用于检测骨髓增生异常综合症和再生障碍性贫血的试剂盒的制作方法
【专利摘要】本实用新型公开了一种用于检测骨髓增生异常综合症和再生障碍性贫血的试剂盒，包括盒体、盒盖和设置在盒体内的衬垫，所述衬垫上设有小孔，装有荧光标记的单克隆抗体IgG1、IgG2a和CD45的试剂管、装有荧光标记的单克隆抗体CD71、CD34和CD45的试剂管、装有红细胞裂解液的试剂管和装有PBS缓冲液的试剂管被设置在所述小孔内。该试剂盒结构简单、设计合理，可对简单、快捷地诊断低增生性骨髓增生异常综合症和再生障碍性贫血，检测结果准确可靠，便于在广大试验仪器、条件相对简单的实验室推广应用。
【专利说明】用于检测骨髓增生异常综合症和再生障碍性贫血的试剂盒
【技术领域】
[0001]本实用新型属于免疫学【技术领域】，涉及一种用于检测低增生性骨髓增生异常综合症和再生障碍性贫血的试剂盒。
【背景技术】
[0002]骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes, MDS)是起源于造血干细胞的一组异质性髓系克隆性疾病，特点是髓系细胞分化及发育异常，表现为无效造血、难治性血细胞减少、造血功能衰竭，高风险向急性髓系白血病(AML)转化。在诊断和分型中主要难点在那些外周血和骨髓原始细胞不增多病例上，尤其当病态造血不显著时；或与营养缺乏、化学药物、中毒、造血生长因子、炎症及感染继发的病态造血鉴别；以及骨髓低增生或伴随纤维化等情况，不能获得足够细胞分析可能的疾病过程。低增性生骨髓增生异常综合征及MDS伴骨髓纤维化诊断常常很困难。
[0003]再生障碍性贫血(aplastic anemia, AA，再障)是由多种原因引起的骨髓造血干细胞缺陷、造血微环境损伤以及免疫机制改变，导致骨髓造血功能衰竭，出现以全血细胞减少为主要表现的疾病。目前比较公认的与后天获得性再障性贫血有关的危险因素包括药物及化学物质、电离辐射、病毒感染等。
[0004]骨髓增生异常综合征(MDS)和再生障碍性贫血(AA)均属于造血干细胞疾病，前者主要损伤造血干细胞分化，骨髓造血异常，而后者主要损伤造血干细胞增生，造血功能抑制。但两者有相同的病理机制，例如低增生骨髓增生异常综合征(L-MDS)与AA的发病机制均与造血衰竭有关，甚至病程上L-MDS与AA两者可相互转化，因此临床上易将L-MDS与AA相混淆。
[0005]目前，对于低增性生骨髓增生异常综合征(L-MDS)和再生障碍性贫血(AA)的诊断方法主要有骨髓形态学及骨髓活检和骨髓细胞遗传学检查。
[0006]在形态学检验中，L-MDS亦有全血细胞减少，网织红细胞不高升值降低，骨髓增生减低等特点，易与AA混淆。有些L-MDS临床上表现不典型，血液学改变复杂，缺乏特异性，部分RA病态造血不典型，仅依靠形态学难以与AA相鉴别，尤其是骨髓增生低下时。且骨髓镜检通量低，易受镜检人员主观因素影响。
[0007]骨髓细胞遗传学检查对于再障与L-MDS鉴别很重要，但若因骨髓增生低下，细胞数少，则难以获得足够的中期分裂象细胞。
实用新型内容
[0008]为了解决上述技术问题，本实用新型的目的在于提供一种用于检测低增生性骨髓增生异常综合症和再生障碍性贫血的试剂盒，可以快速、简便、准确地检测低增生性骨髓增生异常综合症和再生障碍性贫血。
[0009]为实现上述目的，本实用新型采取的技术方案是:一种用于检测骨髓增生异常综合症和再生障碍性贫血的试剂盒，包括盒体(I)、盒盖(2)和设置在盒体(I)内的衬垫(3)，所述衬垫(3)上设有小孔，装有荧光标记的单克隆抗体IgGl (20μ l/test)、IgG2a (20 μ I/test)和CD45(20 μ 1/test)的试剂管(4)、装有荧光标记的单克隆抗体CD71(20 μ 1/test)、CD34 (20μ 1/test)和CD45 (20 μ 1/test)的试剂管(5)、装有红细胞裂解液的试剂管(6)和装有PBS缓冲液的试剂管(7)被设置在所述小孔内。其中，同一试剂管内的单克隆抗体使用不同的荧光标记；优选地，IgGl和⑶71使用FITC标记，IgG2a和⑶34使用PE标记，CD45使用PerCP标记。
[0010]其中，所述红细胞裂解液和所述PBS缓冲液均为本领域常规试剂。
[0011]其中，所述衬垫(3)上设有4个小孔，所述小孔在所述衬垫(3)上分成两排平行排列。
[0012]通过以上技术方案，本实用新型的有益效果如下:
[0013](I)本实用新型的试剂盒结构简单、设计合理，方便携带、保存，不易受污染。
[0014](2)本实用新型的试剂盒在使用时，通过将⑶34+的造血干/组细胞的比例检测和⑶45-⑶71+的有核红细胞比例检测相结合，可对简单、快捷地诊断低增生性骨髓增生异常综合症和再生障碍性贫血，检测结果准确可靠，便于在广大试验仪器、条件相对简单的实验室推广应用。
【专利附图】
【附图说明】
[0015]图1为本实用新型的结构示意图；
[0016]该图中，1-盒体，2-盒盖，3-衬垫，4-装有荧光标记的单克隆抗体IgGl、IgG2a和⑶45的试剂管，5-装有荧光标记的单克隆抗体⑶71、⑶34和⑶45的试剂管，6-装有红细胞裂解液的试剂管，7-装有PBS缓冲液的试剂管。
