抗cgrp抗体和抗体片段用于在有需要的受试者、尤其是偏头痛患者中预防或抑制畏光或...的制作方法

抗cgrp抗体和抗体片段用于在有需要的受试者、尤其是偏头痛患者中预防或抑制畏光或 ...的制作方法
【专利摘要】本发明涉及使用抑制畏光、尤其是CGRP相关畏光的抗CGRP抗体或抗体片段在有需要的受试者中抑制或预防畏光的方法。这些抗体和片段可用于治疗不同的与畏光相关的病症如偏头痛、丛集性头痛等。本发明还提供使用转基因巢蛋白/Ramp1啮齿动物的测定法，其利用CGRP模型厌光行为模型来鉴定在有需要的受试者中抑制或预防畏光的治疗上有效的对CGRP具有结合特异性的抗CGRP抗体和其片段。本发明明确地涉及用于鉴定可用于治疗CGRP相关病症如偏头痛的治疗上有效的对CGRP具有结合特异性的抗体和其片段的方法。明确地说，本发明涉及使用本文所述用于抑制或预防畏光的抗体和其结合片段的测定法和疗法，所述抗体包含本文所述的VH、VL和CDR多肽的序列，以及编码其的多核苷酸。
【专利说明】抗CGRP抗体和抗体片段用于在有需要的受试者、尤其是偏头痛患者中预防或抑制畏光或厌光的用途
[0001]相关申请
[0002]本申请要求了 2011年6月14日提交的名称为“抗CGRP抗体和抗体片段用于在有需要的受试者、尤其是偏头痛患者中预防或抑制畏光的用途(USE OF ANT1-CGRPANTIBODIES AND ANTIBODY FRAGMENTS TO PREVENT OR INHIBIT PHOTOPHOBIA IN SUBJECTSIN NEED THEREOF, ESPECIALLY MIGRAINE) ” 的美国临时申请 N0.61/496，860 (代理人备案N0.67858.760000)以及2011年5月20日提交的名称为“抗CGRP组合物及其用途(ANT1-CGRPC0MP0SITIONS AND USE THEREOF) ”的美国临时申请 N0.61/488，660 (代理人备案N0.67858.730300)的权益，所述临时申请各自特此以全文引用的方式并入。
[0003]本申请包含通过EFS-Web以ASCII格式提交的序列表并且特此以全文引用的方式并入。所述ASCII副本创建于2012年5月21日，命名为67858o730305.txt并且大小为203，941 字节。
[0004]发明背景
发明领域
[0005]本发明涉及以下发现:抑制CGRP/CGRP受体相互作用的多肽和/或特异性结合CGRP或CGRP受体的抗体和抗体片段当施用于有需要的受试者时可用于抑制CGRP诱发的畏光。用于本发明中的抑制CGRP/CGRP受体相互作用的多肽包括例如抑制CGRP与CGRP受体相互作用的对CGRP或CGRP受体以及CGRP或CGRP受体的片段或变体具有特异性的抗体和抗体片段。因为畏光为经常与包括例如偏头痛(有和无先兆)和其他头痛病状(以及下文公开的其他适应症)在内的许多病症相关的不良副作用，所以这些CGRP受体抑制剂，例如对CGRP或CGRP受体具有特异性的`抗体和抗体片段，应完全适于抑制经常与偏头痛和其他头痛病状相关的畏光以及适于治疗其他与畏光相关的病状。结果还表明，如果预防性地施用所述抗体，则这些抗体和抗体片段可用于在有需要的受试者、例如由于偏头痛(有或无先兆)、其他头痛病状、抑郁症、广场恐怖症或其他倾向于畏光的病状而具有慢性畏光病史的个体中预防畏光的发作。本发明涵盖这些抗CGRP抗体和抗体片段以单一疗法或与其他活性剂(例如，止痛剂、阿片类、抗抑郁剂或其他活性剂，取决于所治疗的病状和个体)一起的治疗方式的使用。
[0006]本发明进一步提供在特定动物模型中筛选CGRP受体抑制剂、例如对人类降钙素基因相关肽(Calcitonin Gene Related P印tide，下文为“CGRP”)或CGRP受体具有结合特异性的抗CGRP或抗CGRP受体抗体和其片段(包括Fab片段)以测定其体内作用、最尤其是其拮抗CGRP的畏光副作用以及治疗涉及畏光的病状(包括例如偏头痛)的能力的方法。
[0007]相关技术描述
[0008]降钙素基因相关肽(CGRP)是以长度为37个氨基酸的多功能神经肽形式产生。两种形式的CGRP，即CGRP-α和CGRP-β形式，存在于人类中并且具有类似的活性。CGRP-a与CGRP-β在人类中相差三个氨基酸，并且是源自不同的基因。CGRP肽家族包括胰淀素(amyl in)、肾上腺髓质素(adrenomedullin)以及降钙素，但各自具有不同的受体和生物活性。Doods, H., Curr.0p.1nvest.Drugs, 2 (9): 1261-78 (2001)。
[0009]CGRP是从众多组织如三叉神经中释放，当被活化时在脑膜中释放神经肽，从而介导神经源性炎症，其特征为血管舒张、血管渗漏以及肥大细胞退化。Durham, P.L.，New Eng.J.Med.，350(11):1073-75(2004)。CGRP 的生物作用是通过 CGRP 受体(CGRP-R)介导，该CGRP受体由七次跨膜成分结合受体相关膜蛋白(RAMP)组成。CGRP-R进一步需要受体成分蛋白(RCP)的活性，该受体成分蛋白(RCP)对于通过G蛋白与腺苷酸环化酶有效偶联以及cAMP 的产生是必要的。Doods, H.，Curr.0p.1nvest.Drugs, 2 (9): 1261-78(2001)。
[0010]偏头痛构成影响美国约10%成年群体的神经血管病症，并且典型地伴随着剧烈的头痛。约20-30%的偏头痛患者经历先兆，包括先于事件和/或伴随事件的局灶性神经现象。认为CGRP在偏头痛发展中起到显著作用。例如，在偏头痛的头痛期间在颈静脉血中鉴定出血浆CGRP浓度升高，排除其他神经肽。此外，根据Arulmozhi等人，在偏头痛患者中鉴定出下列:⑴血浆CGRP浓度与偏头痛之间存在强相关性；(2)输注CGRP产生类偏头痛的头痛；(3)基线CGRP水平升高；以及(4)在偏头痛发作期间血浆CGRP水平的变化与头痛强度显著相关。Arulmozhi, D.K.等人，Vas.Pharma.，43:176-187 (2005)。另外，在 2011 年 6月06日在线公布的国际疼痛研究协会杂志(Journal of the International Associationfor the Study of Pain)PI1:S0304-3959(11)00313-7;do1:10.1016/j.pain.2011.04.033中，Hou等人报道了降钙素基因相关肽β的角化细胞表达对于神经性和炎症性疼痛机制有影响。
[0011]一种有效的偏头痛治疗是施用曲坦类(triptans)，它们是基于色胺的药物家族，包括舒马曲坦(su matriptan)和利扎曲坦(rizatriptan)。这个家族的成员对包括5-HT1B、5-HT1D以及5-HT1f在内的多种5-羟色胺受体具有亲和力。这个家族成员的药物选择性地收缩脑血管，但也对冠状血管造成血管收缩作用。Durham，P.L.，New Eng.J.Med.，350(11): 1073-75(2004)。在确定患有心脏病的患者中在施用后存在冠状动脉痉挛的理论风险，并且在服用曲坦类后心脏事件可能很少发生。应注意，冠状动脉血管疾病患者
田
[0012]类似地，通常可能通过施用某些麻醉剂或非留体抗炎药物(NSAID)来解决疼痛问题。然而，这些治疗的施用可能以某些负面后果为代价。NSAID有可能造成肾衰竭、肠道出血以及肝功能障碍。麻醉剂有可能造成恶心、呕吐、精神功能受损以及成瘾。因此，期望鉴定出替代的疼痛疗法以避免这些负面后果中的某些。
[0013]除偏头痛以外，认为CGRP在包括但不限于其他头痛病状以及疼痛在内的许多疾病和病症中起作用。由于察觉到这些疾病和病症中涉及CGRP，因此本领域中需要可用于预防或治疗与CGRP相关的疾病和病症并且同时避免不良副作用的组合物和方法。本领域中特别需要降低或抑制与CGRP相关的疾病或病症如偏头痛、头痛以及疼痛中的畏光的组合物或方法。
[0014]偏头痛患者当暴露于光时典型地产生疼痛和偏头痛恶化的症状，这种现象称为畏光。畏光在眼部病症如虹膜炎和葡萄膜炎以及颅内病症如脑膜炎中也是常见的。在经典的视觉通路中，光激活视网膜中的视杆细胞和视锥细胞，所述细胞激活视网膜神经节细胞，其通过视神经投射到外侧膝状核、上丘、然后视觉皮层。这个通路包括成像和非成像数据。一种新的通路(非成像信息)允许通过视交叉上核维持正常的昼夜节律并且由自主感光视网膜神经节细胞(intrinsically photosensitive retinal ganglion cell, ipRGC)调节。这些ipRGC独立于视杆细胞和视锥细胞并且含有黑视素(一种感光色素)。
[0015]Noseda 等人(Noseda，R.等人，A neural mechanism for exacerbation ofheadache by light.Nat.Neurosc1.13，239-245 (2010))研究了患有偏头痛的盲人个体并且将这些研究结果与涉及追踪ipRGC投射至感受硬脑膜疼痛的区域的大鼠模型相关联。在患有偏头痛的盲人患者中，6名由于具有严重的视神经损伤或双边剜除术而无光感。这些受试者经历异常的睡眠模式和不良的瞳孔光反应。他们的偏头痛没有因光暴露而恶化。与之相比，14名能够检测到光尽管影像感知极微弱的盲人受试者具有正常的睡眠模式和正常的瞳孔光反射。尽管广泛的视杆细胞和视锥细胞变性，但这些患者在偏头痛发作期间在光暴露下具有恶化的偏头痛症状，表明ipRGC而非视杆细胞和视锥细胞在畏光中是重要的。
[0016]这些非成像大脑区域的视网膜投射可投射至后丘脑的对侧背尾区，如由大鼠中的顺行追踪所显示。ipRGC向这个区域的输入调节硬脑膜敏感性疼痛神经元，它们也投射至这 个区域。对硬脑膜疼痛和光输入双重敏感的丘脑神经元广泛地投射至多个皮质区，包括初级躯体感觉皮质、初级和次级运动皮质、顶叶联合皮质以及初级和次级视觉皮质。这些皮质投射可帮助解释除畏光之外的其他常见偏头痛症状，例如运动肌衰弱或不协调、视觉障碍以及注意力不集中。
[0017]畏光还伴随着其他不太频繁但同样致残的病状，例如丛集性头痛和其他三叉自主神经性头痛以及眼睑痉挛。畏光的潜在机制涉及三叉神经系统。盲人患者中的畏光表明来自非视觉通路的贡献。另外，三叉自主神经性头痛(一组不太常见的原发性头痛病症)的特征为常常与同侧畏光相关的单侧三叉神经介导的疼痛。
[0018]三叉神经感觉神经元的刺激导致神经肽(包括P物质和降钙素基因相关肽)的释放，产生血管扩张和肥大细胞、内皮细胞以及血小板活化(神经源性炎症)，其导致偏头痛。(Buzzi MG, Dimitriadou V, Theoharides TC, Moskowitz MA.5-Hydroxytryptaminereceptor agonists for the abortive treatment of vascular headaches blockmast cell,endothelial and platelet activation within the rat dura mater aftertrigeminal stimulation.Brain Res 1992; 583:137-149) ? 在急性偏头痛疼痛期间，外颈静脉血中的 CGRP 升高，(Goadsby PJ, Edvinsson L, Ekman R.Vasoactive peptiderelease in the extracerebral circulation of humans during migraine headache.Ann Neurol 1990; 28:183-187)并且曲坦类降低升高的CGRP水平。在动物模型中，对CGRP敏化的小鼠当暴露于外源CGRP时显示更加厌光的行为。在这些小鼠中施用CGRP受体拮抗剂奥赛格潘(olcegepant)可预防畏光。(参见 Recober A, Kaiser EA, Kuburas A, RussoAF.1nduction of multiple photophobic behaviors in a transgenic mouse sensitizedto CGRP.Neuropharmacology2010;58:156-165)。
[0019]然而，尽管已经提出抗CGRP或抗CGRP受体抗体和片段治疗偏头痛的用途，但据 申请人:知晓，尚未有关于任何多肽CGRP拮抗剂或特别是抗CGRP或抗CGRP受体抗体或抗体片段能够在体内减轻或预防CGRP的畏光副作用的报道。充当CGRP/CGRP受体相互作用的抑制剂的新颖多肽如抗CGRP或抗CGRP受体抗体或抗CGRP或抗CGRP受体抗体片段的开发将有益于对目前的偏头痛治疗剂如曲坦类无反应或由于曲坦类的潜在血管收缩作用而不能服用或耐受它们的患者。
发明概要
[0020]本发明涉及以下发现:抑制CGRP/CGRP受体相互作用的多肽如对人类降钙素基因相关肽(下文为“CGRP”)具有结合特异性的抗CGRP或抗CGRP受体抗体和抗CGRP或抗CGRP受体抗体片段(包括Fab片段)以及抑制CGRP/CGRP受体相互作用的CGRP和CGRP受体的片段可用于预防或抑制畏光，尤其是CGRP相关畏光。本文中特别示例了下文被鉴定为Ab3的抗CGRP抗体，它极其有效地减轻或预防畏光，尤其是CGRP的畏光作用。用于所要求的疗法中的其他优选例子是Ab6和AblO等。
[0021]基于上文，本发明涉及抑制CGRP/CGRP受体相互作用的多肽如对人类降钙素基因相关肽(下文为“CGRP”)具有结合特异性的抗CGRP或抗CGRP受体抗体和抗CGRP或抗CGRP受体抗体片段(包括Fab片段)以及抑制CGRP/CGRP受体相互作用的CGRP和CGRP受体的片段、优选地抗CGRP抗体和抗CGRP抗体片段用于治疗或预防畏光的用途。本发明涵盖对于任何畏光的治疗或预防，并且特别地包括对于与偏头痛相关的畏光、和其他与畏光相关的病症如丛集性头痛和其他三叉自主神经性头痛以及眼睑痉挛、抑郁症、双相情感障碍、广场恐怖症、脑膜炎、以及与眼睛相关病状、自闭症、慢性疲劳综合征、月经期偏头痛和其他畏光相关病状相关的畏光的 治疗或预防。
[0022]本发明还涉及在特定的畏光动物模型(例如，下文公开的巢蛋白(nestin)/hRAMPl啮齿动物模型)中筛选抑制CGRP/CGRP受体相互作用的多肽如对人类CGRP具有结合特异性的抗CGRP或抗CGRP受体抗体和抗CGRP或抗CGRP受体结合抗体片段(包括Fab片段)以及抑制CGRP/CGRP受体相互作用的CGRP和CGRP受体的片段，以测定其体内作用，尤其是这些多肽在体内抑制CGRP/CGRP受体相互作用并且从而拮抗CGRP的不良体内副作用(包括畏光)以及治疗涉及CGRP相关畏光的CGRP病状(包括偏头痛和其他与畏光相关的病症，例如丛集性头痛和其他三叉自主神经性头痛和眼睑痉挛、抑郁症、双相情感障碍以及本文鉴定的其他畏光相关病状)的能力的方法。
[0023]本发明还特别地涉及一种评估抑制CGRP/CGRP受体相互作用的候选多肽如对CGRP具有结合特异性的抗CGRP或抗CGRP受体抗体和抗CGRP或抗CGRP受体抗体片段(包括Fab片段)以及抑制CGRP/CGRP受体相互作用的CGRP和CGRP受体的片段、优选地抗CGRP或抗CGRP受体抗体或抗体片段的潜在体内功效的方法，该方法包括与在不存在候选CGRP/CGRP受体抑制剂多肽的情况下施用了 CGRP的啮齿动物的厌光行为相比，在施用了 CGRP的展现厌光的转基因啮齿动物中测定该多肽(例如，抗体)是否抑制厌光行为。
[0024]此外，本发明涉及一种评估抑制CGRP/CGRP受体相互作用的候选多肽如抗CGRP或抗CGRP受体抗体和抗CGRP或抗CGRP受体抗体片段(包括Fab片段)以及抑制CGRP/CGRP受体相互作用的CGRP和CGRP受体的片段、优选地抗CGRP抗体或抗CGRP受体抗体或抗体片段用于治疗特征为CGRP水平增加(其导致畏光)的神经性病状或其他病状的潜在体内功效的方法。
[0025]此外，本发明明确地涉及一种评估抑制CGRP/CGRP受体相互作用的候选多肽如抗CGRP或抗CGRP受体抗体和抗CGRP或抗CGRP受体抗体片段以及抑制CGRP/CGRP受体相互作用的CGRP物质和CGRP受体的片段或变体、优选地抗CGRP或抗CGRP受体抗体或抗体片段用于治疗或预防偏头痛或慢性偏头痛、月经期或更年期或其他激素相关性偏头痛、丛集性头痛或与头痛相关的疼痛病症中的畏光的潜在体内功效的方法。
[0026]更进一步，本发明涉及一种基于候选多肽CGRP/CGRP受体抑制剂(例如，抗CGRP或抗CGRP受体抗体或抗体片段)在下文详细描述的厌光行为巢蛋白/hRAMPl啮齿动物模型中的作用测定所述多肽(例如，抗体或抗体片段)在人类中的合适的治疗剂量或给药方式的方法。
[0027]此外，本发明涉及基于在啮齿动物CGRP (巢蛋白/hRAMPl动物模型)中的结果评估候选多肽(例如，抗CGRP或抗CGRP受体抗体或抗体片段)在人类中的合适的治疗剂量或给药方式的方法。
[0028]在优选的实施方案中，本发明是针对于对CGRP具有结合特异性的特异性抗体和其片段、特别是具有所需表位特异性、高亲和力或亲合力和/或功能特性的抗体的治疗用途。在优选的实施方案中，本发明涉及本文所述的抗体的测定法和用途，所述抗体包含本文所述的VH、'以及CDR多肽的序列，以及编码其的多核苷酸。本发明的一个优选实施方案是针对能够结合至CGRP或CGRP受体和/或抑制由CGRP与CGRP受体(“CGRP-R”)结合而介导的生物活性的嵌合或人源化抗体和其片段(包括Fab片段)。
[0029]在本发明的另一个优选实施方案中，所述测定法和疗法使用可抑制由CGRP-α、CGRP-β以及大鼠CGRP驱动的cAMP产生的全长抗体和其Fab片段。在本发明的另一个优选实施方案中，涵盖在施用后于接受者中降低血管舒张和抑制或预防畏光的全长和其Fab片段。
[0030]在本发明的另一个实施方案中，能够结合于CGRP或CGRP受体的嵌合或人源化抗体和其片段(包括Fab片段)可用于针对降低、治疗或预防与一种或多种下列病状相关的畏光的方法中:偏头痛(有或 无先兆)、癌症或肿瘤、与癌症或肿瘤生长相关的血管生成、与癌症或肿瘤存活相关的血管生成、体重减轻、疼痛、偏瘫性偏头痛、丛集性头痛、月经期偏头痛、偏头痛性神经痛、慢性头痛、紧张性头痛、一般性头痛、潮热、慢性阵发性半侧颅痛、由于头或颈中的潜在结构问题而致的继发性头痛、脑神经痛、窦性头痛(例如与窦炎相关)、无头痛的偏头痛、腹型偏头痛以及过敏症诱发的头痛或偏头痛。
[0031]畏光的常见原因包括偏头痛、白内障或严重的眼科疾病如葡萄膜炎或角膜擦伤。与畏光相关的病症的更详尽列表包括眼睛相关原因如色盲、无虹膜、抗胆碱能药物可能通过麻痹虹膜括约肌而引起的畏光、无晶状体(眼睛不存在晶状体)、牛眼(角膜与虹膜之间的异常窄角)、白内障、视锥细胞营养不良、先天性眼睛异常、病毒性结膜炎(“红眼病”)、角膜擦伤、角膜营养不良、角膜溃疡、角膜上皮破坏(例如由角膜异物或角膜炎引起)、晶状体异位、眼内炎、由疾病、损伤或感染引起的眼外伤如睑板腺囊肿、巩膜外层炎、青光眼、圆锥角膜、或视神经发育不良、水眼、或先天性青光眼、虹膜炎、视神经炎、色素播散综合征、瞳孔扩张(自然或化学诱导)、视网膜脱离、角膜或巩膜的疤痕以及葡萄膜炎。
[0032]另外，畏光具有神经系统相关或泌尿道原因，包括:自闭症谱系障碍、Chiari畸形、诵读困难、脑炎(包括肌痛性脑脊髓炎，也被称为慢性疲劳综合征)、脑膜炎、蛛网膜下腔出血、后颅窝肿瘤，以及其他原因如强直性脊柱炎、白化病、核黄素缺乏症、苯二氮苯类(苯二氮笨类的长期使用或戒断)、化学疗法、基孔肯雅病(Chikungunya)、胱氨酸症(Cystinosis)、埃勒斯_当洛综合征(Ehlers-Danlos syndrome)、宿醉、流感、传染性单核细胞增多症、镁缺乏、汞中毒、偏头痛、狂犬病以及II型酪氨酸血症(也被称为“里奇纳-汉哈特综合征(Richner-Hanhart syndrome) ”)。另外，已知在抑郁症、双相情感障碍以及广场恐怖症中畏光程度升高。
[0033]在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防畏光的这些抗体和人源化形式可能源自兔免疫细胞(B淋巴细胞)并且可根据它们与人类生殖系序列的同源性(序列同一性)进行选择。这些抗体可能需要最小序列修饰或无序列修饰，从而促进人源化后功能特性的保留。本发明的另一个实施方案是针对来自涵盖例如源自兔免疫细胞的Vh、'和CDR多肽的抗CGRP或抗CGRP受体抗体的片段和编码其的多核苷酸，以及这些抗体片段和编码其的多核苷酸在产生能够结合于CGRP和/或CGRP/CGRP-R复合物的新颖抗体和多肽组合物中的用途。
[0034]本发明还涵盖用于治疗或预防畏光的抗CGRP或抗CGRP受体抗体和其结合片段缀合于一种或多种功能性或可检测部分的缀合物。本发明还涵盖制造用于治疗或预防畏光的所述嵌合或人源化抗CGRP或抗CGRP-R抗体或抗CGRP/CGRP-R复合物抗体和其结合片段的方法。在一个实施方案中，结合片段包括但不限于Fab、Fab’、F (ab’)2、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体以及IgNAR。
[0035]本发明的实施方案涉及多肽CGRP/CGRP受体抑制剂、例如抗CGRP或抗CGRP-R抗体或抗体片段和CGRP或CGRP-R片段、优选地抗CGRP或抗CGRP-R抗体和其结合片段用于诊断、评估和治疗与CGRP或其异常表达相关的疾病和病症、尤其是用于治疗或预防畏光的用途。本发明还涵盖多肽CGRP/CGRP受体抑制剂、例如抗CGRP或抗CGRP受体抗体或CGRP或CGRP受体片段、尤其是抗CGRP抗体的片段用于诊断、评估和治疗与CGRP或其异常表达相关的疾病和病症、尤其是用于治疗或预防畏光的用途。本发明的其他实施方案涉及抗CGRP或抗CGRP受体抗体或其片段在重组宿主细胞、例如哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK293细胞、或酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属(diploid Pichia))以及其他酵母菌株中的产生。
`[0036]附图简要说明
[0037]图1提供对应于全长抗体Abl的多核苷酸和多肽序列。
[0038]图2提供对应于全长抗体Ab2的多核苷酸和多肽序列。
[0039]图3提供对应于全长抗体Ab3的多核苷酸和多肽序列。
[0040]图4提供对应于全长抗体Ab4的多核苷酸和多肽序列。
[0041]图5提供对应于全长抗体Ab5的多核苷酸和多肽序列。
[0042]图6提供对应于全长抗体Ab6的多核苷酸和多肽序列。
[0043]图7提供对应于全长抗体Ab7的多核苷酸和多肽序列。
[0044]图8提供对应于全长抗体AbS的多核苷酸和多肽序列。
[0045]图9提供对应于全长抗体Ab9的多核苷酸和多肽序列。
[0046]图10提供对应于全长抗体AblO的多核苷酸和多肽序列。
[0047]图11提供对应于全长抗体Abll的多核苷酸和多肽序列。
[0048]图12提供对应于全长抗体Abl2的多核苷酸和多肽序列。
[0049]图13提供对应于全长抗体Abl3的多核苷酸和多肽序列。
[0050]图14提供对应于全长抗体Abl4的多核苷酸和多肽序列。[0051]图15提供遵循下文实施例1中的方案而获得的关于抗体Abl、Ab2、Ab3以及Ab4的CGRP-a ELISA结合数据。
[0052]图16提供遵循下文实施例1中的方案而获得的关于抗体Ab5、Ab6、Ab7以及Ab8的CGRP-a ELISA结合数据。
[0053]图17提供遵循下文实施例1中的方案而获得的关于抗体Ab9、AblO以及Abl4的CGRP-a ELISA结合数据。
[0054]图18提供遵循下文实施例1中的方案而获得的关于抗体Abll、Abl2以及Abl3的CGRP-a ELISA结合数据。[0055]图19显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Abl、Ab2以及Ab4对于CGRP- α驱动的cAMP产生的抑制作用。
[0056]图20显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab3对于CGRP-α驱动的cAMP产生的抑制作用。
[0057]图21显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab5和Ab6对于CGRP- α驱动的cAMP产生的抑制作用。
[0058]图22显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab7、Ab8、Ab9以及AblO对于CGRP- α驱动的cAMP产生的抑制作用。
[0059]图23显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Abll、Abl2以及Abl3对于CGRP- α驱动的cAMP产生的抑制作用。
[0060]图24显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Abl4对于CGRP-α驱动的cAMP产生的抑制作用。
[0061]图25显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Abl、Ab2以及Ab3对于CGRP- β驱动的cAMP产生的抑制作用。
[0062]图26显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab4、Ab5以及Ab6对于CGRP- β驱动的cAMP产生的抑制作用。
[0063]图27显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab7和Ab8对于CGRP- β驱动的cAMP产生的抑制作用。
[0064]图28显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab9、AblO以及Abl4对于CGRP- β驱动的cAMP产生的抑制作用。
