一种蟅虫创愈制剂的检测方法
【专利摘要】本发明提供一种蟅虫创愈制剂的检测方法，其特征在于：所述方法包括下述方法中的一种或几种：通过薄层层析法对蟅虫创愈制剂中的红参、续断、骨碎补进行定性鉴别；通过高效液相色谱法对蟅虫创愈制剂的续断中的川续断皂苷Ⅵ的含量进行测定。通过上述检测方法，可以对蟅虫创愈制剂中的各组分进行有效的检测，从而更好的控制产品的质量。
【专利说明】一种螗虫创愈制剂的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种螗虫创愈制剂的检测方法。
【背景技术】
[0002]螗虫创愈胶囊为医疗机构制剂，由土鳖虫、续断、骨碎补、煅龙骨、煅牡蛎、红参、巴戟天、当归八味药组成。具有舒筋活络、活血化瘀、消肿止痛的功效，主要用于跌打损伤和闭合性骨折所致的软组织挫伤，能够缓解跌打损伤的急性期疼痛。
[0003]医疗机构制剂是指医疗机构根据本单位临床需要经批准而配制、自用的固定处方制剂。同其他药品一样，医疗机构配制的制剂必须按照规定和制剂标准进行质量检验，不合格的，不得使用。根据相关法律规定，医疗机构制剂仅能在配制医院出售，不得在市场上销售或变相销售。或经批准在其他医疗机构调剂使用。
[0004]土鳖虫:收载于中华人民共和国药典2010年版一部18页。本品为鳖蠊科昆虫地鳘 Eupolyphaga Sinesis Walker 或冀地鳘 Steleophaga plancyi (Boleny)的雌虫干燥体。捕捉后，置沸水中烫死，晒干或烘干。
[0005]续断:收载于中华人民共和国药典2010年版一部309页。本品为川续断科植物川续断Dipsacus asper Wall.exHenry的干燥根。秋季采挖,除去根和须根,用微火烘至半干，堆置“发汗”至内部变绿色时，再烘干。
[0006]骨碎补:收载于中华人民共和国药典2010年版一部239页。本品为水龙骨科植物槲蕨Drynaria fortunei (Kunze) J.Sm.的干燥根莖。全年均可采挖,除去泥沙,干燥,或再燎去茸毛(鳞片)。
[0007]锻龙骨:药材Os Draconis (Fossilia Ossia Mastodi)原矿物 Fossilia OssisMastrodi ;出自《本经》等。龙骨为古代哺乳动物如象类、犀牛类、三趾马等的骨骼的化石。分布四川、山西、山东、河北、内蒙古、河南、陕西、甘肃、青海。挖出后，除去泥土及杂质。主要成分为碳酸钙、磷酸钙，亦含铁、钾、钠、氯、硫酸根等。性甘涩，平。入心、肝、肾、大肠经。重镇安神镇惊安神，敛汗固精，止血涩肠，生肌敛疮。治惊痫癫狂，怔忡健忘，失眠多梦，自汗盗汗，遗精淋浊，吐衄便血，崩漏带下，泻痢脱肛，溃疡久不收口。煅龙骨就是取刷净的龙骨，在无烟的炉火上或坩埚内煅红透，取出，放凉，碾碎。
[0008]煅牡蛎:收载于中华人民共和国药典2010年版一部161页。本品为牡蛎科动物长牡贩 Ostrea gigas Thunberg、大连湾牡贩 Ostrae talienwhanensis Crosse 或近江牡虫厉Ostrea rivularis Gould的贝壳。全年均可捕捞,去肉,洗净。晒干。《中国药典》1995年版对牡蛎的炮制规定为“取净牡蛎，照明煅法煅至酥脆”。煅牡蛎可收敛固涩除酸的作用强，治疗胃疼、胃酸等。
[0009]红参:收载于中华人民共和国药典2010年版一部143页。本品为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的栽培品经蒸制后的干燥根和根莖。秋季采挖，洗净，蒸制后，干燥。
[0010]巴戟天:收载于中华人民共和国药典2010年版一部75页。本品为茜草科植物巴戟天Morinda offinalis How的干燥根。全年均可采挖,洗净,除去须根,晒至六七成干,轻轻捶扁，晒干。
[0011]当归:收载于中华人民共和国药典2010年版一部124页。本品为伞形科植物当归Angelica sinensis (Oliv.) Diels.的干燥根。秋末采挖，除去须根和泥沙，待水分稍蒸发后，捆成小把，上棚，用烟火慢慢熏干。
[0012]质量检验是反映的药品质量特性的技术参数，指标明确规定下来，形成技术文件，规定药品质量规格及检验方法，就是药品质量标准。目前尚未有螗虫创愈制剂的质量检测方法，也没有对方中的成分进行含量检测的方法。
【发明内容】
[0013]本发明的目的是提供一种螗虫创愈制剂的检测方法，所述方法重现性好、专属性强，能够有效地对螗虫创愈制剂进行质量检验，从而使螗虫创愈制剂的质量稳定、安全、可控。
[0014]本发明提供一种螗虫创愈制剂的检测方法，所述方法包括下述方法中的一种或几种:通过薄层层析法对螗虫创愈制剂中的红参、续断、骨碎补进行定性鉴别；通过高效液相色谱法对螗虫创愈制剂的续断中的川续断皂苷VI的含量进行测定。
