动CIA小鼠模型中具有保护作用。图A显示了用MTX和Renbrel(左上图)、人抗-HMGl抗体S6(右上图)和G16(左下图)和HMGlA-框-Fe融合蛋白(右下图)治疗的被动CIA小鼠随时间变化的爪炎症评分。在此模型中，MTX/Renbrel联用和S6抗体均降低了临床评分，而S6的作用更显著。显示了对前爪和后爪(图B)或単独前爪(图C)组织学检查获得的骨(左上图)、软骨(右上图)和炎症(左下图)的评分图。图D显示用MTX和Renbrel(左上图)、人抗-HMGl抗体S6(右上图)和G16(左下图)及HMGlA-框-Fe融合蛋白(左下图)治疗的小鼠体重指数随时间的变化。如临床评分所示，MTX/Renbrel联用和S6显示了保护作用，而S6效カ更好。图14.人抗-HMGl抗体在关节炎被动CIA小鼠模型中具有保护作用。实验2(图A)显示了用PBS、Renbrel或G4(右图)和用PBS、G4或同种型对照抗体(左图)治疗的被动CIA小鼠的爪炎症评分随时间的变化。实验3(图B)显示了用PBS、G4或同种型对照抗体治疗的被动CIA小鼠的爪炎症评分随时间的变化。此两项向研究也追踪了正常小鼠的临床评分并作图。两个实验均证明在该模型中G4人抗-HMGl抗体能保护(小鼠)免于发生炎症。在实验2中，G4显示效カ优于Renbrel。图15.人抗-HMGl抗体在关节炎主动CIA小鼠模型中具有保护作用。图A显示了用PBS、同种型对照抗体或G4治疗的主动CIA小鼠(左图)和用PBS或Renbrel治疗的主动CIA小鼠(右图)的爪炎症评分随时间的变化。图B是显示同种型对照和G4抗体治疗组的相对体重随时间变化绘制的图。所有图也绘制了PBS处理小鼠和正常小鼠的评分。在此模型中，G4人抗-HMGl抗体对炎症和体重丧失的保护作用显示优于Renbrel。图16.人抗-HMGl抗体在关节炎AIA大鼠模型中具有保护作用。用PBS、同种型对照抗体或G4治疗AIA大鼠(左图)和用PBS或Renbrel治疗的CIA小鼠(右图)爪炎症评分随时间变化作的图(均在图A中，也可參见图B)，显示在此模型中，与PBS对照相比G4抗-HMGl抗体能降低爪炎症评分约35%，而单用Renbrel只能降低爪炎症评分25%(图A)。联用氨甲喋呤和第二药物(同种型对照、G4或Renbrel)治疗的AIA大鼠爪炎症评分随时间变化作的图(图16B)显示MTX和G4联用甚至比单用G4和MTX/Renbrel联用更有效。用MTX和G4治疗能降低爪炎症评分至接近正常(图B)。也显示了用HMGlA-框-Fe融合蛋白治疗的爪炎症评分，其效カ低于单用G4。图17.人抗-HMGl抗体在腹膜炎小鼠模型中具有保护作用。与用PBS或同种型对照(R347)治疗的小鼠相比，在用热灭活金黄色葡萄球菌攻击诱导腹膜炎的小鼠中，96小时的存活百分比显示G4能提高存活率近30%(图A)。抗体在-30分钟时给予(星形)，金黄色葡萄球菌攻击在第O分钟时给予(三角形)。图18.人抗-HMGl抗体在急性肺损伤(ALI)小鼠模型中具有保护作用。与用任一种同种型对照抗体(R347)治疗的小鼠相比，用G4或Ell治疗的ALI小鼠BAL液中回收的总细胞降低了近40%。用HMGlA-框-Fe融合蛋白治疗只使回收的总细胞降低23%。图19.多发性硬化症(MS)样品人脑组织中的HMGl染色模式。样品A)含有激活小胶质细胞的MS病灶(plaque)背景染色，利用Iμg/ml同种型对照；B)小胶质细胞的细胞质和含有激活小胶质细胞的MS病灶间质的特异性HMGBl染色，利用Iμg/ml同种型对照；和C)发现在含有脱髓鞘的、少量激活小胶质细胞和大量淋巴细胞的MS病灶中染色降低，利用Iμg/mlG16。4.表格简述表I-抗体特征和保藏信息。表2-保守性氨基酸取代家族。表3-序列表的说明表4-被动CIA小鼠模型治疗方案的说明表5-AIA大鼠模型治疗方案的说明表6-腹膜炎模型治疗方案的说明5.发明详述本发明部分根据发现能与HMGl及其抗原性片段特异性结合的抗体(本文也称为“HMGB1”)，所述抗体显示某些生物化学、结合和功能特征。能与HMGl特异性结合的抗体在本文专门称为“本发明的高亲和カ抗体”、“高亲和カ抗体”，也包括更宽泛的术语“本发明抗体”、“抗-HMGl抗体”和简称的“HMG抗体”以及类似术语。本发明也部分根据发现能与HMGl和HMG2都结合的抗体。本发明抗体的生物化学特征包括但不限于等电点(Pl)和解链温度(Tm)。本发明抗体的结合特征包括但不限于结合特异性、解离常数(Kd)、表位、区分HMGl的各种形式(例如，重组的、天然的、こ酰化的)和/或HMGl制品的能力以及与可溶性和/或固定化抗原结合的能力。本发明抗体的功能特征包括但不限于抑制HMGl诱导的细胞因子释放、抑制HMGl与ー种或多种受体结合、抑制HMGl与细胞表面结合以及在一种或多种炎性疾病(例如，脓毒症、关节炎、急性肺损伤、腹膜炎)模型中的保护作用。本发明抗体和含有这些抗体的组合物可用于许多目的，例如作为抵御各种慢性和急性炎性疾病和病症的治疗剂，所述疾病和病症包括但不限于脓毒症、类风湿性关节炎、腹膜炎、克罗恩病、再灌注损伤、败血症、内毒素性休克、囊性纤维化、心内膜炎、银屑病、关节炎(例如，银屑病关节炎)、过敏性休克、器官局部缺血、再灌注损伤、脊髄损伤和同种异体移植物排斥。此外，本发明高亲和カ抗体可用于诊断性应用。本发明抗体可用于，例如但不限于纯化、检测和靶向本发明的HMGl和/或HMG2多肽，包括体外和体内诊断和治疗方法。例如，所述抗体可用于免疫測定来定性和定量检测生物学样品中本发明HMGl和/或HMG2多肽的水平。參见，例如Harlow等,Antibodies:ALaboratoryManual(《抗体实验室手册》)，(冷泉港实验室出版社，第二版，1988)。5.I本发明抗体本文所用的“能与HMGl及其抗原性片段特异性结合”的高亲和カ抗体或其片段指，例如所述高亲和力抗体或其片段能与HMGl多肽或HMGl多肽片段(例如，HMGlA框和HMGlB框)或HMGl多肽的某表位特异性结合(用本领域熟知的检测特异性抗体-抗原结合的免疫測定来检测)，但不与其它多肽特异性结合。在一个实施方式中，能与HMGl多肽或其片段特异性结合的高亲和カ抗体或其片段不与其它抗原发生非特异性交叉反应(例如，不能用非HMGl蛋白，如BSA竞争除去结合)。本发明也包括能与HMG2多肽或HMG2多肽片段(例如，HMG2A框和HMG2B框)或HMG2多肽的抗原性片段特异性结合的高亲和カ抗体或其片段。本领域技术人员应知道虽然HMGl和HMG2是不同的蛋白质，但二者可具有同源性区域(參见图I)。因此，预计所述高亲和力抗体或其片段可与HMGl及其抗原性片段特异性结合，但不与HMG2或其抗原性片段结合。还预计所述高亲和力抗体或其片段可与HMG2及其抗原性片段特异性结合，但不与HMGl或其抗原性片段结合。还预计本发明高亲和カ抗体可与HMGl和HMG2共有的某表位特异性结合。HMGl和HMG2中共有的表位可相同，在这种情况下，HMGl和HMG2中含有该表位的氨基酸序列相同。因此，本发明高亲和カ抗体与HMGl和HMG2都能特异性结合(例如，抗体能特异性识别同时存在于HMGl和HMG2中的相同表位)。或者，HMGl和HMG2中均可能有相似的共有表位。例如HMGl和HMG2之间的相似表位可享有显著的同源性(例如，60%-99%相同性)和/或采取相似的三维构象，因而本发明高亲和力抗体能与该共享表位交叉反应。因此，本发明高亲和カ抗体能分别与HMGl或HMG2特异性结合，和能与HMG2或HMGl交叉反应。