[0065]图29显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Abll、Abl2以及Abl3对于CGRP- β驱动的cAMP产生的抑制作用。
[0066]图30显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Abl、Ab2、Ab4以及Ab5对于大鼠CGRP驱动的cAMP产生的抑制作用。
[0067]图31显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab3和Ab6对于大鼠CGRP驱动的cAMP产生的抑制作用。
[0068]图32显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab7和Ab8对于大鼠CGRP驱动的cAMP产生的抑制作用。
[0069]图33显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab9对于大鼠CGRP驱动的cAMP产生的抑制作用。
[0070]图34显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体AblO对于大鼠CGRP驱动的cAMP产生的抑制作用。
[0071]图35显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Abll和Abl2对于大鼠CGRP驱动的cAMP产生的抑制作用。
[0072]图36显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Abl3对于大鼠CGRP驱动的cAMP产生的抑制作用。
[0073]图37显示遵循下文实施例1中的方案而获得的抗体Ab 14对于大鼠CGRP驱动的cAMP产生的抑制作用。
[0074]图38显示遵循下文实施例6中的方案而获得的抗体Abl_Abl3对于经放射性标记的CGRP与CGRP-R结合的抑制作用。
[0075]图39显示遵循下文实施例7中的方案而获得的通过在大鼠模型中施用辣椒素(capsaicin)之后再施用抗体Ab3和Ab6而获得的相对于对照抗体的血管舒张减少。
[0076]图40显示遵循下文实施例7中的方案而获得的通过在大鼠模型中施用辣椒素之后再施用不同浓度的抗体Ab6而获得的相对于对照抗体的血管舒张减少。 [0077]图41显示ICV注射CGRP在hRAMPltg小鼠和对照同窝出生小鼠中的作用并且特别地包含显示CGRP施用在hRAMPItg小鼠中相对于其对照同窝出生仔畜减少了光行为时间的数据。在麻醉下通过ICV对小鼠注射hCGRP(2yg)并且使其恢复30分钟。将小鼠单独地放置在双室光照/黑暗箱中并且记录运动30分钟。每次于六个不同的箱中平行操作六只小鼠。每一组由七至九只小鼠组成。
[0078]图42包含比较全身性(IP)注射抗CGRP抗体(Ab3)对CGRP驱动的厌光的影响的数据。含Ab3的媒介物、媒介物以及含对照抗体的媒介物以30mg/kg的剂量施用于巢蛋白/RAMPl小鼠中并且然后通过ICV施用向小鼠施用CGRP。该图左侧的数据为在CGRP施用后的前10分钟的光照总时间(秒)，并且该图右侧的数据为在CGRP注射后测量的前20分钟的光照总时间(秒)。所述数据揭示接受抗CGRP抗体Ab3 (公开于下文)的小鼠相对于接受对照物的小鼠在光照中花费的时间量具有统计上显著的增加。
[0079]优选实施方案的详细说明
[0080]定义
[0081]应理解，本发明并不限于所述的具体方法、方案、细胞系、动物物种或属以及试剂，因为这些可能会有变化。还应理解，本文所用的术语仅为描述具体的实施方案，而不意欲限制本发明的范围，本发明的范围仅由所附权利要求书限制。除非上下文另外明确指出，否则如本文所用的单数形式“一”和“该”包括复数个指示物。因此，例如，提及“一个细胞”包括多个此类细胞以及提及“该蛋白质”包括提及一种或多种蛋白质以及为本领域技术人员已知的其等效物，诸如此类。除非另外明确指出，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的技术人员所通常理解相同的含义。
[0082]降钙素基因相关肽(CGRP):如本文所用，CGRP不仅涵盖可获自AmericanPeptides (Sunnyvale CA)和 Bachem (Torrance, CA)的下列智人 CGRP-α 和智人 CGRP-β 氨
基酸序列:
[0083]CGRP- q:ACDTATCVTHRLAGLLSRSGGWKNNFVPTNVGSKAF_NH2 (SEQ ID NO: 281)，其中
N端苯丙氨酸被酰胺化；
[0084]CGRP-β:ACNTATCVTHRLAGLLSRSGGMVKSNFVPTNVGSKAF-NH2 (SEQ ID NO:282)，其中N端苯丙氨酸被酰胺化；而且涵盖这些CGRP氨基酸序列的任何膜结合形式，以及这种序列的突变体(突变蛋白)、剪接变体、同种型、直系同源物、同源物以及变体。特别地，本文的CGRP涵盖啮齿动物(大鼠或小鼠)CGRP以及来自其他哺乳动物的CGRP。[0085]“CGRP受体”或“CGRP-R”是指CGRP的受体结合配偶体，优选地为人类CGRP受体，但涵盖其他物种CGRP-R，尤其是啮齿动物(大鼠或小鼠)、非人灵长类动物以及其他哺乳动物 CGRP-R。
[0086]本文的“CGRP/CGRP受体抑制剂”是指任何抑制CGRP与CGRP受体的相互作用的多肽，例如，抗CGRP或抗CGRP-R抗体或抗体片段以及CGRP或CGRP-R多肽的片段。优选地这些抑制剂将在体外和体内抑制这种相互作用并且将抑制CGRP的不良副作用(包括厌光或畏光)。
[0087]本文的“畏光”是指对光的视觉感知异常不能容忍的症状，有时另外由异常或不合理的畏惧光或由眼睛存在实际的物理光敏感性所定义。在本发明中，畏光特别地包括与偏头痛、丛集性头痛以及可触发偏头痛或丛集性头痛的厌光行为的其他神经性原因相关的厌光。患者由于与眼睛或神经系统有关的若干种不同的医学病状而产生畏光。畏光可由在视觉系统中的任何步骤起始的对光的反应增加而造成，例如:(i)过多的光进入眼睛；(ii)如果眼睛被损伤，例如由于角膜擦伤和视网膜损伤，或如果瞳孔不能正常地收缩(在动眼神经损伤时可见)，则过多的光可以进入眼睛；(iii)视网膜中光感受器的过度刺激；(iv)对视神经的过度电脉冲；以及(V)中枢神经系统中的过度反应。
[0088]畏光的常见原因包括偏头痛、白内障或严重的眼科疾病如葡萄膜炎或角膜擦伤。与畏光相关的病症的更详尽列表包括眼睛相关原因如色盲、无虹膜、抗胆碱能药物可能通过麻痹虹膜括约肌而引起的畏光、无晶状体(眼睛不存在晶状体)、牛眼(角膜与虹膜之间的异常窄角)、白内障、视锥细胞营养不良、先天性眼睛异常、病毒性结膜炎(“红眼病”)、角膜擦伤、角膜营养不良、角膜溃疡、角膜上皮破坏(例如由角膜异物或角膜炎引起)、晶状体异位、眼内炎、由疾病、损伤或感染引起的眼外伤如睑板腺囊肿、巩膜外层炎、青光眼、圆锥角膜、或视神经发育不良、水眼、或先天性青光眼、虹膜炎、视神经炎、色素播散综合征、瞳孔扩张(自然或化学诱导)、视网膜脱离、角膜或巩膜的疤痕以及葡萄膜炎。
[0089]另外，畏光具有神经系统相关或泌尿道原因，包括:自闭症谱系障碍、Chiari畸形、诵读困难、脑炎(包括肌痛性脑脊髓炎，也被称为慢性疲劳综合征)、脑膜炎、蛛网膜下腔出血、后颅窝肿瘤，以及其他原因如强直性脊柱炎、白化病、核黄素缺乏症、苯二氮箪类(苯
二氮革类的长期使用或戒断)、化学疗法、基孔肯雅病、胱氨酸症、埃勒斯-当洛综合征、宿醉、流感、传染性单核细胞增多症、镁缺乏、汞中毒、偏头痛、狂犬病以及II型酪氨酸血症(也被称为“里奇纳-汉哈特综合征”)。另外，已知在抑郁症、双相情感障碍以及广场恐怖症中畏光程度升高。
[0090]“偏头痛(migraine) ”来自希腊词hemi (意指一半)和kranion (意指颉骨),它是一种特征为中度至重度头痛以及恶心的令人衰弱的病状。其在女性中比男性中更常见约三倍。典型的偏头痛为单侧的(影响头的一半)并且本质上脉动并持续4至72小时；症状包括恶心、呕吐、畏光(对光的敏感性增加)、畏声(对声音的敏感性增加);所述症状一般通过日常活动加重。大约三分之一的罹患偏头痛的人感知到先兆:作为偏头痛将很快发生的征象的不寻常的视觉、嗅觉或其他感官体验。偏头痛的初始治疗典型地是利用用于头痛的止痛剂、用于恶心的止吐剂以及避免触发病状。关于双胞胎的研究指示对于其患上偏头痛的倾向存在60%至65%的遗传影响。此外，波动的激素水平指示偏头痛关联:75%的成年患者为女性，但偏头痛影响到大约相等数目的青春期前男孩和女孩；已知偏头痛倾向在妊娠期间消失，但在一些妇女中在妊娠期间偏头痛可能变得更频繁。
[0091]本文的“有效治疗或预防畏光”是指在有需要的受试者、例如具有活跃性偏头痛发作或丛集性头痛的受试者或易患上偏头痛或丛集性头痛或本文鉴定的其他畏光相关病症中的一者的受试者中，在施用有效量的根据本发明的CGRP/CGRP受体抑制剂多肽、例如根据本发明的抗CGRP抗体或抗体片段之后，抑制厌光行为或畏光或抑制厌光行为或畏光的发作。可以单一疗法或联合另一种活性剂如例如托吡酯(Topirimate)或双氢麦角胺(dihydroergotamine)来实现治疗。
[0092]交配感受态酵母物种:在本发明中，意欲广泛地涵盖可以在培养物中生长的任何二倍体或四倍体酵母。此类酵母物种可以单倍体、二倍体或其他多倍体形式存在。给定倍性的细胞可在适当条件下以所述形式增殖无限代数。二倍体细胞也可以孢子化以形成单倍体细胞。连续交配可通过二倍体菌株的进一步交配或融合而产生四倍体菌株。本发明涵盖单倍体酵母以及例如通过交配或原生质球融合而产生的二倍体或其他多倍体酵母细胞的用途。
[0093]在本发明的一个实施方案中，交配感受态酵母为酵母科(Saccharomycetaceae)成员，其包括阿斯霉属(Arxiozyma) ;Ascobotryozyma ;固囊酵母属(Citeromyces);德巴利酵母属(Debaryomyces);德克酵母属(Dekkera);假囊酵母属(Eremothecium);伊萨酵母属(Issatchenkia);哈萨克酵母属(Kazachstania);克鲁维酵母属(Kluyveromyces)；柯达酵母属(Kodamaea);娄德酵母属(Lodderomyces);管囊酵母属(Pachysolen);毕赤酵母属(Pichia);酵母属(Saccharomyces) ；Saturnispora ；Tetrapisispora ;有抱圆酵母属(Torulaspora);拟威尔酵母属(Williopsis);以及接合酵母属(Zygosaccharomyces)。潜在地可用于本发明中的其他类型的酵母包括子囊菌酵母属(Yairowia);红冬孢酵母属(Rhodosporidium);假丝酵母属(Candida);汉逊酵母属(Hansenula);线黑粉酵母属(Filobasium);锁掷酵母属(Sporidiobolus);布勒掷孢酵母属(Bullera);白冬孢酵母属(Leucosporidium)以及线黑粉菌属(Filobasidella)。
[0094]在本发明的一个优选实施方案中，交配感受态酵母是毕赤酵母属成员。在本发明的另一个优选实施方案中，毕赤酵母属的交配感受态酵母是以下物种之一:巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)以及多形汉逊酵母(Hansenula poIymorpha)(安格斯毕赤酵母(Pichia angusta))。在本发明的一个特别优选实施方案中，毕赤酵母属的交配感受态酵母为物种巴斯德毕赤酵母。
[0095]单倍体酵母细胞:具有其正常基因组(染色体组)补体的各基因的单拷贝的细胞。
[0096]多倍体酵母细胞:具有其正常基因组(染色体组)补体的多于一个拷贝的细胞。
[0097]二倍 体酵母细胞:具有其正常基因组补体的基本上每个基因的两个拷贝(等位基因)的细胞，其典型地通过两个单倍体细胞融合(交配)的方法而形成。
[0098]四倍体酵母细胞:具有其正常基因组补体的基本上每个基因的四个拷贝(等位基因)的细胞，其典型地通过两个单倍体细胞融合(交配)的方法而形成。四倍体可携带两个、三个、四个或更多个不同的表达盒。此类四倍体可在酿酒酵母(s.cerevisiae)中通过选择性交配纯合基因的异宗配合a/a和α/α 二倍体而获得以及在毕赤酵母中通过单倍体的连续交配以获得营养缺陷型二倍体而获得。例如，[met his]单倍体可以与[ade his]单倍体交配来获得二倍体[his];并且[met arg]单倍体可以与[ade arg]单倍体交配来获得二倍体[arg];然后二倍体[his] X 二倍体[arg]来获得四倍体原养型微生物。本领域技术人员应理解，提及二倍体细胞的益处和用途还可适用于四倍体细胞。
[0099]酵母交配:通过两个单倍体酵母细胞天然地融合以形成一个二倍体酵母细胞的方法。
[0100]减数分裂:通过二倍体酵母细胞经受减少性的分裂以形成四个单倍体孢子产物的方法。每一孢子然后可发芽并形成单倍体植物性生长细胞系。
[0101]可选择标记物:可选择标记物为对例如通过转化事件接收该基因的细胞赋予生长表型(物理生长特征)的基因或基因片段。可选择标记物允许该细胞在选择性生长培养基中在不接收该可选择标记基因的细胞不能生长的条件下存活和生长。可选择标记基因通常属于几种类型，包括阳性可选择标记基因，例如赋予细胞对于抗生素或其他药物的抗性、当杂交两个温度敏感性(“ts”)突变体或转化ts突变体时赋予温度抗性的基因；阴性可选择标记基因，例如赋予细胞以在不含特定营养物的培养基中生长的能力的生物合成基因，而不具有该生物合成基因的所有细胞都需要这种营养物；或赋予细胞以不能利用不具有野生型基因的细胞而生长的诱变型生物合成基因；等。合适的标记物包括但不限于:ZE0 ；G418 ；LYS3 ；MET1 ；ME T3a ；ADE1 ；ADE3 ；URA3 ;等。
[0102]表达载体:这些DNA载体包含便于外来蛋白质在目标宿主细胞内的表达操作的元件。方便起见，序列的操作和用于转化的DNA的产生首先在细胞宿主、例如大肠杆菌(E.coli)中进行，并且通常载体将包括便于此类操作的序列，包括细菌复制起点和适当的细菌选择标记物。选择标记物对在选择性培养基中生长的转化宿主细胞的存活或生长而言必需的蛋白质进行编码。未用包含选择基因的载体转化的宿主细胞将不在该培养基中存活。典型的选择基因编码具有以下功能的蛋白质:(a)赋予对于抗生素或其他毒素的抗性，(b)补充营养缺陷型缺陷，或(c)供应不能从复合培养基中获得的关键营养物。用于转化酵母的不例性载体和方法描述于例如Burke, D., Dawson, D.和Stearns, T.(2000).Methodsin yeast genetics: a Cold Spring Harbor Laboratory course manual.Plainview, N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press 中。
[0103]用于本发明的方法中的表达载体将进一步包括酵母特异性序列，其包括可选择营养缺陷型或药物标记物以用于鉴定转化的酵母菌株。药物标记物此外可用于在酵母宿主细胞中扩增载体的拷贝数。
[0104]所关注的编码多肽的序列可操作地连接至转录和翻译调控序列，所述调控序列提供多肽在酵母细胞中的表达。这些载体成分可包括但不限于下列一种或多种:增强子元件、启动子以及转录终止序列。还可以包括用于分泌多肽的序列，例如信号序列等。酵母复制起点为任选的，因为表达载体通常整合到酵母基因组中。在本发明的一个实施方案中，所关注的多肽可操作地连接或融合至提供多肽从酵母二倍体细胞中优化分泌的序列。
[0105]当核酸与另一核酸序列发生功能关系时为“可操作地连接”。例如，如果信号序列的DNA以参与多肽分泌的前蛋白形式表达，则其与多肽的DNA可操作地连接；如果启动子或增强子影响序列的转录，则其与编码序列可操作地连接。通常，“可操作地连接”意味着所连接的DNA序列为相邻的，并且，在分泌前导序列的情况下，为相邻的并且在阅读框中。然而，增强子不必需是相邻的。连接可以通过在适宜的限制性位点接合或可选地通过本领域技术人员熟悉的PCR/重组方法来实现(GatewayK Technology; Invitrogen, CarlsbadCalifornia)。如果此类位点不存在，则根据常规实践使用合成的寡核苷酸适配子或连接子。
[0106]启动子为位于结构基因(通常在约100至1000bp内)的起始密码子的上游(5’)的非翻译序列，其控制与其可操作地连接的特定核酸序列的转录和翻译。此类启动子属于几类:诱导型、组成型以及阻抑型启动子(其应答于阻遏子的缺失而增加转录水平)。诱导型启动子可应答于培养条件的某些变化，例如营养物的存在或不存在或者温度变化，而引发来自它们控制下的DNA的转录水平的增加。
[0107]酵母启动子片段还可用作用于同源重组和将表达载体整合到酵母基因组中的相同位点的位点；可选地，可选择标记物用作用于同源重组的位点。毕赤酵母属转化描述于Cregg 等人(1985)Mol.Cell.Biol.5:3376-3385 中。
[0108]来自毕赤酵母属的合适启动子的例子包括AOXl和启动子(Cregg等人(1989)1^Cell.Biol.9:1316~1323):ICL1 启动子(Menendez 等人(2003) Yeast20 (13):1097-108):甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(GAP) (Waterham 等人(1997)Genel86 (I):37-44);以及 FLDl启动子(Shen等人(1998)Gene216(l):93_102)。GAP启动子为强组成型启动子并且AOX和FLDl启动子为诱导型。
[0109]其他酵母启动子包括ADHl、醇脱氢酶I1、GAL4、PH03、PH05、Pyk以及从其衍生的嵌合启动子。另外，非酵母启动子可用于本发明中，例如哺乳动物、昆虫、植物、爬行动物、两栖动物、病毒以及鸟类启动子。最典型地该启动子将包括哺乳动物启动子(可能对所表达的基因来说是内源性的)或将包括 在酵母系统中提供有效转录的酵母或病毒启动子。
[0110]所关注的多肽不仅可以直接重组地产生，而且可以作为与异源多肽、例如信号序列或在成熟蛋白或多肽的N端具有特定裂解位点的其他多肽的融合多肽形式产生。一般来说，信号序列可为载体的成分，或其可为插入载体中的多肽编码序列的一部分。优选的异源信号序列为通过宿主细胞内可获得的标准途径之一识别并加工的异源信号序列。酿酒酵母α因子前原信号已经证明在各种来自巴斯德毕赤酵母的重组蛋白的分泌中有效。其他酵母信号序列包括α交配因子信号序列、转化酶信号序列以及衍生自其他分泌的酵母多肽的信号序列。另外，这些信号肽序列可以被工程改造以提供在二倍体酵母表达系统中的增强的分泌。所关注的其他分泌信号还包括哺乳动物信号序列，其可能与所分泌的蛋白质是异源的，或可能为所分泌的蛋白质的天然序列。信号序列包括前肽序列，并且在一些情况下可包括原肽序列。许多此类信号序列在本领域是已知的，包括在免疫球蛋白链中发现的信号序列，例如Κ28前原毒素序列、PHA-E, FACE、人类MCP-1、人类血清白蛋白信号序列、人类Ig重链、人类Ig轻链等。例如参见Hashimoto等人Protein Engll (2) 75 (1998);以及Kobayashi 等人 Therapeutic Apheresis2 (4) 257 (1998)。
[0111]转录可以通过将转录激活子序列插入载体来增强。这些激活子是DNA的顺式作用元件，通常约10至300bp，其作用在启动子上以增强其转录。转录增强子相对独立地定位和定向，已经发现于转录单元的5’和3’、在内含子内以及在编码序列本身内。增强子可以在编码序列的5’或3’位置剪接至表达载体中，但是优选位于从启动子起的5’位点。
[0112]用于真核宿主细胞中的表达载体还可以包含对于转录终止和对于使mRNA稳定所需的序列。此类序列通常可从真核或病毒DNA或cDNA的非翻译区中翻译终止密码子的3’获得。这些区域包含转录为在mRNA的非翻译部分中的多腺苷酸化片段的核苷酸区段。
[0113]包含一种或多种以上所列成分的合适载体的构建使用标准接合技术或PCR/重组方法。分离的质粒或DNA片段以需要产生所需质粒的形式或通过重组方法被裂解、修改和再接合。为了分析以确认所构建质粒中的正确序列，使用接合混合物来转化宿主细胞，并且在适当时通过抗生素抗性(例如氨苄青霉素或博莱霉素(Zeocin))来选择成功的转化株。制备来自转化株的质粒，通过限制性核酸内切酶消化进行分析和/或测序。
[0114]作为片段的限制和接合的替代方案，可使用基于att位点和重组酶的重组方法来将DNA序列插入载体中。此类方法由例如Landy (1989) Ann.Rev.Biochem.58:913-949描述；并且为本领域技术人员已知。此类方法利用分子间DNA重组，其由λ和大肠杆菌编码的重组蛋白的混合物介导。重组出现在相互作用DNA分子上的特异性附着(att)位点之间。对于 att 位点的描述，参见Weisberg和 Landy (1983) Site-Specific Recombination inPhage Lambda, in Lambda II，Weisberg编(Cold Spring Harbor, NY:Cold Spring HarborPress),第211-250页。使侧接重组位点的DNA区段交换，以使得重组后，att位点为由各亲本载体贡献的序列所构成的杂交序列。重组可以在任何拓扑学的DNA之间发生。
[0115]可以通过以下步骤将att位点引入所关注的序列中:将所关注的序列接合入适当的载体；通过使用特定的引物产生包含att B位点的PCR产物；产生克隆入包含att位点的适当载体中的cDNA文库；等等。
[0116]如本文所用的折叠是指多肽和蛋白质的三维结构，其中氨基酸残基之间的相互作用用于稳定该结构。尽管非共价相互作用在确定结构上是重要的，但所关注的蛋白质通常将具有由两个半胱氨酸残基形`成的分子内和/或分子间共价二硫键。对于天然存在的蛋白质和多肽或其衍生物和变体，适当的折叠典型地为导致最佳生物活性的排列，并且可以方便地通过活性测定法、例如配体结合、酶促活性等来监测。
[0117]在一些情况下，例如其中所需产品是合成来源时，基于生物活性的测定法将较无意义。此类分子的正确折叠可基于物理性质、能量考虑、建模研究等确定。
[0118]表达宿主可通过引入编码一种或多种酶的序列来进一步修饰，所述一种或多种酶将增强折叠和二硫键形成，即折叠酶、伴侣蛋白等。此类序列可使用本领域已知的载体、标记物等在酵母宿主细胞中组成性或诱导性地表达。优选地包括足以用于所需表达模式的转录调控元件的序列，通过靶向方法稳定地整合入酵母基因组。
[0119]例如，真核PDI不仅是蛋白质半胱氨酸氧化和二硫键异构化的有效催化剂，而且展现伴侣蛋白活性。PDI的共同表达可以促进具有多个二硫键的活性蛋白的产生。此外所关注的是BIP (免疫球蛋白重链结合蛋白)、亲环素(cyclophilin)等的表达。在本发明的一个实施方案中，每一单倍体亲本菌株表达不同的折叠酶，例如一个菌株可以表达BIP，而另一菌株可以表达PDI或其组合。
[0120]术语“所需蛋白”或“所需抗体”可互换使用并且通常指对标靶具有特异性的亲本抗体，即如本文所述的CGRP或CGRP受体或者衍生自其的嵌合或人源化抗体或者其结合部分。术语“抗体”意欲包括具有适合并识别表位的特定形状的任何包含多肽链的分子结构，其中一种或多种非共价结合相互作用使分子结构和表位之间的复合物稳定化。原型抗体分子为免疫球蛋白，并且认为来自所有来源、例如人类、啮齿动物、兔、牛、绵羊、猪、狗、其他哺乳动物、鸡、其他鸟类等的所有类型的免疫球蛋白IgG、IgM、IgA、IgE、IgD等为“抗体”。用于产生用作根据本发明的起始物质的抗体的优选来源为兔。已经描述了许多抗体编码序列；以及其他可通过本领域众所周知的方法产生。其例子包括嵌合抗体、人类抗体以及其他非人类哺乳动物抗体、人源化抗体、单链抗体(例如scFv)、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR (源自鲨鱼的单链抗体)、小模块免疫药物(SMIP)，以及抗体片段如 Fab、Fab，、F(ab，)2 等。参见 Streltsov VA 等人，Structure of a shark IgNARantibody variable domain and modeling of an early-developmental isotype, ProteinSc1.2005 年 11 月；14(11):2901-9.电子版 2005 年 9 月 30 日；Greenberg AS 等人，Anew antigen receptor gene family that undergoes rearrangement and extensivesomatic diversification in sharks, Nature.1995 年 3 月 9 日；374(6518):168-73 ;Nuttall SD等人，Isolation of the new antigen receptor from wobbegong sharks, anduse as a scaffold for the display of protein loop libraries, Mol Tmmunol.2001年 8 月；38(4): 313-26 ;Hamers-Casterman C 等人，Naturally occurring antibodiesdevoid of light chains, Nature.1993 年 6 月 3 日；363(6428):446-8 ;Gill DS 等人，Biopharmaceutical drug discovery using novel protein scaffolds, Curr OpinBiotechnol.2006 年 12 月;17 (6): 653-8.电子版 2006 年 10 月 19 日。