[0015]优选地，所述红参的定性鉴别是将螗虫创愈制剂超声提取后，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水在10°c以下放置的下层溶液为展开剂进行薄层层析；优选地，所述超声提取是将螗虫创愈制剂加三氯甲烷超声提取后，再加入正丁醇超声提取，滤液先加入氨水，再加入甲醇溶解，获得超声提取溶液；更优选地，所述三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、水的质量比为 3:8:4.5:2。
[0016]进一步地，所述红参的定性鉴别是取所述螗虫创愈制剂内容物1.5-7.5重量份，加三氯甲烷10-60体积份，超声lOmin，弃去三氯甲烷液，药渣挥干，加水0.1-1.0体积份润湿，加水饱和正丁醇5-20体积份，超声处理10-30分钟，过滤，滤液加1-5倍体积氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇1-5体积份溶解，作为供试品溶液；另取红参对照药材粉末0.1-1.0重量份，同法制成对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配制不含红参的阴性样品，并按上述供试品溶液的配制方法制成不含红参的阴性样品溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各0.001-0.02体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-7K，体积比I?10:5?15:
2.5?10:1.0?5.0，10°C以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%?20%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置紫外灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色斑点，且阴性无干扰。
[0017]优选地，所述续断的定性鉴别是将螗虫创愈制剂用甲醇超声提取后，以正丁醇-冰醋酸-水的上层溶液为展开剂进行薄层层析；优选地，所述正丁醇、冰醋酸、水的质量比为4:1: 5。
[0018]进一步地，所述续断的定性鉴别是取所述螗虫创愈制剂内容物0.1-5重量份，力口甲醇5-20体积份,超声处理10-50分钟，4000r/min,5min离心取上清液,蒸干，残洛加甲醇0.5-5体积份使溶解，作为供试品溶液；另取续断对照药材粉末0.05-1.0重量份，同法制成对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配制不含续断的阴性样品，并按上述供试品溶液的配制方法制成不含续断的阴性样品溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各0.001-0.02体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，正丁醇-冰醋酸-水，体积比I?10:0.5?5:2.0?10的上层溶液为展开剂,展开,展距约1-lOcm，取出，晾干，喷以1%?20%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色斑点，且阴性无干扰。
[0019]优选地，所述骨碎补的定性鉴别是将螗虫创愈制剂用甲醇超声提取后，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂进行薄层层析；优选地，所述甲苯、乙酸乙酯、甲酸、水的质量比为1: 12: 2.5: 3。
[0020]进一步地，所述骨碎补的定性鉴别是取所述螗虫创愈制剂内容物0.1-5重量份，加甲醇10-50体积份,超声5-30分钟，4000r/min, 5min离心取上清液，蒸干,残洛加甲醇0.5-5体积份使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品适量，加甲醇制成每I体积份含0.05-1.00重量份的溶液，作为对照品溶液；按处方比例及制备工艺，配制不含骨碎补的阴性样品，并按上述供试品溶液的配制方法制成不含骨碎补的阴性样品溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各0.001-0.03体积份，分别点于同一娃胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水，体积比0.1?5:5?25:1.0?10:1.0?5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%_20%香草醛硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色斑点，且阴性无干扰。
[0021]优选地，所述川续断皂苷VI的含量的测定方法是将螗虫创愈制剂用甲醇超声处理1min后，以乙腈和水为流动相，在液相色谱仪中测定。
[0022]进一步地，所述川续断皂苷VI的含量的测定方法是取螗虫创愈制剂内容物粉末约