本发明高亲和カ抗体对存在干HMGl和HMG2上的相似表位可具有不同亲和力。因此，还预计本发明高亲和カ抗体可以相同或不同的亲和力与HMGl和HMG2结合。在一具体实施方式中，高亲和カ抗体或其片段与HMGl和/或HMG2的特异性结合胜过其它抗原。在一个实施方式中，本发明高亲和カ抗体能特异性结合的多肽含有HMGl和/或HMG2的A框(例如，分别是SEQIDNO.3和22)或者由其构成(或基本上由其构成)。在另ー实施方式中，本发明高亲和カ抗体能特异性结合的多肽含有HMGl和/或HMG2的B框(例如，分别是SEQIDNO.4和23)或由其构成(或基本上由其构成)。本发明也包括能与含有衍生自HMGl和/或HMG2的A框及B框的氨基酸残基或者由其构成(或基本上由其构成)的表位特异性结合的抗体。衍生自A框及B框的氨基酸残基的表位可以是A和B框相连得到的线形多肽，或者可以是含有A和B框氨基酸残基的三维构象多肽。本发明也具体包括具有多种特异性的抗体(例如，对两个或多个不连续的抗原具有特异性的抗体(总结于Cao等，2003,AdvDrugDelivRev,55171;Hudson等，2003,NatMed,I129)。例如，双特异性抗体可含有融合在一起的两个不同的结合特异性(位点)。在最简单的情况中，双特异性抗体能与ー个靶抗原上的两个毗邻表位结合，这种抗体不与其它抗原交叉反应(如上所述)。或者，双特异性抗体能与两个不同的抗原结合，这种抗体能与两个不同的分子(例如，HMGl和HMG2)结合，但不能与其它不相关的分子(例如，BSA)结合。此外，能与HMGl和/或HMG2特异性结合的抗体可能与相关的HMG蛋白交叉反应。本文所述的术语HMGl和/或HMG2“片段”包括含有HMGl和/或HMG2多肽(例如，人HMGl和/或HMG2)氨基酸序列中以下数个氨基酸残基的氨基酸序列或者由其构成(或基本上由其构成)的HMGl和/或HMG2肽或多肽至少5个毗连氨基酸残基、至少10个毗连氨基酸残基、至少15个毗连氨基酸残基、至少20个毗连氨基酸残基、至少25个毗连氨基酸残基、至少40个毗连氨基酸残基、至少50个毗连氨基酸残基、至少60个毗连氨基酸残基、至少70个毗连氨基酸残基、至少80个毗连氨基酸残基、至少90个毗连氨基酸残基、至少100个毗连氨基酸残基、至少125个毗连氨基酸残基、至少150个毗连氨基酸残基、至少175个毗连氨基酸残基、至少200个毗连氨基酸残基或至少250个毗连氨基酸残基。本文所述的术语HMGl和/或HMG2“片段”具体也包括含有HMGA(例如，人HMGl和/或HMG2A框)框或HMGB(例如，人HMGl和/或HMG2B框)框中以下数个氨基酸残基的氨基酸序列或者由其构成(或基本上由其构成)的多肽至少5个毗连氨基酸残基、至少10个毗连氨基酸残基、至少15个毗连氨基酸残基、至少20个毗连氨基酸残基、至少25个毗连氨基酸残基、至少40个毗连氨基酸残基、至少50个毗连氨基酸残基、至少60个毗连氨基酸残基、至少70个毗连氨基酸残基或至少80个毗连氨基酸残基。本发明“高亲和カ抗体”(本文也称为“本发明高亲和カ抗体”、“高亲和カ抗体”，也包括更宽泛的术语“本发明抗体”和简称的“HMG抗体”)包括但不限于合成抗体、单克隆抗体、重组产生的抗体、胞内抗体、多特异性抗体(包括双特异性抗体)、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、合成抗体、单链Fv(scFv)、Fab片段、F(ab’)片段、ニ硫键连接的Fv(sdFv)(包括双特异性sdFv)和抗独特型(杭-Id)抗体和以上任何抗体的表位结合片段。本发明抗体可以是单特异性、双特异性、三特异性或更高的多特异性。多特异性抗体可以是对本发明多肽不同表位特异性的，或者可对本发明多肽以及异源表位，例如异源多肽或固体支持材料特异。參见，例如PCT公开WO93/17715；W092/08802；W091/00360；W092/05793；Tutt等，J.Immunol.，147:60-69(1991);美国专利号4，474，893;4，714，681;4，925，648；5，573，920;5，601，819；Kostelny等，J.Immunol.，148:1547-1553,(1992)。多特异性抗体至少对两种不同抗原具有结合特异性。虽然这种分子通常只与两种抗原结合(双特异性抗体，BsAbs)，但本发明包括具有额外特异性的抗体，例如三特异性抗体。BsAbs的例子包括但不限于ー个臂针对HMGl和/或HMG2表位，而另一臂针对任何其它抗原的那些抗体。本领域已知制备双特异性抗体的方法。全长双特异性抗体的常规制备方法以共同表达两对免疫球蛋白重链为基础，其中所述两链具有不同特异性(Millstein等，1983，Nature,305:537-539)。由于免疫球蛋白重链和轻链的随机重配，这些杂交瘤(四源瘤(quadroma))产生了不同抗体分子的可能混合物,其中只有ー种具有正确的双特异性结构。纯化该正确的分子一般通过亲和层析步骤进行，这相当繁重并且产物收率低。类似的方法见WO93/08829和Traunecker等，1991，EMBOJ.，10:3655_3659。更直接的方法是产生ニ(价)_双抗体，一种四价双特异性抗体。本领域已知产生ニ(价)_双抗体的方法(參见，例如Lu等，2003,JTmmunolMethods,279:219-32;Marvin等，2005，ActaPharmacolicalSinica,26649)。按照另ー种方法，将具有所需结合特异性的抗体可变区(抗体-抗原结合位点)与免疫球蛋白恒定区序列融合。优选与含有绞链区、CH2和CH3区至少一部分的免疫球蛋白重链恒定区相融合。优选至少ー种融合体中存在含轻链结合所需位点的第一重链恒定区(CHl)。将编码免疫球蛋白重链融合体和免疫球蛋白轻链(如果需要)的DNA插入不同的表达载体中，共同转染入合适的宿主生物体中。当构建所用这三种多肽链比例不等时可提供最佳产率，这对调节这三种多肽片段彼此的比例提供了高度灵活性。然而，当等比例表达至少两种多肽链获得高产率或者当所述比例不具有特别意义时，可将两种或所有三种多肽链的编码序列插入ー个表达载体中。在该方法的一个实施方式中，双特异性抗体由一对在ー个臂中具有第一结合特异性(例如，HMGl和/或HMG2表位，如A-框、B-框)的杂交免疫球蛋白重链和另一臂中的杂交免疫球蛋白重链-轻链对(提供第二结合特异性)构成。发现此不对称结构有助于分离所需的双特异性化合物和不要的免疫球蛋白链混合物，因为只在该双特异性分子的一半中存在免疫球蛋白轻链而提供了方便的分离方法。此方法见WO94/04690。产生双特异性抗体的其它细节可见，例如Suresh等，1986,MethodsinEnzymology,121:210。根据W096/27011所述的另一方法，可工程改造ー对抗体分子尽可能提高从重组细胞培养物中回收异源ニ聚体的百分比。优选的界面含有抗体恒定区CH3结构域的至少一部分。在此方法中，用较大侧链(例如，酪氨酸或色氨酸)替代第一抗体分子界面的一个或多个小氨基酸侧链。通过用较小侧链的氨基酸(例如，丙氨酸或苏氨酸)替代大侧链氨基酸可在第二抗体分子的界面上产生与大侧链大小相同或相似的补偿性“空穴”。这提供了増加异质ニ聚体产率超过不要终产物(例如同质ニ聚体)的机制。双特异性抗体包括交联的或“异质缀合物(heteroconjugate)”抗体。