[0121]例如，抗体或抗原结合片段可以通过基因工程产生。在这种技术中，如其他方法一样，抗体产生细胞对所需抗原或免疫原敏感。从抗体产生细胞分离的信使RNA用作模板以使用PCR扩增制备cDNA。各自包含保持初始抗原特异性的一个重链基因和一个轻链基因的载体的文库通过将扩增的免疫球蛋白cDNA的适当部分插入表达载体中而产生。通过将重链基因文库与轻链基因文库组合来构建组合文库。这产生了共同表达重链和轻链(类似于抗体分子的Fab片段或抗原结合片段)的克隆的文库。将携带这些基因的载体共同转染入宿主细胞。当在转染的宿主中诱导抗体基因合成时，重链和轻链蛋白自组装以产生活性抗体，所述活性抗体可以通过用抗原或免疫原筛选来检测。
[0122]所关注的抗体编码序列包括被以下编码的那些:天然序列，以及借助于基因编码的简并性而在序列上与所公开核酸不相同的核酸，和其变体。变体多肽可以包括氨基酸(aa)取代、添加或缺失。氨基酸取代可以为保守性氨基酸取代或为消除非必需氨基酸的取代，例如以改变糖基化位点，或通过取代或缺失一个或多个对于功能不必需的半胱氨酸残基而使错误折叠最小化。变体可以设计成保持或具有蛋白质特定区域(例如，功能域、催化性氨基酸残基等)的增强的生物活性。变体还包括本文公开的多肽的片段，特别是生物学活性片段和/或对应于功能域的片段。用于克隆基因的体外诱变技术是已知的。本发明中还包括这样的多肽，其已经使用普通分子生物技术修饰以改进其对蛋白水解降解的抗性或以优化溶解度性质或以使其更适合作为治疗剂。 [0123]嵌合抗体可以利用重组手段通过将获自一个物种的抗体产生细胞的可变轻链区和可变重链区('和Vh)与来自另一物种的恒定轻链区和恒定重链区组合而制得。典型地嵌合抗体利用啮齿 动物或兔可变区和人类恒定区，以产生具有主要人类结构域的抗体。此类嵌合抗体的产生在本领域是众所周知的，并且可利用标准手段实现(如例如美国专利N0.5，624，659中所述，该专利以全文引用的方式并入本文中)。此外涵盖本发明的嵌合抗体的人类恒定区可选自IgGl、IgG2、IgG3和IgG4恒定区。
[0124]人源化抗体被工程改造以包含甚至更多类人免疫球蛋白结构域，并且只并入动物源抗体的互补决定区。这通过仔细地检查单克隆抗体的可变区的高变环的序列并且使它们适合人类抗体链的结构来实现。尽管表面上复杂，但实际上该过程是简单的。参见例如美国专利N0.6，187，287，其以引用的方式完全并入本文中。
[0125]除了完整免疫球蛋白(或其重组对应物)之外，还可合成包括表位结合位点的免疫球蛋白片段(例如，Fab’、F(ab’)2或其他片段)。可利用重组免疫球蛋白技术来设计“片段”或最小免疫球蛋白。例如，用于本发明的“Fv”免疫球蛋白可以通过合成融合的可变轻链区和可变重链区而产生。抗体的组合也令人关注，例如双功能抗体，其包括两种不同的Fv特异性。在本发明的另一个实施方案中，免疫球蛋白片段涵盖SMIP (小分子免疫药物)、骆驼抗体、纳米抗体以及IgNAR。
[0126]免疫球蛋白和其片段可以被翻译后修饰，例如添加效应子部分如化学连接子、可检测部分如荧光染料、酶、毒素、底物、生物发光材料、放射性材料、化学发光部分等，或特异性结合部分如链霉亲和素(streptavidin)、亲和素(avidin)或生物素等可用于本发明的方法和组合物中。另外的效应子分子的例子在下文提供。
[0127]如果按照遗传密码翻译多核苷酸序列产生多肽序列，则该多核苷酸序列与该多肽序列相“对应”(即，该多核苷酸序列“编码”该多肽序列);如果两个序列编码相同的多肽序列，则一个多核苷酸序列与另一个多核苷酸序列相“对应”。
[0128]DNA构建体的“异源”区或结构域为较大DNA分子内可鉴定的DNA区段，其在自然界中未发现与该较大分子相连。因此，当异源区编码哺乳动物基因时，该基因将通常通过在来源有机体的基因组中不侧接哺乳动物基因组DNA的DNA所侧接。异源区的另一个例子为其中编码序列本身未在自然界中发现的构建体(例如，其中基因组编码序列包含内含子的cDNA，或具有不同于天然基因的密码子的合成序列)。等位变异或天然存在的突变事件不产生如本文定义的DNA的异源区。
[0129]“编码序列”为密码子的同框序列，其(考虑到遗传密码)对应于或编码蛋白质或肽序列。如果序列或其互补序列编码相同的氨基酸序列，则两个编码序列彼此相一致。与适当的调控序列相连的编码序列可被转录和翻译成多肽。多腺苷酸化信号和转录终止序列将通常位于编码序列的3’。“启动子序列”为能够结合细胞中的RNA聚合酶并且启动下游(3’方向)编码序列的转录的DNA调控区域。启动子序列典型地包含用于结合影响编码序列的转录的调控分子(例如，转录因子)的另外的位点。当RNA聚合酶结合细胞中的启动子序列并且将编码序列转录成mRNA，该mRNA然后又翻译成由编码序列编码的蛋白质时，编码序列在启动子序列的“控制下”或“可操作地连接”至启动子。
[0130]使用载体将外来物质如DNA、RNA或蛋白质引入有机体或宿主细胞中。典型的载体包括重组病毒(用于多核苷酸)和脂质体(用于多肽)。“DNA载体”为复制子如质粒、噬菌体或粘粒，另一个多核苷酸区段可连接至其以引起所连接区段的复制。“表达载体”为DNA载体，其包含将通过适当的宿主细胞引导多肽合成的调控序列。这通常意味着结合RNA聚合酶并启动mRNA的转录的启动子，以及核糖体结合位点和引导mRNA翻译成多肽的起始信号。在适当的位点处和在正确的阅读框中将多核苷酸序列并入表达载体中，然后通过载体转化适当的宿主细胞，能够产生由所述多核苷酸序列编码的多肽。
[0131]多核苷酸序列的“扩增”为体外产生特定核酸序列的多个拷贝。扩增序列通常为DNA形式。用于进行此类扩增的各种技术描述于VanBrunt的综述文章(1990，Bio/Technol.，8 (4):291-294)中。聚合酶链反应或PCR为核酸扩增的原型，并且本文的PCR的使用应该被认为是其他合适扩增技术的示例。
[0132]现在已充分理解脊椎动物中抗体的一般结构(Ede lman, G.M., Ann.N.Y.Acad.Sc1.，190:5(1971))。抗体由分子量约23，000道尔顿的两条相同的轻多肽链(“轻链”)和分子量53，000-70, 000的两条相同的重链(“重链”)组成。四条链通过二硫键以“Y”形构型结合，其中轻链在“Y”形构型的口处括住重链。“Y”形构型的“分枝”部分称为Fab区域；“Y”形构型的茎部分称为Fe区域。氨基酸序列定向是从“Y”形构型顶部的N末端至各链底部的C末端。N末端拥有对引发其的抗原具有特异性的可变区，并且长度约100个氨基酸，在轻链和重链之间以及在不同抗体之间存在轻微的变化。
[0133]在各链中可变区连接至恒定区，该恒定区延伸链的剩余长度并且在特定种类的抗体内不随抗体的特异性(即，引发其的抗原)而变化。存在五种已知的主要种类的恒定区，其确定免疫球蛋白分子的种类(对应于Y、U、α、δ以及ε重链恒定区的IgG、IgM、IgA、IgD以及IgE)。恒定区或种类决定抗体的后续效应子功能，包括补体的激活(Kabat, E.A.，Structural Concepts in Immunology and Immunochemistry,第 2版，第 413-436 页，Holt, Rinehart, Winston (1976)),和其他细胞应答(Andrews, Ο-ν?等人 ,Clinical Immunobiology,第 1-18 页，W.B.Sanders (1980) ；Kohl, S.等人，Immunology， 48:187(1983));而可变区决定将与其反应的抗原。轻链被分类为K (kappa)或λ (lambda)。各重链种类可以用κ或λ轻链制备。当通过杂交瘤或通过B细胞产生免疫球蛋白时，轻链和重链彼此共价地键合，并且两个重链的“尾”部分通过共价二硫键彼此键合。
[0134]表述“可变区”或“VR”是指在抗体中各轻链和重链对内的结构域，其直接参与抗体与抗原的结合。各重链在一端具有可变域(Vh)，接着为多个恒定域。各轻链在一端具有可变域并且在另一端具有恒定域；轻链的恒定域与重链的第一个恒定域对齐，并且轻链可变域与重链的可变域对齐。
[0135]表述“互补决定区”、“高变区”或“CDR”是指在抗体的轻链或重链的可变区中存在的一个或多个高变区或互补决定区(⑶R)(参见Kabat, Ε.Α.等人，Sequences of Proteinsof Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md.，(1987)X这些表述包括如由 Kabat 等人(“Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest, ” Kabat E.等人，US Dept, of Health and Human Services, 1983)定义的高变区或在抗体的三维结构中的高变环(Chothia和Lesk，J Mol.Biol.196901-917(1987))。在各链中的CDR由框架区保持紧密接近，并且与其他链的CDR —起形成抗原结合位点。在CDR内存在选定的氨基酸，其已经描述为代表在抗体-抗原相互作用中CDR所用的关键接触残基的选择性决定区(SDR) (Kashmiri, S., Methods, 36:25-34 (2005))。
[0136]表述“框架区”或“FR”是指抗体的轻链和重链的可变区内的一个或多个框架区(参见 Kabat, E.A.等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest, NationalInstitutes of Health, Bethesda, Md., (1987) )?这些表述包括置于抗体的轻链和重链的可变区内的CDR之间的那些氨基酸序列区域。
[0137]对CGRP具有结合活性的抗CGRP抗体和其结合片段
[0138]杭体Abl
[0139]本发明广泛地涵盖通过施用能够有效治疗或预防畏光的有效量的CGRP/CGRP受体抑制剂多肽、例如抗CGRP或抗CGRP受体抗体或其片段或CGRP或CGRP受体的片段在有需要的受试者、例如偏头痛患者或另一种畏光相关病症患者中抑制或预防畏光。这可例如使用适当的体内模型如实施例8中公开的转基因小鼠模型来测定。
[0140]在一个示例性实施方案中，本发明包括对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的源自Abl的嵌合抗体:QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCLGSYDCSS⑶CFVFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:1)。
[0141]本发明还包括对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的嵌合抗体:QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCLGSYDCSS⑶CFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:2)。
[0142]本发明进一步 包括对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的嵌合抗体:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRASSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIffGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:3)。
[0143]本发明还包括对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的嵌合抗体:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRASSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDffLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ IDNO:4)。
[0144]本发明进一步涵盖抗体，其包含对应于SEQ ID NO:1的可变轻链序列或SEQ IDNO: 2的轻链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6以及SEQ IDNO:7的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQ ID NO:3的可变重链序列或SEQ IDN0:4的重链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9以及SEQ IDNO: 10的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成:一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
[0145]本发明还涵盖对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ ID NO:1或SEQ ID N0:2的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ ID NO:3 或 SEQ ID NO:4 的多肽序列。
[0146]在本发明的另一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID NO:1的可变轻链序列或SEQ ID N0:2的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:5,SEQ ID N0:6以及SEQ ID N0:7的多肽序列中的一种或多种。
[0147]在本发明的另一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID NO:3的可变重链序列或SEQ ID NO:4的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9以及SEQ ID N0:10的多肽序列中的一种或多种。
[0148]本发明还涵盖包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段:SEQ ID NO:1的可变轻链区；SEQ ID NO: 3的可变重链区；SEQ ID NO:1的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO: 5 ；SEQ ID N0:6;以及SEQ ID N0:7);以及SEQ ID NO: 3的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:8 ；SEQ ID NO:9 ；以及 SEQ ID NO: 10)。
[0149]在本发明的一个特别优选实施方案中，嵌合抗CGRP抗体为Abl，其包含SEQ IDNO: 2和SEQ ID NO:4或可选地由SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO:4组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
[0150]在本发明的另一个特别优选实施方案中，抗体片段包含以下或可选地由以下组成:对CGRP具有结合特异性的Fab (片段抗原结合)片段。关于抗体Abl，Fab片段包括SEQID NO:1的可变轻链序列和SEQ ID NO:3的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ ID N0:1和/或SEQ ID NO: 3的添加、缺失以及变体。
[0151]在本文(下文)所 述的本发明的一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的Fab片段可通过Abl的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Abl或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CH0、NS0或HEK293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0152]杭体Ab2
[0153]在一个实施方案中，本发明包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的人源化抗体:QVLTQSPSSLSASV⑶RVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSS⑶CFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:11)。
[0154]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的人源化抗体:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:12)。
[0155]本发明进一步包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的人源化抗体:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQffVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:13)。
[0156]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的人源化抗体:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:14)。
[0157]本发明进一步涵盖用于潜在治疗或预防畏光的抗体，其包含对应于SEQ ID NO: 11的可变轻链序列或SEQ ID N0:12的轻链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQ IDNO: 15, SEQ ID N0:16以及SEQ ID NO: 17的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQID NO: 13的可变重链序列或SEQ ID NO: 14的重链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQID NO: 18,SEQ ID NO: 19以及SEQ ID NO:20的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成:一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
[0158]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ IDN0:11或SEQ ID N0:12的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ ID NO: 13或SEQ ID NO: 14的多肽序列。
[0159]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:11的可变轻链序列或SEQ ID NO: 12的轻链序列`的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16以及SEQ ID NO: 17的多肽序列中的一种或多种。
[0160]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID NO: 13的可变重链序列或SEQ ID NO: 14的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19以及SEQ ID N0:20的多肽序列中的一种或多种。
[0161]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段:SEQ ID NO: 11的可变轻链区；SEQ ID NO: 13的可变重链区；SEQ ID NO: 11的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO: 15 ；SEQ ID NO:16;以及 SEQ ID NO: 17);以及 SEQ ID NO: 13 的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO: 18 ；SEQ ID NO: 19;以及 SEQ ID NO: 20)。
[0162]在本发明的一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的人源化抗CGRP抗体为Ab2，其包含SEQ ID NO: 12和SEQ ID NO: 14或可选地由SEQ ID NO: 12和SEQ IDNO: 14组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
[0163]在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:对CGRP具有结合特异性的Fab (片段抗原结合)片段。关于抗体Ab2，Fab片段包括SEQ ID NO: 11的可变轻链序列和SEQ ID NO: 13的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ IDNO: 11和/或SEQ ID NO: 13的添加、缺失以及变体。
[0164]在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的Fab片段可通过Ab2的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab2或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CH0、NS0或HEK293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0165]杭体 Ab3
[0166]在一个优选的实施方案中，本发明包括对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的人源化抗体。如实施例8中所公开，这种抗体已经在转基因小鼠厌光行为模型中显示可有效地抑制CGRP相关畏光: [0167]VLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSS⑶CFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:21)。
[0168]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的人源化抗体:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:22)。
[0169]本发明进一步包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的人源化抗体:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQffVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:23)。
[0170]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的人源化抗体:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:24)。
[0171]本发明进一步涵盖用于潜在治疗或预防畏光的抗体，其包含对应于SEQ ID N0:21的可变轻链序列或SEQ ID N0:22的轻链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQ IDNO:25, SEQ ID N0:26以及SEQ ID N0:27的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQID NO: 23的可变重链序列或SEQ ID NO: 24的重链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQID NO:28,SEQ ID NO:29以及SEQ ID NO:30的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成:一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
[0172]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ IDN0:21或SEQ ID N0:22的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ ID N0:23或SEQ ID N0:24的多肽序列。