0.1-5.0重量份，精密称定，置1-20体积份容量瓶中，加甲醇超声处理5-30分钟，溶解定容至刻度，作为供试品溶液；另取川续断皂苷VI对照品适量，精密称定，加甲醇制成每I体积份含川续断皂苷VI 0.1-10.0重量份的川续断皂苷VI对照品溶液；按处方比例及制备工艺，配制不含续断的阴性样品，并按上述供试品溶液的配制方法制成不含续断的阴性样品溶液；照高效液相色谱法《中国药典》2010版一部附录VI D试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为1(Γ50:1(Γ50的水-乙腈为流动相；在212±2nm检测波长、柱温为25?40°C下测定，理论板数按川续断皂苷VI峰计算应不低于3000 ;分别精密吸取对照药材溶液和供试品溶液各0.005、.05体积份，注入液相色谱仪，测定，制剂每I重量份含续断以川续断皂苷VI计，不得少于0.0027重量份。
[0023]上述螗虫创愈制剂的剂型为散剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂或丸剂。
[0024]本 申请人:对螗虫创愈制剂中各组分的鉴别方法实验如下:
一、红参的薄层鉴另O
(I)仪器
乳钵、电子秤、具塞锥形瓶、移液管、水浴锅、超声波提取仪、漏斗、滤纸、蒸发皿、点样器、硅胶G板、层析缸、紫外点样分析仪。
[0025](2)对照药材
红参(批号:121045-201105 )，购自中国药品生物制品鉴定所。
[0026](3)试剂三氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯、水、正丁醇、氨水、硫酸、乙醇、丙酮。
[0027](4)检验方法:
提取溶剂:正丁醇、氨水、三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮。
[0028]提取方法:振摇和超声。
[0029]展开剂:三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(体积比3:8:4.5:2) 10°C以下放置的下层溶液、三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(体积比3:8:4.5:2)。
[0030]分别选择以上提取溶剂、提取方法和展开剂进行试验，结果参见表1。
[0031]表1
【权利要求】
1.一种螗虫创愈制剂的检测方法，其特征在于:所述方法包括下述方法中的一种或几种:通过薄层层析法对螗虫创愈制剂中的红参、续断、骨碎补进行定性鉴别；通过高效液相色谱法对螗虫创愈制剂的续断中的川续断皂苷VI的含量进行测定。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:所述红参的定性鉴别是将螗虫创愈制剂超声提取后，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水在10°C以下放置的下层溶液为展开剂进行薄层层析；优选地，所述超声提取是将螗虫创愈制剂加三氯甲烷超声提取后，再加入正丁醇超声提取，滤液先加入氨水，再加入甲醇溶解，获得超声提取溶液；更优选地，所述三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、水的质量比为3:8:4.5:2。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于:所述红参的定性鉴别是取所述螗虫创愈制剂内容物1.5-7.5重量份，加三氯甲烷10-60体积份，超声lOmin，弃去三氯甲烷液，药渣挥干，加水0.1-1.0体积份润湿，加水饱和正丁醇5-20体积份，超声处理10-30分钟，过滤，滤液加1-5倍体积氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇1-5体积份溶解，作为供试品溶液；另取红参对照药材粉末0.1-1.0重量份，同法制成对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配制不含红参的阴性样品，并按上述供试品溶液的配制方法制成不含红参的阴性样品溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各0.001-0.02体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水，体积比I?10:5?15:2.5?10:1.0?5.0，10°C以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%?20%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置紫外灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色斑点，且阴性无干扰。