例如，该异质缀合物中的ー种抗体可与亲和素偶联，另ー抗体与生物素偶联。有人提出，例如这种抗体可使免疫系统细胞靶向不要的细胞(美国专利号4，676，980)并可用于治疗HIV感染(W091/00360、WO92/200373和EP03089)。可采用常规的交联方法制备异质缀合物抗体。本领域熟知合适的交联剂和许多交联技术，可參见美国专利号4，676，980。考虑了具有两价以上的掺有至少ー个本发明绞链修饰的抗体。例如，可制备三特异性抗体。參见，例如Tutt等，J.Immunol.,147:60,(1991)。其它专门考虑的抗体是“寡克隆”抗体。本文所用的术语“寡克隆抗体”指不同单克隆抗体的预定混合物。本领域已知制备寡克隆抗体的方法。參见，例如“实施例章节”，实施例1，PCT公布WO95/20401;美国专利号5，789，208和6，335，163。在某些实施方式中，寡克隆抗体由在一个细胞中产生的针对ー种或多种表位的抗体预定混合物构成。在其它实施方式中，寡克隆抗体含有多个重链，其能与共同的轻链配对从而产生具有多特异性的抗体(例如，PCT公布WO04/009618)。当需要靶向ー个靶分子(例如，HMG1)上的多个表位时，寡克隆抗体特别有用。本领域技术人员知道或能确定哪种类型的抗体或抗体混合物适用于所需目的和需要。具体地说，本发明抗体包含免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫学活性部分，即含有能与HMGl抗原特异性结合的抗原结合位点(例如，杭-HMGl抗体的一个或多个互补决定区(CRD))的分子。也专门考虑了本发明抗体可包含免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫学活性部分，即含有能与HMG2抗原特异性结合的抗原结合位点(例如，抗-HMG2抗体的一个或多个互补决定区(CRD))的分子。本发明免疫球蛋白分子可以是任何类型(例如，IgG,IgE,IgM,IgD,IgA和IgY)、类别(例如，IgGUIgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2)或亚类的免疫球蛋白分子。免疫球蛋白可同时含有重链和轻链。IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY重链的阵列可与κ或λ形式的轻链配对。本发明抗体也包含免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫学活性片段，即含有抗原结合位点的分子，可将这些片段与或不与另一免疫球蛋白结构域(包括但不限于Fe区或其片段)融合。如本文所概述的，术语“抗体”包括能与本文所述HMGl和/或HMG2特异性结合的抗体、全长抗体及其含有Fe区的Fe变体、或其与本文所述免疫球蛋白的免疫学活性片段或其它蛋白融合的含有至少ー个本文所述新氨基酸残基的片段。这种变体Fe融合体包括但不限于scFv-Fc融合体、可变区(例如,VL和VH)-Fe融合体、scFv_scFv_Fc融合体。免疫球蛋白分子可以是任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如，IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2)或亚类。本发明抗体也包括在哺乳动物(例如，人)中具有以下半衰期(例如，血清半衰期)的抗体5天以上、10天以上、15天以上、20天以上、25天以上、30天以上、35天以上、40、天以上、45天以上、2个月以上、3个月以上、4个月以上或5个月以上。本发明抗体在哺乳动物(例如，人)中半衰期增加导致所述抗体或抗体片段在哺乳动物中的血清滴度较高，减少了所述抗体或抗体片段的给药频率和/或降低了给予所述抗体或抗体片段的浓度。可通过本领域技术人员已知的技术制备体内半衰期增加的抗体。例如，可通过修饰(如，取代、缺失或添加)经鉴定參与Fe区和FcRn受体间相互作用的氨基酸残基来产生体内半衰期增加的抗体(參见，例如国际公布号WO97/34631；W004/029207；U.S.6，737056和美国专利公布号2003/0190311，下文将更详细讨论)。在一个实施方式中，本发明抗体可在其Fe区内包含修饰/取代和/或新的氨基酸，例如以下文献中所述的Ghetie等，1997,NatBiotech.，15:637-40；Duncan等，1988，Nature,332:563-564；Lund等，1991，J.Immunol,147:2657-2662；Lund等，1992，MolTmmunol,29:53-59;Alegre等，1994,Transplantation,571537-1543;Hutchins等，1995,ProcNatl.AcadSciUSA，92:11980-11984Jefferis等，1995，ImmunolLett.,44:111-117；Lund等，1995,FasebJ,9:115-119；Jefferis等，1996,TmmunolLett,54:101-104;Lund等，1996,JTmmunol,157:4963-4969;Armour等，1999,EurJTmmunol,292613-2624；Idusogie等，2000，JImmunol,164:4178-4184;Reddy等，2000，JTmmunol,164:1925-1933；Xu等，2000，CellImmunol,200:16-26；Idusogie等，2001，JImmunol,166:2571-2575；Shields等，2001，JBiolChem,276:6591-6604Jefferis等，2002，TmmunolLett,82:57-65；Presta等，2002,BiochemSocTrans,30:487-490;美国专利号5，624，821；5,885，573；5,677，425；6,165，745；6,277，375；5,869，046；6,121，022；5，624，821；5,648，260；6,194，551；6,737，056；6,821，505；6,277，375;美国专利申请号10/370，749和PCT公开WO94/2935；W099/58572；W000/42072；W002/060919；W004/029207。本领域技术人员不难理解Fe区的其它修饰/取代。可通过本领域技术人员熟知的许多方法制备在Fe区域含有修饰/取代和/或新氨基酸残基的本发明抗体。非限制性例子包括分离抗体或编码区(例如，从杂交瘤分离)，在该分离的抗体编码区中制作一个或多个所需取代。或者，可将本发明抗体的可变区亚克隆入编码含有ー个或(多个)修饰/取代和/或新的氨基酸残基的Fe区的载体中。也可修饰本发明抗体而改变该抗体的糖基化，再次改变其一种或多种功能特性。在一个实施方式中，修饰本发明抗体的糖基化。例如，可制备去糖基化(aglycosylate)的抗体(即，该抗体缺乏糖基化)。可改变糖基化从而，例如提高该抗体对靶抗原的亲和カ。这种碳水化合物修饰可伴有，例如抗体序列中一个或多个糖基化位点的改变。例如，可制作一个或多个氨基酸取代从而消除一个或多个可变区框架的糖基化位点进而消除该位点的糖基化。这种去糖基化可提高该抗体对抗原的亲和力。美国专利号5，714，350和6，350，861进ー步详述了这种方法。