[0173]在本发明的另一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID NO:21的可变轻链序列或SEQ ID N0:22的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26以及SEQ ID N0:27的多肽序列中的一种或多种。[0174]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:23的可变重链序列或SEQ ID NO: 24的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:28, SEQ ID NO: 29以及SEQ ID N0:30的多肽序列中的一种或多种。
[0175]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段:SEQ ID N0:21的可变轻链区；SEQ ID NO:23的可变重链区；SEQ ID NO:21的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO: 25;SEQ ID NO: 26;以及 SEQ ID NO: 27);以及 SEQ ID NO: 23 的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:28 ；SEQ ID N0:29;以及 SEQ ID N0:30)。
[0176]在本发明的一个特别优选实施方案中，用于治疗或预防畏光的嵌合抗CGRP抗体为 Ab3，其包含 SEQ ID NO: 22 和 SEQ ID NO: 24 或可选地由 SEQ ID NO: 22 和 SEQ ID NO: 24组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
[0177]在本发明的另一个特别优选实施方案中，抗体片段包含以下或可选地由以下组成:对CGRP具有结合特异性的Fab (片段抗原结合)片段。关于抗体Ab3，Fab片段包括SEQID N0:21的可变轻链序列和SEQ ID NO:23的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ ID N0:21和/或SEQ ID NO:23的添加、缺失以及变体。
[0178]在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的Fab片段可通过Ab3的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab3或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CH0、NS0或HEK293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0179]杭体 Ab4
[0180]在一个实施方案中，本发明包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的嵌合抗体:QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:31)。
[0181]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的嵌合抗体:QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:32)。
[0182]本发明进一步包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的嵌合抗体:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWIGVIGINGATYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(SEQID NO:33)。
[0183]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的嵌合抗体:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWIGVIGINGATYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:34)。
[0184]本发明进一步涵盖用于潜在治疗或预防畏光的抗体，其包含对应于SEQ ID N0:31的可变轻链序列或SEQ ID N0:32的轻链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQ IDNO:35, SEQ ID N0:36以及SEQ ID N0:37的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQID NO: 33的可变重链序列或SEQ ID NO: 34的重链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQID NO:38,SEQ ID NO:39以及SEQ ID NO:40的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成:一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
[0185]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ IDN0:31或SEQ ID N0:32的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ ID N0:33或SEQ ID N0:34的多肽序列。
[0186]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:31的可变轻链序列或SEQ ID NO: 32的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36以及SEQ ID N0:37的多肽序列中的一种或多种。
[0187]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:33的可变重链序列或SEQ ID NO: 34的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39以及SEQ ID N0:40的多肽序列中的一种或多种。
[0188]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段:SEQ ID N0:31的可变轻链区；SEQ ID NO:33的可变重链区；SEQ ID NO:31的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:35 ；SEQ ID NO:36;以及 SEQ ID NO:37);以及 SEQ ID NO:33 的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:38 ；SEQ ID N0:39;以及 SEQ ID N0:40)。
[0189]在本发明的一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的人源化抗CGRP抗体为Ab4，其包含SEQ ID N0:32和SEQ ID NO:34或可选地由SEQ ID N0:32和SEQ IDNO: 34组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
[0190]在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:对CGRP具有结合特异性的Fab (片段抗原结合)片段。关于抗体Ab4，Fab片段包括SEQ ID N0:31的可变轻链序列和SEQ ID NO:33的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ IDNO:31和/或SEQ ID NO:33的添加、缺失以及变体。
[0191]在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的Fab片段可通过Ab4的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab4或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CH0、NS0或HEK293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0192]杭体Ab5
[0193]在一个实施方案中，本发明包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的人源化抗体:QVLTQSPSSLSASV⑶RVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID N 0:41)。
[0194]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的人源化抗体:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:42)。
[0195]本发明进一步包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的人源化抗体:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:43)。
[0196]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的人源化抗体:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:44)。
[0197]本发明进一步涵盖用于潜在治疗或预防畏光的抗体，其包含对应于SEQ ID NO:41的可变轻链序列或SEQ ID N0:42的轻链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQ IDNO:45, SEQ ID N0:46以及SEQ ID N0:47的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQID NO:43的可变重链序列或SEQ ID N0:44的重链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQID NO:48,SEQ ID NO:49以及SEQ ID NO:50的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成:一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。[0198]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ IDN0:41或SEQ ID NO:42的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ ID N0:43或SEQ ID NO:44的多肽序列。
[0199]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:41的可变轻链序列或SEQ ID N0:42的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:46以及SEQ ID N0:47的多肽序列中的一种或多种。
[0200]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:43的可变重链序列或SEQ ID N0:44的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:49以及SEQ ID N0:50的多肽序列中的一种或多种。
[0201]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段:SEQ ID NO:41的可变轻链区；SEQ ID N0:43的可变重链区；SEQ ID N0:41的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:45 ；SEQ ID N0:46;以及 SEQ ID N0:47);以及 SEQ ID NO:43 的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:48 ；SEQ ID N0:49;以及 SEQ ID N0:50)。
[0202]在本发明的一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的嵌合抗CGRP抗体为Ab5，其包含SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:44或可选地由SEQ ID NO:42和SEQ IDNO:44组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
[0203]在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:对CGRP具有结合特异性的Fab (片段抗原结合)片段。关于抗体Ab5，Fab片段包括SEQ ID NO:41的可变轻链序列和SEQ ID NO:43的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ IDNO:41和/或SEQ ID NO:43的添加、缺失以及变体。
[0204]在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的Fab片段可通过Ab5的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab5或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CH0、NS0或HEK293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0205]杭体 Ab6
[0206]在一个实施方案中，本发明包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的人源化抗体:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:51)。
[0207]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的人源化抗体:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:52)。
[0208]本发明进一步包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的人源化抗体:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:53)。
[0209]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的人源化抗体:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:54)。
[0210]本发明进一步涵盖用于潜在治疗或预防畏光的抗体，其包含对应于SEQ ID N0:51的可变轻链序列或SEQ ID N0:52的轻链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQ IDNO:55, SEQ ID N0:56以及SEQ ID N0:57的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQID NO: 53的可变重链序列或`SEQ ID NO: 54的重链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQID NO:58,SEQ ID NO:59以及SEQ ID NO:60的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成:一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
[0211]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ IDN0:51或SEQ ID N0:52的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ ID N0:53或SEQ ID N0:54的多肽序列。
[0212]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:51的可变轻链序列或SEQ ID NO: 52的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56以及SEQ ID N0:57的多肽序列中的一种或多种。
[0213]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:53的可变重链序列或SEQ ID NO: 54的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59以及SEQ ID N0:60的多肽序列中的一种或多种。
[0214]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段:SEQ ID N0:51的可变轻链区；SEQ ID NO:53的可变重链区；SEQ ID NO:51的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO: 55;SEQ ID NO: 56;以及 SEQ ID NO: 57);以及 SEQ ID NO: 53 的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO: 58 ；SEQ ID NO: 59 ;以及 SEQ ID NO:60)。
[0215]在本发明的一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的人源化抗CGRP抗体为Ab6，其包含SEQ ID NO:52和SEQ ID NO:54或可选地由SEQ ID NO:52和SEQ IDNO: 54组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
[0216]在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:对CGRP具有结合特异性的Fab (片段抗原结合)片段。关于抗体Ab6，用于潜在治疗或预防畏光的Fab片段包括SEQ ID NO: 51的可变轻链序列和SEQID NO: 53的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ ID NO: 51和/或SEQ ID NO: 53的添加、缺失以及变体。
[0217]在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的Fab片段可通过Ab6的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab6或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CH0、NS0或HEK293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0218]杭体Ab7
[0219]在一个实施方案中，本发明包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的嵌合抗体:QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSIODCFVFGGGTEVVVKR(SEQ ID N0:61)。
[0220]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的嵌合抗体:QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSTCDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:62)。
[0221]本发明进一步包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的嵌合抗体:QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWIGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCARGDIffGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:63)。
[0222]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的嵌合抗体:QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWIGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:64)。
[0223]本发明进一步涵盖用于潜在治疗或预防畏光的抗体，其包含对应于SEQ ID N0:61的可变轻链序列或SEQ ID N0:62的轻链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQ IDNO:65, SEQ ID N0:66以及SEQ ID N0:67的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQID NO:63的可变重链序列或SEQ ID N0:64的重链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQID NO:68,SEQ ID NO:69以及SEQ ID NO:70的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成:一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
[0224]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ ID N0:61或SEQ ID NO:62的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ ID N0:63或SEQ ID NO:64的多肽序列。
[0225]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:61的可变轻链序列或SEQ ID N0:62的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO:66以及SEQ ID N0:67的多肽序列中的一种或多种。
[0226]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或 可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:63的可变重链序列或SEQ ID N0:64的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69以及SEQ ID N0:70的多肽序列中的一种或多种。
[0227]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段:SEQ ID NO:61的可变轻链区；SEQ ID NO:63的可变重链区；SEQ ID NO:61的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:65 ；SEQ ID N0:66;以及SEQ ID N0:67);以及SEQ IDN0:63的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:68 ;SEQ ID N0:69;以及SEQ ID N0:70)。
[0228]在本发明的一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的嵌合抗CGRP抗体为Ab7，其包含SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:64或可选地由SEQ ID NO:62和SEQ IDNO:64组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