[0017]图2为使用本实用新型检测某患者骨髓样本所得的散点图。
【具体实施方式】
[0018]下面结合实施例对本实用新型的【具体实施方式】作进一步描述，本实用新型的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本实用新型的范围构成任何限制。
[0019]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0020]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0021]如图1所示，本实用新型提供了一种用于检测低增生性骨髓增生异常综合症和再生障碍性贫血的试剂盒，包括盒体1、盒盖2和设置在盒体I内的衬垫3，所述衬垫3上设有4个小孔，所述小孔在所述衬垫3上分成两排平行排列，装有荧光标记的单克隆抗体IgGl、IgG2a和⑶45的试剂管4、装有荧光标记的单克隆抗体⑶71、⑶34和⑶45的试剂管5、装有红细胞裂解液的试剂管6和装有PBS缓冲液的试剂管7被设置在所述小孔内。
[0022]其中，IgGl和CD71使用FITC标记，IgG2a和CD34使用PE标记，CD45使用PerCPT 己 O
[0023]其中，所述红细胞裂解液来源于美国BD公司，所述PBS缓冲液来源于北京中杉金桥生物技术有限公司。
[0024]检测步骤如下:[0025](I)取患者的骨髓样本，使用计数板对待检标本进行细胞计数，然后调节白细胞浓度至5X IO6个/ml ；
[0026](2)取两支流式专用管，分别标为I号管和2号管，向I号管加入试剂管4内的抗体60 μ 1，向2号管内加入试剂管5内的抗体60 μ I ；
[0027](3)向每个管内分别加入待检测的骨髓标本70μ 1，低速涡旋混匀，2°C至8°C避光孵育20分钟；
[0028](4)向每个管内分别加入红细胞裂解液1ml，低速涡旋混匀，在2°C至8°C避光裂解红细胞10分钟；
[0029](5)裂解结束后立即以1500转/分钟离心5分钟，离心结束后弃上清，然后向各管内加入Iml PBS，低速涡旋混匀，以1500转/分钟离心5分钟；离心结束后弃上清，向各管内加入0.5ml PBS重悬，低速涡旋混匀，24h内使用流式细胞仪上机检测；
[0030](6)检测I号管时，用CD45-PerCP区分各群细胞，用同型对照IgGl-FITC和IgG2a-PE定FITC和PE的阴性门；检测2号管时，取P2门与P3门的交集，即得CD34+细胞比例；取Q4-1门内细胞，即得⑶71+⑶45-的有核红细胞比例。
[0031]检测结果如下:
[0032]数据以散点图形式显示，如图2所示，P2ANDP3门内细胞约占有核细胞的0.282%，即⑶34+细胞比例；Q4-1门内细胞约占有核细胞的18.486%，即⑶71+⑶45-的有核红细胞比例；提供该骨髓检测样本的患者最终检测结果如下:
[0033]CD34+细胞占有核细胞比例:0.282%
[0034]CD71+CD45-细胞占有核细胞比例:18.486%。
[0035]判断标准:
[0036]CD34+细胞占有核细胞比例的参考值为，低增生性骨髓增生异常综合症:
3.5±0.5%，范围I?7% ;再生障碍性贫血:0.13±0.02%，范围:0.02?0.36%。(此参考值仅用于骨髓未被外周血稀释的情况下)
[0037]上面已经举例说明了本实用新型的实施例，本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本实用新型的精神和范围下可以对本实用新型技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本实用新型的保护范围内。
【权利要求】
1.一种用于检测骨髓增生异常综合症和再生障碍性贫血的试剂盒，其特征在于:所述试剂盒包括盒体(I)、盒盖(2)和设置在盒体(I)内的衬垫(3)，所述衬垫(3)上设有小孔，装有荧光标记的单克隆抗体IgGl、IgG2a和⑶45的试剂管(4)、装有荧光标记的单克隆抗体⑶71、⑶34和⑶45的试剂管(5)、装有红细胞裂解液的试剂管(6)和装有PBS缓冲液的试剂管(7)被设置在所述小孔内。
2.按照权利要求1所述的试剂盒，其特征在于:同一试剂管内的单克隆抗体使用不同的荧光标记，其中，IgGl和CD71使用FITC标记，IgG2a和CD34使用PE标记，CD45使用PerCP标记。
3.按照权利要求1所述的试剂盒，其特征在于:所述衬垫(3)上设有4个小孔，所述小孔在所述衬垫(3 )上分成两排平行排列。
【文档编号】G01N33/96GK203535057SQ201320688642
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2013年11月4日 优先权日:2013年11月4日
【发明者】吴纯斌, 秦晓明, 王显凤, 刘丽媛, 王绪华, 梁超, 方国伟, 黄士昂, 陈忠 申请人:北京海思特临床检验所有限公司