或者，可将本发明抗体制成具有改变的糖基化类型，例如岩藻糖基残基含量減少的低岩藻糖基化(hypofucosylated)抗体或含有GlcNAc双剖面结构增强的抗体。已证明这种改变的糖基化模式提高了抗体的ADCC能力。这种碳水化合物修饰可伴有，例如在宿主细胞中表达改变了糖基化机制的抗体。本领域已描述了含有改变糖基化机制的细胞，这些细胞可用作宿主细胞来表达本发明重组抗体从而产生具有改变糖基化的抗体。可參见，例如Shields,R.L.等，(2002)，J.Biol.Chem.，277:26733-26740；Umana等，(1999)，Nat.Biotech.，17:176-1，以及欧洲专利号EPI,176，195；PCT公开WO03/035835；W099/54342。如下文所详述的，可単独使用本发明抗体或与其它组合物联用。所述抗体还可在N-或C-末端与异源多肽重组融合，或与多肽或其它组合物化学缀合(包括共价和非共价缀合)。例如，本发明抗体可与在检测试验中用作标记物的分子和效应分子，例如异源多肽、药物、放射性核素或毒素融合或缀合。參见，例如PCT公开WO92/08495；W091/14438；W089/12624;美国专利号5，314，995和EP396,387。本发明抗体包括经修饰的衍生物，即通过使任何类型的分子与该抗体共价连接，但该共价连接不会阻止该抗体与HMGl和/或HMG2多肽或其片段结合和/或产生所需反应。例如但不限于抗体衍生物包括经修饰的抗体，例如用已知的保护/封闭基团、蛋白酶解切割、与细胞配体或其它蛋白质连接等(实现)糖基化、こ酰化、peg化、磷酸化、酰胺化衍生。可通过已知技术，包括但不限于特异性化学切割、こ酰化、甲酰化、衣霉素的代谢合成等进行各种化学修饰。此外，所述衍生物可含有ー个或多个非典型氨基酸。见下文，名为“抗体衍生物和綴合物”的章节5.5。也可根据它们的交叉反应性描述或指定本发明抗体。包括不与本发明多肽的任何其它类似物、直向同源物或同源物结合的抗体。本发明也包括能与和本发明的人HMGl多肽(例如，人HMGlA框或B框)具有至少95%、至少90%、至少85%、至少80%、至少75%、至少70%、至少65%、至少60%、至少55%和至少50%相同性(利用本领域已知和本文所述方法计算)的多肽结合的抗体。在具体的实施方式中，本发明抗体能与人HMGl蛋白及其相应表位的小鼠、大鼠和/或家兔同源物交叉反应。本发明也包括能与和人HMG2(例如，人HMG2A框或B框)具有至少95%、至少90%、至少85%、至少80%、至少75%、至少70%、至少65%、至少60%、至少55%和至少50%相同性(利用本领域已知和本文所述方法计算)的多肽结合的抗体。还考虑了能与人HMG2多肽或其片段结合的抗体可与人HMGl蛋白及其相应表位的小鼠、大鼠和/或家兔同源物交叉反应。本发明也包括不能与和本发明HMGl和/或HMG2多肽具有小于95%、小于90%、小于85%、小于80%、小于75%、小于70%、小于65%、小于60%、小于55%和小于50%相同性(利用本领域已知和本文所述方法计算)的多肽结合的抗体。在一个实施方式中，能与HMGl多肽或其片段特异性结合的抗体或其片段能预防/拮抗/抑制以下一种或多种情况=HMGBl与RAGE结合、HMGBl与ー种或多种Toll-样受体(例如，TLR2和TLR4)结合、HMGBI与细胞表面(例如，THP-I细胞)结合、HMGI-介导的促炎细胞因子释放、HMGl-介导的炎症、HMGI-介导的脓毒症、HMGl-介导的炎症(例如，关节的炎症)和HMGl-介导的关节炎。可通过本领域已知的ー种或多种方法检测这些活性。參见，例如US20040005316;6，468，533和6，448，223;及下文名为“实施例”的章节6。术语“50%抑制浓度”(简写为“IC5(I”)表示抑制该抑制剂所靶向分子(例如，HMG1)某给定活性的50%所需的抑制剂(例如，本发明抗体)浓度。本领域技术人员应该知道较低的IC5tl值对应于更强效的抑制剂。在一个实施方式中，本发明抗体抑制HMGl-介导的促炎细胞因子释放的IC5tl值是小于5000ng/ml、或小于4000ng/ml、或小于3000ng/ml、或小于2000ng/ml、或小于1000ng/ml、或小于500ng/ml、或小于250ng/ml、或小于IOOng/ml、或小于50ng/ml、或小于10ng/ml或小于5ng/ml。在另ー实施方式中，本发明抗体抑制HMGl-介导的促炎细胞因子释放的IC5tl值是小于ΙΟΟΟηΜ、或小于500nM、或小于250nM、或小于ΙΟΟηΜ、或小于50nM、或小于25nM、或小于ΙΟηΜ、或小于5nM、或小于O.25nM、或小于O.InM或小于O.OlnM0在一个实施方式中，本发明抗体能预防/拮抗/抑制HMGl与RAGE结合，但基本上不影响HMGl与ー种或多种Toll-样受体(例如，TLR2和TLR4)结合。在另ー实施方式中，本发明抗体能预防/拮抗/抑制HMGl与ー种或多种Toll-样受体(例如，TLR2和TLR4)结合，但基本上不影响HMGl与RAGE结合。在还有另ー实施方式中，本发明抗体能预防/拮抗/抑制HMGl与RAGE结合并抑制HMGl与ー种或多种Toll-样受体(例如，TLR2和TLR4)结合。可通过本领域已知的ー种或多种方法检测这些活性。參见，例如US20040005316;6，468，533和6，448，223;及下文名为“实施例”的章节6。在一具体实施方式中，本发明抗体能抑制HMGl与RAGE的结合至少约10%、或至少约20%、或至少约30%、或至少约40%、或至少约50%、或至少约60%、或至少约70%、或至少约80%、或至少约90%、或至少约100%。在另一具体实施方式中，本发明抗体能抑制HMGl与ー种或多种Toll-样受体(例如，TLR2和TLR4)的结合至少约10%、或至少约20%、或至少约30%、或至少约40%、或至少约50%、或至少约60%、或至少约7%、或至少约80%、或至少约90%、或至少约100%。在另一具体实施方式中，本发明抗体能抑制HMGl与RAGE的结合至少10%、或至少20%、或至少30%、或至少40%、或至少50%、或至少60%、或至少70%、或至少80%、或至少90%、或至少100%。在另一具体实施方式中，本发明抗体能抑制HMGl与ー种或多种Toll-样受体(例如，TLR2和TLR4)的结合至少10%、或至少20%、或至少30%、或至少40%、或至少50%、或至少60%、或至少70%、或至少80%、或至少90%、或至少100%。如本文所述，这些抗体能区分从不同来源分离的同一种多肽。不希望受任何具体理论的束缚，但可通过许多差异来区分从不同来源分离的有相似或相同氨基酸序列的多肽，所述差异包括但不限于翻译后修饰(例如，磷酸化、こ酰化、甲基化、糖基化等)、总体结构中的改变(例如，ニ硫键和/或折叠的改变)和可能与该多肽有关的任何其它分子的差异(例如，盐、其它亚基，如多核苷酸和/或其它多肽)。在一个实施方式中，与天然HMGl(例如，从哺乳动物细胞或组织分离)相比,本发明抗体对大肠杆菌重组产生的HMGl特异性结合亲和力相同或较高。在另ー实施方式中，与大肠杆菌重组产生的HMGl相比，本发明抗体对天然HMGl(例如，从哺乳动物细胞或组织分离)特异性结合亲和力相同或较高。在还有另ー实施方式中，本发明抗体能与天然HMGl的ー种或多种形式结合，所述天然HMGl包括但不限于核HMGl(例如，通过冻融法从细胞中分离)、释放的HMGl(例如，从坏死细胞上清液中分离)和激活的HMGl(例如，从刺激的细胞，如LPS刺激的细胞中分离)。