[0229]在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:对CGRP具有结合特异性的Fab (片段抗原结合)片段。关于抗体Ab7，Fab片段包括SEQ ID N0:61的可变轻链序列和SEQ ID NO:63的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ IDN0:61和/或SEQ ID NO:63的添加、缺失以及变体。[0230]在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的Fab片段可通过Ab7的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的抗CGRP抗体如Ab7或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CH0、NSO或HEK293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0231]杭体 Ab8
[0232]在一个实施方案中，本发明包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的人源化抗体:QVLTQSPSSLSASV⑶RVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSTCDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID N0:71)。
[0233]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的人源化抗体:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:72)。
[0234]本发明进一步包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的人源化抗体:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSNHYMQffVRQAPGKGLEWVGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:73)。 [0235]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的人源化抗体:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWVGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:74)。
[0236]本发明进一步涵盖用于潜在治疗或预防畏光的抗体，其包含对应于SEQ ID N0:71的可变轻链序列或SEQ ID N0:72的轻链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQ IDNO:75, SEQ ID N0:76以及SEQ ID N0:77的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQID NO: 73的可变重链序列或SEQ ID NO: 74的重链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQID NO:78,SEQ ID NO:79以及SEQ ID N0:80的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成:一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
[0237]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ IDN0:71或SEQ ID N0:72的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ ID N0:73或SEQ ID N0:74的多肽序列。
[0238]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:71的可变轻链序列或SEQ ID NO: 72的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76以及SEQ ID N0:77的多肽序列中的一种或多种。
[0239]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:73的可变重链序列或SEQ ID NO: 74的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79以及SEQ ID N0:80的多肽序列中的一种或多种。
[0240]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段:SEQ ID NO:71的可变轻链区；SEQ ID NO:73的可变重链区；SEQ ID NO:71的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:75 ；SEQ ID N0:76;以及SEQ ID N0:77);以及SEQ IDN0:73的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:78 ；SEQ ID N0:79;以及SEQ ID N0:80)。
[0241]在本发明的一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的人源化抗CGRP抗体为Ab8，其包含SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:74或可选地由SEQ ID NO:72和SEQ IDNO: 74组成，并且具有 至少一种本文所示的生物活性。
[0242]在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:对CGRP具有结合特异性的Fab (片段抗原结合)片段。关于抗体Ab8，Fab片段包括SEQ ID N0:71的可变轻链序列和SEQ ID NO:73的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ IDN0:71和/或SEQ ID NO:73的添加、缺失以及变体。
[0243]在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的Fab片段可通过Ab8的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Ab8或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CH0、NS0或HEK293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0244]杭体 Ab9
[0245]在一个实施方案中，本发明包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的嵌合抗体:QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFRGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVVVKR(SEQ ID N0:81)。
[0246]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的嵌合抗体:QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFRGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:82)。
[0247]本发明进一步包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的嵌合抗体:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIGLSSYYMQWVRQSPGRGLEffIGVIGSDGKTYYATffAKGRFTISKTSSTTVDLRMASLTTEDTATYFCTRGDIWGPGTLVTVSS(SEQID NO:83)。
[0248]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的嵌合抗体:QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIGLSSYYMQWVRQSPGRGLEWIGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISKTSSTTVDLRMASLTTEDTATYFCTRGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:84)。
[0249]本发明进一步涵盖用于潜在治疗或预防畏光的抗体，其包含对应于SEQ ID N0:81的可变轻链序列或SEQ ID N0:82的轻链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQ IDNO:85, SEQ ID N0:86以及SEQ ID NO:87的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQID NO:83的可变重链序列或SEQ ID N0:84的重链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQID NO:88,SEQ ID NO:89以及SEQ ID N0:90的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成:一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
[0250]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ IDN0:81或SEQ ID NO:82的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ ID N0:83或SEQ ID N0:84的多肽序列。
[0251]在本发明的另一个`实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID NO:81的可变轻链序列或SEQ ID NO:82的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:85, SEQ ID NO:86以及SEQ ID N0:87的多肽序列中的一种或多种。
[0252]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:83的可变重链序列或SEQ ID N0:84的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:88, SEQ ID NO:89以及SEQ ID N0:90的多肽序列中的一种或多种。
[0253]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段:SEQ ID NO:81的可变轻链区；SEQ ID NO:83的可变重链区；SEQ ID NO:81的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:85 ；SEQ ID N0:86;以及SEQ ID N0:87);以及SEQ IDN0:83的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:88 ;SEQ ID N0:89;以及SEQ ID N0:90)。
[0254]在本发明的一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的嵌合抗CGRP抗体为Ab9，其包含SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:84或可选地由SEQ ID NO:82和SEQ IDNO:84组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
[0255]在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:对CGRP具有结合特异性的Fab (片段抗原结合)片段。关于抗体Ab9，Fab片段包括SEQ ID N0:81的可变轻链序列和SEQ ID NO:83的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ IDNO:81和/或SEQ ID NO:83的添加、缺失以及变体。
[0256]在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的Fab片段可通过Ab9的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的抗CGRP抗体如Ab9或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CH0、NSO或HEK293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。 [0257]杭体 AblO
[0258]在一个实施方案中，本发明包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的人源化抗体:QVLTQSPSSLSASV⑶RVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID N0:91)。
[0259]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的人源化抗体:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:92)。
[0260]本发明进一步包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的人源化抗体:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQffVRQAPGKGLEffVGVIGSDGKTYYATffAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:93)。
[0261]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的人源化抗体:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:94)。
[0262]本发明进一步涵盖用于潜在治疗或预防畏光的抗体，其包含对应于SEQ ID N0:91的可变轻链序列或SEQ ID N0:92的轻链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQ IDNO:95, SEQ ID N0:96以及SEQ ID N0:97的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQID NO:93的可变重链序列或SEQ ID N0:94的重链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQID NO:98, SEQ ID NO:99以及SEQ ID NO: 100的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成:一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
[0263]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ IDN0:91或SEQ ID NO:92的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ ID N0:93或SEQ ID N0:94的多肽序列。
[0264]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:91的可变轻链序列或SEQ ID N0:92的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:96以及SEQ ID N0:97的多肽序列中的一种或多种。
[0265]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:93的可变重链序列或SEQ ID N0:94的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO:98, SEQ ID NO:99以及SEQ ID NO: 100的多肽序列中的一种或多种。
[0266]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段:SEQ ID N0:91的可变轻链区；SEQ ID N0:93的可变重链区；SEQ ID N0:91的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO:95 ；SEQ ID N0:96;以及 SEQ ID N0:97);以及 SEQ ID NO:93 的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO:98 ；SEQ ID N0:99;以及 SEQ ID NO: 100)。
[0267]在本发明的一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的人源化抗CGRP抗体为 Ab 10，其包含 SEQ ID NO:92 和 SEQ ID NO:94 或可选地由 SEQ ID NO:92 和 SEQ IDNO:94组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
[0268]在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:对CGRP具有结合特异性的Fab (片段抗原结合)片段。关于抗体Ab 10，Fab片段包括SEQ ID NO:91的可变轻链序列和SEQ ID NO:93的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ IDN0:91和/或SEQ ID N0:93的添加、缺失以及变体。
[0269]在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的Fab片段可通过AblO的 酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如AblO或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0270]杭体 Abll
[0271]在一个实施方案中，本发明包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的嵌合抗体:QVLTQTASPVSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVVVKR(SEQ ID NO:101)。
[0272]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的嵌合抗体:QVLTQTASPVSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:102)。
[0273]本发明进一步包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的嵌合抗体:QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(SEQID NO:103)。 [0274]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的嵌合抗体:QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:104)。
[0275]本发明进一步涵盖用于潜在治疗或预防畏光的抗体，其包含对应于SEQ IDNO: 101的可变轻链序列或SEQ ID NO: 102的轻链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQID NO: 105, SEQ ID NO: 106以及SEQ ID NO: 107的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQID NO: 103的可变重链序列或SEQ ID NO: 104的重链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQ ID NO: 108,SEQ ID NO: 109以及SEQID NO: 110的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成:一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
[0276]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ IDN0:101或SEQ ID N0:102的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ ID N0:103或SEQ ID N0:104的多肽序列。
[0277]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:101的可变轻链序列或SEQ ID NO: 102的轻链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQ ID NO: 105、SEQ IDNO: 106以及SEQ ID NO: 107的多肽序列中的一种或多种。
[0278]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:103的可变重链序列或SEQ ID NO: 104的重链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQ ID NO: 108、SEQ IDNO: 109以及SEQ ID NO: 110的多肽序列中的一种或多种。[0279]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段:SEQ ID N0:101的可变轻链区；SEQ ID NO: 103的可变重链区；SEQ ID NO: 101的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO: 105 ；SEQ ID NO: 106;以及 SEQ ID NO: 107);以及 SEQ ID NO: 103 的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO: 108 ；SEQ ID NO: 109;以及 SEQ ID NO: 110)。
[0280]在本发明的一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的嵌合抗CGRP抗体为 Abll，其包含 SEQ ID NO: 102 和 SEQ ID NO: 104 或可选地由 SEQ ID NO: 102 和 SEQID NO: 104组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
[0281]在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:对CGRP具有结合特异性的Fab (片段抗原结合)片段。关于抗体Abll，Fab片段包括SEQ ID NO: 101的可变轻链序列和SEQ ID NO: 103的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQID NO: 101和/或SEQ ID NO: 103的添加、缺失以及变体。
[0282]在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的Fab片段可通过Abll的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体如Abll或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CHO、NSO或HEK293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0283]杭体 Abl2
[0284]在一个实施方案 中，本发明包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的人源化抗体:QVLTQSPSSLSASV⑶RVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:111)。
