一种利用靛蓝染料快速检测食品中蛋白质的方法
【专利摘要】本发明公开了一种利用靛蓝染料快速检测食品中蛋白质的方法。利用靛蓝与牛血清蛋白通过静电作用和疏水作用力形成聚集体，造成靛蓝的共振光散射强度发生相应的增强，从而建立了一种测定食品中蛋白质含量的方法。靛蓝的共振光散射信号增加值与待测牛血清蛋白的浓度在2×10-8~6×10-7摩尔/升（1.3×10-3~3.9×10-2克/升）范围内呈良好的线性关系，方法检出限为6×10-9摩尔/升（3.9×10-4克/升）。本发明克服了已有技术在检测时存在灵敏度低、应用范围窄等缺点，提高了灵敏度和选择性，对于食品中低浓度蛋白质的检测更加方便快速。
【专利说明】一种利用靛蓝染料快速检测食品中蛋白质的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种利用靛蓝染料与共振光散射技术快速检测食品中痕量蛋白质的方法。
【背景技术】
[0002]蛋白质(protein)是生命的物质基础,在参与人体内反应、调节代谢、抵御外来物质入侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用，蛋白质的定量检测更是生命科学的重要研究课题。因此，寻求具有高灵敏度，高选择性的检测食品中蛋白质的方法具有重要意义。目前测定蛋白质的方法主要有荧光分析法、色谱法、化学发光法、共振光散射法等。其中共振光散射技术应用于生物大分子的分析具有简便、灵敏度高等特点，为生物化学和临床分析中样品的检测提供了一条新的途径，已成为目前研究生物大分子的重要手段。靛蓝是最早发现的天然染料之一，因其色泽鲜艳、价格低廉等被广泛用于印染、医药和食品等工业。研究发现，对于靛蓝的研究主要集中在药物中含量的测定及其染色能力等方面，而未见利用靛蓝的共振光散射信号测定食品中蛋白质的相关报道。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种方法简单，灵敏度高，选择性好，方便快速的对食品中痕量蛋白质进行检测的方法。
[0004]构思如下:靛蓝染料具有稳定、较强的共振光散射信号。当向靛蓝溶液加入不同浓度的牛血清蛋白后，靛蓝的共振光散射强度发生相应的增强，且其增加值与牛血清蛋白的浓度在2X10—8-6X10—7摩尔/升(1.3X10-3-3.9X 10_2克/升)范围内呈良好的线性关系。具体机理如下:由于牛血清蛋白肽链上的氨基酸带正电荷，形成一个阳离子，而靛蓝结构中的羰基氧原子电负性很强，二者可以通过静电作用和疏水作用力形成聚集体，同时牛血清蛋白大分子形成的疏水性空腔可以与靛蓝产生包结配合作用，形成超分子结合物。
[0005]具体步骤如下:
(I)检测方法:
在12支10毫升比色管中各加入1.00毫升1.0X 10_4摩尔/升的靛蓝溶液，然后分别加入 20、60、100、140、180、220、260、340、420、500、580、600 微升 1.0Χ10-3 摩尔 / 升的牛血清蛋白溶液，再分别用PH = 4.5、浓度为0.05摩尔/升的醋酸-醋酸钠缓冲溶液定容至刻度，反应3分钟后用荧光光度计进行共振光强度检测，令激发波长同发射波长相同，激发和发射狭缝宽度均为5纳米。
[0006](2)工作曲线的绘制:
在12支10毫升比色管中各加入1.00毫升1.0X 10_4摩尔/升的靛蓝溶液，然后分别加入 20、60、100、140、180、220、260、340、420、500、580、600 微升 1.0Χ10-3 摩尔 / 升的牛血清蛋白溶液，再分别用PH = 4.5、浓度为0.05摩尔/升的醋酸-醋酸钠缓冲溶液定容至刻度，充分摇匀后放置反应3分钟，进行共振光强度检测；牛血清蛋白的浓度c在2 X 10-≥6 X IO-7摩尔/升(1.3 X 10-3.9 X IO-2克/升)范围内与荧光增敏量(Λ、)呈良好的线性关系，其线性回归方程为:ΛΙ=0.8654c+75.786，线性相关系数r = 0.9987。
[0007]本发明克服了已有技术在检测时存在灵敏度低、选择性差、反应时间长、稳定差的缺点，更好地提高了灵敏度和选择性，对于食品中低浓度蛋白质的检测更加准确方便快速。