在还有另ー实施方式中，本发明抗体不能与天然HMGl的ー种或多种形式结合，所述天然HMGl包括但不限于核HMGl(例如，通过冻融法从细胞中分离)、释放的HMGl(例如，从坏死细胞的上清液中分离)和激活的HMGl(例如，从刺激的细胞，如LPS刺激的细胞中分离)。本文公开了获得天然和重组HMGl的具体方法(參见，下文实施例2)。在一个实施方式中，本发明抗体能与可溶性HMGl和/或HMG2特异性结合。在另ー实施方式中，本发明抗体能与固定的HMGl和/或HMG2特异性结合。在还有另一实施方式中，本发明抗体能与可溶性和不溶性的HMGl和/或HMG2特异性结合。如上所述，已知HMGl和HMG2是结合多核苷酸(即，DNA和RNA)的蛋白质。在一个实施方式中，本发明抗体能与HMGl和/或HMG2结合，而所述HMGl和/或HMG2与某多核苷酸分子結合。在另ー实施方式中，本发明抗体能预防/拮抗/抑制以下一种或多种情况HMGBl与RAGE结合、HMGBl与ー种或多种Toll-样受体(例如，TLR2和TLR4)结合、HMGBl与细胞表面(例如，THP-I细胞)结合、HMGl-介导的促炎细胞因子释放、HMGl-介导的炎症、HMGl-介导的脓毒症、HMGl-介导的炎症(例如，关节的炎症)和HMGl-介导的关节炎，而所述HMGl与某多核苷酸结合。在具体的实施方式中，所述多核苷酸分子是能促进炎性反应的分子(例如，源自微生物或坏死细胞的多核苷酸)。在一具体实施方式中，本发明抗体与こ酰化HMGl结合的亲和カ高于非こ酰化HMGl的。在另一具体实施方式中，本发明抗体与非こ酰化HMGl结合的亲和カ高于こ酰化HMGl的。在还有另一具体实施方式中，本发明抗体与こ酰化HMGl和非こ酰化HMGl结合的亲和カ基本相同。在另ー实施方式中，本发明高亲和カ抗体能特异性结合的多肽含有人或其它动物，例如哺乳动物和无脊椎动物的HMGl多肽或其抗原性片段或由其构成(或基本上由其构成)。在一具体实施方式中，本发明高亲和カ抗体能特异性结合的多肽含有人HMGl多肽(SEQIDNO1或2)或由其构成(或基本上由其构成)。本领域熟知人和其它动物的HMGl多肽(參见，例如US20040005316;6，468，533和6，448，223)。在一个实施方式中，本发明高亲和カ抗体能特异性结合的多肽含有与SEQIDNO:I或2所示人HMGl多肽具有至少60%相同性、至少70%相同性、至少80%相同性、至少85%相同性、至少90%相同性、至少95%相同性、至少97%相同性、至少99%相同性、或100%相同性的HMGl多肽或由其构成(或基本上由其构成)。在另ー实施方式中，本发明高亲和カ抗体能特异性结合的多肽含有与SEQIDNO:3所示人HMGlA框多肽具有至少60%相同性、至少70%相同性、至少80%相同性、至少85%相同性、至少90%相同性、至少95%相同性、至少97%相同性、至少99%相同性、或100%相同性的多肽或由其构成(或基本上由其构成)。在还有另ー实施方式中，本发明高亲和カ抗体能特异性结合的多肽含有与SEQIDNO:4和/或SEQIDNO28和/或SEQIDNO29所示人HMGlB框多肽具有至少60%相同性、至少70%相同性、至少80%相同性、至少85%相同性、至少90%相同性、至少95%相同性、至少97%相同性、至少99%相同性、或100%相同性的多肽或由其构成(或基本上由其构成)。在另ー实施方式中，本发明高亲和カ抗体能特异性结合的多肽含有人或其它动物，例如哺乳动物和无脊椎动物的HMG2多肽或其抗原性片段或由其构成(或基本上由其构成)。在一具体实施方式中，本发明高亲和カ抗体能特异性结合的多肽含有人HMG2多肽(SEQIDN021)或由其构成(或基本上由其构成)。本领域熟知人和其它动物的HMG2多月太。參见,例如Jantzen等，1990,Nature,344:830-6；Kolodrubetz,1990,NucleicAcidsRes.,18:5565；Laudet等，1993，NucleicAcidsRes.,21:2493-501和Thomas等，2001，TrendsBiochemSci.,26:167_74。在一个实施方式中，本发明高亲和カ抗体能特异性结合的多肽含有与SEQIDNO:21所示人HMG2多肽具有至少60%相同性、至少70%相同性、至少80%相同性、至少85%相同性、至少90%相同性、至少95%相同性、至少97%相同性、至少99%相同性、或100%相同性的HMG2多肽或由其构成(或基本上由其构成)。在另ー实施方式中，本发明高亲和カ抗体能特异性结合的多肽含有与SEQIDNO:22所示人HMG2A框多肽具有至少60%相同性、至少70%相同性、至少80%相同性、至少85%相同性、至少90%相同性、至少95%相同性、至少97%相同性、至少99%相同性、或100%相同性的多肽或由其构成(或基本上由其构成)。在还有另ー实施方式中，本发明高亲和カ抗体能特异性结合的多肽含有与SEQIDNO:23所示人HMG2B框多肽具有至少60%相同性、至少70%相同性、至少80%相同性、至少85%相同性、至少90%相同性、至少95%相同性、至少97%相同性、至少99%相同性、或100%相同性的多肽或由其构成(或基本上由其构成)。例如，可通过以最佳比较为目的比对序列(例如，可在第一条序列的序列中引入空位)来測定两条氨基酸序列(或两条核酸序列)的相同性百分比。然后比较相应位置的氨基酸或核苷酸，两条序列间的相同性百分比是两条序列所共有的相同位置数的函数(即，％相同性=相同位置数目/位置总数X100)。可通过熟知方法，例如利用数学算法进行两条序列的实际比较。这种数学算法的具体的非限制性例子描述于Karlin等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:5873-5877,(1993)。如Schaffer等，NucleicAcidsRes.,292994-3005，(2001)所述这种算法已纳入在BLASTN和BLASTX程序(2.2版)中。当采用BLAST和空位BLAST程序时，可采用各程序(例如，BLASTN)的默认參数。參见http://WWW.ncbi.nlm.nih.gov,2002年4月10日可用。在一个实施方式中，检索的数据库是非冗余(NR)数据库,用于序列比较的參数可设置为无滤过(nofilters);预期值(Expectvalue)为10;字大小(WordSize)为3;矩阵是BL0SUM62;存在ー个空位为11和延伸为I。用于序列比较的数学算法的另ー非限制性例子是Myers和Miller算法，CABIOS(1989)ο该算法已纳入ALIGN程序(2.O版)中，该程序是GCG(Accelrys)序列比对软件包的一部分。当利用ALIGN程序比对氨基酸序列时，可利用PAM120加权残差表(weightresiduetable)、ー个空位长罚分12、ー个空位罚分4。本领域已知用于序列分析的其它算法，这些算法包括Torellis和Robotti,Comput.Appl.Biosci.,10:3_5，(1994)所述的ADVANCE和ADAM，及Pearson和Lipman，Proc.Natl.Acad.SciUSA,85:2444-8,(1988)所述的FASTA。