[0285]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的人源化抗体:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:112)。
[0286]本发明进一步包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的人源化抗体:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDVTNYYMQffVRQAPGKGLEWVGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:113)。
[0287]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的人源化抗体:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:114)。
[0288]本发明进一步涵盖用于潜在治疗或预防畏光的抗体，其包含对应于SEQ IDNO: 111的可变轻链序列或SEQ ID NO: 112的轻链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQID NO: 115, SEQ ID NO: 116以及SEQ ID NO: 117的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQ ID NO: 113的可变重链序列或SEQ ID NO: 114的重链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQ ID NO: 118,SEQ ID NO: 119以及SEQ ID NO: 120的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成:一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
[0289]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ IDNO: 111或SEQ ID NO: 112的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ ID NO: 113或SEQ ID NO: 114的多肽序列。
[0290]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:111的可变轻链序列或SEQ ID NO: 112的轻链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO: 115、SEQ IDNO: 116以及SEQ ID N O: 117的多肽序列中的一种或多种。
[0291]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:113的可变重链序列或SEQ ID NO: 114的重链序列的互补决定区(CDR或高变区)的SEQ ID NO: 118、SEQ IDNO: 119以及SEQ ID NO: 120的多肽序列中的一种或多种。
[0292]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段:SEQ ID N0:111的可变轻链区；SEQ ID NO: 113的可变重链区；SEQ ID NO: 111的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO: 115 ；SEQ ID NO: 116;以及 SEQ ID NO: 117);以及 SEQ ID NO: 113 的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO: 118 ；SEQ ID NO:119;以及 SEQ ID NO: 120)。
[0293]在本发明的一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的人源化抗CGRP抗体为 Abl2，其包含 SEQ ID NO: 112 和 SEQ ID NO: 114 或可选地由 SEQ ID NO: 112 和 SEQID NO: 114组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
[0294]在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:对CGRP具有结合特异性的Fab (片段抗原结合)片段。关于抗体Abl2，Fab片段包括SEQ ID NO: 111的可变轻链序列和SEQ ID NO: 113的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQID NO: 111和/或SEQ ID NO: 113的添加、缺失以及变体。
[0295]在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的Fab片段可通过Abl2的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的抗CGRP抗体如Abl2或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CH0、NSO或HEK293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0296]杭体Abl3[0297]在一个实施方案中，本发明包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的嵌合抗体:AIVMTQTPSSKSVPVGDTVTINCQASESLYNNNALAWFQQKPGQPPKRLIYDASKLASGVPSRFSGGGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEVVVKR(SEQ ID NO:121)。
[0298]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的嵌合抗体:AIVMTQTPSSKSVPVGDTVTINCQASESLYNNNALAWFQQKPGQPPKRLIYDASKLASGVPSRFSGGGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:122)。
[0299]本发明进一步包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的嵌合抗体:QSVEESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSNAMWWVRQAPGKGLEWIGIIYNGDGSTYYASWVNGRFSISKTSSTTVTLQLNSLTVADTATYYCARDLDLffGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:123)。
[0300]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的嵌合抗体:QSVEESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSNAMWWVRQAPGKGLEWIGCIYNGDGSTYYASWVNGRFSISKTSSTTVTLQLNSLTVADTATYYCARDLDLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:124)。
[0301]本发明进一步涵盖用于潜在治疗或预防畏光的抗体，其包含对应于SEQ IDNO: 121的可变轻链序列或SEQ ID NO: 122的轻链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQID NO: 125, SEQ ID NO: 126以及SEQ ID NO: 127的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQ ID NO: 123的可变重链序列或SEQ ID NO: 124的重链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQ ID NO: 128,SEQ ID NO: 129以及SEQID NO: 130的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成:一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
[0302]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ IDN0:121或SEQ ID N0:122的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ ID N0:123或SEQ ID N0:124的多肽序列。
[0303]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:121的可变轻链序列或SEQ ID NO: 122的轻链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQ ID NO: 125, SEQ IDNO: 126以及SEQ ID NO: 127的多肽序列中的一种或多种。
[0304]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:123的可变重链序列或SEQ ID NO: 124的重链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQ ID NO: 128、SEQ IDNO: 129以及SEQ ID NO: 130的多肽序列中的一种或多种。
[0305]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段:SEQ ID NO: 121的可变轻链区；SEQ ID NO: 123的可变重链区；SEQ ID NO: 121的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO: 125 ；SEQ ID NO: 126;以及SEQ ID NO: 127);以及SEQ ID NO: 123的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO: 128 ；SEQ ID N0:129;以及SEQ IDNO:130)。[0306]在本发明的一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的嵌合抗CGRP抗体为 Abl3，其包含 SEQ ID NO: 122 和 SEQ ID NO: 124 或可选地由 SEQ ID NO: 122 和 SEQID NO: 124组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
[0307]在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段。关于抗体Abl3，用于潜在治疗或预防畏光的Fab片段包括SEQ ID NO: 121的可变轻链序列和SEQID NO: 123的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ ID NO: 121和/或SEQ ID NO: 123的添加、缺失以及变体。
[0308]在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的Fab片段可通过Abl3的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的抗CGRP抗体如Abl3或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CH0、NSO或HEK293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0309]杭体 Ab 14
[0310]在一个实施方案中，本发明包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变轻链序列的人源化抗体:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR(SEQ ID NO:131)。
[0311]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的轻链序列的人源化抗体:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:132)。
[0312]本发明进一步包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的可变重链序列的人源化抗体:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQffVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:133)。
[0313]本发明还包括用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性并且具有包含下文所示序列的重链序列的人源化抗体:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:134)。
[0314]本发明进一步涵盖用于潜在治疗或预防畏光的抗体，其包含对应于SEQ IDNO: 131的可变轻链序列或SEQ ID NO: 132的轻链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQID NO: 135, SEQ ID NO: 136以及SEQ ID NO: 137的多肽序列中的一种或多种，和/或对应于SEQ ID NO: 133的可变重链序列或SEQ ID NO: 134的重链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQ ID NO: 138,SEQ ID NO: 139以及SEQ ID NO: 140的多肽序列中的一种或多种，或这些多肽序列的组合。在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的本发明的抗体或其片段包含以下或可选地由以下组成:一个或多个上文所示的CDR、可变重链和可变轻链序列以及重链和轻链序列(包括它们全部)的组合。
[0315]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段。在本发明的一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ ID N0:131或SEQ ID NO: 132的多肽序列。在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的本发明的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:SEQ ID NO: 133 或 SEQ ID NO: 134 的多肽序列。
[0316]在本发明的另`一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:131的可变轻链序列或SEQ ID NO: 132的轻链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQ ID NO: 135、SEQ IDNO: 136以及SEQ ID NO: 137的多肽序列中的一种或多种。
[0317]在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:对应于SEQ ID N0:133的可变重链序列或SEQ ID NO: 134的重链序列的互补决定区(⑶R或高变区)的SEQ ID NO: 138、SEQ IDNO: 139以及SEQ ID NO: 140的多肽序列中的一种或多种。
[0318]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的包括一种或多种本文所述的抗体片段的抗体片段。在本发明的一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的抗体的片段包含以下或可选地由以下组成:一个、两个、三个或更多个(包括全部)下列抗体片段:SEQ ID NO: 131的可变轻链区；SEQ ID NO: 133的可变重链区；SEQ ID NO: 131的可变轻链区的互补决定区(SEQ ID NO: 135 ；SEQ ID NO: 136;以及 SEQ ID NO: 137);以及 SEQ ID NO: 133 的可变重链区的互补决定区(SEQ ID NO: 138 ；SEQ ID NO:139;以及 SEQ ID NO: 140)。
[0319]在本发明的一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的人源化抗CGRP抗体为 Abl4，其包含 SEQ ID NO: 132 和 SEQ ID NO: 134 或可选地由 SEQ ID NO: 132 和 SEQID NO: 134组成，并且具有至少一种本文所示的生物活性。
[0320]在本发明的另一个特别优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的抗体片段包含以下或可选地由以下组成:对CGRP具有结合特异性的Fab(片段抗原结合)片段。关于抗体Abl4，用于潜在治疗或预防畏光的Fab片段包括SEQ ID NO: 131的可变轻链序列和SEQID NO: 133的可变重链序列。本发明的这个实施方案进一步涵盖在保持对CGRP的结合特异性的同时所述Fab中SEQ ID NO: 131和/或SEQ ID NO: 133的添加、缺失以及变体。
[0321]在本文(下文)所述的本发明的一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的Fab片段可通过Abl4的酶消化(例如，木瓜蛋白酶)而产生。在本发明的另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的抗CGRP抗体如Ab 14或其Fab片段可通过在哺乳动物细胞如CH0、NSO或HEK293细胞，真菌、昆虫或微生物系统如酵母细胞(例如二倍体酵母如二倍体毕赤酵母属)和其他酵母菌株中表达而产生。合适的毕赤酵母属物种包括但不限于巴斯德毕赤酵母。
[0322]在另一个实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的抗体片段可以一种或多种下列非限制性形式存在:Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv以及单链Fv抗体形式。在一个优选实施方案中，本文所述的用于潜在治疗或预防畏光的抗CGRP抗体进一步包括包含下文所示序列的K恒定轻链序列:
[0323]VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:283)。
[0324]在另一个优选实施方案中，用于潜在治疗或预防畏光的本文所述的抗CGRP抗体进一步包括包含下文所示序列的Y-1恒定重链多肽序列:
[0325]ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:284)。
[0326]在另一个实施方案中，本发明涵盖用于潜在治疗或预防畏光的分离的抗CGRP抗体，其包含选自以下的 Vh 多肽序列:SEQ ID N0:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133，或其变体；并且进一步包含选自以下的Vl多肽序列:SEQ ID NO: 1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131，或其变体，其中所述￥11或￥1多肽中的一个或多个框架残基(FR残基)已经被另一个氨基酸残基取代，产生用于潜在治疗或预防畏光的特异性结合CGRP的抗CGRP抗体。本发明涵盖这些抗体的人源化和嵌合形式。用于潜在治疗或预防畏光的此类嵌合抗体可包括衍生自IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgGlO, IgGlU IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18 或 IgG19 恒定区的 Fe。
[0327]在本发明的一个实施方案中，抗体或Vh或\多肽源自或选自在本文所述人源化过程开始之前的一种或多种兔B细胞群体。
[0328]在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体和其片段不具有对CGRP-R的结合特异性。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体和其片段抑制CGRP与CGRP-R的缔合。在本发明的另一个实施方案中，抗CGRP抗体和其片段抑制CGRP与CGRP-R和/或另外的蛋白质和/或其多聚体的缔合，和/或拮抗其生物效应。[0329]如本文中所述，抗体和其片段可被翻译后修饰以添加效应子部分如化学连接子、可检测部分如例如荧光染料、酶、底物、生物发光材料、放射性材料以及化学发光部分，或功能性部分如例如链霉亲和素、亲和素、生物素、细胞毒素、细胞毒性剂以及放射性材料。
[0330]抗体或其片段也可以被化学修饰以提供另外的优点，例如多肽的溶解性、稳定性以及循环时间(体内半衰期)增加，或免疫原性降低(参见美国专利N0.4，179，337)。用于衍生化的化学部分可选自水溶性聚合物，例如聚乙二醇、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇等。抗体和其片段可在分子内的任意位置或在分子内的预定位置被修饰并且可包括一个、两个、三个或更多个连接的化学部分。
[0331]聚合物可具有任何分子量，并且可为分枝或未分枝的。对于聚乙二醇来说，为便于处理和制造，优选的分子量介于约IkDa与约IOOkDa之间(术语“约”指示在制备聚乙二醇时，一些分子的重量将比所述分子量更大或略小)。取决于所需治疗概况(例如，所需持续释放的持续时间、对生物活性的影响(如果存在的话)、处理简易性、聚乙二醇与治疗蛋白或类似物的抗原性和其他已知作用的程度或缺乏)，可使用其他大小。例如，聚乙二醇可具有约 200、500、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、8500、9000、9500、10，000、10，500、11，000、11，500、12，000、12，500、13，000、13，500、14，000、14，500、15，000、15，500、16，000、16，500、17，000、17，500、18，000、18，500、19，000、19，500、20，000、25，000、30，000、35，000,40,000,50,000,55,000,60,000,65,000,70,000,75, 000,80, 000,85, 000、90，000,95, 000或100，OOOkDa的平均分子量。分枝聚乙二醇描述于例如美国专利N0.5, 643, 575 ；Morpurgo 等人,Appl.Biochem.Biotechnol.56:59-72(1996) ；Vorobjev等人,Nucleosides NucIeotides 18:2745-2750 (1999)；以及 Caliceti 等人,Bioconjug.Chem.10:638-646(1999)中，其各自的公开内容以引用的方式并入本文中。
[0332]存在多种为本领域技术人员可用的连接方法。参见例如EP0401384，其以引用的方式并入本文中(将PEG偶联至G-CSF)。也参见Malik等人，Exp.Hematol.20:1028-1035 (1992)(报道使用三氟代乙烷磺酰氯进行GM-CSF的聚乙二醇化)。例如，聚乙二醇可经由反应性基团(例如游离氨基或羧基)通过氨基酸残基共价结合。反应性基团为可结合至活化的聚乙二醇分子的那些基团。具有游离氨基的氨基酸残基可包括赖氨酸残基和N端氨基酸残基；具有游离羧基的氨基酸残基可包括天冬氨酸残基、谷氨酸残基以及C端氨基酸残基。巯基也可以用作反应性基团以连接聚乙二醇分子。对于治疗目的优选的是在氨基处连接，例如在N端或赖氨酸基团处连接。
[0333]如上文所示，聚乙二醇可经由键联至多种氨基酸残基中的任一个而连接至蛋白质。例如，聚乙二醇可经由与赖氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或半胱氨酸残基的共价键而键联至多肽。可使用一种或多种反应化学来连接聚乙二醇与特定氨基酸残基(例如，赖氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或半胱氨酸)或多于一种类型的氨基酸残基(例如，赖氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、半胱氨酸以及其组合)。