【专利附图】
【附图说明】
[0008]图1为本发明实施例在0.05摩尔/升的醋酸-醋酸钠缓冲溶液(pH=4.5)中，不同浓度的牛血清蛋白对靛蓝的共振光增敏光谱图。其中a为IX 10_4摩尔/升的靛蓝的共振光散射光谱，b、c、d分别为8X 10_8摩尔/升、2X 10_7摩尔/升、4X 10_7摩尔/升的牛血清蛋白对靛蓝的共振光增敏光谱图。
[0009]图2为本发明实施例牛血清蛋白含量与靛蓝共振光增敏量的关系图。
【具体实施方式】
[0010]实施例:
1、检测方法:
在12支10毫升比色管中各加入1.00毫升1.0X 10_4摩尔/升的靛蓝溶液，然后分别加入 20、60、100、140、180、220、260、340、420、500、580、600 微升 1.0Χ10-3 摩尔 / 升的牛血清蛋白溶液，再分别用PH = 4.5、浓度为0.05摩尔/升的醋酸-醋酸钠缓冲溶液定容至刻度，反应充3分钟后用荧光光度计进行共振光强度检测，令激发波长同发射波长相同，激发和发射狭缝宽度均为5纳米。
[0011]2、标准工作曲线的绘制:
在12支10毫升比色管中各加入1.00毫升1.0X 10_4摩尔/升的靛蓝溶液，然后分别加入 20、60、100、140、180、220、260、340、420、500、580、600 微升 1.0Χ10-3 摩尔 / 升的牛血清蛋白溶液，再分别用PH = 4.5、浓度为0.05摩尔/升的醋酸-醋酸钠缓冲溶液定容至刻度，充分摇匀后放置反应3分钟，进行共振光强度检测；牛血清蛋白的浓度c在2 X 10-6 X IO-7摩尔/升(1.3 X 103.9 X IO-2克/升)范围内与荧光增敏量(Λ、)呈良好的线性关系，其线性回归方程为:ΛΙ=0.8654c+75.786，线性相关系数r = 0.9987。
[0012]3、食品中蛋白质含量的检测:
取市售牛奶样品稀释1000倍作为待测溶液。取市售啤酒样品20毫升在60° C下加热30分钟以除去CO2，后将样品稀释1000倍作为待测溶液。
[0013]取适量的待测液按实验方法操作对样品进行测定，同时进行标准加入回收试验，结果如表I所示，其RSD ( 2.1%(η=6)，加标回收率在98.39101.7%，说明方法具有较高的准确度和较好的精密度。
[0014]表1:样品测定和加标回收试验数据
【权利要求】
1.一种利用靛蓝染料快速检测食品中蛋白质的方法，其特征在于具体步骤为: (1)检测方法:在12支10毫升比色管中各加入1.00毫升1.0* 10-4摩尔/升的靛蓝溶液，然后分别加入 20、60、100、140、180、220、260、340、420、500、580、600 微升 1.0*10-3 摩尔 / 升的牛血清蛋白溶液，再分别用PH = 4.5、浓度为0.05摩尔/升的醋酸-醋酸钠缓冲溶液定容至刻度，反应3分钟后用荧光光度计进行共振光强度检测，令激发波长同发射波长相同，激发和发射狭缝宽度均为5纳米； (2)工作曲线的绘制:在12支10毫升比色管中各加入1.00毫升1.0* 10-4摩尔/升的靛蓝溶液，然后分别加入 20、60、100、140、180、220、260、340、420、500、580、600 微升 1.0*10-3 摩尔 / 升的牛血清蛋白溶液，再分别用PH = 4.5、浓度为0.05摩尔/升的醋酸-醋酸钠缓冲溶液定容至刻度，充分摇匀后放置反应3分钟，进行共振光强度检测；牛血清蛋白的浓度c在2 * 10-8-6 * 10-7摩尔/升即1.3 * 10-3.9 * 10-2克/升范围内与荧光增敏量Δ IF呈良好的线性关系，其线性回归方程为:Δ I=0.8654c+75.786，线性相关系数r = 0.9987。
【文档编号】G01N21/64GK103439307SQ201310394704
【公开日】2013年12月11日 申请日期:2013年9月30日 优先权日:2013年9月30日
【发明者】陶慧林, 徐铭泽, 张庆军, 黎舒怀, 廖秀芬, 孙超 申请人:桂林理工大学