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:所述续断的定性鉴别是将螗虫创愈制剂用甲醇超声提取后，以正丁醇-冰醋酸-水的上层溶液为展开剂进行薄层层析；优选地，所述正丁醇、冰醋酸、水的质量比为4:1: 5。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于:所述续断的定性鉴别是取所述螗虫创愈制剂内容物0.1-5重量份，加甲醇5-20体积份，超声处理10-50分钟，4000r/min，5min离心取上清液，蒸干，残渣加甲醇0.5-5体积份使溶解，作为供试品溶液；另取续断对照药材粉末0.05-1.0重量份，同法制成对照药材溶液；按处方比例及制备工艺，配制不含续断的阴性样品，并按上述供试品溶液的配制方法制成不含续断的阴性样品溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各0.001-0.02体积份，分别点于同一娃胶G薄层板上,正丁醇-冰醋酸-水,体积比I?10:0.5?5:2.0?10的上层溶液为展开剂，展开，展距约1-lOcm，取出，晾干，喷以1%?20%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置日光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色斑点，且阴性无干扰。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:所述骨碎补的定性鉴别是将螗虫创愈制剂用甲醇超声提取后，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂进行薄层层析；优选地，所述甲苯、乙酸乙酯、甲酸、水的质量比为1: 12: 2.5: 3。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于:所述骨碎补的定性鉴别是取所述螗虫创愈制剂内容物0.1-5重量份，加甲醇10-50体积份，超声5-30分钟，4000r/min，5min离心取上清液，蒸干，残渣加甲醇0.5-5体积份使溶解，作为供试品溶液；另取柚皮苷对照品适量，加甲醇制成每I体积份含0.05-1.00重量份的溶液，作为对照品溶液；按处方比例及制备工艺，配制不含骨碎补的阴性样品，并按上述供试品溶液的配制方法制成不含骨碎补的阴性样品溶液；照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各0.001-0.03体积份，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水，体积比0.1?5:5?25:1.0?10:1.0?5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%-20%香草醛硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，置日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色斑点，且阴性无干扰。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于:所述川续断皂苷VI的含量的测定方法是将螗虫创愈制剂用甲醇超声处理1min后，以乙腈和水为流动相，在液相色谱仪中测定。
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于:所述川续断皂苷VI的含量的测定方法是取螗虫创愈制剂内容物粉末约0.1-5.0重量份，精密称定，置1-20体积份容量瓶中，力口甲醇超声处理5-30分钟，溶解定容至刻度，作为供试品溶液；另取川续断皂苷VI对照品适量，精密称定，加甲醇制成每I体积份含川续断皂苷VI 0.1-10.0重量份的川续断皂苷VI对照品溶液；按处方比例及制备工艺，配制不含续断的阴性样品，并按上述供试品溶液的配制方法制成不含续断的阴性样品溶液；照高效液相色谱法《中国药典》2010版一部附录VI D试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为1(Γ50:1(Γ50的水-乙腈为流动相；在212±2nm检测波长、柱温为25?4(TC下测定，理论板数按川续断皂苷VI峰计算应不低于3000 ;分别精密吸取对照药材溶液和供试品溶液各0.005、.05体积份，注入液相色谱仪，测定，制剂每I重量份含续断以川续断皂苷VI计，不得少于0.0027重量份。
10.根据权利要求1-9任一所述的检测方法，其特征在于:所述螗虫创愈制剂的剂型为散剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂或丸剂。
【文档编号】G01N30/06GK104133025SQ201410066024
【公开日】2014年11月5日 申请日期:2014年2月26日 优先权日:2014年2月26日
【发明者】贾忠, 董大海, 徐强, 吴晶 申请人:贾忠, 董大海, 徐强, 吴晶