在另一实施方式中，可利用GCG软件包的GAP程序(http://www.accelrys.com,2001年8月31日可用)测定两条氨基酸序列间的相同性百分比，该程序利用Blossom63矩阵或PAM250矩阵,空位加权(gapweight)12、10、8、6或4,长度加权(lengthweight)2、3或4。在还有另ー实施方式中，可利用GCG软件包的GAP程序(在http://www.cgc.com得到)測定两条核酸序列间的相同性百分比，该程序采用空位加权50，长度加权3。在本发明的另ー实施方式中，所述抗体与HMGl及其抗原性片段特异性结合的解离常数或KdUktJ小于10_5M、或小于10_6M、或小于10_7M、或小于10_8M、或小于1(Γ9Μ、或小于ΙΟ,Μ、或小于10_ηΜ、或小于10_12Μ、或小于10_13Μ、或小于5Χ1(Γ13Μ、或小于1(Γ14Μ、或小于5Χ10_14Μ、或小于10_15Μ、或小于5Χ10_15Μ。在还有另ー实施方式中，本发明抗体与HMGl及其抗原性片段特异性结合的解离常数或KdUkJ介于约10_7Μ-约10_8Μ之间、介于约IQ-8M-约10_9Μ之间、介于约ΙΟ—、-约ΙΟ,Μ之间、介于约I(T10M-约10_ηΜ之间、介于约10_nM-约KT12M之间、介于约IO-12M-约10_13M之间、介于约KT13M-约10_14M之间。在还有另ー实施方式中，本发明抗体与HMGl及其抗原性片段结合的解离常数或KdG^ffZXJ介于约1(Γ7Μ-约KT8M之间、介于约1(Γ8Μ-约KT9M之间、介于约1(Γ9Μ-约KTkiM之间、介于约ΙΟ,Μ-约10_ηΜ之间、介于约10_ηΜ-约10_12Μ之间、介于约10_12Μ-约10_13Μ之间、介于约KT13M-约1(Γ14Μ之间。在本发明的另ー实施方式中，所述抗体与HMG2及其抗原性片段特异性结合的解离常数或KdUktJ小于10_5Μ、或小于10_6M、或小于10_7Μ、或小于10_8Μ、或小于1(Γ9Μ、或小于ΙΟ,Μ、或小于10_ηΜ、或小于10_12Μ、或小于10_13Μ、或小于5Χ1(Γ13Μ、或小于1(Γ14Μ、或小于5Χ10_14Μ、或小于10_15Μ、或小于5Χ10_15Μ。在还有另ー实施方式中，本发明抗体与HMG2及其抗原性片段特异性结合的解离常数或Kd(kjkj介于约10_7Μ-约10_8Μ之间、介于约IO-8M-约10_9Μ之间、介于约ΙΟ—、-约ΙΟ,Μ之间、介于约I(T10M-约10_ηΜ之间、介于约IO-11M-约KT12M之间、介于约IO-12M-约10_13Μ之间、介于约KT13M-约10_14Μ之间。在还有另ー实施方式中，本发明抗体与HMG2及其抗原性片段结合的解离常数或KdG^ffZXJ介于约1(Γ7Μ-约KT8M之间、介于约1(Γ8Μ-约KT9M之间、介于约1(Γ9Μ-约KTkiM之间、介于约ΙΟ,Μ-约10_ηΜ之间、介于约10_ηΜ-约10_12Μ之间、介于约10_12Μ-约10_13Μ之间、介于约KT13M-约1(Γ14Μ之间。本领域熟知平衡解离常数(Kd)定义为kf/kw—般知道具有低Kd(S卩，高亲和カ)的结合分子(例如，抗体)优于具有高Kd(S卩，低亲和力)的结合分子(例如，抗体)。然而在一些情况中，km或kf值比Kd值更相关。本领域技术人员能确定哪种动力学參数对于某给定抗体的应用最重要。在某些实施方式中，本发明抗体对某种抗原的Kd低于对其它抗原的。在另ー实施方式中，所述抗体与HMGl及其抗原性片段结合的kf值小于IXΙΟ、—1或小于SXlO-3S'在其它实施方式中，所述抗体与HMGl及其抗原性片段结合的匕值小于KT3S'小于5XKT3S'小于10小于5Χ10ΛΓ1、小于l(T5s'小于5Χl(T5s'小于KT6S'小于5XKT6S'小于KT7S'小于5XKT7S'小于1θΛ'小于5X1θΛ'小于ΙΟΛ-1、小于5XIO-V1或小于IO-10S'在另ー实施方式中，所述抗体与HMG2及其抗原性片段结合的Iitjff值小于IXΙΟ、—1或小于SXlO-3S'在其它实施方式中，所述抗体与HMG2及其抗原性片段结合的匕值小于KT3S'小于5XKT3S'小于10小于5Χ10ΛΓ1、小于l(T5s'小于5Χl(T5s'小于KT6S'小于5XKT6S'小于KT7S'小于5XKT7S'小于1θΛ'小于5X1θΛ'小于ΙΟΛ-1、小于5XIO-V1或小于IO-10S'在另ー实施方式中，本发明抗体与HMGl和/或其抗原性片段结合的缔合速率常数或km速率值是至少IO5MW至少5XIO5IT1s'至少lOfs—1、至少5XIO6IT1s'至少IO7MW至少5XIO7M-1s'至少IO8IT1S'或至少IO9IT1s'在另ー实施方式中，本发明抗体与HMG2和/或其抗原性片段结合的缔合速率常数或km速率值是至少IO5MW至少5XIO5M-1S'至少lOfs—1、至少5XIO6IT1s'至少IO7MW至少5XIO7M-1s'至少IO8IT1S'或至少IO9IT1s'与所有多肽相似，所述抗体具有等电点(Pl)，其通常定义为多肽不携带净电荷时的pH。本领域已知当溶液的pH等于该蛋白质的等电点时，蛋白质溶解度通常最低。本文所用的Pi值定义为主要带电荷形式的pi。可通过各种方法，包括但不限于等电聚焦和各种计算机算法测定蛋白质的pi(參见，例如Bjellqvist等，1993,Electrophoresis,141023)。此外，抗体Fab结构域的热解链温度(Tm)可作为抗体热稳定性的良好指标，还可进一歩表示保存期限。Tm较低表明凝聚较多/稳定性较差，而Tm较高表明凝聚较少/稳定性较好。因此，某些实施方式优选Tm较高的抗体。可采用本领域已知的任何标准方法，例如示差扫描量热法检测蛋白质结构域(例如，Fab结构域)的Tm(參见,例如Vermeer等，2000，Biophys.J.，78:394-404；Vermeer等，2000，Biophys.J.，79:2150-2154)。因此，本发明的其它非排他性实施方式包括具有某些优选生化特征(例如特定等电点(PD或解链温度(Tm))的本发明高亲和カ抗体。更具体地说，在一个实施方式中，本发明高亲和カ抗体的pi范围是5.5-9.5。在还有另一具体实施方式中，本发明高亲和カ抗体的Pl范围是约5.5-约6.O、或约6.O-约6.5、或约6.5-约7.O、或约7.O-约7.5、或约7.5-约8.O、或约8.O-约8.5、或约8.5-约9.O、或约9.O-约9.5。在其它具体实施方式中，本发明高亲和カ抗体的pi范围是5.5-6.O、或6.0-6.5、或6.5-7.O、或7.0-7.5、或7.5-8.O、或8.0-8.5、或8.5-9.O、或9.0-9.5。甚至更具体地说，本发明高亲和カ抗体的Pl是至少5.5、或至少6.O、或至少6.3、或至少6.5、或至少6.7、或至少6.9、或至少7.I、或至少7.3、或至少7.5、或至少7.7、或至少7.9、或至少8.I、或至少8.3、或至少8.5、或至少8.7、或至少8.9、或至少9.I、或至少9.3、或至少9.5。在其它具体的实施方式中，本发明高亲和カ抗体的Pl是至少5.5、或至少6.O、或至少6.3、或至少6.5、或至少6.7、或至少6.9、或至少7.I、或至少7.3、或至少7.5、或至少7.7、或至少7.9、或至少8.I、或至少8.3、或至少8.5、或至少8.7、或至少8.9、或至少9.I、或至少9.3、或至少9.5。可能通过改变抗体中可电离残基的数目和位置来调节pi从而优化溶解性。例如，可通过制作合适的氨基酸取代(例如，用带电荷的氨基酸，如赖氨酸取代不带电荷的残基，如丙氨酸)来调节多肽的P〗。