[0334]可选地，抗体或其片段可经由与白蛋白(包括但不限于重组人类血清白蛋白或其片段或变体(参见例如1999年3月2日颁予的美国专利N0.5，876，969 ;欧洲专利0413622 ；以及1998年6月16日颁予的美国专利N0.5，766，883，以全文引用的方式并入本文中))或其他循环血蛋白如转铁蛋白或铁蛋白融合而具有增加的体内半衰期。在一个优选的实施方案中，本发明的多肽和/或抗体(包括其片段或变体)与人类血清白蛋白的成熟形式(即，如欧洲专利0322094的图1和图2中所示的人类血清白蛋白的氨基酸1_585，该文献以全文引用的方式并入本文中)融合。本发明还涵盖了编码本发明的融合蛋白的多核苷酸。
[0335]关于可检测部分，另外的示例性酶包括但不限于辣根过氧化物酶、乙酰胆碱酯酶、碱性磷酸酶、β_半乳糖苷酶以及荧光素酶。另外的示例性荧光材料包括但不限于罗丹明(rhodamine)、突光素、异硫氰酸突光素、伞形酮(umbelIiferone)、二氯三嗪胺、藻红蛋白(phycoerythrin)以及丹磺酰氯(dansyl chloride)。另外的示例性化学发光部分包括但不限于鲁米诺(Iuminol)。另外的示例性生物发光材料包括但不限于荧光素和水母发光蛋白(aequorin)。另外的示例性放射性材料包括但不限于碘125 (125I)、碳14 (14C)、硫35 (35S)、氚(3H)以及磷32 (32P)。
[0336]关于功能性部分，示例性细胞毒性剂包括但不限于甲氨蝶呤(methotrexate)、氨基蝶呤(aminopterin)、6_巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧唳、达卡巴嚷(decarbazine);烧化剂如氣芥(mechlorethamine)、赛替派(thioepa)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、美法仑(melphalan)、卡莫司汀(carmustine) (BSNU)、丝裂霉素C (mitomycin C)、洛莫司汀(1mustine) (CCNU)、1-甲基亚硝基脲、环磷酰胺(cyclothosphamide)、氮芥、白消安(busulfan)、二溴甘露醇、链脲佐菌素(streptozotocin)、丝裂霉素C、顺式二氯二氨合钼(II) (DDP)顺钼以及卡钼(钼尔定(paraplatin));蒽环类包括柔红霉素(以前的道诺霉素)、阿霉素(亚德里亚霉素)、地托比星(detorubicin)、洋红霉素(carminomycin)、伊达比星(idarubicin)、表柔比星(epirubicin)、米托蒽酉昆(mitoxantrone)以及比生群(bisantrene);抗生素包括更生霉素(放线菌素D)、博莱霉素、卡奇霉素、光神霉素以及安曲霉素(AMC);以及抗有丝分裂剂如长春花生物碱、长春新碱(vincristine)以及长春碱(vinblastine)。其他细胞毒性剂包括紫杉醇(泰素)、蓖 麻毒素、假单胞菌外毒素(pseudomonas exotoxin)、吉西他滨(gemcitabine)、细胞松弛素 B(cytochalasin B)、短杆菌肽 D(gramicidin D)、溴化乙锭(ethidium bromide)、依米丁 (emetine)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(tenoposide)、秋水仙素(colchicin)、二羟基炭疽菌素二酮、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔(propranolol)、嘌呤霉素、丙卡巴肼(procarbazine)、羟基脲、天冬酰胺酶、皮质类固醇、米托坦(0，P’-(DDD))、干扰素以及这些细胞毒性剂的混合物。
[0337]另外的细胞毒性剂包括但不限于化学治疗剂如卡钼、顺钼、太平洋紫杉醇、吉西他滨、卡奇霉素、阿霉素、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素C、放线菌素D、环磷酰胺、长春新碱以及博莱霉素。来自植物和细菌的毒性酶如蓖麻毒素、白喉毒素以及假单胞菌毒素可以缀合至人源化或嵌合抗体或其结合片段，以产生细胞类型特异性杀伤试剂(Youle等人，Proc.Nat，I Acad.Sc1.USA77:5483 (1980) ;Gilliland 等人，Proc.Nat，I Acad.Sc1.USA77:4539 (1980) ；Krolick 等人，Proc.Nat，I Acad.Sc1.USA77:5419 (1980))。
[0338]其他细胞毒性剂包括由Goldenberg在美国专利N0.6，653，104中所述的细胞毒性核糖核酸酶。本发明的实施方案还涉及放射免疫缀合物，其中使用或不使用复合物形成剂，使发射α或β粒子的放射性核素稳定地偶联至抗体或其结合片段。此类放射性核素包括 β 发射体，例如磷-32 (32P)、钪-47 (47Sc)、铜-67 (67Cu)、镓-67 (67Ga)、钇-88 (88Y)、钇-90 (90Y)、碘-125 (125I)、碘-131 (131I)、钐-153 (153Sm)、镥-177 (177Lu)、铼-186 (186Re)或铼-188 (188Re);以及 α 发射体，例如砹-211 (211At)、铅-212 (212Pb)、铋-212 (212Bi)或铋-213 (213Bi)或锕-2 2 5 (225Ac)。
[0339]用于将抗体或其结合片段结合至可检测部分等的方法在本领域是已知的，例如由 Hunter 等人,Naturel44:945 (1962) ；David 等人,Biochemistryl3:1014 (1974)；Pain 等人，J.1mmunol.Meth.40:219 (1981)；以及 Nygren, J.，Histochem.andCytochem.30:407(1982)描述的那些方法。
[0340]本文所述的实施方案进一步包括与本文所示的抗体、抗体片段、双功能抗体、SMIP、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR、多肽、可变区以及⑶R基本上同源的变体和等效物。这些物质可包含例如保守性取代突变(即一个或多个氨基酸被类似的氨基酸取代)。例如，保守性取代是指氨基酸被同一通用类别内的另一氨基酸取代，例如一个酸性氨基酸被另一酸性氨基酸取代，一个碱性氨基酸被另一碱性氨基酸取代，或一个中性氨基酸被另一中性氨基酸取代。保守性氨基酸取代所预期的内容在本领域众所周知。
[0341]在另一个实施方案中，本发明涵盖与任何一种或多种本文所示的抗体片段、可变区以及CDR的多肽序列具有至少90%或更大的序列同源性的多肽序列。更优选地，本发明涵盖与任何一种或多种本文所示的抗体片段、可变区以及CDR的多肽序列具有至少95%或更大的序列同源性、甚至更优选至少98%或更大的序列同源性以及再更优选至少99%或更大的序列同源性的多肽序列。用于测定核酸与氨基酸序列之间的同源性的方法为本领域技术人员众所周知。
[0342]在另一个实施方案中，本发明进一步涵盖进一步具有抗CGRP活性的本文所示抗体片段、可变区以及CDR的上述多肽同源物。本文例如在下文的段落-中阐述抗CGRP活性的非限制性例子。
[0343]在另一个实施方案中，本发明进一步涵盖结合任何上述序列的抗独特型抗体的产生和使用。在一个示例性实施方案中，此类抗独特型抗体可以施用于已接受抗CGRP抗体的受试者以调节、降低或中和抗CGRP抗体的作用。此类抗独特型抗体还可以用于治疗特征在于存在抗CGRP抗体的自身免疫疾病。此类抗独特型抗体的另一个示例性用途为检测本发明的抗CGRP抗体，例如监测在受试者的血液或其他体液中存在的抗CGRP抗体的水平。
[0344]本发明还涵盖用于潜在治疗或预防畏光的抗CGRP抗体，其包含用于取代本文所述的任何其他多核苷酸序列的本文所述的任何多肽或多核苷酸序列。例如，但不限于此，本发明涵盖包含本文所述的任何可变轻链和可变重链序列的组合的抗体，并且进一步涵盖由本文所述的任何CDR序列取代本文所述的任何其他CDR序列而产生的抗体。
[0345]本发明的另外的示例性实施方案
[0346]在另一个实施方案中，本发明涵盖一种或多种用于潜在治疗或预防畏光的抗人类抗CGRP抗体或其抗体片段，其特异性结合于在完整人类CGRP多肽或其片段上与选自以下的抗人类CGRP抗体相同或重叠的线性或构象表位和/或竞争结合于在完整人类CGRP多肽或其片段上与选自以下的抗人类CGRP抗体相同或重叠的线性或构象表位:Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、Abll、Abl2、Abl3 或 Abl4。在一个优选实施方案中，抗人类CGRP抗体或其片段特异性结合于在完整人类CGRP多肽或其片段上与Ab3、Ab6、Abl3或Abl4并且最优选Ab3相同的重叠线性或构象表位和/或竞争结合于在完整人类CGRP多肽或其片段上与Ab3、Ab6、Abl3或Abl4并且最优选Ab3相同的重叠线性或构象表位。[0347]本发明的一个优选实施方案是针对于对CGRP具有结合特异性并抑制由CGRP与CGRP受体结合而介导的生物活性、尤其用于治疗或预防畏光的嵌合或人源化抗体和其片段(包括Fab片段)。在本发明的一个特别优选实施方案中，嵌合或人源化抗CGRP抗体是选自Ab3、Ab6、Abl3 或 Abl4，或更优选 Ab3。
[0348]本发明的一个优选实施方案是针对在动物模型中筛选对人类降钙素基因相关肽(下文为“CGRP”)具有结合特异性的抗体和其片段(包括Fab片段)以测定其体内作用、尤其是其拮抗CGRP的不良副作用以及治疗涉及过量CGRP的病状的能力、尤其是其治疗或预防畏光(例如，偏头痛中)的能力的方法。
[0349]本发明的一个更具体的优选实施方案涉及一种评估候选CGRP/CGRP受体抑制剂多肽、例如抗CGRP或抗CGRP抗体或抗体片段的潜在体内功效的方法，其包括与在不存在候选抗CGRP抗体或抗体片段的情况下施用了 CGRP的啮齿动物相比，在施用了 CGRP的啮齿动物中测定该抗体是否抑制厌光行为。
[0350]本发明的一个更具体的优选实施方案涉及一种评估候选抗CGRP抗体或抗体片段治疗特征为CGRP水平增加和畏光的神经性病状的潜在体内功效的方法。
[0351]本发明的另一个更具体的优选实施方案涉及一种评估候选抗CGRP抗体或抗体片段治疗与畏光相关的CGRP相关病症的潜在体内功效的方法，所述CGRP相关病症如偏头痛或慢性偏头痛(有或无先兆)、或例如以下病状:体重减轻、癌症或肿瘤、与癌症或肿瘤生长相关的血管生成、与癌症或肿瘤存活相关的血管生成、腹泻、偏瘫性偏头痛、丛集性头痛、偏头痛性神经痛、慢性头痛、紧张性头痛、一般性头痛、潮热、慢性阵发性半侧颅痛、由于头或颈中的潜在结构问题而致的继发性头痛、脑神经痛、窦性头痛(例如与窦炎相关)、过敏症诱发的头痛或偏 头痛、疼痛、无头痛的偏头痛、腹型偏头痛、炎性疼痛、手术后切口疼痛、复杂区域性疼痛综合征、癌症疼痛、原发性或转移性骨癌疼痛、骨折疼痛、慢性疼痛、骨质疏松性骨折疼痛、由灼伤产生的疼痛、骨质疏松症、痛风性关节疼痛、腹痛、与镰状细胞危象相关的疼痛和其他伤害性疼痛，以及肝细胞癌、乳腺癌、肝硬化、经痛、神经源性疼痛、神经性疼痛、伤害性疼痛、三叉神经痛、带状疱疹后神经痛、幻肢痛、纤维肌痛、经痛、卵巢痛、反射性交感神经营养不良、神经源性疼痛、骨关节炎或类风湿性关节炎疼痛、下背痛、糖尿病性神经病变、坐骨神经痛，或与以下相关的疼痛或内脏疼痛:胃-食管反流、消化不良、肠易激综合征、激惹性结肠、痉挛性结肠、粘液性结肠炎、炎症性肠病、克罗恩病(Crohn’s disease),回肠炎、溃疡性结肠炎、肾绞痛、痛经、膀胱炎、月经期、分娩、更年期、前列腺炎、胰腺炎、肾绞痛、痛经、膀胱炎(包括间质性膀胱炎(IC))、与肠梗阻相关的手术、憩室炎、腹膜炎、心包炎、肝炎、目尾炎、结肠炎、胆囊炎、子宫内膜异位、慢性和/或急性胰腺炎、心肌梗塞、肾脏疼痛、胸膜疼痛、前列腺炎、骨盆痛、器官创伤、慢性伤害性疼痛、慢性神经性疼痛、慢性炎性疼痛、纤维肌痛、爆发性疼痛以及持续性疼痛。本发明的另一个优选的实施方案涉及一种基于候选抗CGRP抗体或抗体片段在下文详细描述的厌光行为啮齿动物模型中的作用测定所述抗体或抗体片段在人类中的合适的治疗剂量或给药方式以治疗选自本文鉴定的那些畏光相关病状的方法。畏光的常见原因包括偏头痛、白内障或严重的眼科疾病如葡萄膜炎或角膜擦伤。与畏光相关的病症的更详尽列表包括眼睛相关原因如色盲、无虹膜、抗胆碱能药物可能通过麻痹虹膜括约肌而引起的畏光、无晶状体(眼睛不存在晶状体)、牛眼(角膜与虹膜之间的异常窄角)、白内障、视锥细胞营养不良、先天性眼睛异常、病毒性结膜炎(“红眼病”)、角膜擦伤、角膜营养不良、角膜溃疡、角膜上皮破坏(例如由角膜异物或角膜炎引起)、晶状体异位、眼内炎、由疾病、损伤或感染引起的眼外伤如睑板腺囊肿、巩膜外层炎、青光目艮、圆锥角膜、或视神经发育不良、水眼、或先天性青光眼、虹膜炎、视神经炎、色素播散综合征、瞳孔扩张(自然或化学诱导)、视网膜脱离、角膜或巩膜的疤痕以及葡萄膜炎。另外，畏光具有神经系统相关或泌尿道原因，包括:自闭症谱系障碍、Chiari畸形、诵读困难、脑炎(包括肌痛性脑脊髓炎，也被称为慢性疲劳综合征)、脑膜炎、蛛网膜下腔出血、后颅窝肿瘤，以及其他原因如强直性脊柱炎、白化病、核黄素缺乏症、苯二氮萆类(苯二氮萆类的长期使用
或戒断)、化学疗法、基孔肯雅病、胱氨酸症、埃勒斯-当洛综合征、宿醉、流感、传染性单核细胞增多症、镁缺乏、汞中毒、偏头痛、狂犬病以及II型酪氨酸血症(也被称为“里奇纳-汉哈特综合征”)。另外，已知在抑郁症、双相情感障碍以及广场恐怖症中畏光程度升高。
[0352]本发明的此外另一个优选的实施方案涉及基于啮齿动物CGRP动物模型中的结果评估候选抗CGRP抗体或抗体片段在人类中的合适的治疗剂量或给药方式的方法。
[0353]本发明的其他优选的实施方案是针对于用于治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的特异性抗体和其片段、特别是具有所需表位特异性、高亲和力或亲合力和/或功能特性的抗体的筛选测定法和治疗用途。在优选的实施方案中，本发明涉及本文所述的抗体的测定法和用途，所述抗体包含本文所述的VH、Vl以及CDR多肽的序列，以及编码其的多核苷酸。本发明的一个优选实施方案是针对能够结合至CGRP和/或抑制由CGRP与CGRP受体(“CGRP-R”)结合而介导的生物活性的嵌合或人源化抗体和其片段(包括Fab片段)。
[0354]在本发明的另一个实施方案中涵盖一种降低、治疗或预防与CGRP相关的疾病或病症的方法，该方法通过影响经由CGRP介导的那些生物活性，尤其是抑制或预防畏光，从而避免经由CGRP与CGRP-R的结合而介导的不良生物活性。在一个实施方案中，该与畏光相关的疾病或病症为偏头痛、头痛、疼痛、或与畏光相关的前述其他病状。本文提供与CGRP相关的疾病和病症的另一个非限制性列表。
[0355]本发明的另一个优选实施方案涵盖Fab多肽序列在患者中用于治疗偏头痛和头痛以及尤其用于治疗或预防畏光的用途。本公开中他处提供可使用Fab多肽序列治疗的偏头痛和头痛的非限制性类型。
[0356]在本发明的另一个实施方案中，用于治疗或预防畏光的抗人类CGRP抗体为特异性结合于在完整CGRP多肽或其片段上由Ab3、Ab6、Abl3或Ab 14特异性结合的相同的重叠线性或构象表位的抗体，如使用横跨天然人类CGRP多肽的全长的重叠线性肽片段通过表位定位所确定。
[0357]本发明还涉及一种用于治疗或预防畏光的抗CGRP抗体，其与和本文公开的抗体或抗体片段相同的CGRP表位结合和/或与抗CGRP抗体竞争结合于CGRP，包括但不限于选自 Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、Abll、Abl2、Abl3 或 Abl4、优选地Ab6、AblO、Abl2或Ab3的抗CGRP抗体。如所述，畏光的常见原因包括偏头痛、白内障或严重的眼科疾病如葡萄膜炎或角膜擦伤。与畏光相关的病症的更详尽列表包括眼睛相关原因如色盲、无虹膜、抗胆碱能药物可能通过麻痹虹膜括约肌而引起的畏光、无晶状体(眼睛不存在晶状体)、牛眼(角膜与虹膜之间的异常窄角)、白内障、视锥细胞营养不良、先天性眼睛异常、病毒性结膜炎(“红眼病”)、角膜擦伤、角膜营养不良、角膜溃疡、角膜上皮破坏(例如由角膜异物或角膜炎引起)、晶状体异位、眼内炎、由疾病、损伤或感染引起的眼外伤如睑板腺囊肿、巩膜外层炎、青光眼、圆锥角膜、或视神经发育不良、水眼、或先天性青光眼、虹膜炎、视神经炎、色素播散综合征、瞳孔扩张(自然或化学诱导)、视网膜脱离、角膜或巩膜的疤痕以及葡萄膜炎。
[0358]另外，畏光具有神经系统相关或泌尿道原因，包括:自闭症谱系障碍、Chiari畸形、诵读困难、脑炎(包括肌痛性脑脊髓炎，也被称为慢性疲劳综合征)、脑膜炎、蛛网膜下腔出血、后颅窝肿瘤，以及其他原因如强直性脊柱炎、白化病、核黄素缺乏症、苯二氮苯类(苯二氮革类的长期使用或戒断)、化学疗法、基孔肯雅病、胱氨酸症、埃勒斯-当洛综合征、宿醉、流感、传染性单核细胞增多症、镁缺乏、汞中毒、偏头痛、狂犬病以及II型酪氨酸血症(也被称为“里奇纳-汉哈特综合征”)。另外，已知在抑郁症、双相情感障碍以及广场恐怖症中畏光程度升高。
[0359]在另一个实施方案中，本发明还涉及一种用于治疗或预防畏光的分离的抗CGRP抗体或抗体片段，其包含一个或多个在选自以下的Vh多肽序列中所含的⑶R:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133，或其变体，和/或一个或多个在选自以下的\多肽序列中所含的 CDR:1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121 或 131，或其变体。 [0360]在本发明的一个实施方案中，在前面两个段落中所讨论的用于治疗或预防畏光的抗人类CGRP抗体在可变轻链和可变重链区中各包含至少2个互补决定区(⑶R)，其与选自以下的抗人类 CGRP 抗体中所含的 CDR 相同:Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、Abll、Abl2、Abl3 或 Abl4。
[0361]在一个优选的实施方案中，用于治疗或预防畏光的上文讨论的抗人类CGRP抗体在可变轻链和可变重链区中各包含至少2个互补决定区(CDR)，其与Ab3或Ab6中所含的CDR相同。在另一个实施方案中，上文讨论的抗人类CGRP抗体的所有CDR都与选自以下的抗人类 CGRP 抗体中所含的 CDR 相同:Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、Ab 11、Ab 12、Ab 13或Ab 14。在本发明的一个优选实施方案中，上文讨论的抗人类CGRP抗体的所有CDR都与选自Ab3、AblO、Abl2或Ab6的抗人类CGRP抗体中所含的CDR相同。
[0362]本发明进一步涵盖用于治疗或预防畏光的上文讨论的一种或多种抗人类CGRP抗体，其为未糖基化的或最小程度地被糖基化，例如，缺乏N-糖基化并包含一些O-糖基化，例如少许一个或多个甘露糖残基；例如，其包含已被修饰以改变效应功能、半衰期、蛋白水解和/或糖基化的Fe区；其为人类抗体、人源化抗体、单链抗体或嵌合抗体；以及其为源自兔(亲本)抗人类CGRP抗体的人源化抗体。
[0363]本发明进一步涵盖一种或多种用于治疗或预防畏光的抗人类CGRP抗体，其中所述抗体的可变轻链区和可变重链区中的框架区(FR)分别为未被修饰或已通过用亲本兔抗体的相应FR残基取代可变轻链或重链区中的一个或多个人类FR残基而被修饰的人类FR，并且其中所述人类FR已经来源于人类可变重链和轻链抗体序列，所述人类可变重链和轻链抗体序列已基于其相对于文库中所含的其他人类生殖系抗体序列与相应的兔可变重链或轻链区的高同源性水平而从人类生殖系抗体序列文库中选出。
[0364]在本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防畏光的抗人类CGRP抗体或片段特异性结合于表达CGRP的人类细胞和/或结合于体内循环的可溶性CGRP分子，包括在与表达CGRP的细胞相关的疾病患者中于人类细胞上表达或通过人类细胞表达的CGRP。[0365]在另一个实施方案中，该疾病是选自与一种或多种下列疾病相关的畏光或厌光:偏头痛(有或无先兆)、月经期头痛、月经期偏头痛、更年期偏头痛或另一种激素相关性偏头痛、偏瘫性偏头痛、丛集性头痛、偏头痛性神经痛、慢性头痛、紧张性头痛、一般性头痛、与潮热相关的偏头痛、慢性阵发性半侧颅痛、由于头或颈中的潜在结构问题而致的继发性头痛、脑神经痛、窦性头痛(例如与窦炎相关)、过敏症诱发的头痛或偏头痛、无头痛的偏头痛以及腹型偏头痛。
[0366]本发明进一步涵盖直接或间接连接至可检测标记或治疗剂的用于治疗或预防畏光的抗人类CGRP抗体或片段。
[0367]本发明还涵盖产生如上文所示的用于治疗或预防畏光的抗人类CGRP抗体或抗体片段的表达的一种或多种核酸序列，包括包含酵母或人类偏爱密码子或可选地由酵母或人类偏爱密码子组成的核酸序列。本发明还涵盖包含所述核酸序列的载体(包括质粒或重组病毒载体)。本发明还涵盖表达至少一种上文所示抗体的宿主细胞或重组宿主细胞，包括哺乳动物、酵母、细菌以及昆虫细胞。在一个优选实施方案中，宿主细胞为酵母细胞。在另一个优选实施方案中，酵母细胞为二倍体酵母细胞。在一个更优选实施方案中，酵母细胞为毕赤酵母。
[0368]本发明还涵盖一种治疗方法，其包括向患有与表达CGRP的细胞相关的疾病或病状的患者施用治疗有效量的至少一种用于治疗或预防畏光的本文所述的抗人类CGRP抗体或片段。本发明还涵盖该治疗方法可包括施用两种或更多种抗CGRP抗体或其片段并公开于本文中。如果向患者施用多于一种的抗体，则多种抗体可同时或并行施用，或其施用可交错进行。可治疗的疾病呈现于上文和本文他处所示的非限制性列表中。在一个优选实施方案中，与畏光相关的疾病选自偏头痛、头痛、疼痛、腹泻、癌症疼痛或神经性疼痛。在另一个实施方案中，治疗进一步包括施用选自化学疗法、放射疗法、细胞因子施用或基因疗法的另一种治疗剂或方式。
[0369]在本发明的一个非限制性实施方案中，另一种治疗剂或方式包括阿片类、止痛剂如NSAID、泰素(紫杉醇)或`其衍生物、钼化合物如卡钼或顺钼、蒽环类如阿霉素、烷化剂如环磷酰胺、抗代谢物如5-氟尿嘧啶、或依托泊苷。
[0370]本发明进一步涵盖一种体内成像方法，其检测表达CGRP的细胞的存在，该方法包括施用诊断有效量的至少一种抗人类CGRP抗体。在一个实施方案中，所述施用进一步包括在表达CGRP的疾病位点施用促进抗体检测的放射性核素或荧光团。在另一个实施方案中，使用所述体内成像方法的结果来促进适当的治疗方式的设计，包括包含放射疗法、化学疗法或其组合的治疗方式。
[0371]用于治疗或预防畏光的对CGRP具有结合特异性的本发明的抗CGRP抗体和其片段的抗CGRP活性还可以通过其对于CGRP的结合强度或其亲和力来描述。在本发明的一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的本发明的抗CGRP抗体和其片段以小于或等于 5 X 10-7Μ、10-7Μ、5 X 10-8Μ、10-8Μ、5 X 10-9Μ、10-9Μ、5 X I(T10M、I(T10M、5 X 10-ηΜ、10-ηΜ、5 X 10-12Μ、10-12Μ、5 X IO-13M或10-13Μ的解离常数(KD)结合于CGRP。优选地，抗CGRP抗体和其片段以小于或等于10_nM、5X10_12M或10_12M的解离常数结合CGRP。在本发明的另一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的本发明的抗CGRP抗体和其片段结合于线性或构象CGRP表位。[0372]在本发明的另一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的本发明的抗CGRP抗体和其片段的抗CGRP活性以小于或等于IO-4S-1AX ΙΟ?'ΙΟ?'δΧ IO-6S-1UO-6S'5 X ΙΟΙ—1或10-?-1的解离速率结合于CGRP。
[0373]在本发明的另一个实施方案中，对CGRP具有结合特异性的本发明的抗CGRP抗体和其片段的抗CGRP活性通过预防、改善或减少与CGRP相关的疾病和病症的症状或可选地治疗与CGRP相关的疾病和病症、尤其是治疗或预防畏光而展现抗CGRP活性。本文示出与CGRP相关的疾病和病症以及与畏光相关的病状的非限制性例子。
[0374]编码抗CGRP抗体多肽的多核苷酸
[0375]杭体Abl
[0376]本发明进一步针对编码对CGRP具有结合特异性的抗体多肽的多核苷酸。在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:1的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO:1的可变轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成:
[0377]CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(SEQ ID NO:141)。
[0378]在本发 明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID N0:2的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID N0:2的轻链多肽序列的下列多核苷酸序列组成:
[0379]CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(SEQ ID NO:142)。