不希望受任何具体理论的束缚，抗体中导致所述抗体Pi改变的氨基酸取代可提高抗体的溶解性和/或稳定性。本领域技术人员知道哪种氨基酸取代最适合具体抗体实现所需的Pi。在一个实施方式中，在本发明抗体中产生取代以改变pi。特别考虑了能导致与FeYR结合改变的Fe区取代(如上所述)也可导致Pl改变。在另ー实施方式中，专门选择Fe区取代以实现FeYR结合(力)的改变和所需的pi改变。在一个实施方式中，本发明高亲和カ抗体的Tm范围是65°C_120°C。在具体的实施方式中，本发明高亲和カ抗体的Tm范围是约75V-约120°C、或约75V-约85で、或约85°C-约95°C、或约95°C-约105°C、或约105°C-约115°C、或约115°C-约120°C。在其它实施方式中，本发明高亲和カ抗体的Tm范围是75°C_120°C、或75°C_85°C、或85°C-95V,或95°C_105°C、或105°C_115°C、或115°C_120°C。在还有其它具体的实施方式中，本发明高亲和カ抗体的Tm是至少约65°C、或至少约70°C、或至少约75°C、或至少约80°C、或至少约85°C、或至少约90°C、或至少约95°C、或至少约100°C、或至少约105°C、或至少约110°C、或至少约115°C、或至少约120°C。在还有其它具体的实施方式中，本发明高亲和カ抗体的Tm是至少65で、或至少70°C、或至少75で、或至少80°C、或至少85で、或至少90°C、或至少95°C、或至少100°C、或至少105°C、或至少110°C、或至少115°C、或至少120°C。在一具体实施方式中，本发明高亲和カ抗体或其片段是人抗体或人源化抗体。在一个实施方式中，本发明也包括能以高亲和力与HMGl特异性结合的特定抗体(及其片段)。具体地说，本文将抗-HMGl抗体分别称为“32”、“36”、“316”和“64”，这些抗体由美国模式培养物保藏所(10801UniversityBoulevard,Manassas,Va.20110-2209)保藏，分别指定了ATCC保藏号PTA-6142、PTA-6143、PTA-6259和PTA-6258。这些保藏物按照国际承认用于专利程序的微生物保存布达佩斯条约的条款而维持。由于提及的这些抗体株按照布达佩斯条约的条款而维持，则签署了布达佩斯条约的专利局可获得这些抗体株。在另ー实施方式中，本发明包括的抗体含有本文公开的ー个或多个可变区(參见图2A-J,SEQIDNO:5-20,24-27和30-73)能与HMGl和/或HMG2特异性结合。本发明也包括G2、G4、G9、G12、G16、G20、G34、G35、S2、S6、S10、S12、S14、S16、S17和Ell(參见图2A-J，SEQIDNO:5_20，24-27和30-73)的变体，它们在轻链可变(Vl)结构域和/或重链可变(Vh)结构域中含有一个或多个氨基酸残基取代。本发明也包括G2、G4、G9、G12、G16、G20、G34、G35、S2、S6、S10、S12、S14、S16、S17和Ell(參见图2A-J,SEQIDNO:5-20，24-27和30-73)的变体，它们在ー个或多个\CDR和/或一个或多个VhCDR中含有一个或多个其它氨基酸残基取代。可在体外或体内测试通过在G2、G4、G9、G12、G16、G20、G34、G35、S2、S6、S10、S12、S14、S16、S17和E11(參见图2A-J,SEQIDNO:5-20，24-27和30-73)的Vh结构域、Vh⑶R、Vl结构域和/或'⑶R中引入取代而产生的抗体，例如测试其与HMGl和/或HMG2结合的能力(如通过免疫測定，包括但不限于=ELISA和BIAcore)，或其抑制HMGl诱导细胞因子释放，预防、治疗、控制或缓解炎性疾病或其ー种或多种症状的能力。应该知道本文所提及的互补决定区(OTR)残基编号是Kabat等，(1991，NIH出版物91-3242,NationalTechnicalInformationService,Springfield,VA)所述的那些(编号)。具体说是轻链可变区中的残基24-34(⑶Rl)、50-56(⑶R2)和89-97(⑶R3)，重链可变区中的残基31-35(⑶Rl)、50-65(⑶R2)和95-102(⑶R3)。应注意抗体与抗体之间的⑶R差别巨大(根据定义未显示与Kabat共有序列的同源性)。框架残基的最大比对往往需要将“间隔”残基插入要用于Fv区的编号系统。应该知道本文提及的CDR是Kabat等(同上)所述的那些(CDR)。此外，因为种间或等位基因趋异，位于任何给定Kabat位置编号的某些单个残基身份在抗体链与抗体链之间可能不同。在其它实施方式中，本发明包括含有至少ー个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或至少六个本文所述CDR(參见，例如图2A-J，CDR以下划线标出)的抗体。在还有其它实施方式中，本发明包括的抗体能与HMGl和/或HMG2特异性结合，其含有的VhCDR具有表3所列任一VhCDR的氨基酸序列和/或衍生自表3所列任一抗体重链可变区的重链可变区。在另一具体实施方式中，本发明包括的抗体能与HMGl和/或HMG2特异性结合，其含有的\CDR具有表3所列任一\CDR的氨基酸序列和/或衍生自表3所列任一抗体轻链可变区的轻链可变区。本发明包括的抗体能与HMGl和/或HMG2特异性结合，其含有能与HMGl和/或HMG2特异性结合的本文所述Vh结构域、Vh⑶R、ん结构域或ん⑶R的衍生物。可采用本领域技术人员已知的标准技术将突变(例如，添加、缺失和/或取代)引入编码本发明抗体的核苷酸序列，所述技术包括例如常规采用定点诱变和PCR-介导的诱变来产生氨基酸取代。在一个实施方式中，与最初的Vh和/或VfDR相比，Vh和/或\⑶R衍生物包含少于25个氨基酸取代、少于20个氨基酸取代、少于15个氨基酸取代、少于10个氨基酸取代、少于5个氨基酸取代、少于4个氨基酸取代、少于3个氨基酸取代或少于2个氨基酸取代。在另ー实施方式中，Vh和/或んCDR衍生物在一个或多个预计的非必需氨基酸残基(即，对于抗体与HMGl和/或HMG2特异性结合不是至关重要的氨基酸残基)处具有保守性氨基酸取代(例如，同上)。或者，可沿着整个Vh和/或\CDR编码序列或其一部分随机引入突变，例如通过饱和诱变，可筛选得到的突变体的生物学活性以鉴定保留了活性的突变体。诱变后，可表达所编码的抗体，测定该抗体的活性。本发明也包括能与HMGl和/或HMG2或其片段特异性结合的抗体，所述抗体包含的重链可变区和/或轻链可变区的氨基酸序列与G2、G4、G9、G12、G16、G20、G34、G35、S2、S6、S10、S12、S14、S16、S17和E11(參见图2A-J，SEQIDNO:5_20，24-27和30-73)的重链和/或轻链可变区的氨基酸序列有至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%相同。本发明也包括能与HMGl和/或HMG2或其片段特异性结合的抗体，所述抗体包含的重链可变区和/或轻链可变区的氨基酸序列与62、64、69、612、616、620、634、635、52、56、510、512、514、S16、S17和Ell(參见图2A-J，SEQIDNO:5_20，24-27和30-73)的重链和/或轻链可变区的氨基酸序列有至少约45%、至少约50%、至少约55%、至少约60%、至少约65%、至少约70%、至少约75%、至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%或至少约99%相同。本发明还包括能与HMGl和/或HMG2或其片段特异性结合的抗体，所述抗体或抗体片段包含的ー个或多个CDR的氨基酸序列与G2、G4、G9、G12、G16、G20、G34、G35、S2、S6、S10、S12、S14、S16、S17和Ell(參见图2A-J，SEQIDNO:5_20，24-27和30-73)的一个或多个⑶R的氨基酸序列有至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%相同。本发明还包括能与HMGl和/或HMG2或其片段特异性结合的抗体，所述抗体或抗体片段包含的ー个或多个CDR的氨基酸序列与G2、G4、G9、G12、G16、G20、G34、G35、S2、S6、S10、S12、S14、S16、S17和Ell(參见图2A-J，SEQIDNO:5_20，24-27和30-73)的ー个或多个CDR的氨基酸序列有至少约45%、至少约50%、至少约55%、至少约60%、至少约65%、至少约70%、至少约75%、至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%或至少约99%相同。可采用本领域技术人员已知的任何方法(包括BLSAT蛋白质检索)測定两条氨基酸序列的相同性百分比。本发明也包括能与HMGl和/或HMG2或其片段特异性结合的抗体，所述抗体由能在严谨条件下与G2、G4、G9、G12、G16、G20、G34、G35、S2、S6、S10、S12、S14、S16、S17和E11(參见图2A-J，SEQIDNO:5_20，24-27和30-73)的核苷酸序列杂交的核苷酸序列编码。在另ー实施方式中，本发明包括能与HMGl和/或HMG2或其片段特异性结合的抗体，所述抗体含有的ー个或多个⑶R由能在严谨条件下与G2、G4、G9、G12、G16、G20、G34、G35、S2、S6、S10、S12、S14、S16、S17和Ell(參见图2A-J，SEQIDNO:5_20，24-27和30-73)的一个或多个CDR的核苷酸序列杂交的核苷酸序列编码。严谨杂交条件包括但不限于约45°C在6X氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中与滤膜结合的DNA杂交，然后在约50-65°C用O.2XSSC/0.1%SDS洗涤一次或多次，高度严谨性条件例如约45°C在6XSSC中与滤膜结合的DNA杂交，然后在约60°C用O.1XSSC/0.2%SDS洗涤一次或多次，或者本领域技术人员已知的任何其它严谨性杂交条件(參见，例如，Ausubel,F.Μ.等编，1989,CurrentProtocolsinMolecularBiology(《最新分子生物方法》)，第一卷，GreenPublishingAssociates,Inc.和JohnWileyandSons,Inc.，纽约，第6.3.1-6.3.6页和2·10.3页)。具有保藏抗体的至少ー个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或所有六个⑶R的抗体是本发明的具体实施方式。编码这些抗体(及其片段)的分离的多核苷酸也是本发明的具体实施方式。“S2”、“S4”、“S16”和“G4”以及本发明其它几种特定杭-HMGl抗体的结合与功能特征见表I。表I-抗-HMGl抗体a的特征和保藏信息权利要求1.一种与人HMGBl多肽或其抗原性片段特异性结合的分离的抗体，其中所述抗体与所述人HMGBl多肽或其抗原性片段结合的解离常数(Kd)等于或小于39nM。2.如权利要求I所述的抗体，其特征在于，所述抗体与所述人HMGBl多肽或其抗原性片段结合的解离常数(Kd)在22nM和39nM之间。3.如权利要求I所述的抗体，其特征在于，所述抗体与含有人HMGBlB框的多肽特异性彡口口4.如权利要求I所述的抗体，其特征在于，所述抗体与由人HMGBlB框构成的多肽特异性结合。5.如权利要求3所述的抗体，其特征在于，所述人HMGBlB框选自SEQIDNO3；SEQIDNO:28和SEQIDNO:29。6.如权利要求I所述的抗体，其特征在于，所述抗体与基本上由SEQIDNO4所示的人HMGBlA框构成的多肽特异性结合。7.如权利要求I所述的抗体，其特征在于，所述抗体与由SEQIDNO:4所示的人HMGBlA框构成的多肽特异性结合。8.如权利要求I所述的抗体，其特征在于，所述抗体选自单克隆抗体、人源化抗体、嵌合型抗体、单链Fv(scFv)、Fab片段、F(ab’)片段、胞内抗体和合成抗体。9.如权利要求I、2、3、4、5、6、7或8所述的抗体，其特征在于，所述抗体是人抗体或其抗原性结合片段。10.如权利要求I所述的抗体，其特征在于，所述抗体的Pl介于6.5-9.5之间。11.如权利要求I所述的抗体，其特征在于，所述抗体的Tm介于65°C_95°C之间。12.如权利要求9所述的抗体，其特征在于，所述抗体抑制用高迁移率族(HMG)蛋白处理的脊椎动物细胞释放促炎细胞因子。13.如权利要求I所述的抗体，其特征在于，当给予小鼠时，所述抗体在小鼠CLP脓毒症模型中至少有30%保护作用。14.如权利要求I所述的抗体，其特征在于，当给予啮齿类动物时，所述抗体在至少一种啮齿类动物关节炎模型中至少有30%保护作用。15.如权利要求14所述的抗体，其特征在于，所述啮齿类动物关节炎模型选自小鼠被动性胶原诱导的关节炎模型、小鼠主动性胶原诱导的关节炎模型和大鼠佐剂诱导的关节炎模型。16.如权利要求I所述的抗体，其特征在于，当给予小鼠时，所述抗体在小鼠腹膜炎模型中至少有30%保护作用。17.—种制备如权利要求I所述抗体的方法。18.一种含有如权利要求I所述抗体的抗体组合物。19.一种治疗以炎性细胞因子级联反应激活为特征的病症的方法，所述方法包括给予治疗有效量的至少一种权利要求I所述抗体。20.一种治疗类风湿性关节炎的方法，所述方法包括给予治疗有效量的至少一种权利要求9所述抗体。21.—种诊断、预后或监测以炎性细胞因子级联反应激活为特征的病症的治疗效果的方法，所述方法包括a)在合适的抗体-HMGB结合条件下使生物学样品与权利要求I所述抗体接触；和b)检测所述生物学样品中结合的HMGB。22.一种选自保藏抗体S2、S6、S16或G4的抗体。23.一种与权利要求22所述保藏抗体的相同表位结合的抗体，其中所述保藏抗体对HMGl多肽的亲和力相等或较高。全文摘要公开了抑制脊椎动物细胞释放促炎细胞因子和抑制患者的炎性细胞因子级联反应的组合物和方法。所述组合物含有，例如能与HMG1及其抗原性片段特异性结合的高亲和力抗体。本发明高亲和力抗体和含有它的药物组合物可用于许多目的，例如作为抵御各种炎性疾病和病症的治疗剂，所述疾病和病症是例如脓毒症、类风湿性关节炎、腹膜炎、克罗恩病、再灌注损伤、败血症、内毒素性休克、囊性纤维化、心内膜炎、银屑病、银屑病关节炎、关节炎、过敏性休克、器官局部缺血、再灌注损伤和同种异体移植物排斥。此外，本发明高亲和力抗体可用作诊断抗体。文档编号G01N33/68GK102731654SQ201210097800公开日2012年10月17日申请日期2005年10月21日优先权日2004年10月22日发明者A·科伊尔,C·B·埃兰,H·吴,L·-L·安,P·基纳,毛素殽,高长寿申请人:米迪缪尼有限公司