[0380]在本发明的另一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID N0:3的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID NO: 3的可变重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成:
[0381]CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGCCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(SEQ ID NO:143)。
[0382]在本发明的一个实施方案中，本发明的多核苷酸包含编码SEQ ID NO:4的重链多肽序列的下列多核苷酸序列或可选地由编码SEQ ID N0:4的重链多肽序列的下列多核苷酸序列组成:
【权利要求】
1.一种在有需要的受试者中抑制畏光或厌光或阻止畏光或厌光的发作的方法，其包括施用有效量的抗CGRP抗体或抗体片段、抗CGRP受体抗体或片段、或包含CGRP或CGRP受体的片段的多肽，其中所述抗体或抗体片段或CGRP或CGRP受体的片段减少或预防CGRP相关的畏光或厌光。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述被施用的分子包含抗CGRP抗体或抗体片段。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述被治疗的受试者罹患下列中的一种或多种:慢性偏头痛、偏瘫性偏头痛、丛集性头痛、偏头痛性神经痛、慢性头痛、紧张性头痛、一般性头痛、潮热、慢性阵发性半侧颅痛、由于头或颈中的潜在结构问题而致的继发性头痛、脑神经痛、窦性头痛、过敏症诱发的头痛、更年期偏头痛、月经期偏头痛、或头痛、无头痛的偏头痛、腹型偏头痛或其他偏头痛病状。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述受试者具有选自以下的与畏光相关的眼部病症:色盲、无虹膜、由抗胆碱能药物造成的畏光、无晶状体(眼睛不存在晶状体)、牛眼(角膜与虹膜之间的异常窄角)、白内障、视锥细胞营养不良、先天性眼睛异常、病毒性结膜炎(“红眼病”)、角膜擦伤、角膜营养不良、角膜溃疡、角膜上皮破坏、晶状体异位、眼内炎、由疾病、损伤或感染引起的眼外伤如睑板腺囊肿、巩膜外层炎、青光眼、圆锥角膜、或视神经发育不良、水眼、或先天性青光眼、虹膜炎、视神经炎、色素播散综合征、瞳孔扩张(自然或化学诱导)、视网膜脱离、角膜或巩膜的疤痕以及葡萄膜炎。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述受试者具有选自以下的与畏光相关的神经系统相关或泌尿道病状:自闭症谱系障碍、Chiari畸形、诵读困难、脑炎(包括肌痛性脑脊髓炎，也被称为慢性疲劳综合征)、脑膜炎、蛛网膜下腔出血、后颅窝肿瘤、强直性脊柱炎、白化病、核黄素缺乏症、苯二氮革类(苯二氮簟类的长期使用或戒断)、化学疗法、基孔肯雅病、胱氨酸症、埃勒斯-当洛综合征、宿醉、流感、传染性单核细胞增多症、镁缺乏、汞中毒、偏头痛、狂犬病以及II型酪氨酸血症(也被称为“里奇纳-汉哈特综合征”)。
6.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述受试者具有选自以下的畏光相关病症:偏头痛(有或无先兆)、虹膜炎、葡萄膜炎、脑膜炎、抑郁症、双相情感障碍、丛集性头痛或另一种三叉自主神经性头痛或眼睑痉挛、抑郁症、广场恐怖症或双相情感障碍。
7.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述受试者罹患偏头痛。
8.一种评估候选抗CGRP抗体或抗体片段、抗CGRP受体抗体或抗体片段或者CGRP或CGRP受体的片段用于治疗可通过施用与畏光相关的CGRP拮抗剂而治疗的病状的潜在体内功效的方法，其包括与在所述候选抗CGRP抗体或抗体片段不存在的情况下施用了 CGRP的啮齿动物相比，在施用了 CGRP的巢蛋白/Rampl啮齿动物中测定所述抗体或抗体片段是否抑制厌光行为。
9.根据权利要求8所述的方法，其中这种测定法被用于评估所述抗体或抗体片段是否可用于治疗特征为CGRP水平增加的神经性病状。
10.根据权利要求8所述的方法，其中这种测定法被用于评估所述抗CGRP抗体或抗体片段是否可用于治疗偏头痛、月经期偏头痛或慢性偏头痛。
11.根据权利要求8所述的方法，其中这种测定法被用于评估所述抗CGRP抗体或抗体片段是否可用于治疗偏头痛(有或无先兆)、体重减轻、癌症或肿瘤、与癌症或肿瘤生长相关的血管生成、与癌症或肿瘤存活相关的血管生成、偏瘫性偏头痛、丛集性头痛、偏头痛性神经痛、慢性头痛、紧张性头痛、一般性头痛、无头痛的偏头痛、腹型偏头痛、潮热、慢性阵发性半侧颅痛、由于头或颈中的潜在结构问题而致的继发性头痛、脑神经痛、窦性头痛、过敏症诱发的头痛或偏头痛、疼痛、炎性疼痛、手术后切口疼痛、复杂区域性疼痛综合征、癌症疼痛、原发性或转移性骨癌疼痛、骨折疼痛、骨质疏松性骨折疼痛、由灼伤产生的疼痛、骨质疏松症、痛风性关节疼痛、与镰状细胞危象相关的疼痛和其他伤害性疼痛，以及肝细胞癌、乳腺癌、肝硬化、神经源性疼痛、神经性疼痛、伤害性疼痛、三叉神经痛、带状疱疹后神经痛、幻肢痛、纤维肌痛、经痛、卵巢痛、反射性交感神经营养不良、神经源性疼痛、骨关节炎或类风湿性关节炎疼痛、下背痛、糖尿病性神经病变、坐骨神经痛，或与以下相关的内脏疼痛:胃-食管反流、消化不良、肠易激综合征、炎症性肠病、克罗恩病、回肠炎、溃疡性结肠炎、肾绞痛、痛经、膀胱炎、月经期、分娩、更年期、前列腺炎或胰腺炎。
12.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其包括施用用于治疗偏头痛的活性剂。
13.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗CGRP抗体或抗体片段是以单一疗法施用。
14.根据权利要求12所述的方法，其中所述抗体与另一种活性剂一起于相同或不同的组合物中施用。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述受试者为偏头痛患者并且所述疗法包括止痛剂、曲坦类、托吡酯、双氢麦角胺或阿片类。
16.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体片段为特异性结合于完整 CGRP 多肽或其片段上与选自 Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、AblO、Abl1、Abl2、Abl3或Ab l4的抗人类CGRP抗体相同或重叠的线性或构象表位和/或竞争结合于完整 CGRP 多肽或其片段上与选自 Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab 10、Abll、Abl2、Abl3或Abl4的抗人类CGRP抗体相同或重叠的线性或构象表位的抗人类CGRP抗体或抗体片段。
17.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体片段特异性结合于完整人类CGRP多肽或其片段上与Ab2、Ab3、Ab5、Ab6、Abl3或Abl4相同或重叠的线性或构象表位和/或竞争结合于完整人类CGRP多肽或其片段上与Ab2、Ab3、Ab5、Ab6、Abl3或Ab 14相同或重叠的线性或构象表位。
18.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体片段特异性结合于完整人类CGRP多肽或其片段上与Ab2、Ab3、Ab5或Ab6相同或重叠的线性或构象表位和/或竞争结合于完整人类CGRP多肽或其片段上与Ab2、Ab3、Ab5或Ab6相同或重叠的线性或构象表位。
19.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗体片段选自Fab片段、Fab’片段或F (ab’)2片段。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述片段为Fab片段。
21.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体片段包含包括SEQID NO:25 的 CDRl 序列、SEQ ID NO:26 的 CDR2 序列以及 SEQ ID NO:27 的 CDR3 序列的可变轻链，和/或包括SEQ ID NO:28的CDRl序列、SEQ ID NO:29的CDR2序列以及SEQ IDNO:30的⑶R3序列的可变重链。
22.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体片段包含包括SEQID NO:55 的 CDRl 序列、SEQ ID NO:56 的 CDR2 序列以及 SEQ ID NO:57 的 CDR3 序列的可变轻链，和/或包括SEQ ID NO:58的CDRl序列、SEQ ID NO:59的CDR2序列以及SEQ IDNO:60的⑶R3序列的可变重链。
23.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体片段在所述可变轻链区和所述可变重链区中各包含至少2个互补决定区(CDR)，所述CDR与选自以下的抗人类 CGRP 抗体中所含的 CDR 相同:Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab 10, AblUAbl2、Abl3 或Abl4。
24.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体片段在所述可变轻链区和所述可变重链区中各包含至少2个互补决定区(⑶R)，所述⑶R与Ab2、Ab3、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Abl3 或 Abl4 中所含的 CDR 相同。
25.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体片段为完全未糖基化的或缺乏N-糖基化或仅包含甘露糖残基。
26.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体片段包含已被修饰以改变效应功能、半衰期、蛋白水解和/或糖基化的Fe区。
27.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体片段为人源化、单链或嵌合抗体。
28.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体片段特异性结合于表达CGRP的人类细胞和/或结合于体内循环的可溶性CGRP分子。
29.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体片段包含选自以下的 Vh 多肽序列:SEQ ID N0:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123 或 133，或其变体；并且进一步包含选自以下的八多肽序列:SEQ ID ΝΟ:1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131，或与其具有至少90%序列同一性的其变体，其中所述Vh或'多肽中的一个或多个框架(FR)或CDR残基已经被另一个氨基酸残基取代，产生特异性结合CGRP的抗CGRP抗体。
30.根据权利要求29所述的方法，其中一个或多个所述FR残基被亲本兔抗CGRP抗体中相应位点处存在的氨基酸取代，所述Vh*'多肽中所含的互补决定区(CDR)已经源自所述亲本兔抗CGRP抗体；或被保守性氨基酸取代。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述抗体或抗体片段为人源化的。
32.根据权利要求30所述的方法，其中所述抗体或抗体片段为嵌合的。
33.根据权利要求30所述的方法，其中所述抗体包含单链抗体。
34.根据权利要求32所述的方法，其中所述嵌合抗体包含人类F。。
35.根据权利要求34所述的方法，其中所述人类F。是源自IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。
36.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体片段抑制CGRP与CGRP-R和/或其多聚体、一种或多种另外的蛋白质以CGRP-CGRP-R复合物形式的缔合，和/或拮抗其生物效应。
37.根据权利要求29所述的方法，其中所述抗体或抗体片段包含与其中所述的多肽序列中的两者具有至少90%或更大的同源性的多肽序列。
38.根据权利要求29所述的方法，其中所述抗体或抗体片段包含与其中所述的多肽序列中的任一者具有至少95%或更大的同源性的多肽序列。
39.根据权利要求29所述的方法，其中所述抗体或抗体片段以小于或等于10_4S'5 X IO-V5 X IO-6S^15 X IO^V IO-7S-1 的解离速率(Koff)结合于 CGRP。
40.根据权利要求29所述的方法，其中所述抗体或抗体片段抑制CGRP与CGRP-R和/或其多聚体的产生，和/或CGRP与CGRP-R和一种或多种另外的蛋白质以复合物形式的产生。
41.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗CGRP抗体结合于与选自Abl、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Abl0、Abll、Abl2、Abl3 或 Ab 14 的抗 CGRP 抗体相同或重叠的CGRP表位。
42.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗CGRP抗体或片段包含一个或多个在选自以下的Vh多肽序列中所含的CDR:SEQ ID NO:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133，和/或一个或多个在选自以下的\多肽序列中所含的CDR:SEQ IDN0:l、ll、21、31、41、51、61、71、81、91、101、lll、121 或 131。
43.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗CGRP抗体或片段包含至少2个在选自以下的Vh多肽序列中所含的CDR:SEQ ID NO: 3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133，和/或至少2个在选自以下的Vl多肽序列中所含的CDR:SEQ ID NO: K11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121 或 131。
44.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗CGRP抗体或片段包含全部3个在选自以下的Vh多肽序列中所含的CDR:SEQ ID NO: 3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133，和/或全部3个在选自以下的Vl多肽序列中所含的CDR:SEQ ID NO: K11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121 或 131。
45.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体片段是经肌肉内、皮下、静脉内、经直肠、通过输液、经口、经皮或经由吸入施用的。
46.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗体片段是经静脉内施用的。
47.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述治疗进一步包括施用选自抗组胺、抗炎剂或抗生素的另一种治疗剂或方式。
48.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述对CGRP具有结合特异性的抗CGRP抗体或抗体片段包含选自下列的可变轻链⑶R1XDR2和⑶R3多肽序列以及可变重链⑶R1、⑶R2和⑶R3多肽序列:
49.根据权利要求48所述的方法，其中所述抗体片段为scFv、骆驼抗体、纳米抗体、IgNAR (源自鲨鱼的单链抗体)、Fab、Fab’或F (ab’)2片段。
50.根据权利要求48所述的方法，其中所述抗CGRP抗体片段为Fab片段。
51.根据权利要求48所述的方法，其中所述抗体或片段包含选自下列的可变轻链多肽序列和可变重链多肽序列:I可变轻链I可变重链
52.根据权利要求48所述的方法，其中所述抗体或片段包含选自下列的轻链多肽序列和重链多肽序列:___
53.根据权利要求48所述的方法，其中所述抗体或片段包含各自分别与SEQID NO: K11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131的可变轻链多肽序列之一具有至少90%同一性以及与 SEQ ID N0:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123 或 133 的可变重链多肽序列之一具有至少90%同一性的可变轻链和可变重链多肽序列。
54.根据权利要求48所述的方法，其中所述抗体或片段包含各自分别与SEQID NO: K11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131的可变轻链多肽序列之一具有至少95%同一性以及与 SEQ ID N0:3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123 或 133 的可变重链多肽序列之一具有至少95%同一性的可变轻链和可变重链多肽序列。
55.根据权利要求48所述的方法，其中所述抗体或片段为嵌合或人源化的。
56.根据权利要求48所述的方法，其中所述抗CGRP抗体或抗体片段为完全未糖基化的或缺乏N-糖基化或仅包含甘露糖残基。
57.根据权利要求48所述的方法，其中所述抗CGRP抗体或抗体片段包含人类恒定域。
58.根据权利要求48所述的方法，其中所述抗CGRP抗体或抗体片段为IgGl、IgG2、IgG3或IgG4抗体。
59.根据权利要求48所述的方法，其中所述抗CGRP抗体或抗体片段包含已被修饰以改变效应功能、半衰期、蛋白水解和/或糖基化中的至少一种的Fe区。
60.根据权利要求48所述的方法，其中所述抗CGRP抗体或抗体片段具有包含改变或消除所有糖基化或者减少或消除N-糖基化的突变的Fe区。
61.根据权利要求48所述的方法，其中所述抗CGRP抗体或抗体片段直接或间接连接至可检测标记或治疗剂。
62.根据权利要求48所述的方法，其中所述抗CGRP抗体或抗体片段进一步包含效应子部分。
63.根据权利要求62所述的方法，其中所述效应子部分为可检测部分或功能性部分。
64.根据权利要求63所述的方法，其中所述可检测部分为荧光染料、酶、底物、生物发光材料、放射性材料或化学发光材料。
65.根据权利要求63所述的方法，其中所述功能性部分为链霉亲和素、亲和素、生物素、细胞毒素、细胞毒性剂或放射性材料。
66.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括施用β_阻断剂、氟桂利嗪、丙戊酸、托吡酯、阿米替林、文拉法辛、加巴喷丁、甲氧萘丙酸、款冬根、维生素Β2以及镁中的至少一者。
67.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括施用至少一种选自止痛剂、抗组胺、退热剂、抗炎剂、抗生素、抗病毒剂以及抗细胞因子剂的其他活性剂。
68.根据权利要求67所述的方法，其中其他活性剂是选自下列激动剂、拮抗剂和调节剂:TNF- a、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-18、IFN- a、IFN- y、BAFF, CXCLl3,IP-10、VEGF, EPO, EGF, HRG、肝细胞生长因子(HGF)、铁调素，包括针对任何上述物的反应性抗体，以及针对任何其受体的反应性抗体。
69.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括施用活性剂，所述活性剂包括但不限于2-芳基丙酸、乙酰氯芬酸、阿西美辛、乙酰水盐酸(阿司匹林)、阿氯芬酸、阿明洛芬、阿莫西品、氨基安替比林、芳基链烷酸、阿扎丙酮、扑炎痛/贝诺酯、苯恶洛芬、溴芬酸、卡布洛芬、塞来考昔、水杨酸胆碱镁、氯非宗、C0X-2抑制剂、右布洛芬、右酮洛芬、双氯芬酸、二氟尼柳、屈恶昔康、乙水杨胺、依托度酸、艾托考昔、菲斯胺、芬那酸、芬布芬、非诺洛芬、氟芬那酸、氟诺洛芬、氟比洛芬、布洛芬、异丁普生、喷哚美辛、喷哚洛芬、酮保泰松、酮洛芬、酮咯酸、氯诺昔康、氯索洛芬、罗美昔布、水杨酸镁、甲氯芬那酸、甲芬那酸、美洛昔康、安乃近、水杨酸甲酯、莫非保松、萘丁美酮、甲氧萘丙酸、N-芳基邻氨基苯甲酸、神经生长因子(NGF)、奥沙美辛、奥沙普秦、昔康类、羟保松、帕瑞考昔、非那宗、保泰松、保泰松、吡罗昔康、吡洛芬、普鲁芬、丙谷美辛、吡唑烷衍生物、罗非考昔、双水杨酸、水杨酰胺、水杨酸酯、P物质、磺吡酮、舒林酸、舒洛芬、替诺昔康、噻洛芬酸、托芬那酸、托美汀以及伐地考昔。
70.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括施用抗组胺活性剂，所述抗组胺活性剂包括但不限于阿伐斯汀、阿司咪唑、阿扎他定、氮卓斯汀、贝托斯汀、溴苯那敏、布克利嗪、西替利嗪、西替利嗪类似物、扑尔敏、氯马斯汀、CS560、赛庚啶、地氯雷他定、右氯苯那敏、依巴斯汀、依匹斯汀、非索非那定、HSR609、羟嗪、左卡巴斯汀、氯雷他定、甲基东莨菪碱、咪唑斯汀、诺司咪唑、苯茚胺、异丙嗪、吡拉明、特非那定以及曲尼司特。
71.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括施用抗生素活性剂，所述抗生素活性剂包括但不限于丁胺卡那霉素、氨基糖苷类、阿莫西林、氨苄青霉素、安沙霉素类、胂凡纳明、阿奇霉素、阿洛西林、氨曲南、杆菌肽、碳头孢烯、碳青霉烯类、羧苄青霉素、头孢克洛、头孢轻氨节、头孢氨节、头孢噻吩(Cefalothin)、头孢噻吩(Cefalotin)、头孢孟多、头孢唑林、头孢地尼、头孢托仑、头孢吡肟、头孢克肟、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢西丁、头孢泊肟、头孢丙烯、头孢他啶、头孢布坦、头孢唑肟、头孢吡普、头孢曲松、头孢呋辛、头孢菌素类、氯霉素、西司他丁、环丙沙星、克拉霉素、克林霉素、氯唑西林、粘菌素、复方新诺明、达福普汀、地美环素、双氯青霉素、地红霉素、多利培南、强力霉素、依诺沙星、厄他培南、红霉素、乙胺丁醇、氟氯西林、磷霉素、呋喃唑酮、夫西地酸、加替沙星、格尔德霉素、庆大霉素、糖肽类、除莠霉素、亚胺培南、异烟肼、卡那霉素、左氧氟沙星、林肯霉素、利奈唑胺、洛米沙星、氯拉卡比、大环内酯类、磺胺米隆、美罗培南、甲氧西林、甲硝哒唑、美洛西林、米诺环素、单环内酰胺类、莫西沙星、莫匹罗星、萘夫西林、新霉素、奈替米星、硝基呋喃妥因、诺氟沙星、氧氟沙星、苯唑西林、土霉素、巴龙霉素、青霉素、青霉素类、哌拉西林、平板霉素、多粘菌素B、多肽、百浪多息、批嗪酰胺、喹诺酮、奎奴普丁、利福平(Rifampicin)、利福平(Rifampin)、罗红霉素、大观霉素、链霉素、磺胺醋酰、磺胺甲二唑、磺胺二甲异噁唑、柳氮磺胺吡啶、磺胺异噁唑、磺胺类、替考拉宁、泰利霉素、四环素、四环素类、替卡西林、替硝唑、妥布霉素、甲氧苄氨嘧啶、甲氧苄氨嘧啶-磺胺甲噁唑、醋竹桃霉素、曲伐沙星以及万古霉素。
72.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括施用活性剂，所述活性剂包括但不限于醛固酮、倍氯米松、倍他米松、皮质类固醇类、氢化皮质醇、醋酸可的松、醋酸脱氧皮质酮、地塞米松、醋酸氟氢可的松、糖皮质激素类、氢化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙、泼尼松、类固醇类和曲安西龙以及其组合。
73.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括施用活性剂，所述活性剂包括但不限于布洛芬、甲氧萘丙酸、舒马曲坦、双醋氨酚/对乙酰氨基酚、咖啡因、曲坦如麦角胺类如麦角胺、皮质类固醇、包括但不限于甲氧氯普胺的止吐剂以及其组合。
74.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括施用活性剂组合，所述活性剂组合包括但不限于(阿司匹林与甲氧氯普胺)、(双醋氨酚/可待因用于止痛，布克利嗪作为止吐剂)以及双醋氨酚/甲 氧氯普胺。
【文档编号】G01N33/53GK103702685SQ201280035852
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2012年5月21日 优先权日:2011年5月20日
【发明者】A·F·拉索, E·A·凯泽, A·雷科伯, A·库布拉斯, A·C·拉丹特, B·R·科瓦切维奇, J·A·莱瑟姆, J·T·L·史密斯, L·F·加西亚-马丁内斯 申请人:奥尔德生物控股有限责任公司, 衣阿华大学研究基金会